抗生素檢測方法驗證

1. 檢測牛奶抗生素的方法能用於檢測蜂蜜嗎

檢測牛奶抗生素的方法能用於檢測蜂蜜的。
牛奶中抗生素殘留的幾種常用檢測方法 隨著奶牛飼養業的發展，抗生素在預防和治療奶牛疾病方面得到廣泛的應用。生鮮牛奶中抗生素的來源主要是：第一，治療泌乳期病牛時使用的抗生素會從奶牛體內移行到乳腺殘留進入牛奶中，資料表明治療後的奶牛，其擠出的牛奶5天內都有抗生素殘留；其二，為了預防奶牛疾病並提高產量，在奶牛飼料中添加抗生素也會造成牛奶中抗生素的殘留；第三，由於牧場管理不善，擠奶、儲奶沒有嚴格的衛生制度和配套的設施，人為添加或造成牛奶抗生素的污染。 牛奶中含有抗生素，不僅對人的健康造成很大的危害，而且對乳品加工企業帶來經濟損失（因無法生成酸奶和乳酪）。因此必須嚴格控制牛奶中抗生素殘留，除了要做好科學飼養、精心管理；正確擠奶和預防疾病外，還要規范抗生素的使用，按國標中有關規定，用葯後的奶牛5天後所產的牛奶才可作為原料乳，並且要檢測其殘留。世界糧農組織（FAO）、世界衛生組織（WHO）、歐盟（EC）及美國的食品和葯品管理局（FDA）等對食品中抗生素最大殘留量都有明確的規定，我國也有鮮奶中抗生素殘留量檢驗標准（GB4689.27—94）。 目前，鮮奶中抗生素殘留的檢測方法大致分為三類：生物測定法（微生物測定法、放射受體測定法）、免疫法（放射免疫法、熒光免疫法、酶聯免疫法）、理化分析法（波譜法、色譜及聯用技術）。下面介紹幾種常用的牛奶中抗生素殘留檢測方法。 TTC法 TTC法是我國鮮奶中抗生素殘留量檢驗標准（GB4689.27—94）的檢測法，屬生物檢測法。其測定原理基於抗生素對微生物的抑製作用。如果牛奶中含有抗生素，則加入菌種（嗜熱鏈球菌）經培育2.5~3小時後,加入TTC指示劑(三苯基四氮唑)不發生還原反應,所以樣品呈無色狀態;如果牛奶中不含抗生素,則樣品呈紅色.這樣實驗後樣品顏色不變的為陽性,樣品染成紅色的為陰性。 TTC法的具體操作步驟: 1.菌液制備:將單菌種(嗜熱鏈球菌)以脫脂乳為培養基,在36±1℃培養箱中培養15小時後,再以脫脂乳以至於1:1稀釋待用; 2.取待檢樣液9mL,在80℃水浴加熱5分鍾後冷卻到37℃以下,加活菌液1mL,在36℃±1℃水浴2小時,加入4%的TTC指示劑0.3mL, 36℃±1℃水浴培養30分鍾; 3.若樣液顏色不變為陽性,呈紅色為陰性;若陽性的樣液,再置於水浴中培養30分鍾,不顯色的為陽性,呈紅色為陰性. TTC法測定各種抗生素的靈敏度為:青黴素:4ppb,鏈黴素:500ppb,慶大黴素:400ppb,卡那黴素:5000ppb.它具有費用低,易開展的優點;缺點是耗時長，要求操作人員需有一定專業知識且實驗過程中菌液的制備、水浴過程式控制制都要求嚴格遵守操作規程，否則易出現假陽性，以致出現檢驗結果的不穩定性。 Delvotest? sp法（戴爾沃檢測法） 該法最早在香港傳到廣東的，其使用是基於20世紀80年代初香港要求廣東出口的生奶必須「無抗」且要求採用Delvotest法檢測。該方法也是生物測定法，其試劑是由荷蘭DSM公司生產並由AOAC認證。原理是利用微生物—嗜熱芽胞菌在64℃條件下培養2.5～3小時後會產酸,酸引起指示劑BCP(溴甲酚紫)變為黃色;若牛奶樣品中不含抗生素,培養後樣品呈黃色,如樣品中含有抗生素, 嗜熱芽胞菌生長受到抑制而無法產酸,指示劑將不變色. Delvotest? sp 法的操作步驟: 1.以無菌操作將一片營養葯片夾放入小試管內; 2.用微量移液管將0.1mL牛奶樣品注入小試管內; 3.把小試管放入已預熱至64℃的水浴箱或恆溫器中培養; 4).定時3小時取出觀察顏色變化.如果底部2/3的固體介質是黃色,則為陰性, 如果底部2/3的固體介質是紫色,則為陽性. Delvotest? sp 法具有廣譜性,可檢測到?-內醯胺類抗生素在內的更多抗生素,如磺胺類、四環素類、大環內酯類、氨基糖苷類、氯黴素等，其中對青黴素和磺胺類抗生素特別靈敏. 其靈敏度為：青黴素:3ppb,鏈黴素:300ppb,慶大黴素:400ppb,卡那黴素:2500ppb。Delvotest? sp 法集操作方便，嚴格實用，容易判斷，結果可靠，費用適中等優點；但也易出現假陽性，實驗證明：當牛奶樣品中添加微生物防腐劑（如乳酸鏈球菌素—Nisn）或樣品中有足夠的洗滌劑殘留時，便可影響嗜熱芽胞菌生長而使實驗為陽性。 Snap?法 該方法是酶聯免疫法，由美國IDEXX公司生產其檢測分析儀及其試劑盒，均獲得AOAC認證，它利用了竟爭酶聯免疫技術。其基本原理是用特異性抗體將固相載體激活，加入含待測抗原的溶液和一定量的酶標記抗原在45℃±5℃共同保溫，使樣品內的抗生素與內置抗生素標志物竟爭與固定的抗體結合，然後進行洗滌和顯色，內置抗生素標志物與固定的抗體結合形成的復合體，通過酶的作用分解可形成有色物質，通過測定色度並與參照物對照，就可以確定結果是陽性或陰性。 Snap?法操作步驟： 1.加入乳樣於樣品管中,搖勻,加熱樣品和檢測板5分鍾; 2.加入乳樣於樣品孔中,當激活圓環開始退卻時,按Snap鍵; 3.反應4分鍾,由Snap?讀數儀讀取並列印結果.檢測讀數小於1.05時判為陰性,大於1.05時判為陽性. Snap?法是一種將酶化學反應的敏感性和抗原抗體免疫反應的特異性相結合的方法,其敏感性和特異性好,檢測的靈敏度以普遍使用的?-內醯胺類計：青黴素:5ppb,阿莫西林:10ppb,氨苄西林:10ppb,頭孢西林:8ppb.其他抗生素如四環素等的檢測,則需購買相應的試劑來檢測. Snap?法檢測結果快速准確, 9分鍾內即可檢測出牛奶中?-內醯胺類、四環素類、磺胺類等抗生素的殘留含量，且有半定量的讀數，可監控牧場用葯的情況；檢測儀器穩定性良好，結果重現性高，整個檢測過程簡單方便；但需購置專用儀器和試劑，成本較高。 高效液相色譜檢測法 它是一種理化檢測方法,是利用抗生素分子中的基團所具有的特殊反應來測定其含量.檢測的過程採用了氣相色譜理論,通過高壓液相和高靈敏度的檢測器,分離速度快、效率高和操作自動化。一般要經過樣品的提取、脫蛋白、離心、層析柱凈化、衍生化等步驟，能檢測抗生素的具體含量，敏感性較高，但檢測程序復雜，費用較高，需購買色譜儀等檢測設備，不適合小型檢驗室。 傳統的抗生素檢測方法不少,有的操作煩瑣,有的實驗條件要求高,有的檢驗時間太長;這些不僅會給乳製品生產企業造成經濟上和時間上的損失,而且檢測結果常常會被原輔材料和人為操作等因素所影響.鑒於牛奶中抗生素殘留是涉及人類健康的公共衛生問題,乳品企業及牧場應重視和加強檢測工作,應用一些簡單、快速和准確性高的方法來監控產品的質量，保證消費者的健康。 納米膠體金層析法 該方法是基於競爭法膠體金免疫層析技術，將檢測液加入試紙卡上的樣品孔，檢測液中的抗生素與金標墊上的金標抗體結合形成復合物，若抗生素在檢測液中濃度低於100ng/mL，未結合的金標抗體流到T區時，被固定在膜上的抗生素BSA偶聯物結合，逐漸凝集成一條可見的T線；若抗生素濃度高於100ng/mL，金標抗體全部形成復合物，不會再與T線處抗生素BSA偶聯物結合形成可見T線。未固定的復合物流過T區被C區的二抗捕獲並形成可見的C線。C線出現則表明免疫層析發生，即試紙有效. http://www.quicking.cn/chinese/content.asp?MoleType=3&ChannelID=3&id=174 膠體金法操作步驟： 1．將採集的牛奶樣品進行編號，置於常溫（20-30℃）室內。（低溫牛奶流動性差，不適合進行試紙層析測試） 2．搖勻牛奶，用吸管取1mL加入到離心管中，7000rpm離心3-4分鍾至分離出脂肪層。脂肪層下5mm處液體（脫脂牛奶）即為待測液。 3．取出試紙條，用吸管吸取3滴待測液滴於加樣孔中， 4．5分鍾後判斷結果，10分鍾後的結果無效。 http://www.quicking.cn/chinese/content.asp?MoleType=3&ChannelID=3&id=156 結果解釋 陰性：C線顯色，T線肉眼可見，無論顏色深淺均判為陰性。 陽性：C線顯色，T線不顯色，判為陽性。 無效：C線不顯色，無論T線是否顯色，該試紙均判為無效。 保存和穩定性 4-30℃陰涼乾燥處保存，不可冷凍，避免陽光直曬，生產日期起18個月內有效。 納米膠體金層析法適用於樣品的初篩，檢測時間短，出結果速度快，且能在常溫下保存18個月之久，操作簡單，無需任何專業的技術，沒有檢測環境的需求不管是奶農還是奶站工作人員還是專業的檢測人員，都可以方便使用。

2. 微生物檢驗常見問題解答

微生物檢驗常見問題解答

你知道什麼是微生物檢驗嗎?你對微生物檢驗常見問題了解嗎?下面是我為大家帶來的微生物檢驗常見問題解答的知識，歡迎閱讀。

一、方法驗證

1.做過驗證的樣品微生物檢驗方法是否都需要按照新的方法進行重新驗證?

答：對於微生物限度檢查的產品而言，由於培養時間調整，應重新進行驗證。對於無菌檢查的產品而言，如果方法未作實質性調整，可以不必重新驗證。個別產品在各論中收載了新的無菌檢查方法，對這些品種，應對收載方法的適用性進行驗證。

2. 以前做過無菌驗證的品種是否需要重新按照新的標准再驗證?

答：參見問題1。

3. “新增抗生素供試品應選擇低吸附的濾器及濾膜” 比如注射用克林黴素磷酸酯屬於抗生素，是否需要重新選取濾膜再驗證?

答：目前採用的方法如果經驗證表明可行，則可以繼續使用該方法。

4. 微生物方法學驗證時，培養時間是否跟樣品日常檢驗所培養時間一致?

答：應該一致。

5. 微生物限度驗證時，如果一個方法只有金葡回收率達不到要求，該方法時是否可以用來做細菌黴菌的檢測方法?

答：按葯典的規定，一個計數方法通過驗證，是指所有試驗菌的回收率均達到要求。如果採用各種方法以及方法的組合仍無法使金葡回收率達標，則可以採用使金葡回收率最高的方法作為計數方法。

6. 薄膜過濾的沖洗量不能超過1000ml，我公司的喹諾酮類產品原來的方法是每張膜沖洗量為1500和2000ml，請問有沒有合適的方法將沖洗量降至1000，各菌的回收率仍能符合規定?

答：有幾種辦法可以降低沖洗劑的用量：1)降低接觸濾膜的供試品的濃度;2)改進沖洗的方式，如少量多次地沖洗、降低蠕動泵的轉速等;3)添加中和劑，如高價金屬離子。

7. 微生物限度檢查法規定，技術方法驗證時，採用上述方法若還存在一株或多株試驗菌的回收率達不到要求，那麼選擇回收率最接近要求的方法和試驗條件進行供試品檢驗。請問，上述方法是指僅通過一種方法還是一定要通過幾種方法聯用的?

答：應該要把可能採用的所有方法包括方法聯用都進行驗證。

8. 供試品不溶於稀釋劑，同時又有抑菌性，限度檢查時應如何消除抑菌性?

答：採用低速離心的方式，盡可能把供試品去除干凈，取離心後的上層液，進行薄膜過濾。

9. 不溶於水的固體產品，加表面活性劑後，如何操作才能在方法驗證中得到較好的回收率?

答：同問題8。

10. 有些品種2010年葯典與2005年比較檢驗方法變了，是否需要驗證或確認?

答：同問題1。

二、菌種管理

1. 濃菌液的有效期該如何確定?

答：葯典沒有規定。可以通過實驗確定有效期。例如，在不同的時間點測定濃菌液的濃度，從而判斷其有效期。

2. 葯典要求菌液在制備後2小時內使用，若保存在2-8℃的菌懸液可在在24小時內使用，那我們在做驗證或陽性對照是要加一定量的菌就沒有時間進行平板計數了，該如何確保所加菌量准確?

答：葯典對稀釋菌液的使用期限作出規定，並不會影響操作過程中稀釋菌液的加入。即便不規定，也無法在准確知道菌液濃度的情況下加入試驗菌。菌液稀釋的實驗操作和加入菌液的實驗操作應該是在同一次實驗中完成的，要使加入的菌量符合葯典的規定，可以從濃菌液的制備方法、菌液稀釋的方法等方面進行規范，也可以引入濁度比較的方法。

3. 菌懸液能否在倒平板之前確定菌含量?

答：活菌含量是無法確定的。總菌量可以通過比濁的方式確定。

4. 具體從哪些方面進行菌種菌株的特性和純度確認?如何操作?

答：基層的微生物實驗室進行菌種純度確認可以考慮以下一些方面：1)形態學鑒定，包括菌落形態和染色形態;2)生化鑒定，可以考慮使用API鑒定系統。

5. 黑麴黴凍干菌種如何轉種，傳代?

答：與其他菌種一樣，所不同的是使用的培養基應改為改良馬丁瓊脂培養基。

6. 乾粉狀的是否可做第0代使用?

答：只要是菌種保藏機構提供的凍干保藏的菌種，可以確定為第0代。

7. 菌種每次傳代都要做純度、特性等的確認嗎?

答：從外部購入的菌種，在進入本實驗室的菌種保藏體系時，需要進行純度和特性的確認。以後的每次傳代，可以通過顯色培養基做簡單的確認即可。

8. 如採用低溫保存菌種，需購買哪些設備?能夠到省所進行實際操作培訓?

答：低溫冰箱，應能夠提供-70℃的低溫。可以到省所來培訓。

9. 做方法驗證時，工作用菌種能否同時操作，如何防止交叉污染?

答：可以同時操作。避免交叉污染的關鍵是無菌操作技術。

10. 是否等菌懸液的含菌數出結果後再做適用性等檢查?

答：沒有必要。可參見問題2。

11. 菌液制備中菌液是否都要驗證儲存期?

答：稀釋菌液可參考葯典規定。如要保存濃菌液，則需要驗證有效期。

12. 菌種CMCC是否可以用ATCC替代，從省所或中檢所購買的菌種是否每次都可以出具規范的COA?

答：中國葯典使用CMCC的菌種，並沒有規定可以使用其他等效的菌種。省所提供的菌種嚴格講屬於標准貯備菌種，無法提供ATCC這樣的COA。CMCC至今也無法提供這類證明。

13. 銅綠假單胞如何保藏?答：可以使用低溫冷凍保存的方法。14. 工作用菌液是否屬於亞培養或傳代一次?

答：工作用菌液應屬於一次傳代。

三、微生物限度

1. 包裝材料的大腸埃希菌檢查?

答：根據包裝材料的不同，大腸埃希菌的檢查方法大致有兩種，一種是將浸提液合並後，取一部分，接種膽鹽乳糖培養基進行檢查;另一種是將浸提液合並後，薄膜過濾，然後按規定的方法檢驗。

2. 抗真菌葯品的微生物限度檢查法

答：這類產品的黴菌和酵母菌計數方法需要進行調整，可以根據產品劑型的不同，選擇薄膜過濾法或培養基稀釋法等方法。

3. 為什麼在日常樣品檢測中還需要做陽性對照(國外不需要)?

答：為了確保每一次檢測對可能存在的微生物都是有效的`。

4. 對於同一個品種，葯典為什麼不規定統一的檢測方法?

答：本版葯典進行過這樣的嘗試，也有某些品種已經收載了統一的檢測方法，如注射用頭孢類抗生素的無菌檢查。之所以沒有大量收載，主要是由於檢測方法還沒有經過必要的復核。將微生物檢驗的統一方法收載在品種的各論項下，始終是努力的方向。

5. 梭菌檢查中需置厭氧條件下培養48小時，是否指在厭氧培養箱中?

答：需要在厭氧培養裝置中進行培養，未必一定是厭氧培養箱。

6. 控制菌檢查方法驗證時，採用多種方法均未檢出控制菌，如何處理?

答：在確保所使用的各種方法都沒有錯誤的情況下，如果仍無法使試驗菌生長，則應該採用薄膜過濾法進行檢查。理由是該方法能夠最大程度地去除產品的抑菌作用。

7.常規的監督抽樣檢品(包括原料)在進行微生物限度檢查時，是否一定要進行活蟎檢查並在原始記錄與報告書中體現?

答：需要進行檢查。可以在原始記錄中體現，報告書上可以不出現，除非當發現有活蟎檢出。

8. 葯包材微生物限度檢查規定了合格質量水平，通常產量下取樣8個，要求8個瓶子均符合規定，如何進行?

答：每個瓶子分別進行實驗。

9. 大腸埃希菌具體操作規程?

答：參見中國葯品檢驗標准操作規程。

10. 動物組織及動物類原葯材的提取物入葯，是否需要檢沙門菌?

答：需要進行沙門菌檢查。

11. 關於中國葯典菌落計數結果的判斷還存在疑義，望能舉例說明。

答：不清楚所指的存在疑義是指哪方面。2010年版對結果報告進行了較大篇幅的修訂，目前的規定應該比05版更為清晰、明確。

12. 需做沙門菌檢驗樣品量的確定?

答：10g(ml)用於樣品計數檢驗和其他控制菌檢查，10g(ml)用於沙門菌檢查，10g(ml)用於沙門菌檢查的陽性對照。需要進行沙門菌檢查的樣品，檢驗用量應為30g(ml)。

13. 日常的實驗室裝備能否達到梭菌無氧的培養要求?

答：完全可以。可以採用厭氧培養盒(罐)。

14. 如果一個產品有兩個規格，是否可以取其中之一做陽性對照?

答：每個規格均需進行陽性對照。

15. 細菌數為100g/g的，樣品稀釋級只做1:10,1:100的倍數就可以了嗎?

答：可以。

16. 培養時間3天，5天，可理解為72小時，120小時嗎?

答：可以。這樣更為嚴謹。

17.中國葯品檢驗標准操作規范“已做驗證試驗的供試品，在檢查時刻不必再做陽性對照”如何理解?

答：該標准操作規范中在無菌檢查法中規定“供試品無菌檢查應進行陽性對照試驗”，表明不論是否進行了方法驗證，在產品的每一次檢驗過程中，還必須進行陽性對照。在控制菌檢查的大腸埃希菌項下，指出“已做驗證試驗的供試品，在該供試品檢查時不必再作陽性對照”。該規定僅適用方法驗證與供試品檢查同時開展的情況。2005年版葯典和2010年版葯典在控制菌檢查中均對陽性對照試驗有明確規定，“進行供試品控制菌檢查時，應做陽性對照試驗。”產品檢驗中應以葯典規定為准。

18. 無菌檢查和微生物限度檢查中，產品中規定的溶解液是否可以換成其他的溶液?

答：可以。

19. 制劑通則中，沒有微生物檢查項目的，是否可不進行微生物項目檢測?

答：可以。主要是二部制劑通則中口服片劑、膠囊劑、丸劑和顆粒劑。

20. 在細菌、黴菌和酵母菌計數中，適用性檢查細菌是培養48小時，黴菌和酵母菌是培養72小時，供試品檢查中細菌是培養3天，黴菌和酵母菌是培養5天，那方法驗證中應參照哪個時間進行培養。

答：應按照供試品檢驗時的條件，即細菌3天，黴菌和酵母菌5天。

21. 測定純化水微生物限度時，每張濾膜過濾量是多少合適?需要先稀釋嗎?過濾完後需不需要沖洗?假如我取10ml純化水通過雙杯體封閉式薄膜過濾器過濾，每張濾膜上的計數是以5ml為單位還是10ml為單位?

答：過濾量應以培養後出現的微生物數不超過100cfu/膜為標准。一般可不稀釋。不需要沖洗。每張濾膜的過濾量為5ml。

22. 2010葯典中關於純化水的微生物限度是：細菌、黴菌及酵母菌總數每1ml不得過100個。這句話的意思是細菌總數每1ml不得過100個，黴菌及酵母菌總數不得過100個，還是細菌+黴菌+酵母菌總數每1ml不得過100個。如果是三者總數的話，那細菌總數限度是多少?黴菌及酵母菌總數限度又是多少?

答：是總數不得過100個。沒有必要考慮各自的限度值。

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3. 抗生素檢測的發展趨勢

國內外使用最廣泛的還是液相色譜法及其聯用技術。高效液相色譜具有靈敏度高、精確度高、分析效力高以及檢測限低、特異性強的優點，同時也存在儀器昂貴、操作繁瑣、需要專業的分析操作人員、樣品處理復雜、成本高的缺點。所以，該種方法很難成為一種常規檢測技術。人們也在嘗試著將一些新的方法引進到畜禽廢水抗生素的檢測中，例如，酶免疫分析方法和毛細管電泳分析方法等。酶免疫分析方法具有簡便、靈敏、快速以及成本低的優點，但是其檢測的結果還要通過MS的驗證才能確證，而且國內對試劑盒的使用主要還是從國外進口，價格昂貴。我國是一個農業大國，畜禽養殖業正在從分散式向集約化模式轉變，畜禽養殖廢水量不斷的增長，抗生素對周圍水體的污染將會更加的嚴重。現有的檢測技術還不能完全檢測到水體中的各種類的抗生素，所以隨著科學技術發展以及社會對畜禽廢水中抗生素污染的重視，一種簡便、快速、准確、高效以及廉價的檢測方法，將是我國今後研究和開發的目標。

4. 牛奶抗生素檢測有什麼好方法

牛奶中抗生素殘留的幾種常用檢測方法 隨著奶牛飼養業的發展，抗生素在預防和治療奶牛疾病方面得到廣泛的應用。生鮮牛奶中抗生素的來源主要是：第一，治療泌乳期病牛時使用的抗生素會從奶牛體內移行到乳腺殘留進入牛奶中，資料表明治療後的奶牛，其擠出的牛奶5天內都有抗生素殘留；其二，為了預防奶牛疾病並提高產量，在奶牛飼料中添加抗生素也會造成牛奶中抗生素的殘留；第三，由於牧場管理不善，擠奶、儲奶沒有嚴格的衛生制度和配套的設施，人為添加或造成牛奶抗生素的污染。 牛奶中含有抗生素，不僅對人的健康造成很大的危害，而且對乳品加工企業帶來經濟損失（因無法生成酸奶和乳酪）。因此必須嚴格控制牛奶中抗生素殘留，除了要做好科學飼養、精心管理；正確擠奶和預防疾病外，還要規范抗生素的使用，按國標中有關規定，用葯後的奶牛5天後所產的牛奶才可作為原料乳，並且要檢測其殘留。世界糧農組織（FAO）、世界衛生組織（WHO）、歐盟（EC）及美國的食品和葯品管理局（FDA）等對食品中抗生素最大殘留量都有明確的規定，我國也有鮮奶中抗生素殘留量檢驗標准（GB4689.27—94）。 目前，鮮奶中抗生素殘留的檢測方法大致分為三類：生物測定法（微生物測定法、放射受體測定法）、免疫法（放射免疫法、熒光免疫法、酶聯免疫法）、理化分析法（波譜法、色譜及聯用技術）。下面介紹幾種常用的牛奶中抗生素殘留檢測方法。 TTC法 TTC法是我國鮮奶中抗生素殘留量檢驗標准（GB4689.27—94）的檢測法，屬生物檢測法。其測定原理基於抗生素對微生物的抑製作用。如果牛奶中含有抗生素，則加入菌種（嗜熱鏈球菌）經培育2.5~3小時後,加入TTC指示劑(三苯基四氮唑)不發生還原反應,所以樣品呈無色狀態;如果牛奶中不含抗生素,則樣品呈紅色.這樣實驗後樣品顏色不變的為陽性,樣品染成紅色的為陰性。 TTC法的具體操作步驟: 1.菌液制備:將單菌種(嗜熱鏈球菌)以脫脂乳為培養基,在36±1℃培養箱中培養15小時後,再以脫脂乳以至於1:1稀釋待用; 2.取待檢樣液9mL,在80℃水浴加熱5分鍾後冷卻到37℃以下,加活菌液1mL,在36℃±1℃水浴2小時,加入4%的TTC指示劑0.3mL, 36℃±1℃水浴培養30分鍾; 3.若樣液顏色不變為陽性,呈紅色為陰性;若陽性的樣液,再置於水浴中培養30分鍾,不顯色的為陽性,呈紅色為陰性. TTC法測定各種抗生素的靈敏度為:青黴素:4ppb,鏈黴素:500ppb,慶大黴素:400ppb,卡那黴素:5000ppb.它具有費用低,易開展的優點;缺點是耗時長，要求操作人員需有一定專業知識且實驗過程中菌液的制備、水浴過程式控制制都要求嚴格遵守操作規程，否則易出現假陽性，以致出現檢驗結果的不穩定性。 Delvotest? sp法（戴爾沃檢測法） 該法最早在香港傳到廣東的，其使用是基於20世紀80年代初香港要求廣東出口的生奶必須「無抗」且要求採用Delvotest法檢測。該方法也是生物測定法，其試劑是由荷蘭DSM公司生產並由AOAC認證。原理是利用微生物—嗜熱芽胞菌在64℃條件下培養2.5～3小時後會產酸,酸引起指示劑BCP(溴甲酚紫)變為黃色;若牛奶樣品中不含抗生素,培養後樣品呈黃色,如樣品中含有抗生素, 嗜熱芽胞菌生長受到抑制而無法產酸,指示劑將不變色. Delvotest? sp 法的操作步驟: 1.以無菌操作將一片營養葯片夾放入小試管內; 2.用微量移液管將0.1mL牛奶樣品注入小試管內; 3.把小試管放入已預熱至64℃的水浴箱或恆溫器中培養; 4).定時3小時取出觀察顏色變化.如果底部2/3的固體介質是黃色,則為陰性, 如果底部2/3的固體介質是紫色,則為陽性. Delvotest? sp 法具有廣譜性,可檢測到?-內醯胺類抗生素在內的更多抗生素,如磺胺類、四環素類、大環內酯類、氨基糖苷類、氯黴素等，其中對青黴素和磺胺類抗生素特別靈敏. 其靈敏度為：青黴素:3ppb,鏈黴素:300ppb,慶大黴素:400ppb,卡那黴素:2500ppb。Delvotest? sp 法集操作方便，嚴格實用，容易判斷，結果可靠，費用適中等優點；但也易出現假陽性，實驗證明：當牛奶樣品中添加微生物防腐劑（如乳酸鏈球菌素—Nisn）或樣品中有足夠的洗滌劑殘留時，便可影響嗜熱芽胞菌生長而使實驗為陽性。 Snap?法 該方法是酶聯免疫法，由美國IDEXX公司生產其檢測分析儀及其試劑盒，均獲得AOAC認證，它利用了竟爭酶聯免疫技術。其基本原理是用特異性抗體將固相載體激活，加入含待測抗原的溶液和一定量的酶標記抗原在45℃±5℃共同保溫，使樣品內的抗生素與內置抗生素標志物竟爭與固定的抗體結合，然後進行洗滌和顯色，內置抗生素標志物與固定的抗體結合形成的復合體，通過酶的作用分解可形成有色物質，通過測定色度並與參照物對照，就可以確定結果是陽性或陰性。 Snap?法操作步驟： 1.加入乳樣於樣品管中,搖勻,加熱樣品和檢測板5分鍾; 2.加入乳樣於樣品孔中,當激活圓環開始退卻時,按Snap鍵; 3.反應4分鍾,由Snap?讀數儀讀取並列印結果.檢測讀數小於1.05時判為陰性,大於1.05時判為陽性. Snap?法是一種將酶化學反應的敏感性和抗原抗體免疫反應的特異性相結合的方法,其敏感性和特異性好,檢測的靈敏度以普遍使用的?-內醯胺類計：青黴素:5ppb,阿莫西林:10ppb,氨苄西林:10ppb,頭孢西林:8ppb.其他抗生素如四環素等的檢測,則需購買相應的試劑來檢測. Snap?法檢測結果快速准確, 9分鍾內即可檢測出牛奶中?-內醯胺類、四環素類、磺胺類等抗生素的殘留含量，且有半定量的讀數，可監控牧場用葯的情況；檢測儀器穩定性良好，結果重現性高，整個檢測過程簡單方便；但需購置專用儀器和試劑，成本較高。 高效液相色譜檢測法 它是一種理化檢測方法,是利用抗生素分子中的基團所具有的特殊反應來測定其含量.檢測的過程採用了氣相色譜理論,通過高壓液相和高靈敏度的檢測器,分離速度快、效率高和操作自動化。一般要經過樣品的提取、脫蛋白、離心、層析柱凈化、衍生化等步驟，能檢測抗生素的具體含量，敏感性較高，但檢測程序復雜，費用較高，需購買色譜儀等檢測設備，不適合小型檢驗室。 傳統的抗生素檢測方法不少,有的操作煩瑣,有的實驗條件要求高,有的檢驗時間太長;這些不僅會給乳製品生產企業造成經濟上和時間上的損失,而且檢測結果常常會被原輔材料和人為操作等因素所影響.鑒於牛奶中抗生素殘留是涉及人類健康的公共衛生問題,乳品企業及牧場應重視和加強檢測工作,應用一些簡單、快速和准確性高的方法來監控產品的質量，保證消費者的健康。 納米膠體金層析法 該方法是基於競爭法膠體金免疫層析技術，將檢測液加入試紙卡上的樣品孔，檢測液中的抗生素與金標墊上的金標抗體結合形成復合物，若抗生素在檢測液中濃度低於100ng/mL，未結合的金標抗體流到T區時，被固定在膜上的抗生素BSA偶聯物結合，逐漸凝集成一條可見的T線；若抗生素濃度高於100ng/mL，金標抗體全部形成復合物，不會再與T線處抗生素BSA偶聯物結合形成可見T線。未固定的復合物流過T區被C區的二抗捕獲並形成可見的C線。C線出現則表明免疫層析發生，即試紙有效. http://www.quicking.cn/chinese/content.asp?MoleType=3&ChannelID=3&id=174 膠體金法操作步驟： 1．將採集的牛奶樣品進行編號，置於常溫（20-30℃）室內。（低溫牛奶流動性差，不適合進行試紙層析測試） 2．搖勻牛奶，用吸管取1mL加入到離心管中，7000rpm離心3-4分鍾至分離出脂肪層。脂肪層下5mm處液體（脫脂牛奶）即為待測液。 3．取出試紙條，用吸管吸取3滴待測液滴於加樣孔中， 4．5分鍾後判斷結果，10分鍾後的結果無效。 http://www.quicking.cn/chinese/content.asp?MoleType=3&ChannelID=3&id=156 結果解釋 陰性：C線顯色，T線肉眼可見，無論顏色深淺均判為陰性。 陽性：C線顯色，T線不顯色，判為陽性。 無效：C線不顯色，無論T線是否顯色，該試紙均判為無效。 保存和穩定性 4-30℃陰涼乾燥處保存，不可冷凍，避免陽光直曬，生產日期起18個月內有效。 納米膠體金層析法適用於樣品的初篩，檢測時間短，出結果速度快，且能在常溫下保存18個月之久，操作簡單，無需任何專業的技術，沒有檢測環境的需求不管是奶農還是奶站工作人員還是專業的檢測人員，都可以方便使用。

5. 抗生素檢測的主要方法

由於抗生素在廢水中的濃度相對較低，所以抗生素的檢測一般都是微量或是痕量分析，常採用具有高靈敏度的儀器進行檢測。各研究機構對畜禽廢水中抗生素的檢測技術主要有色譜法和其聯用技術、酶免疫分析法、毛細管電泳法等。 液相色譜法（LC）在廢水抗生素的檢測中是最常見的，LC具有分離效能好，檢測速度快且重現性好的特點。LC法所用的檢測器有紫外檢測器(UV)，熒光檢測器，以及二級管陣列檢測器。
高效液相色譜-紫外檢測器
高效液相色譜-紫外檢測器聯用檢測技術是最早用於環境中抗生素的分離檢測，由於其操作簡便以及成本低，被用於畜禽廢水中抗生素的檢測。
液相色譜-熒光檢測器
液相色譜-熒光檢測器因為其檢測限低所以也被用於畜禽廢水中抗生素的檢測，通常對本身具有熒光性的抗生素液相色譜-熒光檢測器可以直接檢測出，但是對於本身不具有熒光性或熒光性差的抗生素，需要對其衍生化來提高目標物的熒光特性以便檢測。
液相色譜串聯質譜技術
色譜可以用於多組分混合物的分離和分析，可以對有機化合物進行定量分析，但是定性較困難，質譜儀能夠對單一組分提供高靈敏度和特徵的質譜圖，但對復雜化合物無分析能力。所以將色譜與質譜進行聯用（或是串聯質譜），對復雜化合物中微量和痕量組分的定性和定量分析具有重要的意義。
由於畜禽廢水中有多種類的抗生素同時存在，利用色譜和質譜的聯用技術可以提高抗生素的定性、定量分析的可靠性、准確性、靈敏度。 酶免疫分析方法具有操作簡單，前處理簡化，分析成本低、靈敏、特異性強、檢測快速，不需要昂貴的儀器等，而且可以同時測定幾個樣品，但是酶免疫分析方法對試劑的選擇性高，很難同時分析多種成分，對結構類似的化合物有一定程度的交叉，分析分子量很小的化合物和不穩定的化合物有一定的困難。
用酶免疫分析方法試劑盒檢測地表水、地下水中的四環素和泰勒菌素，檢測分別為0.05μg/L,0.1μg/L。其結果表明，該方法成本低、檢測快，可用於水中的四環素、氯四環素、泰勒菌素的初篩檢測。 經典的放射免疫測定基本原理和酶免疫分析是相同的，但所不同的是反應的放大指示系統不是酶和底物，而是放射性同位素。用於抗原或抗體標記的同位素通常是放射性較小的β放射原，最常用的是同位素是3H和14C，放射性不強、用量也極微小，比較安全。

6. 青黴素鈉無菌檢查的方法驗證

目的 建立健全青黴素鈉無菌檢查方法，保證檢驗結果的准確性和可靠性。

方法 採用薄膜過濾法進行。

1.培養基及其制備方法

培養基應適合需氣菌、厭氣菌或真菌的生長，可按以下處方制備，亦可使用按該處 方生產的符合規定的脫水培養基。以下培養基制備時，均以115℃滅菌30分鍾。 1.需氣菌、厭氣菌培養基(硫乙醇酸鹽流體培養基) 酪腖（胰酶水解） 15g 氯化鈉 2.5g 葡萄糖 5g 新配製的0.1%刃天青溶液 1.0ml L－胱氨酸 0.5g (或新配製的0.2%亞甲藍溶液0.5ml) 硫乙醇酸鈉 0.5g 瓊脂 0.5～0.7g (或硫乙醇酸0.3ml) 水 1000ml 酵母浸出粉 5g 除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分加入水內，微溫溶解後，調節pH為弱鹼性， 煮沸，濾清，加入葡萄糖和刃天青溶液，搖勻，調節pH值使滅菌後為7.1±0.2，分裝， 滅菌。 在供試品接種前, 培養基指示劑氧化層的顏色不得超過培養基深度約1/5，否則,須 經水浴煮沸加熱, 只限加熱一次。

2.選擇性培養基

(1) 對氨基苯甲酸培養基（用於磺胺類葯物的無菌檢查） 照上述需氣菌、厭氣菌 培養基及真菌培養基的處方及製法，各加對氨基苯甲酸0.125g，溶解後，搖勻,分裝,滅 菌。 (2) 聚山梨酯80培養基（用於油劑葯品的無菌檢查） 照上述需氣菌、厭氣菌培養基 及真菌培養基的處方及製法，各加10ml聚山梨酯80，搖勻，分裝，滅菌。

3.操作

按該葯品項下規定的方法處理後, 加入0.9%無菌氯化鈉溶液或其他適宜的溶劑至少100ml中, 混合後，通過裝有孔徑不大於0.45μm的薄膜過濾器，然後用0.9%無菌氯化鈉溶液或其他適宜的溶液沖洗濾膜至陽性對照菌正常生長。將需氣菌、厭氣菌培養基，真菌培養基用陽性對照管用培養基分別加至薄膜過濾器內（封閉式過濾器），或取出濾膜分成3等份,分別加入上述二種培養基中，按規定溫度和時間培養。陽性對照管應根據供試品特性加入相應對照菌液1ml(抗細菌葯物，以金黃色葡萄球菌為對照菌；抗厭氧菌葯物，以生孢梭菌為對照菌；抗真菌葯物，以白色念珠菌為對照菌)。陽性對照管細菌應在培養24～48小時，真菌應在培養24～72小時有菌生長。結果判斷當陽性對照管顯渾濁並確有細菌生長，陰性對照管呈陰性時，可根據觀察所得的結果判定。

結果判斷 如需氣菌、厭氣菌及真菌培養基管均為澄清或雖顯渾濁但經證明並非有菌生長,均應判為供試品合格；如需氣菌、厭氣菌及真菌培養基管中任何1管顯渾濁並確證為有菌生長，應重新取2倍量供試品，分別依法復試，除陽性對照管外，其他各管均不得有菌生長，否則應判為供試品不合格。

討論 目前，抗生素類葯物的應用非常廣泛，針對每種抗生素類葯物建立嚴格的質量標准，提高抗生素的質量就顯得尤為關鍵。所以對一個新品種建立無菌檢查法時，對其方法進行驗證就顯得尤為必要。薄膜過濾法作為無菌檢查中的一種方法，具有準確、方便、快捷的優點，是無菌檢查時所採用的一種重要方法。試驗表明上述方法操作方便快捷、結果准確。所以，該無菌檢查方法驗證對保證結果的可信度和准確性具有重要意義。

7. 青黴素鈉無菌檢查的方法驗證

青黴素鈉無菌檢查的方法驗證
目的 建立健全注射用青黴素鈉無菌檢查方法，保證檢驗結果的准確性和可靠性。方法 按中國葯典2010年版二部(附錄XI H)無菌檢查法中的薄膜過濾法進行。
1 試驗環境與材料
1．1 試驗環境在環境潔凈度萬級、局部潔凈度百級的單向流空氣的菌無室中進行。
1．2 儀器智能集菌儀(杭州泰林生物技術設備有限公司)、PY330一次性全封閉集菌培養器(杭州泰林生物技術設備有限公司)、生化培養箱(蘇州威爾實驗用品有限公司)、黴菌培養箱(蘇州威爾實驗用品有限公司)、生物安全櫃(蘇州安泰空氣技術公司)
1．3 試葯注射用青黴素鈉
1．4 試驗用菌株金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26 003l、大腸埃希菌[CMCC(B)44 102]、枯草芽孢桿菌[CMCC(B)63501]、生孢梭茵[CMCC(B)64 941]、白色念珠菌[CMCC(F)98 001]、黑麴黴[CMCC(V)98 003]。
1．5 培養基、稀釋液及緩沖液1．5．1 乾粉培養基 硫乙醇酸鹽流體培養基、改良馬丁培養基、營養瓊脂培養基、瓊脂粉。
1．5．2 細菌稀釋液0．9％ 滅菌氯化鈉溶液。
1．5．3 沖洗用緩沖液pH7．0氯化鈉-蛋白腖緩沖液。
2 方法與結果
2．1 菌液制備按中國葯典2010年版附錄ⅪH無菌檢查法菌液制備法制備 。
2．2 菌落計數取金黃色葡萄球菌菌液、大腸埃希菌菌液、枯草芽孢桿菌菌液各1 m1分別接種於營養瓊脂培養基中，生孢梭菌接種至含1．5％瓊脂的硫乙醇酸鹽流體培養基中，30~C～35'E生化培養箱培養24～48 h，取白色念珠菌菌液、黑麴黴菌液各1 m1分別接種至改良馬丁瓊脂培養基中，經23℃ 一28~C黴菌培養箱培養48～72 h，計數。(上述各菌液分別接種兩個平板，取平均值，同時設陰性對照)
2．2 方法學驗證
2．3．1 試驗組(樣品+陽性) 取一次性全封閉集菌培養器(三聯裝)一套，先用少量pH7．0無菌氯化鈉-蛋白腖緩沖液潤濕濾膜，取樣品15瓶溶解於250 ml緩沖液中，按薄膜過濾法過濾，樣品過濾完畢後，再用pH7．0無菌氯化鈉-蛋白腖緩沖液沖洗，每次每管注人沖洗液100 ml，充分振搖，完全排空後循環操作5次，總沖洗量達到500 ml每管。沖洗完畢後在2管中分別注人改良馬丁培養基100 ml，另1管中注入硫乙醇酸鹽流體培養基100 ml。另取一套集菌培養器(三聯裝)取本品依上述方法過濾並沖洗後，均注入硫乙醇酸鹽流體培養基100 ml，將上述6管集菌培養器移至陽性對照室，於含硫乙醇酸鹽流體培養基的集菌培養器中，分別接種金黃色葡萄球菌菌液、大腸埃希菌茵液、枯草芽孢桿菌菌液、生孢梭菌菌液各1 ml，於含改良馬丁培養基的集茵培養器中，分別接種白色念珠菌菌液和黑麴黴菌液各1 ml，按前述規定溫度培養3～5 d，觀察結果。
2．3．2 陽性對照組取一次性全封閉集菌培養器(三聯裝)二套，4管中分別注入硫乙醇酸鹽流體培養基各100 ml、2管中分別注入改良馬丁培養基各100 ml，在陽性對照室內將6種菌液分別接種至相應管內，作為陽性對照，按前述規定溫度培養3～5 d，觀察結果。
2．3．3 陰性對照組取一次性全封閉集菌培養器(二聯裝)一套，濾過適量緩沖液後分別注入硫乙醇酸鹽流體培養基和改良馬丁培養基各100 ml，作為陰性對照，按前述規定溫度培養14 d，觀察結果。
2．3．4 樣品的無菌檢查 取樣品15支依上述方法同法操作，以500 ml／管的沖洗量沖洗，加入培養基後，按規定溫度培養14 d，逐日觀察，若培養14 d均澄清；由此判定供試品符合規定。
結果判斷 與對照管比較，如含供試品各容器中的試驗菌均生長良好，則說明供試品的該檢驗量在該檢驗條件下無抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不計，照此檢查方法和檢查條件進行供試品的無菌檢查。 如含供試品的任一容器中的試驗菌生長微弱、緩慢或不生長，則說明供試品的該檢驗量在該檢驗條件下有抑菌作用，可採用增加沖洗量、增加培養基的用量、使用中和劑或滅活劑、更換濾膜品種等方法，消除供試品的抑菌作用，並重新進行方法驗證試驗。
討論 目前，抗生素類葯物的應用非常廣泛，針對每種抗生素類葯物建立嚴格的質量標准，提高抗生素的質量就顯得尤為關鍵。所以對一個新品種建立無菌檢查法時，對其方法進行驗證就顯得尤為必要。薄膜過濾法作為無菌檢查中的一種方法，具有準確、方便、快捷的優點，是無菌檢查時所採用的一種重要方法。試驗表明上述方法操作方便快捷、結果准確。所以，該無菌檢查方法驗證對保證結果的可信度和准確性具有重要意義。

8. 無菌葯品的生產過程驗證內容有哪些

無菌葯品的生產過程驗證內容：為保證葯品的微生物檢測檢驗的質量，必須對所有的檢測方法進行驗證，只有檢測方法驗證確認後才能確保驗證結果的准確、可靠。我國的《葯品生產質量管理規范》（1998年修訂）第五十八條規定：「產品的生產工藝及關鍵設施、設備應按驗證方案進行驗證。當影響產品質量的主要因素，如工藝、質量控制方法、主要原輔料、主要生產設備等發生改變時，以及生產一定周期後，應進行再驗證。第五十九條：應根據驗證對象提出驗證項目、制定驗證方案，並組織實施。驗證工作完成後應寫出驗證報告，由驗證工作負責人審核、批准。第六十條：驗證過程中的數據和分析內容應以文件形式歸檔保存。驗證文件應包括驗證方案、驗證報告、評價和建議、批准人等」。
《中國葯典》（2005年版）附錄《葯品質量標准分析方法驗證》中明確指出：「葯品質量標准分析方法驗證的目的是證明採用的方法適合於相應檢測要求，在建立葯品質量標准時，分析方法需經驗證；在葯品生產工藝變更、制劑的組分變更、原分析方法進行修訂時，則質量標准分析方法也需進行驗證。方法驗證理由、過程和結果均應記載在葯品標准起草說明或修訂說明中」。此外，《中國葯典》（2005年版）的葯品無菌檢查法和微生物限度檢查法中也明確規定了無菌檢查法方法驗證試驗和微生物限度檢查法方法的驗證內容：「當供試品為新的產品或供試品的檢驗條件發生改變時，應進行方法驗證試驗，以確認供試品在該實驗條件下無抑菌活性或其抑菌活性可以忽略不計。驗證時，按「供試品的無菌檢查」的規定及下列要求進行操作。供試品對每一試驗菌的抑菌程度應逐一進行驗證」；「當供試品為新的產品或供試品的檢驗條件發生改變時，應進行方法驗證試驗，以確認供試品的抑菌活性及測定方法的可靠性。驗證時，按供試品的制備和細菌、黴菌及酵母菌計數所規定的方法及下列要求進行。對各試驗菌的回收率應逐一進行驗證」。為何規定要進行方法學的驗證？這是由於許多葯品本身具有抑菌性（如抗生素類葯品、含防腐劑葯品）會對檢查結果帶來影響，因此在進行微生物檢測前，需要對樣品進行適當的預處理以消除樣品本身對微生物檢測所帶來的干擾。同樣，樣品的預處理方式、檢驗條件和培養條件也都會影響到樣品的微生物檢測結果。因此，在確定新產品的微生物學檢驗時或開發新的檢測方法時或原有檢驗條件發生改變時必須要加以驗證，以確保在新產品的微生物學檢驗時或開發新的檢測方法時或原有檢驗條件發生改變時的實際檢驗條件下，其檢驗方法的准確性、有效性和重現性。

9. 肉類抗生素檢測方法有哪些

一種基於冰箱的肉類抗生素檢測方法,將紫外激發光源和光譜相機安置於冰箱內部上壁,將肉類放置在冰箱內,開啟光譜相機,連續採集n幀數據,每幀數據為八通道光譜圖像,將每個通道取平均來降低紫外激發光源波動及光譜相機偏置雜訊,獲得八通道背景光譜數.

10. 葯品領域的微生物檢測及標准

中國葯典微生物限度檢查法，為《中國葯典》附錄收載的關於葯品微生物檢查的法定方法。葯品的不同劑型的微生物檢測標准不同，具體如下：

1、制劑通則品種

制劑通則、品種項下要求無菌的制劑及標示無菌的制劑應符合無菌檢查法規定。

2、口服給葯制劑

細菌數每1g不得過l000cfu。每lml不得過100cfu。

黴菌和酵母菌數每lg或lml不得過100cfu。

大腸埃希菌每1g或lml不得檢出。

3、耳、鼻及呼吸道吸入給葯制劑

細菌數每1g、lml或l0cm²，不得過100cfu。

黴菌和酵母菌數每1g、lml或l0cm²，不得過10cfu。

金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌每1g、lml或l0cm²不得檢出。

大腸埃希菌鼻及呼吸道給葯的制劑，每1g、lml或l0cm²，不得檢出。

4、陰道、尿道給葯制劑

細菌數每1g、lml或l0cm²，不得過100cfu。

黴菌數和酵母菌數每1g、lml或l0cm²應小於10cfu。

金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌每1g、lml或l0cm²，不得檢出。

5、直腸給葯制劑

細菌數每1g不得過l000cfu。每lml不得過100cfu。

黴菌和酵母菌數每1g或lml不得過100cfu。

金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌每lg或lml不得檢出。

6、其他局部給葯制劑

細菌數每1g、lml或l0cm²不得過100cfu。

黴菌和酵母菌數每1g、lml或l0cm²不得過100cfu。

金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌每1g、lml或l0cm²不得檢出。

7、含動物組織

含動物組織（包括提取物）的口服給葯制劑每10g或10ml還不得檢出沙門菌。

8、兼用途徑制劑

應符合各給葯途徑的標准。

(10)抗生素檢測方法驗證擴展閱讀

微生物限度檢查法的注意事項：

1、當建立產品的微生物限度檢查法時，應進行控制菌檢查方法的驗證，以確認所採用的方法適合於該產品的控制菌檢查。若產品的組分或原檢驗條件發生改變可能影響檢驗結果時，檢查方法應重新驗證。

2、檢查項目應當包括細菌數、黴菌數、酵母菌數及控制菌檢查。

3、微生物限度檢查應在環境潔凈度10000 級下的局部潔凈度100 級的單向流空氣區域內進行。

4、檢驗全過程必須嚴格遵守無菌操作，防止再污染。單向流空氣區域、工作檯面及環境應定期按《醫葯工業潔凈室（區）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》的現行國家標准進行潔凈度驗證。

5、除另有規定外，本檢查法中細菌及控制菌培養溫度為30℃～35℃；黴菌、酵母菌培養溫度為23℃～28℃。

6、檢驗結果以1g、1ml、10g、10ml、10c㎡ 為單位報告，特殊品種可以最小包裝單位報告。