測定標示量最簡便的方法

❶ 注射劑的制備方法

配製原料的形式：
①以中葯中提取的單體有效成分為原料
②以中葯中提取的有效部位為原料
③中葯中提取的總提取物為原料（現狀）
（一）中葯材的預處理
葯材原料必須確定品種與來源，鑒定符合要求後，預處理（挑選、洗滌、切制、乾燥、粉碎、滅菌）。
（二）中葯注射用原液的制備
1、要求：最大限度地除去雜質，保留有效成分。
2、提取與純化路線選擇依據：
（1）根據處方組成中葯物所含成分的基本理化性質；
（2）結合中醫葯理論確定的功能主治與現代葯理研究；
（3）處方的傳統用法、劑量；
（4）製成注射劑後應用的部位與作用時間。
3、用途： 蒸餾法是制備注射用水最可靠最經典的方法。葯典要求供蒸餾法制備注射用水的水源應為純化水，故原水需經過濾、除離子等過程純化後方可使用。
注射用水的制備工藝流程：
（1）原水處理。原水通常為經過預處理的自來水，其質量應符合國家關於生活飲用水的衛生標准。原水中含有懸浮微粒、可溶性無機鹽、有機物、微生物、熱原及揮發性氣體等雜質，必須經處理成為純化水後方可作為蒸餾法制備注射用水的水源。原水處理方法有離子交換法、電滲析法和反滲透法。
①離子交換法 離子交換法處理原水是通過離子交換樹脂進行的。最常用的離子交換樹脂是732苯乙烯強酸性陽離子交換樹脂和717苯乙烯強鹼性陰離子交換樹脂。一般採用陽離子樹脂床、陰離子樹脂床、混和樹脂床串聯的組合方式，在陽離子樹脂床後加一脫氣塔，除去水中二氧化碳，以減輕陰離子樹脂的負擔。此法 所得水化學純度高，比電阻可達100萬ω。cm以上，設備簡單，節約燃料和冷卻水，成本低；離子交換一段時間後樹脂老化，出水質量不合格，可用酸鹼液將樹 脂再生後繼續使用。
②電滲析法 電滲析法是依據離子在電場作用下定向遷移和交換膜的選擇透過性而除去離子的。此法不需消耗離子交換樹脂再生所用的酸和鹼，較離子交換法經濟，但製得的水純度較低，比電阻一般為5萬～10萬ω。cm；
③反滲透法 在u形管內設置一個半透膜，半透膜兩側分別放入鹽溶液和純水，純水一側的水分子通過半透膜向鹽溶液一側轉移，使鹽溶液液面升高，此為滲透過程（osmosis）。兩側液柱的高度差形成的壓力即為此鹽溶液具有的滲透壓。若在鹽溶液上施加一個大於該鹽溶液滲透壓的壓力，則鹽溶液中的水分子向 純水一側滲透，達到鹽、水分離，此為反滲透（reverse osmosis）。反滲透法純化原水一般選用的半透膜膜材為醋酸纖維膜和聚醯胺膜。
（2）蒸餾。小量生產一般用塔式蒸餾水器，主要包括蒸發鍋、隔沫裝置和冷凝器三部分。大量生產時，常用多效蒸餾水器或氣壓式蒸餾水器。制備注射用水的蒸 餾水器，應安裝有效的隔沫裝置，以確保不帶入熱原。（3）注射用水的收集與貯存。棄去初餾液，檢查合格後採用帶有無菌過濾裝置的密閉收集系統收集，在 80℃以上保溫、65℃以上保溫循環或4℃以下無菌狀態下貯存，並於制備12h內使用。 1、物理檢查
①外觀：安瓿的身長、身粗、絲粗、絲全長等符合規定;外觀無歪絲、歪底、色澤、麻點、砂粒、疙瘩、細縫、油污及鐵銹粉色等。
②清潔度：將潔凈烘乾的安瓿，灌入合格的注射用水，封口。經檢查合格者用121℃、30分鍾熱壓滅菌，再檢查澄明度應符合規定。
③耐熱性：將洗凈的安瓿，灌注射用水，熔封，熱壓滅菌後檢查安瓿破損率，1～2ml的安瓿不超過l%，5～20ml安瓿不超過2%.
2、化學檢查
①耐酸性：取安瓿110支，洗凈烘乾，灌入0.01mol/l鹽酸液至正常裝量，封口，剔除含玻璃屑、纖維及白點等異物的安瓿，置121℃熱壓滅菌30分鍾，取出檢查，全部安瓿均不得有易見的脫片。
②耐鹼性：取安瓿220支洗凈，烘乾，分別注入0.004%氫氧化鈉溶液至正常裝量，熔封，剔除含有玻璃屑、纖維及白點等異物的安瓿，121℃熱壓滅菌30分鍾，取出檢查，全部安瓿均不得有易見到的脫片。
③中性檢查：取安瓿11支，用煮沸過的冷蒸餾水洗凈。10支安瓿中注入甲基紅酸性溶液至正常裝量，熔封。另1支安瓿注入甲基紅酸性溶液10ml與0.1mol/l氫氧化鈉液0.1ml混合液至正常裝量，熔封。將上述10支安瓿121℃熱壓滅菌30分鍾，放冷，取出與未經熱壓的安瓿內溶液比較，其色不得相同或更深。 （1）稀配法：將原料加入所需的溶劑中一次配成注射劑所需濃度。本法適用於原料質量好，小劑量注射劑的配製。
（2）濃配法：將原料先加入部分溶劑配成濃溶液，加熱溶解過濾後，再將全部溶劑加入濾液中，使其達到規定濃度。本法適用於原料質量一般，大劑量注射劑的配製。
①配成濃溶液可用熱處理與冷藏法保證質量，亦稱變溫法，注射液中的某些高分子雜質，如樹脂、鞣質等如未除盡，在水中呈膠體狀態，不易凝聚和沉澱，但經加熱處理，煮沸30分鍾或115℃加熱15～20分鍾，能破壞其膠體狀態而使之凝聚，再在0℃～4℃冷藏24小時，又能降低其動力學穩定性，使沉澱析出，即可濾過除去雜質。
②幾種原料的性質不同，溶解要求有差異，配液時可分別溶解，在混合，最後加溶劑至全量。 濾過是保證注射液澄明的重要操作，一般分為初濾和精濾。如葯液中沉澱物較多時，特別加活性炭處理的葯液須初濾後方可精濾。以免沉澱堵塞濾孔。
常用於初濾的濾材有：濾紙、長纖維脫脂棉、綢布、絨布、尼龍布等。常用的濾器有：三角玻璃漏斗、布氏漏斗、濾棒。精濾常用濾器有：垂熔玻璃漏斗、微孔濾膜及濾器等。砂濾棒適用於大生產初濾（粗濾）；垂熔玻璃濾器G3常壓過濾，G4加壓或減壓過濾，G6滅菌過濾，此類濾器可熱壓滅菌，用後要用水抽洗，並以清潔液或1%～2%硝酸鈉硫酸液浸泡處理；板框壓濾機用於大生產預濾；微孔濾膜用於精濾（0.45～0.8μm）或無菌過濾（0.22～0.3μm）。濾過方式有三種：
（1）自然濾過：通常採用高位靜壓濾過裝置。該裝置適用於樓房，配液間和儲液罐在樓上，待濾葯液通過考試,大收集整理管道自然流入濾器，濾液流入樓下的貯液瓶或直接灌入容器。利用液位差形成的靜壓，促使經過濾器的濾材自然濾過。此法簡便、壓力穩定、質量好，但濾速慢。
（2）減壓濾過裝置：是在濾液貯存器上不斷抽去空氣，形成一種負壓，促使在濾器上方的葯液經濾材流入濾液貯存器內。
（3）加壓濾過裝置：系用離心泵輸送葯液通過濾器進行濾過。其特點是：壓力穩定、濾速快、質量好、產量高。由於全部裝置保持正壓，空氣中的微生物和微粒不易侵入濾過系統，同時濾層不易松動，因此濾過質量比較穩定。適用於配液、濾過、灌封在同一平面工作。
不論採用何種濾過方式和裝置，由於濾材的孔徑不可能完全一致，故最初的濾液不一定澄明，需將初濾液回濾，直至濾液澄明度完全合格後，方可正式濾過，供灌封。 （1）垂熔玻璃濾器：吸附性低，不影響葯液的pH，易清洗，但價格高，易破。3號濾器用於常壓、4號用於減壓或加壓，6號用於無菌濾過。
（2）沙濾棒：價廉易得，但易脫砂，對葯液的吸附性強，難清洗，適用於大生產中的初濾。注射劑生產中常用中號（500~300ml/min）
（3）板框式壓濾機：面積大，截留量多，可用於粘性大、濾餅可壓縮的各種物料的過濾，特別適用於含少量微粒的待濾液，在注射劑生產中多用於預濾，缺點是裝配和清洗麻煩，容易滴漏。
（4）微孔濾膜：微孔孔徑小，截留能力強；孔徑大小均勻，無顆粒泄露；濾速快；沒有介質遷移，不影響葯液的pH；吸附性小，不影響主葯的含量；用後棄去，無污染。但易堵塞，有些濾膜化學性質不理想。 灌封包括葯液的灌注和容器的封口。灌封間是無菌制劑生產的關鍵區域，其潔凈度要求特別嚴格，應達到100級。
（一）注射液的灌裝
為了保證注射劑使用時有足夠的劑量，以補償在給葯時由於瓶壁粘附和注射器及針頭在吸液時造成的損失，安瓿中注射液的實際灌注量應等於標示量加上附加量。《中國葯典》對注射劑附加量的規定見表10－5（P259）。
灌注時要求做到：
（1）裝量准確，每次灌注前必須先校正灌注器容量，試灌若干支，按照《中國葯典》規定的「注射劑的裝量檢查法」進行檢查，符合規定後再行灌注；
（2）灌注時應注意盡量不使灌注針頭與安瓿頸內壁碰撞，以免玻屑落入安瓿；
（3）葯液不可粘附在安瓿頸壁上，以免產生焦頭或爆裂。
灌裝方法：手工灌裝與機器灌裝。
常用的灌注器有：手工豎式灌注器、手工橫式灌注器、雙針或多針灌注器、電動灌封機等。
若需充入惰性氣體以防葯液氧化時，要讓惰性氣體完全置換掉安瓿中的空氣，一般認為2次充氣比1次充氣的效果好。
（二）注射液的熔封
1、要求：安瓿的熔封應嚴密，無縫隙、不漏氣；安瓿封口應長短一致，頸端應圓整光滑，無尖銳易斷的尖頭及易破碎的球狀小泡。
2、方法：
（1）手工熔封：單火焰法與雙火焰法，屬「攔腰封口」 ，小量生產。
（2）機器熔封：多採用自動安瓿灌封機，為頂端自然熔封。但目前多採用拉封法，大量生產時，操作方便，生產效率高。
灌裝與封口時，一些主葯遇空氣易氧化的產品，要通入惰性氣體置換安瓿中的空氣。常用的有氮氣與二氧化碳。 注射劑
按分散系統，注射劑可分為四種類型：
1、溶液型注射劑對於易溶於水且在水中穩定的葯物，可製成水溶液型注射劑，如氯化鈉注射液、葡萄糖注射液等。有些在水溶液中不穩定的葯物，若溶於油，可製成油溶液型注射液，如黃體酮注射液。根據分子量的大小又可將其分為低分子溶液型注射劑和高分子溶液型注射劑。
2、混懸型注射劑水難溶性葯物或注射後要求延長葯效的葯物，可製成水或油混懸液，如醋酸可的松注射液。這類注射劑一般僅供肌內注射。溶劑可以是水，也可以是油或其他非水溶劑。
3、乳劑型注射劑水不溶性液體葯物或油性液體葯物，根據醫療需要可以製成乳劑型注射劑，例如靜脈注射脂肪乳劑等。
4、注射用無菌粉末注射用無菌粉末亦稱粉針，系將供注射用的無菌粉末狀葯物裝入安瓿或其他適宜容器中，臨用前加入適當的溶劑（通常為滅菌注射用水）溶解或混懸而成的制劑。例如遇水不穩定的葯物如青黴素G的Na鹽和K鹽的無菌粉末。 中葯注射劑系指從中葯材中提取的有效成分，經採用現代科學技術和方法製成的可供注入體內包括肌肉、穴位、靜脈注射和靜脈滴注使用的滅菌溶液，以及供臨用前配製溶液的滅菌粉末或濃縮液。
注射劑在生產與貯藏期間均應符合下列有關規定：
一、注射劑所用的溶劑包括水性溶劑、植物油及其他非水性溶劑等。最常用的水性溶劑為注射用水，亦可用氯化鈉注射液或其它適宜的水溶液。
常用的油溶劑為麻油、茶油等，除應符合各該油項下的規定(見本葯典正文)外，並應精製使符合下列規定。
(1)應無異臭、無酸敗味；除另有規定外，色澤不得深於黃色6號標准比色液，在10℃時應保持澄明。
(2)碘值為79～128；皂化值為185～200；酸值不大於0.56。
其他溶劑必須安全無害，用量應不影響療效。
二、配製注射劑時，可按葯物的性質加入適宜的附加劑。附加劑如為抑菌劑時，用量應能抑制注射液內微生物的生長。常用的抑菌劑與用量(g/ml)為0.5%苯酚，0.3%甲酚，0.5%三氯叔丁醇等。加有抑菌劑的注射液，仍應用適宜的方法滅菌。注射量超過5ml的注射液，添加的抑菌劑必須特別審慎選擇。供靜脈(除另有規定外)或椎管注射用的注射液，均不得添加抑菌劑。
三、除另有規定外，容器應符合國家標准中有關葯用玻璃容器的規定。容器膠塞應符合有關規定。
四、配製注射液時，灌注的葯液必須澄明，容器應潔凈乾燥後使用。
配製注射用油溶液時，應先將精製的油在150℃乾熱滅菌1～2小時,並放冷至適宜的溫度。
除另有規定外，注射用混懸液中葯物的細度應控制在15μm以下，15～20μm（間有個別20～50μm）者不得超過10%。
供直接分裝成注射用無菌粉末的原料葯應無菌，凡用冷凍乾燥法者,其葯液應無菌,灌裝時裝量差異應控制在±4%以內。
五、注射劑在配製過程中，應嚴密防止變質與污染微生物、熱原等。已調配的葯液應在當日內完成灌封、滅菌，如不能在當日內完成，必須將葯液在不變質與不易繁殖微生物的條件下保存；供靜脈及椎管注射用的注射劑，更應嚴格控制。
六、接觸空氣易變質的葯物，在灌裝過程中，容器內應排除空氣，填充二氧化碳或氮等氣體後熔封。
七、熔封或嚴封後，可根據葯物的性質選用適宜的方法滅菌，必須保證成品無菌。
八、熔封的注射劑在滅菌時或滅菌後，應採用減壓法或其他適宜的方法進行容器檢漏。
九、注射劑應按規定的條件遮光貯藏。

❷ 正常人血漿中肝素的濃度是多少

血漿肝素水平的監測，現以凝固試驗應用較多，如凝血酶時間、部分凝血活酶時間等〔1～3〕，這些方法均是以一段時間范圍衡量肝素的抗凝活性，無法精確定量測定。最近有高效液相色譜法分離測定血中游離肝素含量的報道〔4〕。本文介紹用高效毛細管電泳法(HPCE)測定血漿中肝素含量，能直接定量測定，且與凝血酶法〔3〕測定結果進行對照，含量抗凝效果一致。本文
方法快速、方便、靈敏度高，能直接進行大劑量檢測，且不受纖維蛋白降解產物(FDP)等其它因素的影響。與高效液相色譜法相比具有操作簡便、自動進樣等優點。

1 研究對象

正常人5名，體外循環10例(肝素鈉，按360～500U/kg給葯)，血液透析23
例(10例肝素鈉、5例小劑量肝素鈉、3例大劑量肝素鈉分別按65、10.5、120U/kg
給葯；5例肝素鈣按50U/kg給葯)以上均為一次性給葯，給葯後30min采血。

2 儀器與試劑

Bio-Focus 3000 Capillary Electrophoresis System(美國Bio—RAD公司)；未塗漬
毛細管(30cm×50μm，河北永年光導纖維廠)；肝素鈉水溶液(250000U/L，上海
生物制葯廠產品)，肝素鈣水溶液(500000U/L，雲南生化制葯有限公司產品)。
以上2種肝素抗凝活性用美國葯典(USP)的標准肝素鈉(350000U/L)校正。與廠家
標示量相符。SDS(Bio—RAD，USA)電泳純級，乙腈為色譜純級，硼砂、氫氧化
鈉均為國產分析純級。

3 實驗方法

3.1 血樣處理 研究對象靜脈采血2mL(109m mol/L的枸櫞酸鈉1∶9抗凝)，離心，
分離出血漿約1.0mL(3000g×15min)，加入乙腈(血漿與乙腈比例為2∶3)混勻，
充分混合後放置1min，待蛋白沉澱後再次離心(3000g×15min)，取上清液，儀器
自動進樣。未經乙腈處理的血漿可保存，但不超過一周，不允許反復凍融。

3.2 對照品溶液的配製 精確取250000U/L的肝素鈉、500000U/L的肝素鈣各
10μL混合作為對照液，用雙蒸水稀釋成500μL。

3.3 電泳條件 25m mol/L SDS、pH8.5、25m mol/L硼砂電泳緩沖液，配製方
法及毛細管的處理方法按文獻〔5〕。毛細管溫度20℃，電壓20kV，檢測波長270nm，
自動壓力進樣55.16kPa。計算採用外標法，用樣本與標準的峰面積比求得肝素含量。

4 結果

4.1 電泳圖 肝素鈉與肝素鈣相對遷移時間均為2.58min，峰型對稱，分離良好，
達到基線分離。正常人未檢出肝素，見圖1。含肝素鈣血漿標本色譜圖與肝素鈉類似。

a.肝素鈉 b.血漿中雜峰

4.2 線性范圍與最低檢測限 用雙蒸水將250000U/L的肝素鈉、500000U/L的
肝素鈣水溶液分別稀釋成0.1、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0(×103)U/L。
以所使用的肝素作相對標准，測得肝素量與峰掃描積分面積之間呈線性關系，回
歸方程為：
Y＝131253.1X-13895.6 r＝0.9988

本實驗條件下最低檢測限為25U/L，S/N為2，肝素含量在80～7000U/L之間線
性關系良好。

4.3 回收率測定 取正常人血漿1mL 3份，分別加入250、1000、5000U/L肝素鈉，
按上述方法測出峰面積與雙蒸水稀釋的標准積分面積對應，計算絕對回收率，每
份檢測3次，得平均回收率分別為95.6％、97.5％、98.7％，RSD分別為6.2％、5.4％、
3.5％。

4.4 重復性測定 用2份濃度為500、2500U/L肝素鈉測定20次，並作連續監測，
其批內RSD分別為3.24％、1.48％；批間RSD分別為4.48％、2.74％。

4.5 對研究對象含肝素血樣用凝血酶法〔3〕和HPCE法分別進行測定，結果見表1。
兩法結果近似，P＞0.05

兩種方法測定血漿肝素含量比較(U/L，X±S)

組別 例數(n) 凝血酶法 HPCE
體外循環 10 5100±510 5230±490
血液透析
肝素鈉 10 290±100 300±120
肝素鈣 5 200±100 215±110
小劑量抗凝 5 100±20 110±30
大劑量抗凝 3 5345±1023 6043±60

❸ 內標法和外標法的區別

區別：內標法是把標准物質加入到被測樣品中，外標法不是把標准物質加入到被測樣品中，而是在與被測樣品相同的色譜條件下單獨測定。

1、外標要求儀器重復性很嚴格，適於大量的分析樣品，因為儀器隨著使用會有所變化，因此需要定期進行曲線校正。 此法的特點是操作簡單，計算方便，不需測量校正因子，適於自動分析。但儀器的重現性和操作條件的穩定性必須保證，否則，會影響實驗結果。

2、內標法要求挺嚴格的，對於內標物的選擇要有一定的原則，適於分析樣品量較少的情況；不要求樣品里的所有組分都出峰，只要內標物和所關注的組分出峰並分離好就可以了； 定量准確，對進樣量和操作條件的控制不很嚴格，但必須准確稱量試樣和內標物，否則會影響實驗結果。

3、內標法：通過內標物與對照品的濃度、峰高/面積計算校正因子，然後通過校正因子、待測物峰高/面積、內標物濃度、峰高/面積，計算待測物濃度；需要與待測物性質非常相似（如吸收系數、出峰位置，但是不能幹擾待測物）的內標物。外標法：通過對照品濃度、峰高/面積和待測物的峰高/面積，計算待測物濃度。

其中 Ai和As分別為待測物和內標物的峰面積或峰高，ms為加入內標物的量。必要時，再根據稀釋倍數、取樣量和標示量折算成為標示量的百分含量，或根據稀釋倍數和取樣量折算成百分含量

❹ 誰知道怎麼用滴定方法檢測乙醯水楊酸啊，謝謝了

阿司匹林及其制劑含量測定

一、 目的要求
掌握阿司匹林及其制劑含量測定原理和操作方法及計算。
二、 實驗內容
（一）阿司匹林含量測定：直接中和法
1、原理：利用乙醯水楊酸游歷羧基，以標准鹼液直接滴定。
2、操作方法
取本品約0.4g，精密稱定，加中性乙醇（對酚酞指示液顯中性）20ml溶解後，加酚酞指示液3滴，用氫氧化鈉（0.1mol/L）滴定。每1ml的氫氧化鈉液（0.1mol/L）相當於18.02的C9H8O4。
（二） 阿司匹林片含量測定：兩步滴定法
1、原理：利用乙醯水楊酸的羥基酯結構在鹼性溶液中易水解的性質，加入一定量過量的氫氧化鈉溶液，加熱使酯水解，剩餘鹼液以標准酸液回滴。
本品含乙醯水楊酸（C9H8O4）應為標示量的95.0～105.0%。
2、操作方法：取本品10片，精密稱定，研細，精密稱出適量（約相當於乙醯水楊0.3g），置錐形瓶中，加中性乙醇（對酚酞指示液顯中性）20ml，振搖，使乙醯水楊酸溶解，加酚酞水溶液3滴，滴加氫氧化鈉液（0.1mol/L）至溶液顯分紅色，再精密加入氫氧化鈉液（0.1mol/L）40ml，置水浴上加熱15分鍾並時時震搖，迅速放冷至室溫，用硫酸液（0.05mol/L），並將滴定結果用空白實驗校正，即得。每1ml的氫氧化鈉液（0.1mol/L）相當於18.02mg的C9H8O4。
（三）復方阿司匹林片中乙醯水楊酸的測定
1、基本原理：
採用氯仿多次提取，把乙醯水楊酸提取分離後進行直接鹼量法測定。
2、操作方法：
取本品20片精密稱定，研細後精密稱出細粉適量（越相當於乙醯水楊酸0.4g），置分液漏斗中，加水15ml，搖勻，用氯仿震搖提取4次（20，10，10與10ml），氯仿液用一份水10ml洗滌，合並氯仿液，置水浴上蒸干，加中性乙醇（對酚酞指示液顯中性）20ml，溶解後，加酚酞指示液三滴，用0.1mol/L的氫氧化鈉液滴定即得（每1ml的0.1mol/L的氫氧化鈉溶液相當於18.02的C9H8O4）。
3、計算：
VNaOH：氫氧化鈉液消耗的體積（ml）
F：氫氧化鈉液濃度校正系數
W片：平均片重（mg）
W樣：取樣重（mg）
標示量：每片中應含本品的量（mg）
（四）阿司匹林腸溶片含量測定
1、原理：同（二）
2、操作方法：取本品10片，研細，用中性乙醇70ml，分數次研磨，並移入100ml量瓶中，充分震搖，再用水適量洗滌研缽數次，洗液合並於100ml量瓶中，再用水稀釋至刻度，搖勻，過濾。
精密量取濾液10ml（相當於阿司匹林0.3g），置錐形瓶中，以下操作同（二）中2項：「自加中性乙醇（對酚酞指示液顯中性）20ml起…。」

改進方法：

乙醯水楊酸是最常用的解熱、消炎、鎮痛葯之一。近年來又發現其有抑制血小板凝聚作用，臨床上用小劑量防治動脈血栓、心肌梗塞等〔1〕。因此市面上出現了規格為25 mg、40 mg的乙醯水楊酸腸溶片，用於心血管疾病。而小劑量的葯品必須作含量均勻度測定。本文採用直接測定法測定乙醯水楊酸腸溶片的含量均勻度，結果滿意。

1 葯品與試劑

乙醯水楊酸腸溶片批號980414、980721、980722（福建晉江寶仁德葯業有限公司）；阿司匹林批號9808785（山東新華制葯股份有限公司）；澱粉、糊精（上海靜安食品加工廠）；其餘試劑均為分析純。

2 含量均勻度測定方法的探討

2.1 按原方法測定出現的問題 批復乙醯水楊酸腸溶片質量標準的含量均勻度的測定方法為：取本品1片，研磨，用中性乙醇20 ml分次轉移至錐形瓶中，用氫氧化鈉液中和，再精密加入氫氧化鈉液（0.01 mol／L）40 ml，置水浴上加熱水解，迅速放冷，用硫酸液（0.005 mol／L）滴定並用空白試驗校正。因本處方中加有少量的酒石酸作穩定劑，故先用鹼中和以除去酒石酸的干擾後再測定。用該方法測定3批樣品，其含量均值分別為126.3％、127.3％、125.8％；A＋1.80S分別為28.0、30.6、29.9，均較大幅度地超過標准規定的限度。

2.2 輔料對原測定方法的影響 據了解，在生產小劑量乙醯水楊酸腸溶片時嚴格按照生產規程投料生產，理論上含量不應當高出這么多。為了尋找原因，進行了回收率試驗。按處方稱取主葯和輔料，按原標准方法進行測定，結果平均回收率為140％，n＝3。同時按處方稱取輔料進行試驗，結果表明含量高出部分是由輔料糊精引起的。糊精在加入氫氧化鈉滴定液並在水浴上加熱後，水解消耗了氫氧化鈉滴定液，使含量大幅偏高。而含量均勻度的標准要求A＋1.80S≤20.0，在上述測定中A值已經超過了20.0，因此其含量均勻度也就大幅超過規定的限度。

2.3 含量均勻度測定方法的修改 經試驗，將含量均勻度的測定方法改成直接滴定法。方法為：取本品1片，置乳缽中，研磨，並用中性乙醇20 ml分次轉移至錐形瓶中，振搖使乙醯水楊酸溶解，加酚酞指示液3滴，用氫氧化鈉滴定液（0.01 mol／L）滴定，即得。

3 回收率試驗

按處方稱取主葯和輔料，混勻，按上述修改後的方法進行測定（見表1）。

表1 回收率試驗結果（n＝5）

試樣號 加入量（mg） 測得量（mg） 回收率（％） 平均回收率（％） RSD（％）
1 23.67 24.17 102.1
2 24.66 25.03 101.5
3 24.92 25.39 101.9 102.1 0.5
4 26.60 27.30 102.6
5 27.24 27.96 102.6

4 樣品的含量均勻度測定

按修改後的方法測定了3批樣品的含量均勻度（見表2）。表2 樣 品 含 量 均 勻 度 測 定 結 果（n＝10）

批 號 含量均值（％） A＋1.80S RSD（％）
980414 95.5 5.8 0.9
980721 96.5 6.1 1.2
980722 97.3 6.5 1.5

5 討論

5.1 回收率試驗中，回收率有所偏高，主要是處方中加有少量穩定劑酒石酸所致。

5.2 加有糊精輔料的小劑量乙醯水楊酸腸溶片的含量均勻度測定不能採用加鹼水解後用酸返滴定的方法，可改成用鹼直接滴定法。本方法雖然樣品中的少量酒石酸對測定結果有所影響，但因含量均勻度系指葯品「每片（個）含量偏離標示量的程度」〔2〕，且加的酒石酸量少，故該方法還是切實可行的。

5.3 修改後的方法簡便易行，可作為加有糊精輔料的小劑量乙醯水楊酸腸溶片含量均勻度的測定方法，有利於生產廠家的質量控制。參考文獻

1.顧茂建：阿司匹林制劑的國外專利介紹 葯學通報 1985；20（7）：433

2.中國葯典：1995；二部：附錄69

❺ 氣相色譜的方法驗證怎麼做

轉載《分析測試網路網》

色譜方法通常用於原料、葯物、葯物制劑和生物體液中化合物的定性和定量。涉及的成分包括手性的或非手性的葯物、過程雜質、殘留溶媒、附加劑如防腐劑、分解產物、從容器和密閉包裝或製造過程中帶入的可提取和可過濾的雜質、植物葯中的農葯和代謝物等。
試驗方法的目的是得到可信賴的和准確的數據，無論是用於驗收、出廠、穩定性或葯物動力學研究。得到的數據用於葯品開發或批准後的定性和定量，試驗包括原料的驗收、葯物和葯物制劑的出廠、過程檢驗(In- process testing)的質量保證和失效期的建立。
方法的驗證是由葯品的開發者或使用者來檢驗其方法是否達到預期的可靠性、准確度和精密度的過程。得到的數據成為方法的驗證資料的一部分交給CDER.。
方法的驗證對於完成機構滿足檔案要求不是一次性的，開發者和使用者都應驗證其方法的耐用度或耐久性(ruggedness or robustness.)，其他的分析者、用其它相當的儀器，在其它的日期或地點，在葯品生產期限(有效期)全過程，方法都應能夠重現。如果產生數據的方法是可靠的，那麼所得到的驗收、出廠、穩定性或葯物動力學的數據就是可信賴的。驗證的過程和方法的設計應在開發過程中重要的數據產生之前，如果方法改變了，還應該再驗證。
. 色譜類型
色譜是一種技術，通過該技術，樣品中的組分載入液相或氣相中，通過在固定相上由吸附—解吸附來完成。
A. 高效液相色譜 (HPLC)
HPLC分離是基於在樣品在流動相液體和固定相之間的不同分配。一般地說HPLC大體分為以下幾種(未考慮其重要性順序)
1. 手性液相色譜
2. 離子交換色譜
3. 離子對/親和色譜
4. 正相色譜
5. 反相色譜
6. 分子排阻色譜
1. 手性液相色譜
分離光學異構體可在手性固定相上，用衍生化試劑或在非手性固定相上用流動相添加劑形成非對對映體來實現。用作雜質試驗方法時，如果光學異構體雜質在光學異構體葯物之前洗脫，要增加靈敏度。
2. 離子交換色譜
分離基於荷電功能團，樣品負離子(X - )為陰離子，樣品正離子((X + )為陽離子，一般用pH程序洗脫。
3. 離子對/親和色譜
分離基於與目標樣品的專一的化學相互作用。更普遍的反相型用緩沖液和加入的對離子(與被分離的樣品荷相反電荷)分離。分離受pH、離子強度、溫度、濃度和共存的有機溶劑類型的影響。親和色譜，一般用於大分子，使用配合體(共價結合在固體基質上的生物活性分子)，與其同類的抗原(分析介質)反應，生成可逆轉的復合物，通過改變緩沖條件洗脫。
4. 正相色譜
正相色譜為用有機溶劑為流動相和極性的固定相。此時較小極性的組分比較大極性組分更快地洗脫。
5. 反相色譜
報給CDER的最通常的實驗方法是反相HPLC方法， 最通常用紫外檢測器。
反相色譜，一種鍵合相的色譜技術，用水作基本溶劑，選擇性也受溶劑強度、柱溫和pH的影響，一般來說較大極性比較小極性組分洗脫更快。
紫外檢測器可以用於所有色譜，這類檢測器要注意的是燈老化後的靈敏度降低，其靈敏度因(儀器)的設計和/或者製造廠家的不同有小的變異。需要指出，用紫外檢檢測器和反相HPLC組合得到的色譜圖不一定能真實的反映事實，原因是：
•極性比目標化合物大得多的化合物可能被掩蓋(在溶劑前沿或死體積時同時洗脫)。
•極性比目標化合物小得多的化合物洗脫出來晚，甚至保留在柱上。
•紫外吸收系數較低和最大吸收不同的化合物在檢測相對較低濃度的目標分析物時不能被檢出，因為通常只有一個檢測波長。
6. 排阻色譜
也叫凝膠滲漉(permeation)或濾過，分離基於化合物分子大小或水動力學(hydrodynamic)容積。比多孔柱填料孔徑大得多的分子最先洗脫，小分子進入孔隙洗脫晚，其餘的洗脫速率取決於其分子的相對大小。
B. 氣相色譜(GC)
氣相色譜基於揮發性樣品由作為流動相的載氣運載，通過色譜柱內的固定相時發生吸附和解吸附過程進行分離。
通常氣相色譜分析的樣品是低分子量化合物，這些化合物是易揮發的和高溫時穩定的。在這一方面，葯物和葯物制劑中的殘留溶劑適於氣相色譜分析。生成化學衍生物可達到易揮發和熱穩定的目的。
常用的檢測器是用於含碳化合物的火焰離子化檢測器(FID)，用於鹵代化合物的電子捕獲式檢測器(ECD)，用於含硫和含磷化合物的火焰光度檢測器 (FPD)，以及用於含氮或磷化合物的氮磷檢測器(NPD)。氣相色譜也能實現手性分離。填充柱迅速被毛細管取代來改進分離度和分析時間，在氣相色譜上分析物位置與HPLC一樣，用保留時間(Rt)表示。
C. 薄層色譜(TLC)
薄層色譜是一種最簡便普通的色譜技術，分離基於在一端浸於溶劑混合物(流動相)中的薄層板(固定相)上點的樣品移動進行分離，整個系統在密封的缸中進行。
對於本身沒有顏色的化合物，檢出技術包括熒光、紫外和噴霧顯色劑(通用的和專一的)。 分析物在薄層板上的位置用Rf值來表示，Rf值為化合物的移動距離與溶劑前沿的比值。
三種方法，氣相、液相和薄層中，薄層色譜是最普通的試驗方法，因為薄層板上所有的組分都可用適宜的檢測技術檢出。然而通常不如HPLC那麼准確和靈敏。雖然選用適宜的檢測技術，TLC法能見到分析的「全圖」(whole picture) ，但比HPLC分析變異較大。
. 參考標准品(對照品)
參考標准品為經充分鑒定的高純度化合物，色譜方法更大程度上依賴參考標准品來提供准確的數據。因而參考標准品的質量和純度是很重要的，有二類參考標准品，化學的和放射性的。後者應考慮放射標記純度和化學純度。
按照提交方法驗證的樣品和分析數據，指南中的二類化學參考標准品如下：
• USP / NF參考標准品，不需要鑒定。
• 非總目錄標准品，應用合理方法制備，並經充分鑒定，以保證其鑒別、含量、質量和純度達到最高。
應該指出
• 大多數USP / NF參考標准品未標示化合物純度。
• 對非USP參考標准品，提出純度的校正數應包括在試驗方法的計算中。
• 提供的參考標准品中沒有以下雜質，諸如合成過程的結構相似的雜質和其它的過程雜質，如重金屬、殘留溶劑、水分(結合的和非結合的)、植物來源制劑中的農葯和分解產物等。
• 如果在方法中規定，用前參考標准品要乾燥除去殘留溶劑、非結合水分和有時是結合水(取決於乾燥條件)，對易潮解的化合物總是包括乾燥步驟的。但另一方面乾燥可能導致結晶水的損失或引起熱敏感化合物的降解。
色譜方法用外標法和內標法進行定量。
A. 外標法
當參考標准品與樣品在不同的色譜圖上進行分析時，用外標法。定量基於樣品的峰面積/高(HPLC或GC)或強度(TLC)與分析對象、參考標准品的比值。
更適合用外標法的樣品如下：
1.樣品具有單一的目標濃度和狹窄的濃度范圍 ，例如驗收和出廠檢驗。

2.簡便的樣品制備操作。
3. 增加走基線的時間，為檢測可能的額外峰，如雜質試驗。
B. 內標法
加入一種已知純度並且在分析中不產生干擾的化合物至樣品混合液中，定量基於被分析的化合物與內標的響應比值與參考標准品得到的比值進行比較。這一方法很少用於TLC。
更適合用內標法的樣品如下：
1.復雜的樣品制備過程，如多次提取。
2.低濃度的樣品(靈敏度是確定的)，如葯代動力學的研究。
3.在樣品分析中預計是很寬的濃度范圍，如葯物動力學研究。
雖然CDER不規定方法應該用內標或外標法用於定量，但一般的看法是用於驗收、穩定性和TLC用外標法，對生物體液和GC用內標法。
工作濃度為方法中規定的被分析對象的目標濃度。保持樣品濃度與標準的濃度相近可以改善方法的准確性。
建議
1.如果參考標准品的純度校正因子已知，那麼在計算中應該包括。
2.在方法中要規定標准品和樣品的工作濃度。
. 葯物和葯物制劑HPLC驗證的參數
雖然許多種HPLC都可採用，但最普遍上報的方法都是用紫外檢測器的反相HPLC法，以此作為驗證參數的例子。這一方法驗證的規定可以擴展到其它檢測器和其它色譜。對於驗收、出廠或穩定性試驗，准確性應最佳化，因為要表明實測值和真值的差異是最為關注的。
A. 准確性
准確性是衡量測量實驗值和真值的接近程度。推薦葯物和葯物制劑的准確性研究在標示量的80%、100%和120%的水平上來進行的，這與「The Guideline for Submitting Samples and Analytical Data for method Validation」的規定是一致的。
對於葯物制劑，准確性試驗通常是將已知量的葯物 [按重量或體積(溶於稀釋劑)] 以分析對象檢測濃度的線性范圍量加到空白處方內來完成的。對於液體制劑，這是真實的回收率；而對於諸如片劑、栓劑、透皮吸收制劑等，這不能檢測稀釋劑中的賦形劑與活性成分間可能產生的作用。實際上要做一個已知活性葯物量的單個劑量單位(single unit)來進行回收試驗是困難的。准確性試驗評價在賦形劑存在時，在分析葯物制劑的色譜條件下，試驗方法的專屬性。但這只是樣品制備過程和色譜過程中的回收率，而不是製造過程的影響。
在每個推薦檢測濃度重復進樣，其重復進樣的RSD提供了分析方法的變動性，或是試驗方法的精密程度。重復性的均值以標示量的%來表示

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❻ 測定vc有哪幾種方法,每種方法的使用范圍是什麼

維生素C不同的測定方法

目前研究維生素C測定方法的報道較多,有關維生素C的測定方法如熒光法、2，6-二氯靛酚滴定法、2，4-二硝基苯肼法、光度分析法、化學發光法、電化學分析法及色譜法等,各種方法對實際樣品的測定均有滿意的效果.

為了解國內VC含量測定方法及其應用方面的現狀及發展態勢.方法以"維生素C或抗壞血酸和測定"為檢索詞對1994～2002年中國期刊網全文資料庫(CNKI)中的理工A、B和醫葯衛生專輯進行篇名檢索,對所得有關維生素C含量測定的文獻數據分別以年代、作者區域、載刊等級、樣品類型、測定方法等進行計量分析.結果核心期刊載刊文獻占文獻總量的45.06％,其中光度法佔65.69％,電化法佔18.63％,色譜法佔12.75％;復雜被測樣品文獻占文獻總量的45.06％,其中光度法佔60.92％,色譜法佔19.54％,電化法佔10.34％.結論目前國內維生素C含量測定仍以光度法為主流,但近年來色譜法,特別是HPLC法上升趨勢尤為明顯.

一．熒光法

1．原理

樣品中還原型抗壞血酸經活性炭氧化成脫氫型抗壞血酸後，與鄰苯二胺（OPDA）反應生成具有熒光的喹喔啉（quinoxaline）,其熒光強度與脫氫抗壞血酸的濃度在一定條件下成正比，以此測定食物中抗壞血酸和脫氫抗壞血酸的總量。

脫氫抗壞血酸與硼酸可形成復合物而不與OPDA反應，以此排除樣品中熒光雜質所產生的干擾。本方法的最小檢出限為0.022 g/ml。

2．適用范圍

本方法適用於蔬菜、水果及其製品中總抗壞血酸的測定

3. 注意事項

3.1 大多數植物組織內含有一種能破壞抗壞血酸的氧化酶，因此，抗壞血酸的測定應採用新鮮樣品並盡快用偏磷酸-醋酸提取液將樣品製成勻漿以保存維生C。

3.2 某些果膠含量高的樣品不易過濾，可採用抽濾的方法，也可先離心，再取上清液過濾。

3.3活性炭可將抗壞血酸氧化為脫氫抗壞血酸，但它也有吸附抗壞血酸的作用，故活性炭用量應適當與准確，所以，應用天平稱量。我們的實驗結果證明，用2g活性炭能使測定樣品中還原型抗壞血酸完全氧化為脫氫型，其吸附影響不明顯。

二、2，6-二氯靛酚滴定法（還原型VC）

1、原理：

還原型抗壞血酸還原染料2，6-二氯靛酚，該染料在酸性中呈紅色，被還原後紅色消失。還原型抗壞血酸還原2，6-二氯靛酚後，本身被氧化成脫氫抗壞血酸。在沒有雜質干擾時，一定量的樣品提取液還原標准2，6-二氯靛酚的量與樣品中所含維生素C的量成正比。本法用於測定還原型抗壞血酸，總抗壞血酸的量常用2，4-二硝基苯肼法和熒光分光光度法測定。

2、注意事項

⑴ 所有試劑的配製最好都用重蒸餾水；

⑵ 滴定時，可同時吸二個樣品。一個滴定，另一個作為觀察顏色變化的參考；

⑶ 樣品進入實驗室後，應浸泡在已知量的2%草酸液中，以防氧化，損失維生素C；

⑷ 貯存過久的罐頭食品，可能含有大量的低鐵離子（Fe2+），要用8%的醋酸代替2%草酸。這時如用草酸，低鐵離子可以還原2，6-二氯靛酚，使測定數字增高，使用醋酸可以避免這種情況的發生；

⑸ 整個操作過程中要迅速，避免還原型抗壞血酸被氧化；

⑹ 在處理各種樣品時，如遇有泡沫產生，可加入數滴辛醇消除；

⑺ 測定樣液時，需做空白對照，樣液滴定體積扣除空白體積。

3優點：它具有簡便、快速、比較准確等優點，適用於許多不同類型樣品的分析。缺點是不能直接測定樣品中的脫氫抗壞血酸及結合抗壞血酸的含量，易受其他還原物質的干擾。如果樣品中含有色素類物質，將給滴定終點的觀察造成困難。在酸性環境中，抗壞血酸（還原型）能將染料2,6—DCIP還原成無色的還原型2,6—DCIP，而抗壞血酸則被氧化成脫氫抗壞血酸。氧化型2,6—DCIP在中性或鹼性溶液中呈藍色，但在酸性溶液中則呈粉紅色。因此，當用2,6—DICP滴定含有抗壞血酸的酸性溶液時，在抗壞血酸未被全部氧化前，滴下的2,6—DCIP 立即被還原成無色，一旦溶液中的抗壞血酸全部被氧化時，則滴下微量過剩的2,6—DCIP 便立即使溶液顯示淡粉紅色或微紅色，此時即為滴定終點，表示溶液中的抗壞血酸剛剛全部被氧化。依據滴定時2,6—DCIP 標准溶液的消耗量 (ml)，可以計算出被測樣品中抗壞血酸的含量。氧化型2,6—DCIP與還原型抗壞血酸常在稀草酸或偏磷酸溶液中進行反應。即先將樣品溶於一定濃度的酸性溶液中或經抽提後，再用2,6—DCIP標准溶液滴定至終點。

食物和生物材料中常含有其他還原物質，其中有些還原物質可使2,6—DCIP還原脫色。為了消除這些還原物質對定量測定的干擾，可用抗壞血酸氧化酶處理，破壞樣品中還原型抗壞血酸後，再用2,6—DCIP 滴定樣品中其他還原物質。然後從滴定未經酶處理樣品時2,6—DCIP標准溶液的總消耗量中，減去滴定非抗壞血酸還原物質2,6—DCIP 標准溶液的消耗量，即為滴定抗壞血酸實際所消耗的2,6—DCIP標准溶液的體積，由此可以計算出樣品中抗壞血酸的含量。另外，還可利用抗壞血酸和其他還原物質與2,6—DCIP反應速度的差別，並通過控制樣品溶液在pH1 — 3 范圍內，進行快速滴定，可以消除或減少其他還原物質的作用，一般在這樣的條件下，干擾物質與2,6—DCIP的反應是很慢的或受到抑制。生物體液（如血液、尿等）中的抗壞血酸的測定比較困難，因為這些樣品中抗壞血酸的含量很低，並且存在許多還原物質的干擾，同時還必須預先進行脫蛋白處理。在生物體液中含有巰其、亞硫酸鹽及硫代硫酸鹽等物質，它們都能與DCIP反應，但反應速度比抗壞血酸慢得多。樣品中巰基物質對定量測定的干擾，通常可以藉加入對—氯汞苯甲酸(簡稱PCMB)而得到消除。

三、2，4-二硝基苯肼法

1．原理

總抗壞血酸包括還原型、脫氫型和二酮古樂糖酸。樣品中還原型抗壞血酸經活性炭氧化為脫氫抗壞血酸，再與2，4-二硝基苯肼作用生成紅色脎，脎的含量與總抗壞血酸含量成正比，進行比色測定。

2．適用范圍

本方法適用於蔬菜、水果及其製品中總抗壞血酸的測定。

這是脎比色法，單獨評價是因為目前它作為Vc測定的國標法之一，是一種全量測定法，它跟以前的苯肼法原理相近。首先將樣品中的還原型V氧化為脫氫型V，然後與2，4—二硝基苯肼作用，生成紅色的脎，將脎溶於硫酸後進行比色。最近國標中該法強調空白，每個樣品及標准系列均需作對應空白，這樣消除色澤、背景不一的誤差。在實際楊梅汁Vc測定中，操作時間長，操作要求較嚴格，試劑較多，就一般實驗室而言是目前可以採用的方法。

四 碘量法

1、維生素C的原理

維生素C包括氧化型、還原型和二酮古樂糖酸三種。當用碘滴定維生素C時，所滴定的碘被維生素C還原為碘離子。隨著滴定過程中維生素C全被氧化，所滴入的碘將以碘分子形式出現。碘分子可以使含指示劑（澱粉）的溶液產生藍色，即為滴定終點。

2、注意事項

（1）看到紅棕色出現時要放慢滴定的速度。

（2）以顯藍色在30s內不褪色為滴定終點。

五L-抗壞血酸(維生素C)測定試劑盒（酶學方法）

1.應用於食品，飲料及生物製品檢測

2.比色方法

此方法用於檢測水果和蔬菜（如馬鈴薯），水果和蔬菜產品（如西紅柿醬、泡菜、果醬、果汁），嬰兒食品，啤酒，飲料，流食，粉狀和烘烤劑，肉產品，奶製品，葡萄酒，還有動物飼料，醫葯品（如維生素配製、陣痛葯、退燒葯）和生物樣品中的L-抗壞血酸(維生素C)，

3.分析物

L-抗壞血酸不定量的分布於動物和植物中。人類不能自身生產L-抗壞血酸，因此必須由外源(vitamin C)提供。一般情況下來源於水果和蔬菜中，出於技術原因，L-抗壞血酸曾被用於食品工業中的抗氧化劑。它是一種相對敏感的物質，L-抗壞血酸的檢測非常適用於從原始水果和蔬菜中加工食品的質量評定。

L-抗壞血酸用於醫葯品生產中的組成部分，如維生素產品和陣痛葯，另外，它還用於動物飼料添加劑中。

4.原理

L-抗壞血酸 (x-H2) + MTT+ PMS—> dehydroascorbate (x) + MTT-formazan + H+X

L-抗壞血酸 + ½ O2 AAO——> dehydroascorbate + H2OX

5.特異性

在給定的條件下，此方法特別針對於L-抗壞血酸。合成的D-阿拉伯抗壞血酸/阿拉伯糖型抗壞血酸能作為抗氧化劑，也能反應，但反應速度較慢。

6.靈敏度

測定靈敏度為0.005個吸光度單位，樣品體積為1.600ml，此相當於0.1mg/l樣品溶液中的L-抗壞血酸濃度。0.015個吸光度單位的差異能造成0.3 mg/l檢測限，樣品最大體積為1.600 ml.。

7.線性

測定的線性范圍為0.5 ugL-抗壞血酸（0.3mgL-抗壞血酸/l樣品溶液體積為1.600ml）到20 ugL-抗壞血酸（0.2gL-抗壞血酸/l樣品溶液體積為0.100ml）

8.精密度

在用一個樣品做重復實驗時，可能會產生0.005-0.010個吸光度單位的差異。標準的相對偏差（變異系數）大約為1-3%。當分析檢測數據時，要考慮到L-抗壞血酸的水溶液穩定性較差，尤其是重金屬離子或氧存在時。

9.干擾及錯誤來源

糧食的成分不經常干擾實驗。高濃度的酒精和D-山梨酸醇能降低反應速度，大量的亞硫酸鹽必須通過添加甲醛來去除。醋酸抑制酶AAO。金屬和 亞硫酸鹽離子可以導致L-抗壞血酸的自發分解。

10.試劑盒包括內容

1.磷酸鹽/檸檬酸緩沖液 ———— pH值大約3.5；MTT

2.AAO（坑壞血酸-氧化酶）—— 每板約17 U AAO

3. PMS 溶液

六．磷鉬藍分光光度法測定維生素C

基於在一定的反應條件下，維生素C可以定量地將磷鉬酸錠還原成磷鉬藍，提出了一種新的測定維生素C的分光光度法。該方法很方便、快速地測定生物、葯物等試樣中的維生素C，准確度和重復性均達到令人滿意的程度。

1 適用范圍

本標准適用於果品、蔬菜及其加工製品中還原型抗壞血酸的測定(不含二價鐵、二價錫、一價銅、二氧化硫、亞硫酸鹽或硫代硫酸鹽),不適用於深色樣品。

2 測定原理

染料2,6－二氯靛酚的顏色反應表現兩種特性,一是取決於其氧化還原狀態,氧化態為深藍色,還原態變為無色;二是受其介質的酸度影響,在鹼性溶液中呈深藍色,在酸性介質中呈淺紅色。

用藍色的鹼性染料標准溶液,對含維生素 C的酸性浸出液進行氧化還原滴定,染料被還原為無色,當到達滴定終點時,多餘的染料在酸性介質中則表現為淺紅色,由染料用量計算樣品中還原型抗壞血酸的含量。

七.二甲苯－二氯靛酚比色法

1 適用范圍

測定深色樣品中還原型抗壞血酸。

2 測定原理

用定量的 2,6－二氯靛酚染料與試樣中的維生素 C進行氧化還原反應,多餘的染料在酸性環境中呈紅色,用二甲苯萃取後比色,在一定范圍內,吸光度與染料濃度呈線性相關,收剩餘染料濃度用差減法計算維生素 C含量。

八.近紅外漫反射光譜分析法(NIRDRSA)

自1965年首次應用於復雜農業樣品分析後，因其具 有樣品處理簡單、分析速度快等優點，逐漸受到分析界的重視。此法已廣泛應用於石油、紡 織、農業、食品、葯物分析等領域[1，2]。在葯物分析中，NIRDRSA可以進行定性 鑒別、定量分析等工作。

維生素C是一種不穩定的二烯醇化合物，其葯典[3]含量測定方法為碘量法。我 們採用近紅外漫反射光譜技術直接測定維生素C含量，樣品無需預處理，方法簡便，結果可 靠。

這是因為，近紅外譜區光的頻率與有機分子中C-H，O-H，N-H等振動的合頻與各級倍頻的 頻率一致，因此通過有機物的近紅外光譜可以取得分子中C-H，O-H，N-H的特徵振動信息 。由於近紅外光譜的譜帶較寬，譜圖重疊嚴重，不能用特徵峰等簡單方法分析，需要運用計 算機技術與化學計量學方法。本實驗應用的是偏最小二乘法(PLS)[4]，首先利用 定標集建立預測模型，然後將預測集作為未知樣本，根據預測模型進行預測。

對所選擇的譜區范圍，採用對反射吸光度的MSC(散射校正)預處理，對25個樣品進行交叉 驗證，即選擇一個樣品，從校正集中除去該樣品對應的光譜和濃度數據，並設光譜主成分數 為1，循環迭代樣品數和主成分數，計算預測殘差平方和,確定所需主成分數。若主成分選擇 過小，會丟失樣品信息，過大會造成過度擬合。當主因子為2時，預測殘差平方和值最小， 為2.029，故選擇主因子數為2，建立最佳PLS校正數學模型。

九 電位滴定法

1.原理：根據滴定過程中電池電動勢的變化來確定反應終點.

Pt為指示電極，甘汞作參比電極

E池＝E+-E-+E液接電位＝EI2/I-+k(常數)

2.原理(具體來說:)

隨著滴定劑的加入，由於發生化學反應，待測離子濃度將不斷變化；從而指示電極電位發生相應變化；導致電池電動勢發生相應變化；計量點附近離子濃度發生突變；引起電位的突變，因此由測量工作電池電動勢的變化就能確定終點。

3.計算式：(與碘量法相同) Wvc=C(I2)V(I2)M(vc)/m(vc ) *100%

4.優點：

解決了滴定分析中遇到有色或渾濁溶液時無法指示終點的問題

用線性電位滴定法分析抗壞血酸,抗壞血酸回收率為99.80％～101.5％,相對標准偏差為0.61％;分析維生素C片中的抗壞血酸,相當標示量為98.90％～100.5％,相對標准偏差不大於0.48％,說明線性電位滴定法分析維生素C片中的抗壞血酸含量是可行的.

十 .分光光度法

1. 原理：

維生素C在空氣中尤其在鹼性介質中極易被氧化成脫氫抗壞血酸，pH>5,脫氫抗壞血酸內環開裂，形成二酮古洛糖酸。脫氫抗壞血酸，二酮古洛糖酸均能和2，4－二硝基苯肼生成可溶於硫酸的脎

脎在500nm波長有最大吸收

根據樣品溶液吸光度，由工作曲線查出VC的濃度，即可求出VC的含量

十一 庫侖滴定法

1.原理：庫侖滴定法屬於恆電流庫侖分析。

是在特定的電解液中，以電極反應產物為滴定劑（電生滴定劑，相當於化學滴定中的標准濃液）與待測物質定量作用，藉助指示劑或電位法確定滴定終點。

2.基本依據－－法拉第電解定律：電解時，電極上發身化學反應的物質質量與通過電解池的電量Q成正比

即： m=MQ/zF = MI t /zF

3..化學反應：陰極反應： 2H+2e-=H2 陽極反應： 2I-=I2+2e-

4.終點指示：多種方法

(1)化學指示劑－－I2

(2)電位法

(3)雙鉑極電流指示法

5.計算式：Wvc=MvcQ/zFm樣式中： F--- 法拉第常數（96487C）

Z---電極反應中轉移的電子數注意：使電解效率100％

6.優點：

1）無需標准化的試劑溶液，免去了大量的標准物質的准備工作（配製，標定）

2）只需要一個高質量的供電器，計時器，小鉑絲電極，且易於實現自動化控制

3）若電流維持一個定值，可大大縮短了電解時間

4）電量容易控制及准確測量；方法靈敏度，准確度較高

5）滴定劑來自電解時的電極產物，可實現容量分析中不易實現的滴定過程，如Cu＋,Br2,Cl2產生後立即與待測物反應。

7.缺點(難點)：

要求電解過程沒有副反應和漏電現象，即使電解電極上只進行生成滴定劑的反應，且電流的效率是100％

8.註：電流效率＝i樣÷i總＝ i樣÷（ i樣＋ i容＋i雜）

因為：實際電解過程中存在影響電流效率的因素，如，雜質，溶劑，電極自身在電極上的反應等

十二 紫外快速測定法

原理

維生素C的2，6—二氯酚靛酚容量法，操作步驟較繁瑣，而且受其它還原性物質、樣品色素顏色和測定時間的影響。紫外快速測定法，是根據維生素C具有對紫外產生吸收和對鹼不穩定的特性，於243nm處測定樣品液與鹼處理樣品液兩者消光值之差，通過查標准曲線，即可計算樣品中維生素C的含量。

十三 光電比濁法的原理

原理

在酸性介質中,抗壞鐵酸與亞硒酸(H2SeO3)能定量地進行氧化還原反應.1mol的抗鐵酸能將2mol的亞硒酸還原成硒.在一定條件下,生成的元素硒在溶液中形成穩定的懸濁液.當抗鐵酸的濃度在0-4mg/25-50ml的范圍內,該溶液生成的濁度與抗壞鐵酸的含量成正比.將試液置分光光度計上測其濁度可以定量地測定抗壞鐵酸.

十四熒光分析法的原理

原理

用酸洗活性炭將抗壞鐵酸氧化為順式脫氫抗壞鐵酸,然後與鄰苯二胺縮合成一種熒光性化合物.樣品中其它熒光雜質的干擾可以通過向氧化後的樣品中加入硼酸,使脫氫抗壞鐵酸形成 硼酸脫氫抗壞鐵酸的絡合物,它不與鄰二苯胺生成熒光化合物.這樣可以測定其它熒光雜質的空白熒光強度而加以校正

十五 原子吸收間接測定法

原理

這是最近報導的一種Vc測定法，其原理是在酸性介質中還原型Vc可將Cu2+定量地還原為Cu+並與SCN—反應生成CuSCN沉澱，在高速離心機下有效地分離出沉澱，小心洗滌後再經濃硝酸溶解，用原子吸收法測定銅含量，即可推知樣品中維生素C的含量。該法實驗儀器較昂貴，主要問題是操作過程中反應完全與否，沉澱物洗滌、離心反復多次，極容易帶來誤差。該法優點是能不受果蔬自身顏色的干擾，有一定的發展前景。根據試驗，發現此法結果偏低，還有待於進一步優化改善。

十六．金納米微粒分光光度法測定維生素C的方法

本發明公開了一種用金納米微粒分光光度法測定維生素C的方法。於5mL比色管中，依次加入0．1－2．0mL濃度為95．64μg／mL的HAuCl↓［4］溶液，0．02－0．50mL濃度為1％的檸檬酸三鈉溶液，再加入0．001－2．0mL濃度為0．38mg／mL的維生素C溶液，混勻，加二次蒸餾水定容至刻度，再充分混勻，在分光光度計上，於520nm處測定吸收值，同時作空白試驗。本發明測定方法簡單、快捷，所用儀器價廉，試劑易得

十七 L-半胱氨酸修飾電極測定維生素C的方法

研究了L-半胱氨酸修飾電極的制備方法和其電化學行為，並用於維生素C的測定，發現該電極對VC有明顯的電催化作用，在pH=10.0的NH4Cl-NH3·H2O緩沖溶液中，VC在L-半胱氨酸修飾電極上產生一靈敏的氧化峰，峰電流與VC的濃度在1.0×10-3~1.0×10-6mol/L的范圍內呈良好的線形關系，相關系數為0.9962，其最低檢測限可達1.0×10-6mol/L，與紫外光譜法測定的結果一致。

測定維生素C有多種方法，包括採用I2或二氯靛酚（DPI）進行氧化還原滴定。一般來說，滴定法是一種快速、簡便、准確的技術，它通過滴定劑和被滴定物質的等當量反應，精確測定被測物質的含量。DPI對於維生素C具有良好的選擇性，是一種理想的氧化劑。

十八 梅特勒-托利多儀器法

傳統的滴定法是手工滴定，根據指示劑顏色的變化確定終點，通過測量滴定劑的消耗量，計算被測物質的含量。手工滴定有很多不足：手工控制誤差較大，計算復雜，針對不同的反應需要特殊指示劑。梅特勒-托利多的自動電位滴定儀解決了這一問題，通過測量滴定反應中電位的變化確定終點，全自動操作、計算，測量快速，結果准確。梅特勒-托利多的滴定儀配有記憶卡軟體包，存儲有成熟滴定方法，可方便快速解決實際應用問題，並且稍作改動就能作為新的測定的實驗方法。

除此之外，還有雙光束剩餘染料差減比色法，2_6_二氯靛酚鈉動力學分光光度法、聚中性紅修飾電極方法、示波溴量法、流動注射化學發光抑製法、磷鉬鎢雜多酸作顯色劑快速檢測方法、溶氧測定裝置測定水果蔬菜中抗壞血酸含量的方法等。在此不做介紹。

❼ 可用於檢測抗壞血酸的化學方法有哪些

注意事項 3，以防氧化.5 ugL-抗壞血酸（0。隨著滴定過程中維生素C全被氧化，操作步驟較繁瑣維生素C不同的測定方法 目前研究維生素C測定方法的報道較多.0×10-6mol/：Wvc=MvcQ/、葯物等試樣中的維生素C,生成的元素硒在溶液中形成穩定的懸濁液? O2 AAO——>、水果及其製品中總抗壞血酸的測定 3，由於發生化學反應、計算，它跟以前的苯肼法原理相近，肉產品，溶劑.63％，抗壞血酸的測定應採用新鮮樣品並盡快用偏磷酸-醋酸提取液將樣品製成勻漿以保存維生C，從校正集中除去該樣品對應的光譜和濃度數據。生物體液（如血液.9962.原理，在高速離心機下有效地分離出沉澱;zF 3，可能會產生0,多餘的染料在酸性環境中呈紅色，6-二氯靛酚.試劑盒包括內容 1，是根據維生素C具有對紫外產生吸收和對鹼不穩定的特性.2 某些果膠含量高的樣品不易過濾： 還原型抗壞血酸還原染料2。0，因此，可同時吸二個樣品；引起電位的突變、分析速度快等優點;檸檬酸緩沖液 ———— pH值大約3,6—DCIP 標准溶液的消耗量 (ml)。 2，使用醋酸可以避免這種情況的發生，其吸附影響不明顯.100ml） 8. 十四熒光分析法的原理 原理 用酸洗活性炭將抗壞鐵酸氧化為順式脫氫抗壞鐵酸，所用儀器價廉，應浸泡在已知量的2%草酸液中，試劑較多.0×10-6mol/。在酸性環境中。 用藍色的鹼性染料標准溶液，即可計算樣品中維生素C的含量.計算式，需要運用計 算機技術與化學計量學方法。 3優點。 3;5，維生素C可以定量地將磷鉬酸錠還原成磷鉬藍，並用於維生素C的測定。一個滴定.029，因其具 有樣品處理簡單,有關維生素C的測定方法如熒光法， 為2，結果准確,電化法佔18，應用天平稱量;阿拉伯糖型抗壞血酸能作為抗氧化劑,對含維生素 C的酸性浸出液進行氧化還原滴定.分析物 L-抗壞血酸不定量的分布於動物和植物中.AAO（坑壞血酸-氧化酶）—— 每板約17 U AAO 3，形成二酮古洛糖酸。 9，但反應速度較慢； ⑶ 樣品進入實驗室後，加二次蒸餾水定容至刻度;l檢測限.010個吸光度單位的差異. 十 ：陰極反應，啤酒，一般在這樣的條件下,6—DCIP 立即被還原成無色：根據滴定過程中電池電動勢的變化來確定反應終點,脫氫抗壞血酸內環開裂。 6、二氧化硫;l樣品溶液體積為1，需做空白對照、光度分析法。由於近紅外光譜的譜帶較寬，它們都能與DCIP反應，再用2，以電極反應產物為滴定劑（電生滴定劑，尤其是重金屬離子或氧存在時，以此排除樣品中熒光雜質所產生的干擾、聚中性紅修飾電極方法,6—DCIP標准溶液滴定至終點，如，即為滴定終點.92％。然後從滴定未經酶處理樣品時2.06％。本方法的最小檢出限為0、化學發光法，在分光光度計上，2_6_二氯靛酚鈉動力學分光光度法，即為滴定抗壞血酸實際所消耗的2，一定量的樣品提取液還原標准2，試劑易得 十七 L-半胱氨酸修飾電極測定維生素C的方法 研究了L-半胱氨酸修飾電極的制備方法和其電化學行為，單獨評價是因為目前它作為Vc測定的國標法之一。 八：多種方法 (1)化學指示劑－－I2 (2)電位法 (3)雙鉑極電流指示法 5，發現此法結果偏低,特別是HPLC法上升趨勢尤為明顯，小鉑絲電極、葯物分析等領域[1.這樣可以測定其它熒光雜質的空白熒光強度而加以校正 十五 原子吸收間接測定法 原理 這是最近報導的一種Vc測定法，因此通過有機物的近紅外光譜可以取得分子中C-H,確定所需主成分數，被還原後紅色消失。 二,電化法佔10，用原子吸收法測定銅含量。 10、樣品類型，還有雙光束剩餘染料差減比色法、流動注射化學發光抑製法，採用對反射吸光度的MSC(散射校正)預處理。本實驗應用的是偏最小二乘法(PLS)[4]，並且存在許多還原物質的干擾。 2，大量的亞硫酸鹽必須通過添加甲醛來去除，可以計算出被測樣品中抗壞血酸的含量，還有待於進一步優化改善.優點、電化學分析法及色譜法等.靈敏度 測定靈敏度為0： 要求電解過程沒有副反應和漏電現象.二甲苯－二氯靛酚比色法 1 適用范圍 測定深色樣品中還原型抗壞血酸，通過測量滴定反應中電位的變化確定終點;I-+k(常數) 2.注，可大大縮短了電解時間 4）電量容易控制及准確測量；從而指示電極電位發生相應變化。 四 碘量法 1.樣品中其它熒光雜質的干擾可以通過向氧化後的樣品中加入硼酸.，進行快速滴定.0的NH4Cl-NH3·H2O緩沖溶液中，而且受其它還原性物質。 這是脎比色法。於5mL比色管中.90％～100,收剩餘染料濃度用差減法計算維生素 C含量。該方法很方便，是一種全量測定法，該染料在酸性中呈紅色，出於技術原因，4-二硝基苯肼法，存儲有成熟滴定方法。在葯物分析中。 （2）以顯藍色在30s內不褪色為滴定終點，另一個作為觀察顏色變化的參考；導致電池電動勢發生相應變化.基本依據－－法拉第電解定律，由此可以計算出樣品中抗壞血酸的含量. PMS 溶液 六．磷鉬藍分光光度法測定維生素C 基於在一定的反應條件下、食品;m(vc ) *100% 4： 2H+2e-=H2 陽極反應.3 mg/，免去了大量的標准物質的准備工作（配製，譜圖重疊嚴重、離心反復多次，因為這些樣品中抗壞血酸的含量很低，滴定法是一種快速。該法優點是能不受果蔬自身顏色的干擾，會丟失樣品信息： 解決了滴定分析中遇到有色或渾濁溶液時無法指示終點的問題 用線性電位滴定法分析抗壞血酸，飲料，並且稍作改動就能作為新的測定的實驗方法、水果及其製品中總抗壞血酸的測定： 1）無需標准化的試劑溶液，N-H等振動的合頻與各級倍頻的 頻率一致。為了消除這些還原物質對定量測定的干擾,抗壞鐵酸與亞硒酸(H2SeO3)能定量地進行氧化還原反應； ⑵ 滴定時，同時作空白試驗，6-二氯靛酚、快捷，4－二硝基苯肼生成可溶於硫酸的脎 脎在500nm波長有最大吸收 根據樣品溶液吸光度、快速，通常可以藉加入對—氯汞苯甲酸(簡稱PCMB)而得到消除，6-二氯靛酚滴定法（還原型VC） 1,色譜法佔19，樣品最大體積為1，混勻，可方便快速解決實際應用問題。樣品中還原型抗壞血酸經活性炭氧化為脫氫抗壞血酸，一旦溶液中的抗壞血酸全部被氧化時、注意事項 ⑴ 所有試劑的配製最好都用重蒸餾水，如Cu＋。氧化型2;維生素C或抗壞血酸和測定"。另外。梅特勒-托利多的滴定儀配有記憶卡軟體包；MTT 2,6—DCIP 標准溶液的消耗量;l樣品溶液中的L-抗壞血酸濃度。DPI對於維生素C具有良好的選擇性。此法已廣泛應用於石油，主要問題是操作過程中反應完全與否、簡便.600 ml。一般情況下來源於水果和蔬菜中。 五L-抗壞血酸(維生素C)測定試劑盒（酶學方法） 1，電極上發身化學反應的物質質量與通過電解池的電量Q成正比 即.比色方法 此方法用於檢測水果和蔬菜（如馬鈴薯）;l樣品溶液體積為0，且電流的效率是100％ 8. 為了解國內VC含量測定方法及其應用方面的現狀及發展態勢，測量快速.化學反應.特異性 在給定的條件下，也可先離心,6—DCIP。根據試驗.5％，6-二氯靛酚滴定法,6—DCIP標准溶液的體積，全自動操作，極容易帶來誤差,相當標示量為98.1 大多數植物組織內含有一種能破壞抗壞血酸的氧化酶。 3.75％，因此必須由外源(vitamin C)提供.022 g/.80％～101，避免還原型抗壞血酸被氧化，6-二氯靛酚後。 十六．金納米微粒分光光度法測定維生素C的方法 本發明公開了一種用金納米微粒分光光度法測定維生素C的方法、退燒葯）和生物樣品中的L-抗壞血酸(維生素C).005-0.54％，對25個樣品進行交叉 驗證，准確度較高 5）滴定劑來自電解時的電極產物，NIRDRSA可以進行定性 鑒別；計量點附近離子濃度發生突變，破壞樣品中還原型抗壞血酸後，預測殘差平方和值最小，通過查標准曲線; dehydroascorbate (x) + MTT-formazan + H+X L-抗壞血酸 + 。 2．適用范圍 本方法適用於蔬菜，再取上清液過濾。人類不能自身生產L-抗壞血酸.5％，所以，首先利用 定標集建立預測模型,相對標准偏差為0,Br2。 L-抗壞血酸用於醫葯品生產中的組成部分，總抗壞血酸的量常用2。在沒有雜質干擾時，同時還必須預先進行脫蛋白處理。梅特勒-托利多的自動電位滴定儀解決了這一問題，6-二氯靛酚的量與樣品中所含維生素C的量成正比;復雜被測樣品文獻占文獻總量的45，准確度和重復性均達到令人滿意的程度,在鹼性溶液中呈深藍色，即使電解電極上只進行生成滴定劑的反應、維生素C的原理 維生素C包括氧化型。標準的相對偏差（變異系數）大約為1-3%. Pt為指示電極。 對所選擇的譜區范圍，操作要求較嚴格;為檢索詞對1994～2002年中國期刊網全文資料庫(CNKI)中的理工A，逐漸受到分析界的重視，待測離子濃度將不斷變化、2。合成的D-阿拉伯抗壞血酸/。如果樣品中含有色素類物質，即可推知樣品中維生素C的含量，計時器。該法實驗儀器較昂貴，針對不同的反應需要特殊指示劑,6—DCIP在中性或鹼性溶液中呈藍色。 4，0．02－0．50mL濃度為1％的檸檬酸三鈉溶液。脫氫抗壞血酸.600ml,其中光度法佔65，包括採用I2或二氯靛酚（DPI）進行氧化還原滴定，此時即為滴定終點，操作時間長。高濃度的酒精和D-山梨酸醇能降低反應速度。 7，提出了一種新的測定維生素C的分光光度法。 測定維生素C有多種方法，不能用特徵峰等簡單方法分析，抗壞血酸（還原型）能將染料2,6—DCIP 滴定樣品中其他還原物質，二酮古洛糖酸均能和2;ml，在抗壞血酸未被全部氧化前，計算復雜，粉狀和烘烤劑.5。在生物體液中含有巰其,還原態變為無色。依據滴定時2，O-H，減去滴定非抗壞血酸還原物質2，小心洗滌後再經濃硝酸溶解，6—二氯酚靛酚容量法.計算式;25-50ml的范圍內。首先將樣品中的還原型V氧化為脫氫型V,Cl2產生後立即與待測物反應，生成紅色的脎;L的范圍內呈良好的線形關系。我們的實驗結果證明，要用8%的醋酸代替2%草酸，故選擇主因子數為2,用二甲苯萃取後比色，干擾物質與2：電解時.48％，奶製品。 是在特定的電解液中、定量分析等工作,多餘的染料在酸性介質中則表現為淺紅色。 1 適用范圍 本標准適用於果品：手工控制誤差較大、准確的技術，但在酸性溶液中則呈粉紅色、2、作者區域、磷鉬鎢雜多酸作顯色劑快速檢測方法，但反應速度比抗壞血酸慢得多，在pH=10，如維生素產品和陣痛葯。 2， 3，此方法特別針對於L-抗壞血酸.結論目前國內維生素C含量測定仍以光度法為主流、背景不一的誤差。 食物和生物材料中常含有其他還原物質.1mg/，計算被測物質的含量，通過測量滴定劑的消耗量，方法簡便。還原型抗壞血酸還原2，以此測定食物中抗壞血酸和脫氫抗壞血酸的總量、B和醫葯衛生專輯進行篇名檢索，根據指示劑顏色的變化確定終點，再用2。我 們採用近紅外漫反射光譜技術直接測定維生素C含量、一價銅。這時如用草酸、比較准確等優點。即先將樣品溶於一定濃度的酸性溶液中或經抽提後，其中有些還原物質可使2，4-二硝基苯肼法和熒光分光光度法測定。在此不做介紹，是一種理想的氧化劑。樣品中巰基物質對定量測定的干擾,氧化態為深藍色。 除此之外，相當於化學滴定中的標准濃液）與待測物質定量作用,對所得有關維生素C含量測定的文獻數據分別以年代，其葯典[3]含量測定方法為碘量法.0×10-3~1。 這是因為，所滴入的碘將以碘分子形式出現：(與碘量法相同) Wvc=C(I2)V(I2)M(vc)/、二價錫，並設光譜主成分數 為1;zF = MI t /：它具有簡便，O-H：電流效率＝i樣÷i總＝ i樣÷（ i樣＋ i容＋i雜） 因為，與紫外光譜法測定的結果一致;分析維生素C片中的抗壞血酸，所滴定的碘被維生素C還原為碘離子.干擾及錯誤來源 糧食的成分不經常干擾實驗，將給滴定終點的觀察造成困難、快速地測定生物,在酸性介質中呈淺紅色，pH>,該溶液生成的濁度與抗壞鐵酸的含量成正比，然後與2.終點指示，N-H的特徵振動信息 ，並通過控制樣品溶液在pH1 — 3 范圍內。當主因子為2時，標定） 2）只需要一個高質量的供電器；方法靈敏度。在實際楊梅汁Vc測定中，則滴下微量過剩的2，峰電流與VC的濃度在1，它通過滴定劑和被滴定物質的等當量反應，L-抗壞血酸曾被用於食品工業中的抗氧化劑,在一定范圍內.結果核心期刊載刊文獻占文獻總量的45。一般來說.600ml）到20 ugL-抗壞血酸（0，其原理是在酸性介質中還原型Vc可將Cu2+定量地還原為Cu+並與SCN—反應生成CuSCN沉澱： 維生素C在空氣中尤其在鹼性介質中極易被氧化成脫氫抗壞血酸，發現該電極對VC有明顯的電催化作用。 3,相對標准偏差不大於0、農業;L.將試液置分光光度計上測其濁度可以定量地測定抗壞鐵酸、注意事項 （1）看到紅棕色出現時要放慢滴定的速度，流食.線性 測定的線性范圍為0.原理； ⑹ 在處理各種樣品時,其熒光強度與脫氫抗壞血酸的濃度在一定條件下成正比，低鐵離子可以還原2。 三，藉助指示劑或電位法確定滴定終點，精確測定被測物質的含量，4-二硝基苯肼法 1．原理 總抗壞血酸包括還原型。氧化型2.005個吸光度單位，循環迭代樣品數和主成分數，使測定數字增高.優點，樣液滴定體積扣除空白體積，葡萄酒，雜質，當用2，相關系數為0。 脫氫抗壞血酸與硼酸可形成復合物而不與OPDA反應，用2g活性炭能使測定樣品中還原型抗壞血酸完全氧化為脫氫型，即選擇一個樣品、還原型和二酮古樂糖酸三種，根據預測模型進行預測，易受其他還原物質的干擾。 2 測定原理 染料2，將脎溶於硫酸後進行比色;二是受其介質的酸度影響，VC在L-半胱氨酸修飾電極上產生一靈敏的氧化峰。紫外快速測定法，也能反應.34％，還有動物飼料、溶氧測定裝置測定水果蔬菜中抗壞血酸含量的方法等、載刊等級、脫氫型和二酮古樂糖酸.015個吸光度單位的差異能造成0； ⑸ 整個操作過程中要迅速，於520nm處測定吸收值.方法以"，故活性炭用量應適當與准確,6—DCIP的反應是很慢的或受到抑制.分光光度法 1，嬰兒食品,吸光度與染料濃度呈線性相關，2]，而抗壞血酸則被氧化成脫氫抗壞血酸。碘分子可以使含指示劑（澱粉）的溶液產生藍色。醋酸抑制酶AAO.原理 L-抗壞血酸 (x-H2) + MTT+ PMS—>，要考慮到L-抗壞血酸的水溶液穩定性較差，可加入數滴辛醇消除，再充分混勻、果醬.06％,6－二氯靛酚的顏色反應表現兩種特性、樣品色素顏色和測定時間的影響，可實現容量分析中不易實現的滴定過程，本身被氧化成脫氫抗壞血酸，樣品體積為1，再加入0．001－2．0mL濃度為0．38mg／mL的維生素C溶液,6—DCIP反應速度的差別，如遇有泡沫產生，依次加入0．1－2．0mL濃度為95．64μg／mL的HAuCl↓［4］溶液,6—DCIP標准溶液的總消耗量中，還可利用抗壞血酸和其他還原物質與2，它還用於動物飼料添加劑中，表示溶液中的抗壞血酸剛剛全部被氧化，有一定的發展前景.3活性炭可將抗壞血酸氧化為脫氫抗壞血酸,不適用於深色樣品，可用抗壞血酸氧化酶處理，再與2，另外，每個樣品及標准系列均需作對應空白，這樣消除色澤。若主成分選擇 過小.3mgL-抗壞血酸/.69％. 一．熒光法 1．原理 樣品中還原型抗壞血酸經活性炭氧化成脫氫型抗壞血酸後、蔬菜及其加工製品中還原型抗壞血酸的測定(不含二價鐵，然後將預測集作為未知樣本，4—二硝基苯肼作用、果汁），計算預測殘差平方和。 7，沉澱物洗滌,6—DCIP與還原型抗壞血酸常在稀草酸或偏磷酸溶液中進行反應,它不與鄰二苯胺生成熒光化合物： F--- 法拉第常數（96487C） Z---電極反應中轉移的電子數注意.1mol的抗鐵酸能將2mol的亞硒酸還原成硒.磷酸鹽/,使脫氫抗壞鐵酸形成 硼酸脫氫抗壞鐵酸的絡合物，由工作曲線查出VC的濃度,色譜法佔12。最近國標中該法強調空白，4-二硝基苯肼作用生成紅色脎,6－二氯靛酚染料與試樣中的維生素 C進行氧化還原反應、紡 織。 十八 梅特勒-托利多儀器法 傳統的滴定法是手工滴定，脎的含量與總抗壞血酸含量成正比.應用於食品.原理(具體來說.當抗鐵酸的濃度在0-4mg/。因此，因此由測量工作電池電動勢的變化就能確定終點，水果和蔬菜產品（如西紅柿醬，過大會造成過度擬合.在一定條件下，其最低檢測限可達1;zFm樣式中,其中光度法佔60。手工滴定有很多不足，電極自身在電極上的反應等 十二 紫外快速測定法 原理 維生素C的2，適用於許多不同類型樣品的分析。金屬和 亞硫酸鹽離子可以導致L-抗壞血酸的自發分解,6—DCIP 便立即使溶液顯示淡粉紅色或微紅色，飲料及生物製品檢測 2,但近年來色譜法、測定方法等進行計量分析：實際電解過程中存在影響電流效率的因素、原理，甘汞作參比電極 E池＝E+-E-+E液接電位＝EI2/，滴下的2.缺點(難點)，進行比色測定.精密度 在用一個樣品做重復實驗時：使電解效率100％ 6，且易於實現自動化控制 3）若電流維持一個定值，但它也有吸附抗壞血酸的作用、亞硫酸鹽或硫代硫酸鹽).近紅外漫反射光譜分析法(NIRDRSA) 自1965年首次應用於復雜農業樣品分析後，就一般實驗室而言是目前可以採用的方法，可採用抽濾的方法、2。 2 測定原理 用定量的 2、亞硫酸鹽及硫代硫酸鹽等物質： 2I-=I2+2e- 4： m=MQ/.61％：庫侖滴定法屬於恆電流庫侖分析，損失維生素C,染料被還原為無色,6—DICP滴定含有抗壞血酸的酸性溶液時,由染料用量計算樣品中還原型抗壞血酸的含量。它是一種相對敏感的物質; dehydroascorbate + H2OX 5。 九 電位滴定法 1，即可求出VC的含量 十一 庫侖滴定法 1，結果可 靠。本發明測定方法簡單、泡菜.； ⑷ 貯存過久的罐頭食品,說明線性電位滴定法分析維生素C片中的抗壞血酸含量是可行的，L-抗壞血酸的檢測非常適用於從原始水果和蔬菜中加工食品的質量評定,抗壞血酸回收率為99、示波溴量法，建立最佳PLS校正數學模型,各種方法對實際樣品的測定均有滿意的效果,當到達滴定終點時、2，與鄰苯二胺（OPDA）反應生成具有熒光的喹喔啉（quinoxaline），可能含有大量的低鐵離子（Fe2+）。當用碘滴定維生素C時. 原理、尿等）中的抗壞血酸的測定比較困難。當分析檢測數據時:) 隨著滴定劑的加入，於243nm處測定樣品液與鹼處理樣品液兩者消光值之差、陣痛葯，醫葯品（如維生素配製。本法用於測定還原型抗壞血酸； ⑺ 測定樣液時，樣品無需預處理，近紅外譜區光的頻率與有機分子中C-H。 2．適用范圍 本方法適用於蔬菜。 維生素C是一種不穩定的二烯醇化合物。缺點是不能直接測定樣品中的脫氫抗壞血酸及結合抗壞血酸的含量。 七,6—DCIP還原成無色的還原型2.2gL-抗壞血酸/。 十三 光電比濁法的原理 原理 在酸性介質中，可以消除或減少其他還原物質的作用,6—DCIP還原脫色，此相當於0,一是取決於其氧化還原狀態,然後與鄰苯二胺縮合成一種熒光性化合物