A. 溶菌酶 lysozyme 耐熱嗎
溶菌酶( lysozyme )主要是由吞噬細胞合成並分泌的一種小分子粘性蛋白，屬乙醯多糖酶。存在於唾液、、淚液和鼻及氣管等分泌物中，能溶解革蘭氏陽性細菌。由於它的高等電點( pH11.0 )，使它能與細菌牢固結合，並水解細菌細胞壁肽聚糖，使細菌裂解死亡。 本實驗在平板上進行唾液…
溶菌酶( lysozyme )主要是由吞噬細胞合成並分泌的一種小分子粘性蛋白，屬乙醯多糖酶。存在於唾液、、淚液和鼻及氣管等分泌物中，能溶解革蘭氏陽性細菌。由於它的高等電點( pH11.0 )，使它能與細菌牢固結合，並水解細菌細胞壁肽聚糖，使細菌裂解死亡。
本實驗在平板上進行唾液酶的測定。溶菌酶與枯草芽胞桿菌( Bacillus subtilis )作用後，可使該菌因細胞壁破壞而溶解，致使瓊脂板加樣孔周圍出現溶菌環。溶菌環直徑與樣品中溶菌酶含量的對數呈直線關系。
【材料】
1? 無菌 PBS ( pH6.4 ， 1/15mol/L )， 5mol/LKOH ， 3%PBS 瓊脂，溶菌酶標准品，受驗者唾液。
2? 枯草芽胞桿菌 12 小時培養物。
3? 10×100 試管，試管架，無菌平皿，打孔器，微量加樣器。
4? 分光光度計，水浴箱，溫箱等。
【方法】
菌液配製：將 PBS 加入枯草芽胞桿菌斜面，置室溫 5-10 分鍾後製成菌懸液；在波長 640nm 處，測定菌懸液的濃度，並將菌液濃度調至透光率 30-40% 。
2. 溶菌酶標准液配製：稱取溶菌酶標准品，用 PBS 配成 1000 m g/ml ，置冰箱凍存，臨用時再稀釋成 100 、 50 、 25 和 10 m g/ml 。
3. 收集唾液標本：待檢測者用清水漱口後，將唾液收集於消毒平皿內待用。
4. 加熱融化 3% 瓊脂，冷至 60 -70℃ ，與預熱好的枯草芽胞桿菌菌懸液等體積混合，到平板。用打孔器在平板上打孔，孔間距約 1.5cm , 每平板可打孔 8-9 個。
5. 各孔內依次加溶菌酶標准品和唾液樣品，每孔 20 m l 。
6. 置於 24 -26 ℃ 12-18 小時後測量溶菌環直徑。
【結果判斷】
記錄溶菌環的直徑( mm )於下表，繪制標准曲線，並從標准曲線上查出所測樣品的溶菌酶含量。
B. 溶菌酶存在於人體哪些場所
溶菌酶為正常機體免疫防禦機制的組成部分，具有溶解細菌細胞壁的作用。在人體內，它存在於中性粒細胞、單核細胞和巨噬細胞內；也存在於黏膜分泌液中，成為體表防禦因素之一。正常人尿中無溶菌酶。某些疾病患者血清或體液內的溶菌酶活性值有顯著差別，故測定溶菌酶活性日益受到臨床重視。
檢查過程：抽血，抽血檢查一般采靜脈血，由醫生或護士抽血。抽血量的多少是根據化驗內容的不同及項目的多少來決定的，抽血量一般在2-20毫升，最多不會超過50毫升，然後由醫生用顯微鏡觀察紅細胞大小。
血清：5-30mg/L(瓊脂平板法);9.6-14mg/L(比濁測定法)。
腦脊液：0mg/L(瓊脂平板法)。
唾液：30-70mg/L(比濁測定法)。
尿液：0mg/L(瓊脂平板法);1-3mg/L(比濁測定法)。
由於方法與實驗條件不同，測定結果有所差別，故各實驗室應建立自己的正常值標准。
血清溶菌酶測定對鑒別各型急性白血病有一定意義，急粒與急單血清溶菌酶升高；而急淋、急性紅白血病降低或正常；經化療奏效病情緩解後，溶菌酶水平可恢復。
血清溶菌酶測定可作為判斷局限性腸炎活動性的一個有用的指標，並且有助於判斷臨床過程的嚴重程度和對治療的反應。
尿液溶菌酶含量增高的原因有：
①腎小管損害;
②高溶菌酶血症;
③腎組織破壞。
臨床上測定尿液溶菌酶主要是作為腎小管損害的一個指標，各種原因的腎小管損害都可引起尿溶菌酶含量增高。腎移植患者定期檢查尿溶菌酶活性十分必要。如移植腎接受良好，則溶菌酶活性在7天內恢復正常；若尿中過多的溶菌酶持續存在，必須疑及排斥反應的發生。
細菌性腦膜炎患者腦脊液(CSF)溶菌酶含量遠較病毒性腦膜炎患者的含量高。因此，用溶菌酶測定對二者的鑒別有重要意義。此外，CSF溶菌酶測定對中樞神經系統的原發性或繼發性腫瘤有一定輔助診斷價值。
慢性支氣管炎患者痰液中溶菌酶含量降低；重症肺結核、泌尿系統感染患者血清或尿液中溶菌酶活性均可顯著升高。
C. 請教用溶菌酶裂解細菌的配方
溶菌酶( lysozyme )主要是由吞噬細胞合成並分泌的一種小分子粘性蛋白，屬乙醯多糖酶。存在於唾液、乳汁、淚液和鼻及氣管等分泌物中，能溶解革蘭氏陽性細菌。由於它的高等電點( pH11.0 )，使它能與細菌牢固結合，並水解細菌細胞壁肽聚糖，使細菌裂解死亡。 本實驗在平板上進行唾液…
溶菌酶( lysozyme )主要是由吞噬細胞合成並分泌的一種小分子粘性蛋白，屬乙醯多糖酶。存在於唾液、乳汁、淚液和鼻及氣管等分泌物中，能溶解革蘭氏陽性細菌。由於它的高等電點( pH11.0 )，使它能與細菌牢固結合，並水解細菌細胞壁肽聚糖，使細菌裂解死亡。
本實驗在平板上進行唾液酶的測定。溶菌酶與枯草芽胞桿菌( Bacillus subtilis )作用後，可使該菌因細胞壁破壞而溶解，致使瓊脂板加樣孔周圍出現溶菌環。溶菌環直徑與樣品中溶菌酶含量的對數呈直線關系。
【材料】
1• 無菌 PBS ( pH6.4 ， 1/15mol/L )， 5mol/LKOH ， 3%PBS 瓊脂，溶菌酶標准品，受驗者唾液。
2• 枯草芽胞桿菌 12 小時培養物。
3• 10×100 試管，試管架，無菌平皿，打孔器，微量加樣器。
4• 分光光度計，水浴箱，溫箱等。
【方法】
1. 菌液配製：將 PBS 加入枯草芽胞桿菌斜面，置室溫 5-10 分鍾後製成菌懸液；在波長 640nm 處，測定菌懸液的濃度，並將菌液濃度調至透光率 30-40% 。
2. 溶菌酶標准液配製：稱取溶菌酶標准品，用 PBS 配成 1000 m g/ml ，置冰箱凍存，臨用時再稀釋成 100 、 50 、 25 和 10 m g/ml 。
3. 收集唾液標本：待檢測者用清水漱口後，將唾液收集於消毒平皿內待用。
4. 加熱融化 3% 瓊脂，冷至 60 -70℃ ，與預熱好的枯草芽胞桿菌菌懸液等體積混合，到平板。用打孔器在平板上打孔，孔間距約 1.5cm , 每平板可打孔 8-9 個。
5. 各孔內依次加溶菌酶標准品和唾液樣品，每孔 20 m l 。
6. 置於 24 -26 ℃ 12-18 小時後測量溶菌環直徑。
【結果判斷】
記錄溶菌環的直徑( mm )於下表，繪制標准曲線，並從標准曲線上查出所測樣品的溶菌酶含量。
D. 如何從細菌中得到純化的特異性不同的酶，大概步驟
1、確定你的目的酶
2、根據酶的性質，採用相應的方法條件、檢測方法
大概如下：
a 細菌培養，採用最適條件，使目的酶盡量富集
b 根據酶的性質，採用低溫條件下，使用溶菌酶、超聲波、凍融等方法得到勻漿液
c 粗提
d 鹽析
e 透析
f 濃縮
g 柱層析（陰離子層析、陽離子層析、分子篩層析、疏水層析、親和層析等）
h 電泳檢測（每一步都要做）
i 酶活性檢測
j 酶結晶等進一步純化措施
E. 溶菌酶活性檢測比濁法及其不穩定，請教原因
我們也遇到了這種情況，數據不穩定，平行對照之間的差值就很大，而且對照和測定之間很的差值為負值。
F. 跪求有關溶菌酶的GB檢測標准
FAO，WHO，1992；鹽酸溶菌酶（做食品添加劑用）。
1.水分（GT-32-1） ≤6%，
2.砷（GT-3-2，試樣3g) ≤1mg/kg，
3.重金屬（GT-16-2，試樣2g) ≤10mg/kg，
4.灼燒殘渣（GT-27） ≤1.5%，
5.含氮量（凱氏法） 16.8～17.8，
6.氯化物含量 3.2%～4.2%，
7.鈉含量 ≤0.6%，
8.雜菌數（GB4789.2-94) ≤5×104/g ，
9.沙門氏菌（GB4789.4-94) 檢不出/25g，
10.金黃色葡萄球菌（GB4789.10-94) 檢不出/g，
11.大腸菌群（GB4789.3-94） 檢不出/g。
呵呵 僅找到一項用途，希望對你有用
G. 免疫學的檢測方法
免疫學檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫。
H. 在溶菌酶的粗提取實驗中,為什麼將蛋清緩沖液PH調到4.7後又調到8.0
因為卵清蛋白的等電點是4.7，為了提純溶菌酶，要將卵清蛋白沉澱，所以要把PH調到4.7，至於8.0，這是溶菌酶的最適PH值。
提取溶菌酶的方法：
樹脂預處理：干樹脂清水浸泡，使其充分膨脹並除去細小顆粒和較大雜質； 1 mol/L 的HCl浸泡2 h，去離子水洗3次至至近中性；抽濾收集樹脂,1 mol/L 的NaOH溶液浸泡2 h，去離子水洗3次至近中性；抽濾收集樹脂,加0.15 mol/L、pH 值為6．5的磷酸緩沖液平衡過夜待用。
蛋清制備：將3個新鮮雞蛋洗凈乾燥，小端敲一個小洞，大端打一個小孔進氣，分離得雞蛋清，用1 mol/L HCl調節PH到7。過濾前稱量燒杯重48.7g，緩慢攪拌用滅菌的兩層紗布過濾除去臍帶塊和碎蛋殼等，蛋清與燒杯總重207.5g，蛋清凈重158.8g。用1 mol/L 的HCl 溶液調pH 值至7.0，量蛋清體積為100 ml。在調節PH時蛋清中出現少量白色沉澱，可能為部分蛋白由於局部過酸而變性。
吸附：蛋清在不斷攪拌下加入抽濾好的724樹脂25g（相當蛋清四分之一體積的樹脂），冰水浴中磁力攪拌器緩慢攪拌（使樹脂全部懸浮在雞蛋清中，攪拌不能起泡）吸附2.5 h，4℃靜置1.5h。然後3000r/min離心15min分層，收集樹脂，回收蛋清（留樣A）。
去除雜蛋白：收集樹脂用去離子水振盪水洗直至洗液澄清（至無白沫為止），吸管輕吸去洗液，以去除雜蛋白。（每洗1次，離心1次，總共3次）冰浴中用等體積的0.15mol/L、pH =6.5的磷酸緩沖液攪拌洗滌15min，抽濾，重復洗三次，注意防止樹脂流失。最後一次抽濾濾除樹脂水分至乾燥。
洗脫溶菌酶：樹脂中加入35ml（等體積）的10％（NH4）2SO4溶液攪拌洗脫30 min，抽濾,使溶菌酶從樹脂上洗脫下來，重復兩次，合並收集洗脫液（留樣），洗脫液過濾後，准確量取體積100ml。（留樣B）
鹽析:每83mL洗脫液加32g磨細的固體（NH4）2SO4，本實驗中總量為38.55g。緩慢加入（NH4）2SO4攪拌待完全溶解後保鮮膜封口，置於4℃冰箱鹽析過夜。
透析:待白色沉澱析出，3000r/min離心15 min，收集沉澱，用去離子水將沉澱洗下並全部溶解（4.5ml去離子水），裝於透析袋中，於去離子水中透析（冰浴），期間2次更換去離子水，直至用BaCl2檢測透析完全。透析裝置中加入磁子，於磁力攪拌器中攪拌加快透析速度。
去雜質蛋白：取出透析袋中的透析液，用0.1mol/L HCl調整pH4.6，產生少量白色沉澱（留樣D），可能為雜蛋白。3000r/min離心10min，收集上清液（留樣C 20ul）。
濃縮：用PEG-20000濃縮上清液至1.5ml（留樣E，20ul，加loading buffer,出現黃色（可能為濃縮時透析袋中滲入了PEG-20000）。[5][6]
I. 溶菌酶溶菌環大小不同的原因，影響直徑因素
溶菌酶( lysozyme )主要是由吞噬細胞合成並分泌的一種小分子粘性蛋白，屬乙醯多糖酶。存在於唾液、、淚液和鼻及氣管等分泌物中，能溶解革蘭氏陽性細菌。由於它的高等電點( pH11.0 )，使它能與細菌牢固結合，並水解細菌細胞壁肽聚糖，使細菌裂解死亡。 本實驗在平板上進行唾液…
溶菌酶( lysozyme )主要是由吞噬細胞合成並分泌的一種小分子粘性蛋白，屬乙醯多糖酶。存在於唾液、、淚液和鼻及氣管等分泌物中，能溶解革蘭氏陽性細菌。由於它的高等電點( pH11.0 )，使它能與細菌牢固結合，並水解細菌細胞壁肽聚糖，使細菌裂解死亡。
本實驗在平板上進行唾液酶的測定。溶菌酶與枯草芽胞桿菌( Bacillus subtilis )作用後，可使該菌因細胞壁破壞而溶解，致使瓊脂板加樣孔周圍出現溶菌環。溶菌環直徑與樣品中溶菌酶含量的對數呈直線關系。
【材料】
1? 無菌 PBS ( pH6.4 ， 1/15mol/L )， 5mol/LKOH ， 3%PBS 瓊脂，溶菌酶標准品，受驗者唾液。
2? 枯草芽胞桿菌 12 小時培養物。
3? 10×100 試管，試管架，無菌平皿，打孔器，微量加樣器。
4? 分光光度計，水浴箱，溫箱等。
【方法】
菌液配製：將 PBS 加入枯草芽胞桿菌斜面，置室溫 5-10 分鍾後製成菌懸液；在波長 640nm 處，測定菌懸液的濃度，並將菌液濃度調至透光率 30-40% 。
2. 溶菌酶標准液配製：稱取溶菌酶標准品，用 PBS 配成 1000 m g/ml ，置冰箱凍存，臨用時再稀釋成 100 、 50 、 25 和 10 m g/ml 。
3. 收集唾液標本：待檢測者用清水漱口後，將唾液收集於消毒平皿內待用。
4. 加熱融化 3% 瓊脂，冷至 60 -70℃ ，與預熱好的枯草芽胞桿菌菌懸液等體積混合，到平板。用打孔器在平板上打孔，孔間距約 1.5cm , 每平板可打孔 8-9 個。
5. 各孔內依次加溶菌酶標准品和唾液樣品，每孔 20 m l 。
6. 置於 24 -26 ℃ 12-18 小時後測量溶菌環直徑。
【結果判斷】
記錄溶菌環的直徑( mm )於下表，繪制標准曲線，並從標准曲線上查出所測樣品的溶菌酶含量。
J. 溶菌酶含量的測定方法
那要看你用什麼方法測定dna和rna：
（1）紫外吸收法也就是測量od（260）和od（280）的吸收值，這樣的方法其它的雜質對測量結果影響大一點，因為其它雜質在這兩個吸收波長也有吸收。
（2）熒光法，用picogreen熒光染料，測定dna，rna濃度比較靈敏，並且適合測量低濃度和微量dna和rna，並且受其它雜質的影響不大，缺點要有專門的熒光檢測儀器，試劑比較昂貴。
純化dna可以買試劑盒，主要有膜吸附法，磁珠分離法，都很方便。