主要用探針檢測mRNA或用抗體檢測出表達的蛋白質(轉錄水平上對特異mRNA的檢測和翻譯水平上對特異蛋白質的檢測)
詳見下面:
外源基因轉錄水平的鑒定
基因表達分為轉錄及翻譯兩階段,轉錄是以DNA(基因)為模板生成mRNA的過程,翻譯是以mRNA為模板生成蛋白質的過程,檢測外源基因的表達就是檢測特異mRNA及特異蛋白質的生成。所以基因表達檢測分為兩個水平:即轉錄水平上對特異mRNA的檢測和翻譯水平上對特異蛋白質的檢測。轉錄水平上的檢測主要方法是Northern雜交,它是以DNA或RNA為探針,檢測RNA鏈。和Southern雜交相同,Northern雜交包括斑點雜交和印跡雜交。
也可用RT-PCR(reverse transcribed PCR)方法檢測外源DNA在植物體內的轉錄表達。其原理是以植物總RNA或mRNA為模板進行反轉錄,然後再經PCR擴增。如果從細胞總RNA提取物中得到特異的cDNA擴增條帶,則表明外源基因實現了轉錄。此法簡單、快速,但對外源基因轉錄的最後決定,還需與Northern雜交的實驗結果結合。
外源基因表達蛋白的檢測
表達蛋白的檢測方法有三種:①生化反應檢測法:主要通過酶反應來檢測;②免疫學檢測法:通過目的蛋白(抗原)與其抗體的特異性結合進行檢測,具體方法有Western雜交、酶聯免疫吸附法(ELISA)及免疫沉澱法;③生物學活性的檢測。
Western雜交是將聚丙烯醯胺凝膠(SDS-PAGE)電泳分離抗原(Antigen)固定在固體支持物上(如硝酸纖維素膜,NC膜)。不同分子量大小的蛋白質在凝膠中遷移率不同,據此可確定特定的抗原存在與否以及相對豐度,或者蛋白質是否遭到降解等。蛋白質電泳後轉到NC膜,放在蛋白質(如牛血清蛋白BSA)或奶粉溶液中,溫育,以封閉非特異性位點,然後用含有放射性標記或酶標記的特定抗體雜交,抗原-抗體結合,再通過放射性自顯影或顯色觀察。
參考網上
❷ 鍍鋅鐵絲網的國家標準的檢驗依據是什麼
GB/T15393-94《鋼絲鍍鋅層》,標准修訂
主要參照GB/T1.1-2000《標准化工作導則》和ISO 7989-2:2007(E)《鋼絲和鋼絲製品 — 鋼絲的有色金屬塗層》
非等效採用ISO7989-2:2007(E)《鋼絲和鋼絲製品 — 鋼絲的有色金屬塗層》,與GB/T15393-94相比主要變化如下: ——增加鋅合金鍍層的技術要求、試驗方法及檢驗規則。本標準的附錄A為資料性附錄。由中國鋼鐵工業協會提出。由全國鋼標准化技術委員會歸口。
(2)鐵絲網的特異性檢測方法擴展閱讀:
固定方法
鋼絲網採用塑料膨脹螺栓固定。固定鋼絲網時,應從頂層開始沿邊角處釘掛鋼絲網。鋼絲網應橫向鋪設,也可按分格縫尺寸垂直鋪設。釘掛鋼絲網時,先將鋼絲網的一頭(距50毫米處)拆成L角,以便於轉彎搭接。用直徑不小於1.5毫米的鋼絲做成V型卡子,先固定住鋼絲網,然後按梅花型打孔或注射安裝錨固件。
鋼絲網固定後,先用防裂砂漿刮糙2—3毫米,使鋼絲網壓人其中,固化後再抹3—5毫米,待防裂砂漿達到一定強度後,方可進行面磚粘結層的施工及貼面磚。
❸ 如何用spss分析檢查方法的敏感性及特異性差異
使用ROC分析法,做ROC曲線(receiver operating characteristic curve)。
該方法優點:
①簡單、直觀,通過圖示可觀察分析方法的臨床准確性,並可用肉眼作出判斷。
②將靈敏度與特異性以圖示方法結合在一起,可准確反映某分析方法特異性和敏感性的關系,是試驗准確性的綜合代表。
③不固定分類界值,允許中間狀態存在,利於使用者結合專業知識,權衡漏診與誤診的影響,選擇一更佳截斷點作為診斷參考值。
❹ pcr的特異性檢測和敏感性檢測要怎麼做
pcr靈敏度檢測
1.1 樣本准備:以4次方國家一級或者二級標准品為基礎樣本,用陰性血清進行倍比稀釋,稀釋後的樣本濃度分別為1000IU/ml、500IU/ml、250IU/ml、125IU/ml、100IU/ml、50IU/ml、25IU/ml,每份樣本使用1000μl進行檢測。1.2 用質檢合格核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)進行檢測,每個濃度每批次試劑盒做5個復管,分析各濃度標本的檢出率(即陽性率)。以標本濃度值對數為橫坐標,對應的檢出率為縱坐標描點,用Origin的Sigmoidal Fit 的方法擬合成曲線,根據軟體給出的曲線公式計算出當檢出率為95%時所對應的濃度,此濃度即為本試劑盒對HBV標本的分析靈敏度。
pcr特異性檢測
2.1 參考樣本選擇:選擇與目的片段相近或者感染方式相似的其他病毒或者細菌高載量樣本,同時應滿足臨床或者其他方法確認目的片段為陰性,做5個副管擴增並且全部為陰性。以乙肝為例:選擇高載量HCV、CMV、EBV、HSV2的陽性標本各1個(乙肝表面抗原為陰性),分別檢測乙肝表面抗原及乙肝核酸量。每個測5次,全部陰性或者在參考范圍以下為特異性良好。
希望能夠幫到你,有其他需要可以隨時交流!
❺ 熒光定量PCR方法的特異性和准確度怎麼計算
特異性主要看檢測的目的樣品是否是專一的,准確度主要看測量數據之間的偏差
❻ 定性檢測方法的靈敏度和特異性是什麼意思
靈敏度:正確檢出陽性患者的能力,也就是指在診斷疾病的時候對真正的病人不漏診的機會有多大。靈敏度越高,假陰性越少。
特異性:正確檢出陰性患者的能力,也就是指對一個健康人不造成誤診的機會有多大。特異性越高,假陽性越少。
臨床靈敏度可用來衡量某種試驗檢測出有病者的能力,靈敏度是將實際有病的人正確地判定為真陽性的比例。
臨床特異度是衡量試驗正確地判定無病者的能力,特異度是將實際無病的人正確地判定為真陰性的比例。
(6)鐵絲網的特異性檢測方法擴展閱讀;
靈敏度=真陽性人數/(真陽性人數+假陰性人數)*100%。正確判斷病人的率。
特異度=真陰性人數/(真陰性人數+假陽性人數))*100%。正確判斷非病人的率。
特異性就是檢查發現dsDNA陽性,那他就是SLE患者的概率;敏感性就是檢查dsDNA陰性,那他就不是SLE患者的概率。用來評估真陽性和真陰性的。
❼ 免疫學的檢測方法
免疫學檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫。
❽ 醫學統計 聯合檢測 特異性和敏感性怎麼計算
1、診斷敏感性:是指將實際患者正確地判斷為陽性(真陽性)的百分率。
計算公式為:TP/(TP FN)×100%。TP為真陽性,FN為假陰性。
2、診斷特異性:是指將實際無病者正確地判斷為陰性(真陰性)的百分率。
計算公式為:TN/(TN+FP)×100%。TN為真陰性, FP為假陽性。
3、診斷效率:是指能准確區分患者和非患者的能力。
計算公式為:(TP+ TN)/(TP+FP+TN +FN)×100%。
4、陽性預期值:是指特定試驗方法測定得到的陽性結果中真陽性的比率。
計算公式為:PPV=TP/(TP+FP)×100%。
5、陰性預期值:是指特定試驗方法測定得到的陰性結果中真陰性的比率。
計算公式為:NPV=TN/(TN+FN)×100%。
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醫學統計方法的選擇
一、先確定研究目的,根據研究目的選擇方法
不同研究目的採用的統計方法不同,常見的研究目的主要有三類:一是差異性研究,即比較組間均數、率等的差異,可用的方法有t檢驗、方差分析、χ2檢驗、非參數檢驗等。
二是相關性分析,即分析兩個或多個變數之間的關系,可用的方法有相關分析。三是影響性分析,即分析某一結局發生的影響因素,可用的方法有線性回歸、logistic回歸、Cox回歸等。
二、明確數據類型,根據數據類型進一步確定方法
不同數據類型採用的統計方法也不同。定量資料可用的方法有t檢驗、方差分析、非參數檢驗、線性相關、線性回歸等。分類資料可用的方法有χ2檢驗、對數線性模型、logistic回歸等。圖1.6簡要列出了不同研究目的、不同數據類型常用的統計分析方法。
三、選定統計方法後,需要利用統計軟體具體實現統計分析過程
SAS中,不同的統計方法對應不同的命令,只要方法選定,便可通過對應的命令輔之以相應的選項實現統計結果的輸出。
四、統計結果的輸出並非數據分析的完成
一般統計軟體都會輸出很多結果,需要從中選擇自己需要的部分,並做出統計學結論。但統計學結論不同於專業結論,最終還需要結合實際做出合理專業結論。
❾ 特異性定義 醫學檢驗
特異性(specificity)是指干擾物存在時分析系統可以正確區分或檢測被測量的能力。
特異性(specificity)是指在未感染某一病原體的個體中,檢測出陰性反應的可能性。
特異性也稱靈敏度,是指一般指儀器、設備、試劑或測試方法對微小外加作用顯示出的敏感度。
在分析化學中靈敏度一般是指測定方法和檢測儀器能檢測出物質的最低量或最低濃度。測定方法的靈敏度與實驗條件有密切關系,通常用工作曲線的斜率值來表示該方法的靈敏度更符合實際,斜率值越大,方法靈敏度越高。定性鑒定方法的靈敏度是用檢出限量m(單位μg)和最低濃度c1(單位g/L)兩個相關的量來表示,檢出限量和最低濃度越低,鑒定方法越靈敏。在儀器分析中,分析靈敏度直接依賴於檢測器的靈敏度與儀器的放大倍數,當提高檢測器的靈敏度與儀器的放大倍數,靈敏度提高,雜訊也隨之增大,而信噪比s/N和分析方法的檢出能力不一定會有所改善和提高。如果只給出靈敏度,不給出獲得此靈敏度的儀器條件,則各分析方法之間的靈敏度沒有可比性。由於靈敏度沒有考慮到測量雜訊的影響,因此,現在推薦用檢出限而不用靈敏度作為表徵分析方法最大檢出能力
❿ ELISA檢測方法的原理及其優缺點是什麼
1.
直接法(direct
elisa)
將抗原直接固定在固相載體上,參加酶符號的一級抗體,即可測定抗原總量,此一級抗體的特異性非常重要。
優勢:操作手續簡略,因無須運用二抗可防止交互反響。
缺陷:實驗中的一抗都得用酶符號,但不是每種抗體都適合做符號,費用相對進步。
2.間接法(indirect
elisa)
此測定辦法與直接法相似,不一樣在於一級抗體沒有酶符號,改用酶符號的二級抗體去辨識一級抗體來測定抗原量。
優勢:二抗能夠加強信號,並且有多種挑選能做不一樣的測定剖析。不加酶符號的一級抗體則能保存它最多的免疫反響性。
缺陷:交互反響發作的機率較高。
3.雙抗體夾心法(sandwich
elisa)
被檢測的抗原包被在兩個抗體之間,其間一個抗體將抗原固定於固相載體上,即捕捉抗體。另一個則是檢測抗體,此抗體可用酶符號後直接測定抗原的量;或不符號,再透過酶符號的二級抗體來測定抗原的量。這兩種抗體有必要當心選擇,才可防止交互反響或競爭一樣的抗原聯系部位。
優勢:高活絡、高專一性,抗原無須事前純化。
缺陷:抗原必定得具有兩個以上的抗體聯系部位。
4.競爭法(competitive
elisa)
樣本里的抗原(自在抗原)和純化並固定在固相載體上的抗原(固定抗原)一同競爭一樣的抗體,當樣品里的自在抗原越多,就能夠聯系越多的抗體,而固定抗原就只能聯繫到較少的抗體,反之亦然。經清潔過程,洗去自在抗原和抗體的復合物,只留下固定抗原和抗體的復合物,拿來與只要固定抗原的對照組成果相比擬,依據呈色區別就可計算出樣品里的抗原含量。
優勢:可適用比擬不純的樣本,並且數據再現性很高。
缺陷:全體的敏感性和專一性都較差。
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