分子量及分子量分布檢測方法驗證

⑴ 實驗室測定蛋白質分子量的方法有哪些

測定蛋白質分子量的常用方法：

粘度法、凝膠過濾層析法、凝膠滲透色譜法、SDS-凝膠電泳、滲透壓法、質譜法包括電噴霧離子化質譜技術和基質輔助激光解吸電離質譜技術、光散射法（多角度激光散射）、沉降法（超速離心法）。

1、粘度法

一定溫度條件下，高聚物稀溶液的粘度與其分子量之間呈正相關性，隨著分子量的增大，聚合物溶液的粘度增大。通過測定高聚物稀溶液粘度隨濃度的變化，即可計算出其平均分子量(粘均分子量)。

如果高聚物分子的分子量愈大，則它與溶劑間的接觸表面也愈大，摩擦就大，表現出的特性粘度也大。特性粘度和分子量之間的經驗關系式為：

8、電噴霧離子化質譜技術

電噴霧離子化質譜技術（ESI-MS）是在毛細管的出口處施加一高電壓，所產生的高電場使從毛細管流出的液體霧化成細小的帶電液滴，隨著溶劑蒸發，液滴表面的電荷強度逐漸增大，最後液滴崩解為大量帶一個或多個電荷的離子，致使分析物以單電荷或多電荷離子的形式進入氣相的質譜技術。ESI-MS 測定蛋白質大分子是根據一簇多電荷的質譜峰群，通過解卷積的方式計算得到蛋白質的分子量，由於ESI-MS可以產生多電荷峰，因此使得測試的分子質量范圍大大擴大。

優缺點：（1）對樣品的消耗少，不會造成樣品的大量浪費；（2）對樣品分子質量測試靈敏度、分辨力和准確度都相當高；（3）能夠方便地與多種分離技術聯用，如毛細管電泳、高效液相色譜等，是解決非揮發性、熱不穩定性、極性強的復雜組分化合物的定性定量的高靈敏度檢測方法。

9、基質輔助激光解吸電離質譜技術

基質輔助激光解吸電離質譜技術（MALDI-MS）是將待測物懸浮或溶解在一個基體中，基體與待測物形成混晶，當基體吸收激光的能量後，均勻傳遞給待測物，使待測物瞬間氣化並離子化。基體的作用在於保護待測物不會因過強的激光能量導致化合物被破壞。MALDI的原理是用激光照射樣品與基質形成的共結晶薄膜，基質從激光中吸收能量傳遞給生物分子，而電離過程中將質子轉移到生物分子或從生物分子得到質子，而使生物分子電離的過程。TOF的原理是離子在電場作用下加速飛過飛行管道，根據到達檢測器的飛行時間不同而被檢測即測定離子的質荷比（M/Z）與離子的飛行時間成正比，檢測離子。

優缺點：（1）同ESI-MS 一樣對樣品的消耗很少；（2）隨著質量分析器的不斷改進、新的基質的不斷發現和應用以及延遲萃取技術的使用，使得MALDI-MS 的最高解析度不斷提高，甚至超過ESI-MS；（3）MALDI-MS 單電荷峰佔主要部分，碎片峰少，非常有利於對復雜混合物的分析，且能忍受較高濃度的鹽、緩沖劑和其他難揮發成分，降低了對樣品預處理的要求；（4）MALDI-TOF 質譜對生物大分子分子量的測定范圍是所有測試技術中最廣的。

⑵ 測定聚合物分子量的方法有哪些

測定聚合物分子量通常採用的方法是凝膠滲透色譜法(GPC)。凝膠色譜不但可以用於分離測定高聚物的相對分子質量和相對分子質量分布，同時根據所用凝膠填料不同，可分離脂溶性和水溶性物質，分離相對分子質量的范圍從幾百萬到100以下。近年來，凝膠色譜也廣泛用於小分子化合物。相對分子質量相近而化學結構不同的物質，不可能通過凝膠滲透色譜法達到完全分離純化的目的。凝膠色譜不能分辨分子大小相近的化合物，相對分子質量相差需在10%以上才能得到分離。

⑶ 分子量分布方法學驗證需要做哪些內容

我做的是低分子量肝素鈉的分子量和分子量分布，就一個大的峰，根據GPC軟體做的分子量和分子量分布，沒辦法像樓上所說的做那些系統適用性試驗啊，標准曲線、理論板數都沒法做啊

⑷ 實驗室中常用的DNA分子量的測定方法有哪些

第一種方法最常用
1）紫外吸收法也就是測量OD（260）和OD（280）的吸收值,這樣的方法其它的雜質對測量結果影響大一點,因為其它雜質在這兩個吸收波長也有吸收.
（2）熒光法,用PicoGreen熒光染料,測定DNA,RNA濃度比較靈敏,並且適合測量低濃度和微量DNA和RNA,並且受其它雜質的影響不大,缺點要有專門的熒光檢測儀器,試劑比較昂貴.
純化DNA可以買試劑盒,主要有膜吸附法,磁珠分離法,都很方便.
RNA與DNA最重要的區別一是RNA只有一條鏈,二是它的鹼基組成與DNA的不同,RNA沒有鹼基T（胸腺嘧啶）,而有鹼基U（尿嘧啶）.所以導致他們有以下性質上的不同.
1.兩性解離：DNA無,只有酸解離,鹼基被屏蔽（在分子內部形成了H鍵）.RNA有,有PI.
2.粘度大：DNA;RNA,粘度由分子長度/直徑決定,DNA為線狀分子,RNA為線團.
3.鹼的作用：DNA耐鹼RNA易被鹼水解.
4.顯色反應：
鑒別DNA和RNA+濃HCl RNA ------→ 綠色化合物
DNA ------→ 藍紫色化合物苔黑酚
二苯胺啡啶溴紅（熒光染料）和溴嘧啶都可對DNA染色,原理是卡在分子中,DNA的離心和電泳顯色可用它們.
DNA和RNA的鑒別染色
利用吖啶橙的變色特性可鑒別DNA和RNA.吖啶橙作為一種熒光染料已被用於染色固定,非固定細胞核酸,或作溶酶體的一種標記.觀察死亡細胞熒光變色性變化以及區別分裂細胞和靜止細胞群體.雖然測定DNA和RNA含量時較難獲得好的重復性結果,但該方法已被許多實驗室廣泛採用.
5.溶解性：都溶於水而不溶於乙醇,因此,常用乙醇來沉澱溶液中的DNA和RNA.DNA溶於苯酚而RNA不溶,故可用苯酚來沉澱RNA.
6.紫外吸收：核酸的λm＝260nm,鹼基展開程度越大,紫外吸收就越厲害.當A＝1時,DNA：50ug/ml,RNA和單鏈DNA：40ug/ml,寡核苷酸：20ug/ml.用A260/A280還可來表示核酸的純度.
7.沉降速度：對於拓撲異構體（核苷酸數目相同的核酸）,其沉降速度從達到小依次為：RNA ; 超螺旋DNA > 解鏈環狀DNA ; 鬆弛環狀DNA ; 線形DNA也就是在離心管中最上層是線形DNA,最下面是RNA.
8.電泳：核苷酸、核酸均可以進行電泳,泳動速度主要由分子大小來決定,因此,電泳是測定核酸分子量的好方法.
9.DNA分子量測定最直接的方法：用適當濃度的EB（溴嘧啶）染色DNA,可以將其他形式的DNA變成線形DNA,用電鏡測出其長度,按B-DNA模型算出bp數,根據核苷酸的平均分子量就可計算出DNA的分子量.

⑸ 蛋白質分子量如何測定

優化蛋白質結晶條件，在體外監測蛋白質行為以及確定葯物傳輸系統都是可以實現的。利用X射線散射，可以研究蛋白質之間的相互作用(高階結構)，包括穩定性和聚集途徑，測定蛋白質的大小、分子量和折疊程度，分析脂質葯物傳遞系統中液晶的形成和結構，得到本質上無序的蛋白質和RNA的結構，並量化柔性區域的運動。SAXS非常適用於分析溶液中蛋白質的分子質量、折疊程度、回轉半徑、聚集、大小和形狀等。可以進行結構生物學研究的儀器有Nano-inXider，Xeuss 3.0和BioXolver。

⑹ 【求助】 分子量的測定方法有哪些

最簡單的粘度法，不過需要查到α，K等相關的參數。 可以試一試GPC（SEC），可得到數均、質均分子量及分子量分布male7151(站內聯系TA)高聚物分子量的測定一般有下面幾種方法：端基分析沸點升高和冰點降低膜滲透壓光散射（絕對） 小角激光光散射(LALLS)（絕對） 超速離心沉降（絕對）粘度凝膠色譜（如與光散射連用則絕對）sui422(站內聯系TA)我也在找這個方面的內容,苦於沒有人能給我指條明路hyw.2006(站內聯系TA)做個GPC嘛！皇甫功凱(站內聯系TA)高吸收性樹脂（SAP）也可以用GPC測分子量分布嗎？yingram(站內聯系TA)PI？溶解性好的話可以做GPC，不過 肯定是相對的啊，再說GPC的標樣一般都 是PS，所以也是做個參考吧提豐之災(站內聯系TA)三樓的兄弟厲害！ 我就補充一點，有點班門弄斧了 還有核磁共振（NMR）也可以測量分子量 三樓的兄弟厲害！ 我就補充一點，有點班門弄斧了 還有核磁共振（NMR）也可以測量分子量 可以說的具體點么

⑺ PC分子量該怎麼測

高分子分子量的主要測定方法

用途

高聚物的分子量及分子量分布，是研究聚合物及高分子材料性能的最基本數據之一。它涉及到高分子材料及其製品的力學性能，高聚物的流變性質，聚合物加工性能和加工條件的選擇。也是在高分子化學、高分子物理領域對具體聚合反應，具體聚合物的結構研究所需的基本數據之一。

表徵方法及原理

1.粘度法測相對分子量（粘均分子量Mη）
用烏式粘度計，測高分子稀釋溶液的特性粘數[η]，根據Mark-Houwink公式[η]＝kMα，從文獻或有關手冊查出k、α值，計算出高分子的分子量。其中，k、α值因所用溶劑的不同及實驗溫度的不同而具有不同數值。

2.小角激光光散射法測重均分子量（Mw）
當入射光電磁波通過介質時，使介質中的小粒子（如高分子）中的電子產生強迫振動，從而產生二次波源向各方向發射與振盪電場（入射光電磁波）同樣頻率的散射光波。這種散射波的強弱和小粒子（高分子）中的偶極子數量相關，即和該高分子的質量或摩爾質量有關。根據上述原理，使用激光光散射儀對高分子稀溶液測定和入射光呈小角度（2℃－7℃）時的散射光強度，從而計算出稀溶液中高分子的絕對重均分子量（MW） 值。採用動態光散射的測定可以測定粒子（高分子）的流體力學半徑的分布，進而計算得到高分子分子量的分布曲線。

3.體積排除色譜法（SES）（也稱凝膠滲透色譜法（GPC））
當高分子溶液通過填充有特種多孔性填料的柱子時，溶液中高分子因其分子量的不同，而呈現不同大小的流體力學體積。柱子的填充料表面和內部存在著各種大小不同的孔洞和通道，當被檢測的高分子溶液隨著淋洗液引入柱子後，高分子溶質即向填料內部孔洞滲透，滲透的程度和高分子體積的大小有關。大於填料孔洞直徑的高分子只能穿行於填料的顆粒之間，因此將首先被淋洗液帶出柱子，而其他分子體積小於填料孔洞的高分子，則可以在填料孔洞內滯留，分子體積越小，則在填料內可滯留的孔洞越多，因此被淋洗出來的時間越長。按此原理，用相關凝膠滲透色譜儀，可以得到聚合物中分子量分布曲線。配合不同組分高分子的質譜分析，可得到不同組分高分子的絕對分子量。用已知分子量的高分子對上述分子量分布曲線進行分子量標定，可得到各組分的相對分子量。由於不同高分子在溶劑中的溶解溫度不同，有時需在較高溫度下才能製成高分子溶液，這時GPC柱子需在較高溫度下工作。

4.質譜法
質譜法是精確測定物質分子量的一種方法，質譜測定的分子量給出的是分子質量m對電荷數Z之比，即質荷比（m/Z）過去的質譜難於測定高分子的分子量，但近20餘年由於我的離子化技術的發展，使得質譜可用於測定分子量高達百萬的高分子化合物。這些新的離子化技術包括場解吸技術（FD），快離子或原子轟擊技術（FIB或FAB）,基質輔助激光解吸技術（MALDI-TOF MS）和電噴霧離子化技術（ESI-MS）。由激光解吸電離技術和離子化飛行時間質譜相結合而構成的儀器稱為「基質輔助激光解吸－離子化飛行時間質譜」（MALDI-TOF MS 激光質譜）可測量分子量分布比較窄的高分子的重均分子量（Mw）。由電噴霧電離技術和離子阱質譜相結合而構成的儀器稱為「電噴霧離子阱質譜」（ESI-ITMS 電噴霧質譜）。可測量高分子的重均分子量（Mw）。

5.其他方法
測定高分子分子量的其他方法還有：端基測定法，沸點升高法，冰點降低法，膜滲透壓法，蒸汽壓滲透法，小角X－光散射法，小角中子散射法，超速離心沉降法等。

所用儀器

烏式粘度計

激光光散射儀

凝膠滲透色譜儀

質譜儀

參考文獻

1、「現代高分子物理學」（上冊，P.126）殷敬華、莫志深主編，科學出版社，2001年
2、「高分子物理實驗」（P.95）何平笙，楊海洋，朱平平，瞿保均編，中國科技大學出版社，2002年
3、「高分子物理」（P.317）楊玉良，胡漢傑主編，化工出版社，2001年

⑻ 測定聚合物平均分子量的方法有哪些得到的是何種統計平均分子量

分子量和分子量分布的統計計算如圖
分子量和分子量分布的測定方法
測定分子量的方法很多，包括端基分析法、沸點升高和冰點降低、膜滲透壓和光散射等方法，由於測定方法的不同，分子量的含義也不同，因而具有各種不同的數值。

⑼ 可以用什麼方法測無機高分子的分子量

1.粘度法測相對分子量（粘均分子量Mη） 
  用烏式粘度計，測高分子稀釋溶液的特性粘數[η]，根據Mark-Houwink公式[η]＝kMα，從文獻或有關手冊查出k、α值，計算出高分子的分子量。其中，k、α值因所用溶劑的不同及實驗溫度的不同而具有不同數值。  
2.小角激光光散射法測重均分子量（Mw） 
  當入射光電磁波通過介質時，使介質中的小粒子（如高分子）中的電子產生強迫振動，從而產生二次波源向各方向發射與振盪電場（入射光電磁波）同樣頻率的 散射光波。這種散射波的強弱和小粒子（高分子）中的偶極子數量相關，即和該高分子的質量或摩爾質量有關。根據上述原理，使用激光光散射儀對高分子稀溶液測 定和入射光呈小角度（2℃－7℃）時的散射光強度，從而計算出稀溶液中高分子的絕對重均分子量（MW） 值。採用動態光散射的測定可以測定粒子（高分子）的流體力學半徑的分布，進而計算得到高分子分子量的分布曲線。  
3.體積排除色譜法（SES）（也稱凝膠滲透色譜法（GPC）） 
  當高分子溶液通過填充有特種多孔性填料的柱子時，溶液中高分子因其分子量的不同，而呈現不同大小的流體力學體積。柱子的填充料表面和內部存在著各種大 小不同的孔洞和通道，當被檢測的高分子溶液隨著淋洗液引入柱子後，高分子溶質即向填料內部孔洞滲透，滲透的程度和高分子體積的大小有關。大於填料孔洞直徑 的高分子只能穿行於填料的顆粒之間，因此將首先被淋洗液帶出柱子，而其他分子體積小於填料孔洞的高分子，則可以在填料孔洞內滯留，分子體積越小，則在填料 內可滯留的孔洞越多，因此被淋洗出來的時間越長。按此原理，用相關凝膠滲透色譜儀，可以得到聚合物中分子量分布曲線。配合不同組分高分子的質譜分析，可得 到不同組分高分子的絕對分子量。用已知分子量的高分子對上述分子量分布曲線進行分子量標定，可得到各組分的相對分子量。由於不同高分子在溶劑中的溶解溫度 不同，有時需在較高溫度下才能製成高分子溶液，這時GPC柱子需在較高溫度下工作。  
4.質譜法 
  質譜法是精確測定物質分子量的一種方法，質譜測定的分子量給出的是分子質量m對電荷數Z之比，即質荷比（m/Z）過去的質譜難於測定高分子的分子量， 但近20餘年由於我的離子化技術的發展，使得質譜可用於測定分子量高達百萬的高分子化合物。這些新的離子化1.粘度法測相對分子量（粘均分子量Mη） 
  用烏式粘度計，測高分子稀釋溶液的特性粘數[η]，根據Mark-Houwink公式[η]＝kMα，從文獻或有關手冊查出k、α值，計算出高分子的分子量。其中，k、α值因所用溶劑的不同及實驗溫度的不同而具有不同數值。  
2.小角激光光散射法測重均分子量（Mw） 
  當入射光電磁波通過介質時，使介質中的小粒子（如高分子）中的電子產生強迫振動，從而產生二次波源向各方向發射與振盪電場（入射光電磁波）同樣頻率的 散射光波。這種散射波的強弱和小粒子（高分子）中的偶極子數量相關，即和該高分子的質量或摩爾質量有關。根據上述原理，使用激光光散射儀對高分子稀溶液測 定和入射光呈小角度（2℃－7℃）時的散射光強度，從而計算出稀溶液中高分子的絕對重均分子量（MW） 值。採用動態光散射的測定可以測定粒子（高分子）的流體力學半徑的分布，進而計算得到高分子分子量的分布曲線。  
3.體積排除色譜法（SES）（也稱凝膠滲透色譜法（GPC）） 
  當高分子溶液通過填充有特種多孔性填料的柱子時，溶液中高分子因其分子量的不同，而呈現不同大小的流體力學體積。柱子的填充料表面和內部存在著各種大 小不同的孔洞和通道，當被檢測的高分子溶液隨著淋洗液引入柱子後，高分子溶質即向填料內部孔洞滲透，滲透的程度和高分子體積的大小有關。大於填料孔洞直徑 的高分子只能穿行於填料的顆粒之間，因此將首先被淋洗液帶出柱子，而其他分子體積小於填料孔洞的高分子，則可以在填料孔洞內滯留，分子體積越小，則在填料 內可滯留的孔洞越多，因此被淋洗出來的時間越長。按此原理，用相關凝膠滲透色譜儀，可以得到聚合物中分子量分布曲線。配合不同組分高分子的質譜分析，可得 到不同組分高分子的絕對分子量。用已知分子量的高分子對上述分子量分布曲線進行分子量標定，可得到各組分的相對分子量。由於不同高分子在溶劑中的溶解溫度 不同，有時需在較高溫度下才能製成高分子溶液，這時GPC柱子需在較高溫度下工作。  
4.質譜法 
  質譜法是精確測定物質分子量的一種方法，質譜測定的分子量給出的是分子質量m對電荷數Z之比，即質荷比（m/Z）過去的質譜難於測定高分子的分子量， 但近20餘年由於我的離子化技術的發展，使得質譜可用於測定分子量高達百萬的高分子化合物。這些新的離子化技術包括場解吸技術（FD），快離子或原子轟擊 技術（FIB或FAB）,基質輔助激光解吸技術（MALDI-TOF MS）和電噴霧離子化技術（ESI-MS）。由激光解吸電離技術和離子化飛行時間質譜相結合而構成的儀器稱為「基質輔助激光解吸－離子化飛行時間質譜」 （MALDI-TOF MS 激光質譜）可測量分子量分布比較窄的高分子的重均分子量（Mw）。由電噴霧電離技術和離子阱質譜相結合而構成的儀器稱為「電噴霧離子阱質譜」（ESI- ITMS 電噴霧質譜）。可測量高分子的重均分子量（Mw）。  
5.其他方法 
  測定高分子分子量的其他方法還有：端基測定法，沸點升高法，冰點降低法，膜滲透壓法，蒸汽壓滲透法，小角X－光散射法，小角中子散射法，超速離心沉降法等。