檢測糖化終點的方法

『壹』 糖化血紅蛋白快速檢測儀哪種檢驗方法好

1.HbA1c一滴血樣檢測糖化：適用反映糖尿病患者2-3個月左右的糖代謝情況。監測糖尿病並發在微細血管病變。

2.D－Dimer：適用靜脈血栓，肺栓塞和動脈血栓塞的診斷。

3.DIC的診斷：纖溶作用機制的早期檢測—血栓前危評價，妊娠與分娩復雜性評價，血栓形成過程及溶栓治療的監測，腫瘤輔助診斷。

4.U-Albumin：觀察入微，快速檢測，適用檢測病人尿液中的低濃度的微量蛋白的體外快速診斷。具體哪種方法好，依據不同人的檢測需求。

『貳』 糖化血紅蛋白的檢測方法

1、陽離子交換色譜法
原理：糖化導致血紅蛋白分子表面陽離子丟失。在弱的陽離子交換劑中，例如Biorex70，伴有增加的離子濃度和（或）pH下降，糖化血紅蛋白在非糖化血紅蛋白前先洗脫。這現象產生了糖化血紅蛋白最初的術語「快速血紅蛋白」。陽離子交換色譜法可用於小型、微型或大型柱層析方法或部分或全自動的PHLC/FPLC方法。因為，其他翻譯後修飾血紅蛋白，例如醛亞胺型、甲醯化、乙醯化、乙醛加合物、降解物、老化人工物品和異常血紅蛋白電荷交換也不同於正常的HbA0，所以已經列出了許多陽離子交換層析法的干擾因素。使用常規HPLC的方法。分離糖化血紅蛋白亞組分是能達到滿足需求的臨床精密度。然而，已知HbA1c的峰不是均一的而是包含一重要的非糖化血紅蛋白部分。少數糖化血紅蛋白也整合到HbA0主峰中。通過使用特殊的柱原料（poly-CATA）和30～40 min分離時間可以改善分離效果。這些方法可以作為參考步驟但不適合常規使用。所有的陽離子交換色譜法對pH和溫度的變化敏感，因此要控制pH和溫度。
說明：根據紅細胞代謝動力學推測初始HbA1c值大約每日破壞1/120（≈0.83%）。因為糖化在合適的治療下甚至健康人也產生，故這個理論值在體外不能達到。控制不理想的糖尿病患者通過加強治療而達到血糖量正常，可以發現HbA1c值最大下降率以大約每10 d下降正常血糖的1%（絕對的）。由於測定糖化血紅蛋白方法的精確性，兩次測定值HbA1c的差異大約1%就可認為具有臨床相關性。因為這些原因，在HbA1c兩次測定間至少有2周的時間，推薦4～6周的間隔。
因為升高的糖化血紅蛋白值是長期高糖血症的糖尿病患者相當可靠的指示劑，因而是可能診斷糖尿病的。在未治療的個體，正常的糖化血紅蛋白值臨床上可以排除明顯的糖尿病。但由於它不能檢測糖耐量受損，所以作為診斷和（或）篩選目的唯一的參數，使用糖化血紅蛋白是存在問題的。
2、電泳法
原理：相比於非糖化血紅蛋白，因糖化而變化的總電荷和糖化血紅蛋白的等電點變化是瓊脂糖凝膠或者pH梯度5.0～6.5的凝膠等電聚焦電泳分離的基礎。瓊脂糖凝膠電泳的血紅蛋白亞組分解析度很小，而等電聚焦可以更好地使亞組分分離。可能由於試驗的自動化程度不足，重要性已經下降。
3、親和層析法
原理：硼酸結合順式-羥基。商品化的m-氨基苯硼酸瓊脂糖共價結合的親和柱已可用於微柱分析檢測。將血樣本中的血紅蛋白加到層析柱後，所有的糖化血紅蛋白（HbA1和旁鏈糖化的血紅蛋白；總糖化血紅蛋白）與硼酸結合而非糖化血紅蛋白通過層析柱可被測量。在加入高濃度也包含順式-羥基的多羥基復合物，例如山梨醇後，糖化血紅蛋白與硼酸的結合被替換而從柱子上洗脫下來。親和層析法對經翻譯以後修飾的血紅蛋白和病理血紅蛋白的影響相對不敏感。利用親和層析法，僅能測定總糖化血紅蛋白。廣泛使用的親和層析方法，允許用經驗演算法從總糖化血紅蛋白值計算出「標準的HbA1c」。
4、免疫分析法
在纈氨酸β-N-末端糖化的血紅蛋白提供了一個容易被抗體識別的抗原表位。可以用單克隆抗體或多克隆抗體進行放射免疫分析和免疫酶學分析測定，抗體特異識別β鏈N-末端糖化的血紅蛋白最後4～8個氨基酸組成的抗原表位。異常的血紅蛋白或翻譯後經修飾的血紅蛋白無干擾。
目前的免疫化學試驗不僅檢測HbA1c，通常也同時檢測HbA2c，因為血紅蛋白A2糖化δ鏈的表位是相同的。抗體直接抗β-鏈的最後四個氨基酸的糖化表位的免疫化學試驗也可用進行檢測，例如HbS1c。在大多數情況下HbA2c意義不大，雖然鐮刀細胞病時可以准確地測定纈氨酸β-N-氨基末端糖化程度，但它仍不能100%代表HbA1c。
5、離子層析法
離子層析法精密度高、重復性好且操作簡單, 被臨床廣泛採用。檢測原理由於血紅蛋白β-鏈N 末端纈氨酸糖化後所帶電荷不同, 在偏酸溶液中總糖化血紅蛋白( GH b) 及H bA 均具有陽離子的特性, 因此經過陽離子交換層析柱時可被偏酸的緩沖液平衡過的樹脂來吸附, 但二者吸附率不同, GH b正電荷較少吸附率較低, H bA 正電荷較多吸附率較高。用不同pH 的磷酸鹽緩沖液可以分次洗脫出GH b 和H bA, 用KCN 可將H b轉化為高鐵氰化血紅蛋白, 用分光光度計測定。或者得到相應的H b層析譜, 其橫坐標是時間, 縱坐標是百分比。HbA1c值以百分率來表示。現在大部分都用全自動測定儀測定。
6、等電點聚集法
是測定GH b的新技術, 它是在聚丙烯酞凝膠中加人載體兩性介質的薄板上形成一個由陽極到陰極逐漸增加的pH 梯度, 溶血液中各個組份將移動到各自的等電點的pH 位置上, 這樣就得到比一般電泳法更好的分劃效果和比較集中的色帶, 通過解析度高的微量光密度儀掃描, 可以准確地測定出各自組份的含量。由於它能夠分辨出一級結構不同的HbA、HbAc、HbF、HbS 及HbC等, 可完全避開各種物質的干擾。
7、化學發光法
採用離子捕捉免疫分析法, 應用抗原抗體反應原理, 聯以熒游標記物, 通過連接帶負電的多陰離子復合物, 吸附到帶正電的纖維表面, 經過一系列徹底清洗等步驟後, 測定熒光強度變化率, 計算濃度。採用專用試劑包和免疫發光分析儀,其檢測系統易於規范和重復, 可減少操作技術誤差, 檢測的靈敏度和特異性高, 批內、批間變異系數小, 回收率高, 准確度高, 交叉污染率小, 影響因素少。
8、酶法
原理為用特殊蛋白酶分解Hb, 3~ 5 min內果糖基氨基酸從H b分離, 果糖基氨基酸氧化酶( FAOD )從果糖基氨基酸產生H2O2, H2O2經POD與DA- 64反應, 選擇751 nm 測吸光度改變求得GHb濃度。

『叄』 較簡單的製糖方法

可以用紅薯製糖！(特地再過來補充一句：你男朋友好幸福！)
而且原材料易得，且操作簡單！
方法如下：
1.紅薯製作飴糖
(1)工藝流程：原料選擇-洗薯-制澱粉-糊化-糖化-加熱濃縮-成品。
(2)工藝操作要點：①原料選擇：應選擇新鮮、無霉爛、無病蟲害的紅薯為原料。用於生產飴糖的紅薯，所含澱粉轉化糖的量對熬糖的產量來說是不受影響的。但如果紅薯貯藏的時間過長，會使製成的飴糖顏色較深，使飴糖的成品質量下降。鮮薯最適宜加工飴糖。②洗薯：取紅薯裝入洗薯機中，裝入量約為機容積的1／3，將該機的門扣扣好，即用力搖轉洗薯機。)同時上面不斷淋下清水。因紅薯在機內互相沖擊，薯皮上附著的泥沙被清水洗去。洗得愈凈愈佳，如不洗凈，則將來成品中有泥沙混入，影響質量。必須一直搖洗到紅薯表皮大部分除去，即可停止搖洗，打開機門，將紅薯取出。③制澱粉：將已洗 好的紅薯放於石碾槽溝內或石磨上，加適量水可開始碾磨。碾子、磨子與紅薯接觸的部件，不得含有鐵質，否則影響產品的色澤、氣味和外觀。把紅薯碾磨成漿狀：愈細愈好，如碾磨不細，將有一部分澱粉損失。取細竹或木棒捆一十字架，另取0.8米見方的稀白布，四端拴於十字架上，下接一盛水桶。將碾磨後的漿狀物用瓢移人此布袋中，用人力搖動布袋，澱粉即隨水穿過稀布面流入桶中，直至搖干為止。把漿全部搖完，再在殘渣中加以適量桶中澄清的薯水，碾磨十次，務必使其完全成為漿狀。這樣才能把澱粉完全提出，以免造成損失。再如上法搖動過濾，所得濾液與上述濾液合並，殘渣即可作為豬的飼料，或作醬油、甜醬等。將濾出的薯漿靜置1小時左右，待上面液已澄清，即可傾出上清液，沉在桶底的白色漿即是澱粉，用布袋濾干水分，即為粗澱粉。一般每100千克紅薯，可製得澱粉16-17千克。④糊化：取已濾乾的紅薯澱粉放人夾層鍋中，按100千克生紅薯製得的澱粉加入清水1.50千克左右，配成約10%的澱粉漿液。煮約半小時，同時不斷攪拌夕至成糊狀，澱粉已被煮熟，糊化即算終了。⑤大麥芽的製取：用大麥芽作為製作飴糖的糖化劑，需對大麥進行處理。先將大麥授於冷水中，水溫約為23攝氏度，浸漬約1-2小時。如冬季水溫較低，浸漬時間必須延長。用作原料的大麥必須清理雜物，並經浸漬後分離掉污水。麥粒浸漬不能太過，否則發芽力消失。麥粒浸漬含水以40%-45%為宜。經浸漬後，大麥送去發芽。發芽開始時由於呼吸，作用而使溫度升高，可翻動散熱。另外每天還要撒水2-3次。在室溫25-30攝氏度時，4天可完成發芽，當芽長2厘米時即可使用。⑥糖化：將已糊化的澱粉冷卻至 60-63攝氏度可加入麥芽汁，攪拌均勻：臼麥芽汁可用擠壓機壓扁麥芽而鍋得。麥芽用量為鮮紅薯原料的8%，壓擠時必須使麥芽汁完全流出。糖化溫度應保持在55-60攝氏度。澱粉在麥芽汁的作用下，逐漸糖化，變成麥芽糖和糊精，此時澱粉糊也逐漸變稀薄廣糖化8小時，即取樣用碘試液檢查有無澱粉反應。加碘試液搖動後顯藍色、黑色或紫紅色時，證明尚有澱粉未被糖化，故應保持溫度繼續糖化。如此每隔1小時取樣檢查一次，直到檢查液呈現淡紅色或近似碘試液的顏色時，即糖化完全，澱粉已變成麥芽糖或糊精。同時取半個試管的糖化液，在酒精燈上加熱，煮沸1二-2分鍾，注意觀察，如試管內的混懸物逐漸聚成較大的絮狀物，並能與液體分離，靜置1-2分鍾後試管上部的液體能夠澄清，則證明糖化已達終點。達到這個程度的糖化時間一般需要重2-14小時。糖化達終點後，即可升溫煮沸糖化液，既可將糖化酶制劑殺死，又可將混懸物凝聚；便於過濾操作。⑦加熱濃縮：糖化過程結束後，用板框壓濾機或布袋製得澄清的稀糖液，然後進行濃縮。濃縮一般採用加熱蒸發水分酌方法濃縮，加熱的初始溫度可以高些，在加熱過程中要不斷進行充分攪拌。糖液逐漸蒸濃時，溫度高了，易發生焦化而使顏色加深，影響質量。故糖液愈濃，加熱溫度愈應降低。在加熱濃縮過程中，在液面上有一層沫；要不斷將這些浮沫除去。這些浮沫為蛋白質等物，而且浮在糖液表面也會妨礙水分蒸發，易出現溢鍋現象。全部濃縮過程所需時間取決於糖液的含水量、加熱溫度小當糖液濃度為40波美度時，即為飴糖成品。
(3)成品規格：①化學質量：成品含糖量(以還原糖計)應在50%以上。②物理外觀指標：比重：在40攝氏度測定，比重為l38 (波美40度)為合格；色澤氣味：應為獨淡黃色的半透明濃稠液體，無不良氣昧和異味，昧甜香。
2.紅薯製作葡萄糖
(1)工藝流程：紅薯澱粉-調和-糖化-中和-脫色-蒸發-結晶-分蜜軋糖-結晶精製啼-烘乾碾粉-包裝。
(2)工藝操作要點：①調和澱粉漿：取紅薯澱粉25干克置於糖化鍋中，然後取濃硫酸2.1千克緩緩加入2千克水中攪勻，再將此稀酸液倒入糖化鍋中攪勻。另取沸水75千克迅速加入其中，攪成漿糊狀。②糖化：將澱粉漿溫度升至98攝氏度並保持-4小時，然後吸取少量糖化液，滴人碘液檢驗糖化終點。糖化結束後；停止加熱，濾去殘渣，濾液待下一步處理。③中和：在濾液中約加3.8千克碳酸鈣，對其進行中和，邊加邊攪動(不宜加得過快，否則產生大量，泡沫乙易將糖液溢出，直至試紙試驗中和至 ph值為5-6，然後將糖液再加熱至85攝氏度，保持半小時，用布過濾，除去硫酸鈣。④脫色：取上面已中和好的澄清濾液，加熱至85攝氏度，然後按濾液重量加入0.3%的活性炭(活性炭稱好後裝入布袋扎緊，先放人糖液鍋中煮至全部吸濕後才打開布袋，傾入糖液中)，保持85攝氏度半小時，然後乘熱過濾除去活性炭。起初流下來的帶有微量活性炭，另器接濾，至濾清再用清潔之容器接存。未濾清的糖液，可重新過濾，把濾液又加熱至85攝氏度，加濾液重量 0.3%的活性炭脫色，混勻後保持85攝氏度半小時，再用布過濾。⑤蒸發：蒸發過程即是糖液濃縮過程號將糖液的部分水分蒸去，至25攝氏度測定比重為1.3時，即可進行結晶。⑥結晶：按已蒸濃的糖，液重量加入0.5%-l.0%的葡萄糖晶種。在44攝氏度時加入(晶種須預先過篩，不得有小塊)，邊加邊攪動，至攪拌均勻。然後在30-35攝氏度下靜止結晶，每天攪拌三次，開始結晶時即停止攪拌，結晶3天即可取出。⑦分蜜軋糖：將葡萄糖精粥放人布袋中，置木製壓干機中進行分蜜。上好榨後保持2小時，取下干塊；再壓碎加入10%冷開水，攪勻，過細篩後再裝入布袋中，置木製壓榨機中壓干(方法、時間同上)。然後取下打成碎塊；置烘箱內，在 50攝氏度下進行烘乾，即得粗製葡萄糖(可作食糖用)。⑧結晶精製：取粗製葡萄糖加水加溫溶解，濕糖：冷開水1：2，保持75攝氏度至全部溶化，加入濾液重量0.3%的活性炭，置水鍋上加熱。待溫度升至85攝氏度，保溫半小時，進行過濾，濾液蒸濃，測定比重達1.34，不足時可繼續蒸濃。再按照上述⑥的條件放置結晶，在上述⑦的條件下分蜜洗晶，壓干烘乾，打粉過篩歹即得葯用口服葡萄糖。再取濕晶如上法進行重結晶二次，即可得注射葡萄糖(最後在分蜜時可加適量酒精洗晶體1-2次，但酒精必須預先經過澄明，除去鐵銹異物)。⑨烘乾碾粉：取已分去母液的結晶葡萄糖並碎成小塊，分別裝入預墊好的竹篩中，然後再甩厚布蓋好，放在乾燥架上。於50攝氏度以下進行乾燥烘乾後放石碾中進行粉碎，再通過40-50目篩即得。
3.紅薯制果葡糖漿
果葡糖漿是由植物澱粉水解和異構化製成的澱粉糖晶，具有獨特風味，是一種重要的甜味劑。因為它的組成主要是果糖和葡萄糖；故稱為「果葡糖漿」。生產果葡糖漿不受地區和季節限制，設備比較簡單，投資費用較低。
(1)工藝流程：紅薯澱粉-調漿-糖化-中和-脫色-過濾-樹脂處理-蒸發-異構化-脫色-樹脂處理-蒸發-成品。
(2)工藝操作要點：①調漿：在調粉桶內先加部分水，在攪拌情況下加入紅薯澱粉，投料完畢，繼續加水使澱粉乳達到規定濃度(40%)，然後加入鹽酸調節至ph值為18。②糖化：調好的澱粉乳，用耐酸泵送水糖化罐；進料完畢打開蒸汽閥升壓力至 2.8千克／平方厘米左右，保持該壓力3-5分鍾。取樣；用20%碘液檢查糖化終點。糖化液遇碘呈醬紅色時即可放料中和。③中和糖化液轉入中和桶進行中和，開始攪拌時加入定量廢炭作助濾劑，逐步加入10%碳酸鈉溶液中和，當ph為4.6-4.8時，打開出料閥，用泵將糖液送人過濾機廣濾出的清糖液隨即冷卻至60攝氏度，冷卻後糖液進行脫色。④脫色：清糖液放入脫色桶內，加入定量活性炭隨加隨拌，脫色攪拌時間不得少於5分鍾，然後再送至過濾機，濾出清液盛放在貯桶內備用。⑤樹脂交換：將第一次脫色濾清液送至離子交換濾床進行脫鹽提純及脫色。糖液通過，陽-陰-陽-陰四個樹脂濾床後，在貯糖桶內調正ph值至3.8-4.2。⑥蒸發：樹脂交換後，准確調好ph值的糖液，利用泵送至蒸發罐，保持真空度在500毫米汞柱以上。加熱蒸汽壓力不得超過1千克／平方厘米，當糖液濃度在42%-50%左右，即可出料。⑦異構化：將固相異構酶裝填於豎立的保溫反應柱內，反應溫度控制在65攝氏度，精製的糖液由柱頂進料，流過酶柱，進行異構化反應，再從柱底出料，連續操作，也可由柱底進料，經過酶柱，從柱頂出料。因酶活力處於最佳ph值時，能充分發揮催化作用，反應速度快，時間短，糖分分解副反應發生的程度低，所得的異構糖液的顏色淺，容易精製，所以，異構化時糖液的ph值大小應由所用的異構酶的型號而決定。⑧二次脫色：異構化反應後，所得糖液含有色物質，並在貯存期間能產生顏色及灰分等雜質，所以，需二次脫色。將糖液送人脫色桶，加入定量新鮮活性炭，操作與第一次脫色相同。⑨二次樹脂交換：經二次脫色的糖液需再進行一次樹脂交換，方法同前。最後流出的糖液ph值較高，可用鹽酸調節ph值至4.0-4.5。⑩蒸發濃縮；精製的糖液經真空蒸發罐濃縮到需要的濃度，即得果葡糖漿。由於葡萄糖易於結晶，為了防止糖漿在貯存期間出現結晶析出，不能讓糖液蒸發到過高濃度，一般要求在70%-75%(干物質濃度)之間。
4.紅薯制軟糖
軟糖是一種柔軟和微存彈性的糖果，有透明的和半透明的。軟糖的含水量較高；一般為10%-20%。絕大多數軟糖都製成水果味型的，也有一部分製成奶味和清涼味型的，其外形隨成型工藝不同分為長方形或不規則形。
(1)工藝流程:調澱粉乳-沖漿-熬糖-冷卻-成型-包裝。
(2）配料：澱粉12千克，澱粉糖漿40千克，白糖50千克、檸檬酸25克，香料0.25千克。
(3)工藝操作要點：①調澱粉乳：做軟糖可用紅薯澱粉和玉米澱粉各半。如果成品按50千克計算，可用混合澱粉6千克，過篩，加入重2.5千克白糖、12克檸檬酸和8千克水，攪拌均勻，慢火加熱至60攝氏度，不要超過60攝氏度。②沖漿：用沸騰的清水約17千克沖人已調好的澱粉乳中，將澱粉乳沖熟成漿狀，急速攪拌，攪至無疙瘩，將已經加熱至沸、完全溶化和過濾的12.5千克白糖和20千克澱粉糖漿的棍合液，分三次加入已沖熟攪勻的漿糊中，邊加邊攪拌。第一次加入1/5，攪勻後第二次加入2／5，再攪勻後第三次全部加入，攪拌均勻後即可熬糖。在調澱粉乳和沖漿的過程中，要注意加水量。如水量過少，製品堅硬；如加水過多，熬糖費時較長，也浪費燃料，且使製品色深，因配方中使用澱粉糖漿，需把澱粉糖漿中的水分計算在內。③熬糖：將沖好、攪勻的糖漿放在火上熬糖，邊熬邊攪拌，約需1個多小時。出鍋溫度為115-120攝氏度；冬季可低些，夏季可高些。離火後加入香料攪拌均勻。④冷卻：冷卻的方法有兩種：一是在鐵板上鋪一層澱粉，以防出鍋後的糖坯粘在鐵板上；另一種是在鐵板上擦一些植物油作為潤滑劑。⑤成型、包裝：糖坯在鐵板上冷卻至軟硬適中時，即可分塊、壓片，繼續冷卻至成型所要求的適宜軟硬度時，可用切塊機切塊成型。一般可切成長方形或不規則形塊，質量好的軟糖可拉長12厘米以上。成型後，稍經冷卻可用除粉機除去糖塊表面粘附的澱粉粒，用糯米紙為內襯，外包商標紙，扭結緊密。
5.紅薯制粉糖
(1)工藝流程：制麥芽-薯粉糊化-糖化-熬糖-加工成糖。
(2)工藝操作：①制麥芽：將大麥或小麥用水浸泡3-4小時後取出瀝干，並在20-24攝氏度條件下發芽，5-7天後，待麥芽現青長到3厘米長即為鮮麥芽。將鮮麥芽干制，即為干麥芽。將鮮麥芽或干，麥芽兌水，用石磨或磨漿機磨成麥芽漿，要隨磨隨用，磨得越細越好。②薯粉糊化：按干紅薯澱粉10千克加冷水15千克的比例調化，濕紅薯澱粉加水量要適當減少,再加入1千克鮮麥芽或0.75千克干麥芽調成薯粉麥芽乳，倒入45千克沸水中攪勻，並加熱煮開，一定要煮熟透。麥芽不易過多或過少，多者顏色發黃，少者熬不成糖。③糖化：將煮熟後的薯粉麥芽乳退火降溫至50攝氏度左右，再加入1千克鮮麥芽或0.75千克干麥芽，讓乳液在鍋中充分糖化。一般2小時後；糖渣就會全部沉澱，上面現一層清水。此時再燒火煮開，用布過濾。濾出液即為糖液，糖渣可作飼料。④熬糖：將糖液盛人鍋內，燒大火煎熬，使水分蒸發，中途不得停火，經4-6小時後，糖液即成濃稠狀，取少許滴人冷水中，冷卻後一敲即成碎塊時，熄火取糖。不要熬過，否則會炭化，味變苦。1千克干紅薯澱粉可熬糖0.8-0.9千克。⑤加工成糖：紅薯糖可加工成塊糖、豆絲糖和米花糖。塊糖：從鍋中取出來的糖冷至35攝氏度時，加少許熟芝麻和橘子皮粉拌勻，拉成條，一端放在潔凈的木樁上，另一端用圓棒穿起，雙手來回扯動，直到顏色由黃變白為止，就成為塊糖；豆絲糖：將冷至35攝氏度的糖，粘上熟豆粉，並加倍挽圈拉扯，由細條拉成細絲時，就成為豆絲糖；米花糖：先在鍋中放50克食用油煎熟，取3千克糖加溫火溶化，加入3千克炒米花，再撒一點熟芝麻和橘子皮。待全部拌勻後，從鍋內趁熱取出放在干凈的木板上，再用另一木板加壓成長條形，壓得愈緊愈好，並立即用鋒利快刀塊成小塊，即為米花糖。

『肆』 在雙酶法制備葡萄糖生產上,怎樣判斷液化,糖化的終點

液化終點 碘反應呈棕紅色
糖化終點 無水酒精檢驗無糊精存在，取糖化液數滴,滴入無水乙醇中,看是否生成白色絮狀物。若無白色絮狀物生成,表明糖化比較徹底。

『伍』 糖化酶活力測定

糖化酶活力測定

1.定義

1g固體酶粉（或1ml液體酶），於40℃、pH值為4.6的條件下，1h分解可溶性澱粉產生1mg葡萄糖，即為1個酶活力單位，以u/g（u/ml）表示。

2.原理

糖化酶有催化澱粉水解的作用，能從澱粉分子非還原性末端開始，分解α-1,4-葡萄糖苷鍵生成葡萄糖。葡萄糖分子中含有醛基，能被次碘酸鈉氧化，過量的次碘酸鈉酸化後析出碘，再用硫代硫酸鈉標准溶液滴定，計算酶活力。

3.試劑和溶液

（1）乙酸－乙酸鈉緩沖溶液（pH為4.6）。

稱取乙酸鈉（CH3COONa·3H2O）6.7g，溶於水中，加冰乙酸（CH3COOH）2.6ml，用水定容至1000ml。配好後用pH計校正。

（2）硫代硫酸鈉標准溶液（Na2S2O3，0.05mol/L）。

（3）碘溶液（1/2I2，0.1mol/L）。

（4）氫氧化鈉溶液（NaOH，0.1mol/L）。

（5）200g/L可溶性氫氧化鈉溶液。

（6）硫酸溶液（2mol/L）。

（7）20g/L可溶性澱粉溶液。

（8）10g/L澱粉指示液。

4.儀器和設備

恆溫水浴鍋、秒錶、比色管、玻璃儀器。

5.步驟

（1）待測酶液的制備 稱取酶粉1～2g，精確至0.0002g（或吸取液體酶1.00ml），先用少量的乙酸緩沖液溶解，並用玻璃棒搗研，將上清液小心傾入容量瓶中。沉渣部分再加入少量緩沖液，如此搗研3～4次，最後全部移入容量瓶中，用緩沖液定容至刻度（估計酶活力在100～250u/ml范圍內），搖勻。通過4層紗布過濾，濾液供測定用。

（2）測定 於甲、乙兩支50ml比色管中，分別加入可溶性澱粉25ml及緩沖液5ml，搖勻後，於40℃恆溫水浴中預熱5min。在甲管（樣品）中加入待測酶液2ml，立刻搖勻，在此溫度下准確反應30min，立刻各加入氫氧化鈉溶液0.2ml，搖勻，將兩管取出迅速冷卻，並於乙管（空白）中補加待測酶液2ml，吸取上述反應液與空白液5ml，分別置於碘量瓶中，准確加入碘溶液10ml，再加氫氧化鈉溶液15ml，搖勻，密塞，於暗處反應15min。取出，加硫酸溶液2ml，立即用硫代硫酸鈉標准溶液滴定，直至藍色剛好消失為其終點。

（3）計算

X＝（A－B）c×90.05×32.2/5×1/2×n×2＝579.9×（A－B）c×n

式中 X——樣品的酶活力（u/g或u/ml）

A——空白消耗硫代硫酸鈉溶液的體積（ml）

B——樣品消耗硫代硫酸鈉溶液的體積（ml）

c——硫代硫酸鈉溶液的濃度（mol/L）

90.05——與1ml硫代硫酸鈉標准溶液（1mol/L）相當的以克表示的葡萄糖的質量

32.2——反應液的總體積（ml）

5——吸取反應液的體積（ml）

1/2——吸取酶液2ml，換算為1ml

n——稀釋倍數

2——反應30min，換算成1h的酶活力系數所得的結果表示至整數

『陸』 如何判斷發酵的終點

最終結果是產生酒精，二氧化碳以及其它代謝的產物。

現代發酵的定義應該是：通過對微生物（或動植物細胞）進行大規模的生長培養，使之發生化學變化和生理變化，從而產生和積累大量人們發酵所需要的代謝產物的過程。

其也是生物工程的基本過程，即發酵工程。對於其機理以及過程式控制制的研究，還在繼續。

(6)檢測糖化終點的方法擴展閱讀

食品發酵類型眾多，若不加以控制，就會導致食品腐敗變質。控制食品發酵過程的主要因素有酸度、酒精含量、菌種的使用、溫度、通氧量和加鹽量等。這些因素同時還決定著發酵食品後期貯藏中的微生物生長的類型。

隨著科學技術的進步，發酵技術發生了劃時代的變革，已經從利用自然界中原有的微生物進行發酵生產的階段進入到，按照人的意願改造成具有特殊性能的微生物以生產人類所需要的發酵產品的新階段。

參考資料來源：網路-發酵

『柒』 測定糖的含量的方法有哪些

糖的測定方法
一般有四種方法：
1、 直接滴定法。

原理為 糖還原天藍色的氫氧化銅為紅色的氧化亞銅。缺點：水樣中的還原性物質能對糖的測定造成影響。

2、 高錳酸鉀滴定法。

所用原理同直接滴定法。缺點：水樣中的還原性物質能對糖的測定造成影響，過程較為復雜，誤差大。

3、硫酸苯酚法。

糖在濃硫酸作用下，脫水形成的糠醛和羥甲基糠醛能與苯酚縮合成一種橙紅色化合物，在10-100mg范圍內其顏色深淺與糖的含量成正比，且在485nm波長下有最大吸收峰，故可用比色法在此波長下測定。苯酚法可用於甲基化的糖、戊糖和多聚糖的測定，方法簡單，靈敏度高，實驗時基本不受蛋白質存在的影響，並且產生的顏色穩定160min以上。

缺點：如果水樣呈橙紅色（大部分水樣為黃色），會對比色法造成較大的干擾。

4、蒽酮法

糖在濃硫酸作用下，可經脫水反應生成糠醛和羥甲基糠醛，生成的糠醛或羥甲基糠醛可與蒽酮反應生成藍綠色糠醛衍生物，在一定范圍內，顏色的深淺與糖的含量成正比，故可用於糖的測定。

缺點：，不同的糖類與蒽酮試劑的顯色深度不同，果糖顯色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖較淺，五碳糖顯色更淺。

綜合比較；採用蒽酮法能將最為准確地測定尾水中糖的含量。

（一） 直接滴定法

Ⅰ、原理

v 一定量的鹼性酒石酸銅甲、乙液等量混合，立即生成天藍色的氫氧化銅沉澱，這種沉澱很快與酒石酸鈉反應，生成深藍色的可溶性酒石酸鉀鈉銅絡合物。在加熱條件下，以次甲基藍作為指示劑，用標液滴定，樣液中的還原糖與酒石酸鉀鈉銅反應，生成紅色的氧化亞銅沉澱，待二價銅全部被還原後，稍過量的還原糖把次甲基藍還原，溶液由藍色變為無色，即為滴定終點。根據樣液消耗量可計算出還原糖含量。
樣品經除去蛋白質後，在加熱條件下，以次甲基藍做指示劑，滴定標定過的鹼性酒石酸銅溶液（用還原糖標准溶液標定鹼性酒石酸銅溶液），根據樣品溶液消耗體積計算還原糖量。

Ⅱ、儀器和試劑
1．儀器
酸式滴定管，可調電爐（帶石棉板），250ml容量瓶。
2．試劑

1. 鹽酸。

2. 鹼性酒石酸銅甲液：稱取15g硫酸銅（CuSO4·5H2O）及0.05g次甲基藍，溶於水中並稀釋至1000mL。

3. 鹼性酒石酸銅乙液：稱取50g酒石酸鉀鈉與75g氫氧化鈉，溶於水中，再加入4g亞鐵氰化鉀，完全溶解後，用水稀釋至1000 ml，貯存於橡膠塞玻璃瓶內。

4. 乙酸鋅溶液：稱取21.9 g乙酸鋅，加3ml冰乙酸，加水溶解並稀釋至100ml。

5. 亞鐵氰化鉀溶液：稱取10.6g亞鐵氰化鉀，用水溶解並稀釋至100ml。

6. 葡萄糖標准溶液：准確稱取1.0000g經過96℃±2℃乾燥2h的純葡萄糖，加水溶解後加入5ml鹽酸，並以水稀釋至1000L。此溶液相當於1mg/ml葡萄糖（註：加鹽酸的目的是防腐，標准溶液也可用飽和苯甲酸溶液配製）。

7. 果糖標准溶液：按⑹操作，配製每毫升標准溶液相當於1mg的果糖。

8. 乳糖標准溶液：按⑹操作，配製每毫升標准溶液相當於1mg的乳糖。

9. 轉化糖標准溶液：准確稱取1.0526g純蔗糖，用100ml水溶解，置於具塞三角瓶中加5ml鹽酸（1+1），在68℃~70℃水浴中加熱15min，放置至室溫定容至1000ml，每ml標准溶液相當於1.0mg轉化糖。

Ⅲ、實驗步驟
1．樣品處理
⑴ 乳類、乳製品及含蛋白質的食品：稱取約2.50～5.00g固體樣品（吸取25～50ml液體樣品），置於250 ml容量瓶中，加50 ml水，搖勻。邊搖邊慢慢加入5ml乙酸鋅溶液及5ml亞鐵氫化鉀溶液，加水至刻度，混勻。靜置30 min，用乾燥濾紙過濾，棄去初濾液，濾液備用。（注意：乙酸鋅可去除蛋白質、鞣質、樹脂等，使它們形成沉澱，經過濾除去。如果鈣離子過多時，易與葡萄糖、果糖生成絡合物，使滴定速度緩慢；從而結果偏低，可向樣品中加入草酸粉，與鈣結合，形成沉澱並過濾。）

⑵ 酒精性飲料：吸取100ml樣品，置於蒸發皿中，用1 mol/L氫氧化鈉溶液中和至中性，在水浴上蒸發至原體積1/4後，移入250ml容量瓶中，加水至刻度。

⑶ 含多量澱粉的食品：稱取10.00～20.00g樣品，置於250ml容量瓶中，加200ml水，在45℃水浴中加熱1h，並時時振搖（注意：此步驟是使還原糖溶於水中，切忌溫度過高，因為澱粉在高溫條件下可糊化、水解，影響檢測結果。）。冷後加水至刻度，混勻，靜置，沉澱。吸取200ml上清液於另一250ml容量瓶中，慢慢加入5ml乙酸鋅溶液及5ml亞鐵氫化鉀溶液，加水至刻度，混勻，沉澱，靜置30 min，用乾燥濾紙過濾，棄去初濾液，濾液備用。

⑷ 汽水等含有二氧化碳的飲料：吸取100ml樣品置於蒸發皿中，在水浴上除去二氧化碳後，移入250ml容量瓶中，並用水洗滌蒸發皿，洗液並入容量瓶中，再加水至刻度，混勻後備用。（注意：樣品中稀釋的還原糖最終濃度應接近於葡萄糖標准液的濃度。）

2. 標定鹼性酒石酸銅溶液：吸取5.0ml鹼性酒石酸銅甲液及5.0ml乙液，置於150ml錐形瓶中（注意：甲液與乙液混合可生成氧化亞銅沉澱，應將甲液加入乙液，使開始生成的氧化亞銅沉澱重溶），加水10 ml，加入玻璃珠2粒，從滴定管滴加約9 ml葡萄糖標准溶液或其他還原糖標准溶液，直至溶液蘭色剛好褪去為終點，記錄消耗的葡萄糖標准溶液或其他還原糖標准溶液總體積，平行操作三份，取其平均值，計算每10 ml（甲、乙液各5 ml）鹼性酒石酸銅溶液相當於葡萄糖的質量或其他還原糖的質量（mg）。（注意：還原的次甲基藍易被空氣中的氧氧化，恢復成原來的藍色，所以滴定過程中必須保持溶液成沸騰狀態，並且避免滴定時間過長。）

3. 樣品溶液預測：吸取5.0 ml鹼性酒石酸銅甲液及5.0 ml乙液，置於150 ml錐形瓶中，加水10 ml，加入玻璃珠2粒，控制在2 min內加熱至沸，趁沸以先快後慢的速度，從滴定管中滴加樣品溶液，並保持溶液沸騰狀態，待溶液顏色變淺時，以每兩秒1滴的速度滴定，直至溶液藍色褪去，出現亮黃色為終點。如果樣品液顏色較深，滴定終點則為蘭色褪去出現明亮顏色（如亮紅），記錄消耗樣液的總體積。（注意：如果滴定液的顏色變淺後復又變深，說明滴定過量，需重新滴定。） 當試樣溶液中還原糖濃度過高時應適當稀釋，再進行正式測定，使每次滴定消耗試樣溶液的體積控制在與標定鹼性酒石酸酮溶液時所消耗的還原糖標准溶液的體積相近，約在10ml左右。當濃度過低時則採取直接加入10ml樣品溶液，免去加水10ml，再用還原糖標准溶液滴定至終點，記錄消耗的體積與標定時消耗的還原糖標准溶液體積之差相當於10ml試樣溶液中所含還原糖的量。

4. 樣品溶液測定：吸取5.0 ml鹼性酒石酸銅甲液及5.0 ml乙液，置於150 ml錐形瓶中，加水10 ml，加入玻璃珠2粒，在2 min內加熱至沸，快速從滴定管中滴加比預測體積少1 ml的樣品溶液，然後趁沸繼續以每兩秒1滴的速度滴定直至終點。記錄消耗樣液的總體積，同法平行操作兩至三份，得出平均消耗體積。

5. 計算
樣品中還原糖的含量（以某種還原糖計）按下式計算。
X=〔A/(m×V/250×1000)〕×100
式中：X--樣品中還原糖的含量(以某種還原糖計)，單位 g/100g；
A—鹼性酒石酸銅溶液（甲、乙液各半）相當於某種還原糖的質量，單位 mg；
m--樣品質量，單位 g；
V--測定時平均消耗樣品溶液的體積，單位 ml；
計算結果保留小數點後一位。

注意：

滴定結束，錐形瓶離開熱源後，由於空氣中氧的氧化，使溶液又重新變藍，此時不應再滴定。

（二）高錳酸鉀滴定法

v 原理 將樣液與一定量過量的鹼性酒石酸銅溶液反應，還原糖將二價銅還原為氧化亞銅，經過濾，得到氧化亞銅沉澱，加入過量的酸性硫酸鐵溶液將其氧化溶解，而三價鐵鹽被定量地還原為亞鐵鹽，用高錳酸鉀標准溶液滴定所生成的亞鐵鹽，根據高錳酸鉀溶液消耗量可計算出氧化亞銅的量，再從檢索表中查出氧化亞銅量相當的還原糖量，即可計算出樣品中還原糖含量。

（三）硫酸苯酚法

Ⅰ、原理

糖在濃硫酸作用下，脫水形成的糠醛和羥甲基糠醛能與苯酚縮合成一種橙紅色化合物，在10-100mg范圍內其顏色深淺與糖的含量成正比，且在485nm波長下有最大吸收峰，故可用比色法在此波長下測定。苯酚法可用於甲基化的糖、戊糖和多聚糖的測定，方法簡單，靈敏度高，實驗時基本不受蛋白質存在的影響，並且產生的顏色穩定160min以上。

多糖在硫酸的作用下先水解成單糖，並迅速脫水生成糖醛衍生物，然後與苯酚生成橙黃色化合物。再以比色法測定。

Ⅱ、試劑

1． 濃硫酸：分析純，95.5%

2． 80%苯酚：80克苯酚（分析純重蒸餾試劑）加20克水使之溶解，可置冰箱中避光長期儲存。

3． 6%苯酚：臨用前以80%苯酚配製。（每次測定均需現配）

4． 標准葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia）,或分析純葡萄糖。

5． 15%三氯乙酸（15%TCA）：15克TCA加85克水使之溶解，可置冰箱中長期儲存。

6． 5%三氯乙酸（5%TCA）：25克TCA加475克水使之溶解，可置冰箱中長期儲存。

7． 6mol/L 氫氧化鈉：120克分析純氫氧化鈉溶於500ml水。

8． 6mol/L 鹽酸

Ⅲ、操作。

1．製作標准曲線：准確稱取標准葡聚糖（或葡萄糖）20mg於500ml容量瓶中，加水至刻度，分別吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml,各以蒸餾水補至2.0ml，然後加入6%苯酚1.0ml及濃硫酸5.0ml,搖勻冷卻，室溫放置20分鍾以後於490nm測光密度，以2.0ml水按同樣顯色操作為空白，橫坐標為多糖微克數，縱坐標為光密度值，得標准曲線。

2．樣品含量測定：

①取樣品1克（濕樣）加1ml 15%TCA溶液研磨，再加少許5％TCA溶液研磨，倒上清液於10毫升離心管中，再加少許5％TCA溶液研磨，倒上清液，重復3次。最後一次將殘渣一起到入離心管。注意：總的溶液不要超出10毫升。（既不要超出離心管的容量）。

②離心，轉速3000轉/分鍾，共三次。第一次15分鍾，取上清液。後兩次各5分鍾取上清液到25毫升錐形比色管中。最後濾液保持18毫升左右。（測肝胰腺樣品時，每次取上清液時應過濾。因為其脂肪含量大容易夾帶殘渣。）

③水浴，在向比色管中加入2毫升6mol/L 鹽酸之後搖勻，在96℃水浴鍋中水浴2小時。

④定容取樣。水浴後，用流水冷卻後加入2毫升6mol/L 氫氧化鈉搖勻。定容至25毫升的容量瓶中。吸取0.2 ml的樣品液，以蒸餾補至2.0ml，然後加入6%苯酚1.0ml及濃硫酸5.0ml,搖勻冷卻室溫放置20分鍾以後於490nm測光密度。每次測定取雙樣對照。以標准曲線計算多糖含量。

Ⅳ、注意

（1）此法簡單、快速、靈敏、重復性好，對每種糖僅製作一條標准曲線，顏色持久。

（2）製作標准線宜用相應的標准多糖，如用葡萄糖，應以校正系數0.9校正μg數。

（3）對雜多糖，分析結果可根據各單糖的組成比及主要組分單糖的標准曲線的校正系數加以校正計算。

（4）測定時根據光密度值確定取樣的量。光密度值最好在0.1——0.3之間。比如：小於0.1之下可以考慮取樣品時取2克，仍取0.2ml樣品液，如大於0.3可以減半取0.1ml的樣品液測定。

（四）蒽酮法

Ⅰ、實驗原理

糖在濃硫酸作用下，可經脫水反應生成糠醛和羥甲基糠醛，生成的糠醛或羥甲基糠醛可與蒽酮反應生成藍綠色糠醛衍生物，在一定范圍內，顏色的深淺與糖的含量成正比，故可用於糖的測定。

該法的特點是幾乎可以測定所有的碳水化合物，不但可以測定戊糖和己糖，而且可以測所有的寡糖類和多糖類，其中包括澱粉、纖維素等（因反應液中的濃硫酸可以把多糖水解成單糖而發生反應。所以，用蒽酮法測出的碳水化合物含量，實際上是溶液中全部可溶性碳水化合物總量。在沒有必要細致劃分各種碳水化合物的情況下，用蒽酮法可以一次測出總量。此外，不同的糖類與蒽酮試劑的顯色深度不同，果糖顯色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖較淺，五碳糖顯色更淺。故測定糖的混合物時，常因不同糖類的比例不同造成誤差，但測定單一糖類時，則可避免此種誤差。

Ⅱ、試劑：

蒽酮試劑，0.20 g蒽酮溶入100 mL 95%濃硫酸中，冰箱保存；

Ⅲ、方法：

樣品2.0 mL加5.0 mL蒽酮試劑，混勻，然後水浴煮沸10 min，取出冷卻至室溫，在620 nm處測定其吸光度，根據標准曲線計算水樣中糖的濃度。（標線以葡萄糖為標樣）

『捌』 糖化血紅蛋白儀的檢測方法

糖化血紅蛋白檢測方法很多，常用的有微柱法離子交換層析、親和層析、高壓液相、免疫凝集、離子捕獲法、電泳法等。 如毛細管電泳也能分離檢測糖化血紅蛋白和血紅蛋白質的變異體，但目前尚無商品化，具有批量樣本通過能力的儀器面世，相當程度地限制了該方法的臨床應用。
金標法的糖化血紅蛋白儀,CV值小於5%。
綜上所述，糖化血紅蛋白是糖尿病患者疾病控製程度一項良好的指標，糖尿病患者應定期檢測糖化血紅蛋白，並據此制定，修正相關治療方案。各醫院可根據自身標本的多少，選擇使用有關糖化血紅蛋白的檢測儀器，開展該項目的檢測。