⑴ 蜂蜜中氯黴素葯物的殘留如何快速檢測,用哪個品牌的比較好
可以用美正生物的氯黴素快速檢測試紙條,本產品用於快速檢測蜂蜜中氯黴素葯物的殘留,適用於各類企業、檢測機構、監督部門的現場快速檢測。
檢測步驟
【樣品處理】
1. 稱取3.0±0.03g樣本至50mL聚苯乙烯離心管中,加入3mL去離子水振盪5分鍾,使其充分溶解;
2. 加入6mL乙酸乙酯振盪30秒~1分鍾;
3. 室溫4000r/min 離心5分鍾(如離心後出現乳化現象,可手動搖晃後繼續離心5分鍾或置於熱水中待溶解後再次離 心);
4. 移取4mL上層有機相至離心管中(離心管可根據氮吹儀 型號選擇不同規格),於50~60℃氮氣流下吹乾; 5. 加入800μL氯黴素樣本稀釋液,充分振盪後,取200 μL進行分析。
【檢測步驟】
1. 使用前將試紙條、微孔試劑、樣本稀釋液和待檢樣本恢復 至室溫(20~25℃);一次檢測樣本數量不要超過8個; 如果一次檢測樣本數量超過8個,請按照8個一組,分批檢測。
2. 取所需數量的微孔和試紙條,並做好標記,將微孔置於40℃乾式加熱器上。
3. 用移液器取200μL振盪混勻的待檢樣本加入微孔並反復 吸打直至紅色固體充分混勻進行孵育,計時3分鍾。
4. 將試紙條立即插入微孔中進行反應,計時5分鍾。
5. 取出試紙條去除下端樣品墊並在1分鍾內根據圖示進行 判讀或者配合儀器判讀。
注意事項
1. 不同批次試紙條、微孔、二維碼均不能混用。
2. 槍頭與離心管等耗材不可混用,以免交叉污染。
3. 產品為一次性消耗品,請在有效期內使用。
4. 請勿觸摸試紙條中央白色膜區,檢測時避免陽光直射和風 直吹,如不小心接觸後請遺棄。
5. 微孔打開時不要用力過猛,以免有粉末飛出。已開封的產 品請按照要求密封儲存,並盡快使用,以免影響檢測結果。
6. 請勿用自來水、純水及蒸餾水等做陰性對照。
7. 遇到樣本檢測結果呈陽性,建議重復測試一次。
8. 試紙條檢測線出現明顯斷點,會影響檢測結果,建議重復測試一次。
9. 反應後,務必立即去掉試紙條下端的樣品墊,並在1分鍾內判讀結果,因為試紙條乾燥後顏色深度會有變化,影響最後的結果。
10. 試劑從試劑桶取出後,請立即蓋好試劑桶蓋。如果一次用不完8個微孔,需將剩餘微孔立即放回到裝有乾燥劑的試 劑桶中密封保存。
11. 本產品檢測結果僅供參考,如需確證,請參照國家相關標准方法。
液相色譜(LC)法
氣相色譜(GC)法
液—質聯用(LC/MS)
氣—質聯用(GC/MS)法
⑶ 豬肉中氯黴素殘留的檢測
可參照賽分科技的一個檢測方法
(一)樣品准備
1、 稱取10g待檢豬肉樣品於50mL具塞離心管中;
2、 加入2~3g無水硫酸鈉和30 mL乙酸乙酯,均質1 min,以5000rpm 離心5min後,用吸管吸出上層乙酸乙酯於濃縮瓶中,殘渣用15 mL乙酸乙酯重復提取,合並提取液;
3、 提取液在50℃水浴中旋轉蒸發(或氮氣吹乾);
4、 加入1mL 甲醇-氯化鈉溶液(20%甲醇:4g/100mL氯化鈉溶液=20 : 80, v/v)和4 mL 正己烷,充分振搖後,轉移至10mL具塞離心管中,用1mL甲醇-氯化鈉溶液清洗濃縮瓶,合並清洗液;
5、 渦旋0.5min,經3000rpm離心3min後,用吸管吸去正己烷,加入4 mL正己烷,重復以上操作;
6、 加入4mL乙酸乙酯提取水相2次,將乙酸乙酯提取液在50oC下濃縮至干(或氮氣吹乾),用10mL水溶解殘渣。
註:本步驟參考《GB/T 9695.32-2009 肉與肉製品 氯黴素含量的測定》
(二)SPE凈化
1. 活化:取固相萃取小柱H2P 60mg/3mL(訂貨號:SSH2P063),用2mL 甲醇,2mL水活化。
2. 上樣:取1mL提取液上樣
3. 淋洗:1mL的20%甲醇
4. 洗脫:2mL甲醇
5. 濃縮:氮氣吹乾,1mL 流動相溶解,0.45μm 濾膜過濾
(三)液相檢測
採用賽分BR-C18,120Å, 5μm,4.6×250mm色譜柱(訂貨號:102185-4625)進行檢測,流動相為50%甲醇,流速為1ml/min,檢測波長為278nm,進樣量為20μL。
H2P固相萃取小柱可除去樣品中大部分的雜質,避免了雜質對實驗結果的干擾,同時延長了色譜柱的使用壽命。回收率測定表明氯黴素的回收率保持在95%-105%的高水平上。
⑷ 氯黴素檢測的反應原理
ELISA法:
氯黴素酶聯免疫檢測試劑盒,主要是利用抗原與抗體的特異性免疫化學反應的基本原理來進行的,換句話說,就是利用酶標記物與樣品中的氯黴素與微孔中的抗體進行競爭反應。在整個反應當中,如果樣品中的氯黴素殘留的越多,相對地就會競爭反應越多的酶標記物,使得能結合上抗體的酶標記物相對地減少,用TMB底物顯色,樣品中的氯黴素含量與樣品的吸光度值呈反比,與標准曲線比較即可得出氯黴素含量。
⑸ 怎樣檢測氯黴素
(組織)氯黴素(CAP)j膠體金快速檢測卡用於快速檢測水產品(魚蝦蟹等)、畜禽肉及水體沉積物中的氯黴素殘留,整個檢測過程只需要30分鍾左右,本試紙條為定性檢測,檢測卡靈敏度為0.2ppb。
(水體)氯黴素(CAP)j膠體金快速檢測卡用於快速檢測水體中的氯黴素殘留,整個檢測過程只需要10分鍾左右,本試紙條為定性檢測,靈敏度為0.3ppb。
檢測原理:
氯黴素檢測卡應用了競爭抑制免疫層析的原理,樣品中的氯黴素在流動的過程中與膠體金標記的特異性單克隆抗體結合,抑制了抗體和NC膜檢測線(T)上氯黴素-蛋白偶聯物的結合。如果樣品中氯黴素含量大於0.2ppb,檢測線(T)線顯色比C線淺,結果為陽性;反之,檢測線(T)顯色比質控線(C)深或者一樣深,結果為陰性。
結果判定:
1、 陰性(-):檢測線(T)顯色比質控線(C)深或者一樣深,表示樣品中氯黴素濃度低於檢測限或者不含氯黴素。
2、 陽性(+):檢測線(T)線顯色比C線淺,或者檢測線(T)不顯色,表示樣品中氯黴素殘留濃度大於檢測限。
3、 無效:質控線(C)不顯色;可能是操作不當或者檢測卡失效。用新的檢測卡重新檢測。
⑹ 氯黴素定量及定性檢測的方法有哪些
氯黴素殘留檢測的主 要方法。闡述了微生物法檢測氯黴素的優缺點,比較了免疫學方法中放射免疫法(RIA)和酶標免疫法(EIA),指出了免疫學方法適合於大規模推廣使用為一 種快速篩選方法,可以採用該方法進行樣品篩選;對色譜學方法中液相色譜(LC)法、氣相色譜(GC)法、液質聯用(LC/MS)法和氣質聯用(GC /MS)法的研究做了綜合、比較,指出了它們各自的優缺點,並認為色譜學方法中氣質聯用(GC/MS)法和液質聯用法可同時定量和定性,靈敏度高、檢測限 低,將是今後氯黴素殘留最主要的檢測方法。
⑺ 氯黴素檢測的注意事項
1、使用前先將氯黴素標准溶液6瓶,濃縮萃取稀釋液,濃縮洗滌液,酶標記物,底物溶液及微量測試孔條置於室溫下,回溫30分鍾。
2、原倍萃取稀釋液及洗滌液配製
用蒸餾水將10倍濃縮萃取稀釋液及濃縮洗滌液分別以1: 9的比例稀釋(即1mL濃縮液+9mL蒸餾水),即可作為樣品萃取稀釋液與微孔板清洗液。
3、回溫後,取出所需微量測試孔條,將剩餘板條立即放回鋁箔袋中用膠帶封好,置於40℃保存。 針對以下抗生素進行交叉反應之測試,結果如下:
Chloramphenicol =100%
Chloramphenicol(free base) <0.1%
Gentamycin <0.1%
Tetracycline <0.1%
Penicillin G <0.1%
Sulfamethazine <0.1% 生乳(添加1.0ppb)104~117%
蜂蜜(添加0.3ppb)90~110%
蝦及魚肉(添加0.5ppb)95~110%
雞肉(添加0.5ppb) 90~120%
血清(添加0.5ppb)100~120%
內臟(添加1.0ppb) 100~120%
飼料(添加2.0ppb)80~110%
⑻ 氯黴素檢測的主要方法
氯黴素檢測方法包括微生物法、色譜法、免疫測定法。微生物法易操作,費用低,但靈敏度低,特異性差。色譜法精確可靠、靈敏度高,檢測極限可達到0. 1μgPkg ,但前處理步驟多,回收率偏低 。免疫測定具有靈敏度高、特異性強、對儀器設備和人員素質要求低以及樣品前處理簡單等優點,適於現場監控和大規模樣品篩選。
⑼ 檢測氯黴素的行業標准
氯黴素檢驗方法 --這是我們公司現在使用的方法,發上來大家指導指導
1. 試劑與材料
1.1氯黴素試劑盒,德國r-Biopharm公司
1.2乙酸乙酯,分析純
1.3雙蒸水
2.儀器與設備
2.1微孔板酶標儀,MuLtisKan Ascent,芬蘭Labsystens公司。
2.2 8道移液器,50-300uL
2.3 單道移液器,5-50ul,20-200ml,100-1000ul,1-5ml
2.4 離心機。
2.5 旋轉蒸發器,配真空冷卻系統。
2.6 液體混勻器。
3.樣品前處理
3.1樣品提取 稱取約2g(准確至0.01g)蜂蜜於20ml具塞試管中,加入用4ml雙蒸水溶解,再加4ml乙酸乙酯,在混勻器上混勻10分鍾。將上述樣液轉至10ml離心管中,以4000轉/分離心12分鍾
3.2凈化 從上述離心管中移取1ml上層的乙酸乙酯(相當於0.5樣品)至另一試管中,60℃以下減壓旋轉蒸干,殘留物用0.5ml緩沖液1溶液,此為樣品溶液,供酶標儀測定
4.測定
4.1 酶標儀測定條件
酶標儀測定波長為450nm
4.2 酶標測定(以下操作在20-24℃室溫條件下進行)
4.2.1測定之前的准備工作
將氯黴素酶試劑盒附帶的所有試劑回升至室溫20-24℃。其中氯黴素酶標記物、氯黴素抗體用緩沖液1以1;11的比例稀釋,在吸取濃縮液之前,要仔細振搖使之充分混勻
4.2.2 標准應用的制備;50uL標准濃縮液(氯黴素試劑盒附帶)用450uL緩沖液1稀釋並混合均勻用玻璃不能用塑料瓶
標准應用液1:50uL標准濃縮液1用450uL緩沖液1稀釋oppt
標准應用液2:50uL標准濃縮液2用450uL緩沖液1稀釋50ppt
標准應用液3:50uL標准濃縮液3用450uL緩沖液1稀釋150ppt
標准應用液4:50uL標准濃縮液4用450uL緩沖液1稀釋450 ppt
標准應用液5:50uL標准濃縮液5用450uL緩沖液1稀釋1350ppt
標准應用液6:50uL標准濃縮液6用450uL緩沖液1稀釋4050ppt
4.2.3.測定程序:
取出實驗需要數量的微孔板條,按順序加入50ul標准或處理好的樣品到各自的微孔中,加入50ul稀%@FI
釋了的酶標記物到微孔底部,加入50ul稀釋了的抗體溶液到每一個微孔中充分混合(輕輕振盪板並在桌面上做圓周運動以混均)用薄膜覆蓋板上在室溫孵育2小時(注意在加入抗體的過程中移液器管尖千萬不要接觸到放進孔中的液體,避免交叉污染)
倒出孔中的液體,將微孔架倒置在吸水紙上拍打(拍打4次)以保證完全除去孔中的液體,用250ul蒸餾水充入孔中(輕輕振盪板並在桌面上做圓周運動),再次倒掉微孔中液體,重復操作兩遍。注意在洗板過程中加洗滌水的移液器管尖必須置於微孔板上方約1厘米處打出洗滌水。洗板後立即進行下一步
操作不要讓板孔乾燥。
迅速加入50ul基質及50ul發色劑到每一個孔中,輕輕振盪板並在桌面做圓
周運動以混均。室溫孵育微孔板30分鍾,注意暗處避光放置。在恆溫孵育期間准備好反應停止液
加入100ul反應停止液,混勻。立即測量,如果不能立即測量請放置在暗處並於60分鍾內450nm測量OD值
5.試劑空白
以2 ml雙蒸水代替樣品,按上述步驟提取
6結果與計算
6.1繪制標准曲線法
所獲得的標准和樣品吸光度值的平均值除以第一個標准(0標准)的吸光度值再乘以100,因此0標准等於100%,吸光度值的百分比表示。
標准(或樣品)的吸光度值360
×100 = %吸光度
0標準的吸光度值
計算標準的值並繪成一個以氯黴素濃度(ng/kg)為半對數坐標系統的曲線圖,曲線在50-1350ng/kg(ppt)范圍內應當成為線性。相對應每一個樣品的濃度(ng/kg)可以從校正曲線上讀出。為了獲得樣品中氯黴素的實際濃度(ng/kg),從校正曲線上讀出的濃度值必須乘以相對應的稀釋系數。(可採用Labsystens公司提供的MuLtisKan Ascent軟體,從計算機上編制測定程序並進行數據處理,可直接讀取樣品氯黴素的濃度值)。7.方法的檢出限、回收率
7.1本方法氯黴素的檢出限為125ng/kg(ppt)
7.2 回收率: 90%
對蜂蜜樣品進行的回收率實驗,結果如下表示.
樣品本底值(ng/kg)添加值(ng/kg)測定值回收率
蜂蜜
⑽ 水產品中的氯黴素殘留用什麼方法檢測比較好
氯黴素主要液質聯用和氣質聯用的方法 一般用液質方法好點 氣質方法需要衍生化,衍生化的方法對定量都有一定的風險。
GB/T 20756-2006 可食動物肌肉、肝臟和水產品中氯黴素、甲碸黴素和氟苯尼考殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法
SN/T 1864-2007 進出口動物源食品中氯黴素殘留量的檢測方法 液相色譜-串聯質譜法
農業部781號公告-2-2006 動物源食品中氯黴素殘留量的測定 高效液相色譜-串聯質譜法
如果你實在要用氣質聯用方法
農業部781號公告-1-2006 動物源食品中氯黴素殘留量的測定 氣相色譜-質譜法
農業部958號公告-14-2007 水產品中氯黴素、甲碸黴素、氟甲碸黴素殘留量的測定 氣相色譜-質譜法
SC/T 3018-2004 水產品中氯黴素殘留量的測定 氣相色譜法
當然還有酶聯免疫 半定量的方法
DB34/T 821-2008 動物組織中氯黴素的殘留測定——酶聯免疫吸附法
SN/T 1604-2005 進出口動物源性食品中氯黴素殘留量的檢驗方法 酶聯免疫法
農業部1025號公告-26-2008 動物源食品中氯黴素殘留檢測 酶聯免疫吸附法
我們一般都是用液質聯用的檢測方法 檢出限比較低 而且定量結果比較穩定可靠。