A. 測定氨基酸含量的方法有幾種
1)稱乾重法.可用離心法或過濾法測定.優點:可適用於一切微生物,缺點:無法區別死菌和活菌.
2)比濁法.原理:由於微生物在液體培養時,原生質的增加導致混濁度的增加,可用分光光度計測定.優點:比較准確.
3)測含氮量,大多數微生物的含氮量占乾重的比例較一致,根據含氮量再乘以6.25即可測得其粗蛋白的含量.
4)血球計數板法.優點:簡便、快速、直觀.缺點:結果包括死菌和活菌.
5)液體稀釋法.對未知菌樣作連續的10倍系列稀釋,經培養後,記錄每個稀釋度出現生長的試管數,然後查MPN表,再根據樣品的稀釋倍數就可計算其中的活菌含量.優點:可計算活菌數,較准確.缺點:比較繁瑣.
6)平板菌落計數法.取一定體積的稀釋菌液塗布在合適的固體培養基,經培養後計算原菌液的含菌數.優點,可以獲得活菌的信息.缺點:操作繁瑣,需要培養一定時間才能獲得,測定結果受多種因素的影響.
B. 氨基酸質譜檢測用正離子模式還是負離子
選擇正負離子模式主要是根據化合物的性質,也就是看結構;而流動相環境影響分析的靈敏度。
比如含羧基,磺酸基的物質,一般肯定可以使用負離子模式,因為在一般情況下可以電離為R-COO-,和R-SO3-;在酸性的流動相中,如pH3以下,羧酸根可能就不好電離成負離子了,這時負離子監測的靈敏度下降,而磺酸根酸性較大,仍然可以電離。
而含氮的化合物鹼性化合物,包括季氮化合物,一般採用正離子模式,R-NH3+,R2-NH2+,R3-NH+,R4-N+;這些化合物一般容易加和氫離子形成正電荷的離子;同樣跟他們的鹼性有關,季氮化合物是強鹼,一般情況都可以正離子監測的;
兩性化合物如氨基酸,有個等電點pH的,根據流動相pH不同選擇模式。
一般酸性化合物流動相選pH大於pKa2.0以上,採用負離子模式;反之鹼性化合物流動相選pH小於pKa2.0,採用正離子模式
我遇到的情況一般是正離子模式應用更多,一方面流動相由於色譜柱的性質一般偏向酸性(pH2-8),另一方面,普遍採用的ESI離子源是一種超軟電離的離子源,在酸性條件下大部分極性較大的化合物都可以加和氫離子,形成正電離子,如沒有氮的黃酮類,脂類,糖類等。
且負離子模式相應一般比正離子模式小一個數量級。
在優化質譜條件的時候正負離子都試試哈,看看相應值!~還有,看看樣品的基質是否有干擾,看看基線高度和性噪比!
C. 檢驗氨基酸用什麼方法
1.茚三酮反應,氨基酸與其發生反應縮合成藍色物質。除開脯氨酸和羥脯氨酸,他們與其反應生成黃色衍生物。
2.桑格反應,氨基酸與其反應會生成黃色的2,4-二硝基氨基酸,可以用於鑒定多肽或蛋白質的N端氨基酸。
3.艾德曼反應(DNFB反應),即氨基酸與苯異硫氰酸反應生成相應的苯氨基硫甲醯氨基酸。
D. 氨基酸檢測
你若是問蛋白質,我可以直接告訴你又雙縮脲試劑(中學階段),但氨基酸的檢驗比蛋白質麻煩多了.一、氨基酸的分離和檢測氨基酸的分離和檢測手段,以往用化學分析法、層析法、比色法、氣相色譜法、氨基酸自動分析儀.隨著高效液相色譜及填料的發展,HPLC在氨基酸檢測方面顯示了其特有的優越性.但大多數氨基酸無紫外吸收和熒光發射特性,為提高分析檢測靈敏度和分離選擇特性,通常將氨基酸衍生,衍生方式有柱前衍生法與柱後衍生法.HPLC與各種衍生相結合的氨基酸分析技術,構成了具有廣泛適用性的現代氨基酸分析技術.\x0d二、鑒定是哪種氨基酸,不同的氨基酸要用不同的方法.1、茚三酮反應 (ninhydrin reaction) 茚三酮(弱酸環境加熱) 紫色(脯氨酸、羥脯氨酸為黃色) (檢驗α-氨基)\x0d2、坂口反應 (Sakaguchi reaction) 丙氨酸\x0dα-萘酚+鹼性次溴酸鈉 紅色 (檢驗胍基 精氨酸有此反應)\x0d3、米隆反應(又稱米倫氏反應) HgNO3+HNO3+熱 紅色 (檢驗酚基 酪氨酸有此反應,未加熱則為白色)\x0d4、Folin-Ciocalteau反應(酚試劑反應) 磷鎢酸-磷鉗酸 藍色 (檢驗酚基 酪氨酸有此反應)\x0d5、黃蛋白反應 濃硝酸煮沸 黃色 (檢驗苯環 酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸有此反應)\x0d6、Hopkin-Cole反應(乙醛酸反應) 加入乙醛酸混合後徐徐加入濃硫酸 乙醛與濃硫酸接觸面處產生紫紅色環 (檢驗吲哚基 色氨酸有此反應)\x0d7、Ehrlich反應 P-二甲氨基苯甲醛+濃鹽酸 藍色 (檢驗吲哚基 色氨酸有此反應)\x0d8、硝普鹽試驗 Na2(NO)Fe(CN)2*2H2O+稀氨水 紅色 (檢驗巰基 半胱氨酸有此反應)
E. 串聯質譜是怎樣測定氨基酸序列的,以三級四級桿質量分析器為例
牙酸是有劇毒的,以上三點是化學問題,分析示例嗯,60%至70%
F. 質譜法測定氨基酸的原理詳細步驟,不勝感激!!!!
用液質聯用儀做可以得到氨基酸的M+H峰,可以得到氨基酸的確認
G. 列舉三種氨基酸的定量分析方法,說明其工作原理。
就給你找到兩種,將就著看吧..你找到了另一種,再告訴我一下
1、化學分析法——甲醛滴定法
甲醛滴定法用於氨基氮的測定, 可以測出樣品中總氨基酸的含量,其原理是在中性或弱鹼性水溶液中,氨基酸的α—氨基與醛類反應生Schiff鹼:α—氨基酸與甲醛反應生成亞甲基亞氨基衍生物
2、分光光度法——茚三酮法
茚三酮是一種能使氨基酸生成在可見光區有吸收的衍生試劑。該方法的基本原理是經陽離子交換柱分離出的氨基酸與茚三酮混合,經加熱反應後,一級胺與之生成藍紫色化合物,二級胺與之生成黃色化合物。兩種衍生物使用雙通道紫外檢測器同步檢測,檢測波長分別為570nm 和436nm。
H. 測定氨基酸
用高相液相質譜儀可以測氨基酸含量,取標准氨基酸作標准曲線,用質譜作檢測器。看有沒有質譜信號,應該是沒有問題,如果沒有信號,則進行衍生,例如苯肼等。不同濃度標准氨基酸提取離子流圖的峰面積作標准曲線。最後檢測樣品,計算含量。
1. 分光光度法氨基酸檢測:主要是利用氨基酸與衍生劑發生化學反應,產生藍紫色化合物,該化合物在某一波長處有最大吸收峰,根據吸收值大小得到氨基酸含量。常用的衍生劑為茚三酮。
2. 毛細管電泳法氨基酸檢測:根據分離原理的不同,可分為毛細管區帶電泳、毛細管凝膠電泳、毛細管等電電泳、毛細管等速電泳以及膠束電動力學毛細管電泳。其中,毛細管區帶電泳和膠束電動力學毛細管電泳可用於氨基酸檢測。
3. 近紅外光譜法氨基酸檢測:利用有機化合物的含氫基團在特定波長區域躍遷,產生光譜的變化,結合統計學方法間接地實現氨基酸的定量檢測。
4. 氣相色譜法氨基酸檢測:將氨基酸衍生化處理變為容易氣化的物質,根據氣態樣品中各組分在流動相和固定相中的分配系數的不同,實現對氨基酸的定量分析。
5. 高效液相色譜法氨基酸檢測:是最常用的一種氨基酸檢測方法。由於大多數氨基酸本身沒有紫外吸收和熒光反應,因此需要對樣品進行衍生化處理將其轉化為有紫外吸收和發射熒光的物質,衍生可分為柱前衍生和柱後衍生。
J. 氨基酸鑒別方法
方法太多了,
等電點法。
紫外分光分析。
還有色譜分析。
等電點法和色譜分析都是提供一個分離的環境,需要已知氨基酸作對照。
關於紫外吸收,使用得並不廣泛,特地查書,看到以下描述:
有機化合物在紫外區中有些沒有吸收譜帶,有的僅有較簡單而寬闊的吸收光帶;
另一方面,如果物質組成的變化不影響生色團及助色團,就不會顯著得影響其吸收光譜,例如甲苯和乙苯的紫外吸收光譜實際上是相同的。
因此物質的紫外吸收光譜基本上是其分子中生色團及助色團的特性而不是它的整個分子的特性。所以物質的紫外光譜不能完全決定物質的結構,還必須與紅外吸收光譜、核磁共振波譜、質譜以及其它化學的和物理化學的方法共同配合起來,才能得出可靠的結論。