細菌菌落檢測結果表示方法

『壹』 測菌片測出的細菌量單位是什麼

、

測量細菌常用的單位是：
μm

菌落總數測試片檢測方法

方法編號：5011

1 適用范圍：可用於各類食品及原料中菌落總數的測定。也可用於與食品接觸的容器、操作台和其他設備表面的衛生檢測。
2 方法原理：將營養培養基、凝膠和氯化三苯基四氮唑（TTC）顯色劑等載入在試紙片，經加樣、培養後，細菌菌落在測試片上顯現出紅色菌斑，通過計數報告結果。
3 操作方法
3.1樣品處理：無菌稱取樣品25g（或25mL）放入含有225mL無菌生理鹽水的采樣瓶或均質杯內，經充分振搖（均質）做成1:10的稀釋液。用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL，注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內，用1mL滅菌吸管反復吸吹製成1:100的稀釋液。以此類推，做出1:1000等稀釋度的稀釋液，每個稀釋度更換一支滅菌吸管。
3.2接種：一般食品選2～3個稀釋度進行檢測，含菌量少的液體樣品（如食用純水和礦泉水等）可直接用原液檢測。將測試片放在水平檯面上，揭開上面的透明薄膜，用滅菌吸管吸取樣品原液或稀釋液1mL，均勻加到中央的紙片上，輕輕將上蓋膜放下，靜置5 min使培養基凝固，最後用手輕輕地壓一下。每個稀釋度接種兩片。
3.3培 養： 將測試片疊在一起放回原自封袋中，透明面朝上水平置於恆溫培養箱內，堆疊片數不超過12片。培養溫度為36℃±1℃，培養15～24h。
4 結果判斷與計數：
4.1細菌在紙片上生長後會顯示紅色斑點，選擇菌落數適中（10個～100個）的紙片進行計數，乘以稀釋倍數後即為每克（或毫升）樣品中所含的細菌菌落總數。菌落數在100以內時，按實有數報告。大於100時，用二位有效數字，二位有效數字後面的數字，以四捨五入方法計算，並以10的指數來表示。
4.2計數原則與報告方式
4.2.1 通常選擇菌落在10個～100個之間的紙片進行計數，乘以稀釋倍數報告之（見下表中例次1）。國家標准菌落總數報告方式術語為cfu/g或mL，cfu的含義為菌落形成單位。
4.2.2 若有兩個稀釋度的菌落數在10個～100個之內，兩者的比值小於2，則取其平均數，若大於2，則採用稀釋度小者報告（見下表中例次2和例次3）。
4.2.3 若三個稀釋度的菌落數都有在10個～100個之內時，應選擇二個低數值的平均數（見下表中例次4）。
4.2.4 若三個稀釋度的菌落數均小於10個或大於100個時，應重新試用更低或更高的稀釋度進行菌落計數；或採用均小於數量標準的最小值，或採用均大於數量標準的最大值（見下表中例次5和例次6）。
例次

稀釋度

兩稀釋
度之比

選定計數
稀釋度

報告方式
（個/g或
個/mL）

10-1

10-2

10-3

1
2
3
4
5
6

158
208
265
98
8
295

76
68
82
50
5
174

5
12
50
15
1
106

—
1.8
6.1
—
—
—

10-2
10-2、10-3
10-2
10-1、10-2
10-1
10-3

7.6×103
9.4×103
8.2×103
3.0×103
8.0×10
1.1×105

5 表面取樣方法：加1mL滅菌生理鹽水在測試片上，靜置至少1h使培養基凝固；提起上層膜，使中央濾紙部分貼到待測物表面，用手在外側輕壓；然後將上蓋膜合上，置培養箱內培養。
6 注意事項：使用過的紙片上帶有活菌，需及時按照生物安全廢棄物處理原則進行處理。

菌落數少時的情況 菌落數多時的情況

『貳』 菌落總數的檢測

平皿計數法

菌落總數(standardplate-countbacteria):水樣在營養瓊脂上有氧條件下37℃培養48h後，所得1mL水樣所含菌落的總數。

儀器和裝置

高壓蒸汽滅菌器。

乾熱滅菌箱。

培養箱(36±1)℃。

電爐。

冰箱。

放大鏡或菌落計數器。

pH計或精密pH試劑。

滅菌試管。

平皿直徑9cm。

培養基與試劑

營養瓊脂成分蛋白腖10g、牛肉膏3g、氯化鈉5g、瓊脂10～20g、蒸餾水1000mL。

製法將上述成分混合後，加熱溶解，調整pH為7.4～7.6，分裝於玻璃容器中(如用含雜質較多的瓊脂時，應先過濾)，經103.43kPa(121℃)滅菌20min，貯存於冷暗處備用。

檢驗步驟

1)水樣處理。

a.飲用水。以無菌操作方法用滅菌吸管吸取1mL充分混勻的水樣，注入來菌平皿中，傾注約15mL已熔化並冷卻到45℃左右的營養瓊脂培養基，並立即旋搖平皿，使水樣與培養充分混勻。每次檢驗時應做一平行接種，同時另用一個平皿只傾注營養瓊脂培養基作為空白對照。

待冷卻凝固後，翻轉平皿，使底面向上，置於(36±1)℃培養箱內培養48h，進行菌落計數，即為1mL水樣中的菌落總數。

b.水源水。以無菌操作方法吸取1mL充分混勻的水樣，注入盛有9mL滅菌生理鹽水的試管中，混勻成1∶10稀釋液。

吸取1mL1∶10的稀釋液注入盛有9mL滅菌生理鹽水的試管中，混勻成1∶100稀釋液。按同法依次稀釋成1∶1000、1∶10000稀釋液等備用。如此遞增稀釋一次，必須更換一支1mL滅菌吸管。

用滅菌吸管取未稀釋的水樣和2～3個適宜稀釋度的水樣各1mL，分別注入滅菌平皿內。以下操作同生活飲用水的檢驗步驟。

2)菌落計數及報告方法。作平皿菌落計數時，可用眼睛直接觀察，必要時用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各平皿的菌落數後，應求出同稀釋度的平均菌落數，供下一步計算時應用。在求同稀釋度的平均數時，若其中一個平皿有較大片狀菌落生長時，則不宜採用，而應以無片狀菌落生長的平皿作為該稀釋度的平均菌落數。若片狀菌落不到平皿的一半，而其餘一半中菌落數分布又很均勻，則可將此半皿計數後乘2以代表全皿菌落數。然後再求該稀釋度的平均菌落數。

不同稀釋度的選擇及報告方法:

首先選擇平均菌落數在30～300者進行計算，若只有一個稀釋度的平均菌落數符合此范圍時，則將該菌落數乘以稀釋倍數報告之(見表82.2中實例1)。

若有兩個稀釋度，其生長的菌落數均在30～300之間，則視二者之比值來決定。若其比值小於2應報告兩者的平均數(如表82.2中實例2)。若大於2則報告其中稀釋度較小的菌落總數(如表82.2中實例3)。若等於2亦報告其中稀釋度較小的菌落數(見表82.2中實例4)。

若所有稀釋度的平均菌落數均大於300，則應按稀釋度最高的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之(見表82.2中實例5)。

若所有稀釋度的平均菌落數均小於30，則應以按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之(見表82.2中實例6)。

若所有稀釋度的平均菌落數均不在30～300，則應以最接近30或300的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之(見表82.2中實例7)。

若所有稀釋度的平板上均無菌落生長，則以未檢出報告之。

如果所有平板上都菌落密布，不要用「多不可計」報告，而應在稀釋度最大的平板上，任意數其中2個平板1cm²中的菌落數，除2求出每平方厘米內平均菌落數，乘以皿度面積63.6cm²，再乘其稀釋倍數作報告。

菌落計數的報告:菌落數在100以內時按實有數報告，大於100時，採用兩位有效數字;在兩位有效數字後面的數值，以四捨五入方法計算。為了縮短數字後面的零數也可用10的指數來表示(見表82.2「報告方式」欄)。

表82.2 稀釋度選擇及菌落總數(CFU)報告方式

『叄』 病原微生物中細菌常見檢測方法有哪些

1、快速測試片技術法

快速測試片是指以紙片、紙膜、膠片等作為培養基載體，將特定的培養基和顯色物質附著在上面，通過微生物在上面的生長、顯色來測定食品中微生物的方法。

細菌總數檢測紙片的研製始於 20 世紀 80 年代，其主要優點是簡便、實用、經濟、操作性強。近年來以濾紙和美國某公司的 Petrifilm 為載體的測試片已開始被廣泛應用。

2、生物電化學方法

生物電化學方法是指通過電極測定微生物產生或消耗的電荷，從而提供分析信號的方法。微生物在滋生代謝過程中，培養基的電化學性質如電流、電位、電阻和電導等會發生變化，所以可以通過檢測分析這些電化學參量的變化來實現對微生物的快速測定。

常見的有：阻抗分析法、電位分析法、電流分析法等。生物電化學方法具有測量快速、直觀、操作簡單、測量設備成本低和信號的可控性等特點。

3、微菌落技術

微菌落是指細菌生長繁殖早期在固相載體上所形成的只能藉助於顯微鏡觀察的微小菌落。微菌落技術具有快速、經濟、實用的特點，其研究始於 20 世紀50年代，定量測定技術從 20 世紀 70 年代開始，國外已有報道將該法應用於水、食品中細菌總數的快速檢測。

4、氣相色譜法

氣相色譜應用到微生物的檢測中，主要是依據不同微生物的化學組成或其產生的代謝產物各異，利用上述色譜檢測可直接分析各種體液中的細菌代謝產物、細胞中的脂肪酸、蛋白質、氨基酸、多肽、多糖等，以確定病原微生物的特異性化學標志成分，協助病原診斷和檢測。

5、高效液相色譜法

利用高效液相色譜檢測可分析各種體液中的細菌代謝產物、病原微生物等，以確定病原微生物的特異性化學標志成分，協助病原診斷和檢測。

『肆』 歸納概括細菌檢驗方法

10種常用的細菌檢測方法

一、[3H]脫氧胸苷攝入法測定細胞數：
1、用RPMI-1640培養液洗滌對數生長期（培養3天）的CTLL-2細胞兩次，每次250×g離心10分鍾，洗去培養液中殘存的IL-2。
2、用台盼藍（1% Trypan blue）染色法計數細胞並決定細胞的活力，用10%小牛血清的RPMI-1640培養液懸浮細胞至1×105/ml。
3、在96孔細胞培養板中每孔加0.1ml倍比稀釋的標准IL-2或待測樣品，每個稀釋度三個復孔，標准IL-2從40 IU/ml稀釋到0.019 IU/ml（8～10個稀釋度），陰性對照孔不加IL-2。
4、每孔加0.1ml細胞懸液，在37℃ 5% CO2的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養18～24小時。每孔加10μl（0.5μCi或1.85×104Bq）[3H]脫氧胸苷，繼續培養4小時。
5、用多頭細胞收集器將細胞收集到玻璃纖維濾紙上，用3%醋酸水溶液濾紙3次，洗去游離的[3H]TdR。將濾紙置液體閃爍瓶中，加入5ml閃爍液。在液體閃爍儀上計數細胞攝入的同位素活性（每分鍾放射性計數，cpm），根據儀器效率換算成dpm（每分鍾衰變數）。
6、用dpm值對樣品稀釋倍數作圖。在圖上，標准IL-2的曲線與待測樣品的曲線應當呈平行的S型，說明是同樣的分子反應。比較同樣dpm處的不同稀釋倍數，決定待測樣品的相應濃度。
二、MTT檢測法：
1、取96孔細胞培養板，每孔中加0.1ml含2×104～10×104靶細胞的培養液（含10%小牛血清的RPMI-1640培養液），在37℃ 5% CO2的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養2～3小時讓細胞帖壁（如果是懸浮細胞可直接進行下一步）
2、用RPMI-1640培養液2～10倍遞次稀釋細胞因子標准品，根據情況2～5倍遞次稀釋待檢樣品，每孔加0.1ml稀釋的標准品和待檢樣品，每個稀釋度3個重復孔。對照孔6個：3個陽性對照孔，每孔加0.1ml含大劑量細胞因子的RPMI-1640培養液，3個陰性對照孔，每孔加0.1ml RPMI-1640培養液。在37℃ 5% CO2的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養24～48小時或預定的時間。
3、吸去培養液，用PBS洗滌一次（如為懸浮細胞，應在吸去上清液前離心培養板）。
4、每孔加0.1ml PBS和10μl MTT染液，在37℃ 5% CO2的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養4～6小時。
5、每孔加0.1ml酸化異丙醇，也可用含10% SDS的10mmol/L HCl代替酸化異丙醇，在振盪器上振盪混勻，讓還原產物充分溶解。置酶聯檢測儀上測定光密度（OD）值，檢測波長570nm，參考波長630nm。以OD值對樣品稀釋度作圖，比較標准曲線和待測樣品曲線即可求得待測樣品中細胞因子的含量。
三、XTT檢測法：
用XTT代替MTT可省去溶解還原產物結晶的步驟，XTT可以被活細胞中的代謝酶還原成黃色水溶性的代謝產物（formazan）。代謝產物在OD450處有吸收峰。
四、MTS檢測法：
1、培養IL-2依賴細胞株CTLL-2細胞或HT-2細胞（檢測IL-2），或者IL-3依賴細胞株FDC-P1細胞或FL5.12細胞（檢測IL-3）到對數生長期。
2、取96孔細胞培養板，每孔加0.1ml含1×104～2×104上述細胞之一的DMEM培養液（加10%小牛血清）。
3、每孔加0.1ml系列稀釋的待測細胞因子（IL-2或IL-3）樣品或細胞因子標准品，在37℃ 5% CO2的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養24小時。
4、每孔加20μl MTS/PMS混合液，繼續培養3～4小時顯色。
5、檢測前搖晃培養板10秒鍾，混勻顏色。在酶聯檢測儀上，波長570nm（或490nm，或570nm和690nm）處檢測各孔的光吸收值（OD）。用樣品稀釋度對OD值（OD570、OD490或OD570/OD690）繪制劑量-反應曲線，根據標准品曲線計算樣品中細胞因子的量。
五、NAG檢測法：
1、按MTT檢測法培養細胞和用不同稀釋度的細胞因子處理細胞。
2、吸去培養液，用PBS洗滌兩次（如為懸浮細胞，應在吸去上清液前先離心）。
3、每孔加60μl NAG染液，在37℃ 5% CO2的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養4小時。
4、每孔加90μl終止液，混勻後置酶聯檢測儀上測定光密度（OD）值，檢測波長402nm。以OD值對樣品稀釋度作圖，比較標准曲線和待測樣品曲線即可求得待測樣品中細胞因子的含量。
六、AlamarBlueTM攝入法：
1、按MTT檢測法培養細胞和用不同稀釋度的細胞因子處理細胞。
2、在培養結束前24小時加入Alamar Blue染料，96孔細胞培養板每孔20μl。
3、在培養結束後，直接在酶聯檢測儀上測定光吸收值。氧化型Alamar Blue的最大光吸收在570nm，用OD570減去OD600即為活細胞還原的Alamar Blue染料，顏色深淺與活細胞數成正比。
七、鹼性磷酸酶檢測法（AKP法）：
1、按MTT法用細胞因子處理靶細胞適當時間，用PBS洗去死亡細胞，洗兩次。
2、向96孔細胞培養板各孔中加0.2ml新鮮配製的底物液（0.2mol/L 硼酸，1mmol/L MgCl2，1.2mmol/L甲傘基磷酸）。在37℃ 5% CO2的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養3小時。
3、在熒光計數儀上測定熒光的量。根據測定已知不同數目細胞的熒光量作出標准曲線，根據標准曲線可得到各孔中的活細胞數。
八、三磷酸腺苷檢測法（ATP法）：
1、ATP反應液（Bio-Orbit）是粉末狀混合物，含有熒光素、熒光素酶、0.5mmol醋酸鎂、50mg BSA和0.1μmol無機焦磷酸。在4℃可以保存1個月。用前用10ml含2mmol/L EDTA的0.1mol/L pH7.75 Tris-醋酸緩沖液稀釋。稀釋液分裝後可在－20℃長期保存。
2、在已經完成促增殖或抑生長試驗後的96孔細胞培養板中（每孔含100μL細胞培養液），每孔加0.1ml ATP釋放因子，室溫中反應5分鍾。取另一塊96孔細胞培養板，從第一塊板的各孔中吸0.1ml細胞溶解物到第二塊板的相應各孔。
3、在低於25℃中，將第二塊板置自動多孔熒光檢測儀中。用自動加樣器，每孔加入20μl ATP反應液，立即檢測10秒鍾的熒光強度。溫度升高，檢測敏感性就下降。
4、用RLU（Y軸）對細胞因子標准品的稀釋度（X軸）作標准曲線，根據標准曲線確定待測樣品中細胞因子的含量。
九、染料染色法測定細胞數：
1）結晶紫檢測法：
1、在96孔細胞培養板各孔中加0.1ml含5×104～10×4 WEHI-164細胞的培養液（含10%小牛血清的RPMI-1640培養液），37℃ 5% CO2的二氧化碳培養箱中培養2～3小時，讓細胞帖壁。
2、用RPMI-1640培養液10倍遞次稀釋TNF標准品，根據需要3～5倍遞次稀釋待檢樣品，每孔加0.1ml稀釋的標准品或待檢樣品，每個稀釋度3個重復孔。對照孔6個，3個陽性對照孔各加0.1ml含4μg TNF的RPMI-1640培養液，3個陰性對照孔各加100μl RPMI-1640培養液。繼續培養18～24小時。
3、甩去培養液，用PBS小心洗滌一次，每孔加0.1ml 10%甲醇溶液固定細胞30秒鍾。
4、吸去甲醇溶液，每孔加0.1ml結晶紫染液，室溫中放置20分鍾。
5、輕輕甩去染色液，用蒸餾水洗滌各孔，將培養板倒置於吸水紙上吸干水分。自然乾燥或37℃烘乾。此板可以在室溫中長期保存。
6、測定前，每孔加0.1ml 33%醋酸脫色，充分振盪後在570nm處測定光吸收度。用光吸收度（OD）值對樣品稀釋度作圖，比較標准品曲線和待檢樣品曲線即可得到待測樣品中的細胞因子活性
2）NBB檢測法：
1、在用細胞因子處理靶細胞以後傾去培養液，倒置培養板於吸水紙上吸干培養液。再用100μl磷酸緩沖鹽水小心洗去死細胞，用吸水紙吸干培養液。
2、每孔加100μl NBB染液，室溫中染色30分鍾。輕輕染液。用吸水紙吸干染液。</P< p>
3、每孔加100μl福爾馬林固定液固定15分鍾。用自來水輕輕洗去固定液，倒置培養板，用吸水紙吸干染液。
4、每孔加150μl 50mmol/L氫氧化鈉。輕輕振盪培養板直到染料全部溶解並均勻分布。在分光光度計上讀取各孔在620nm處的光密度（OD）值。計算TNF的活性。
3）美藍染色檢測法：
1、用細胞因子處理靶細胞，在含100μL細胞培養液的檢測孔中，每孔加0.02ml 25%戊二醛固定活細胞15分鍾，用自來水緩緩洗去死細胞和固定液。
2、每孔加0.1ml 0.05%美藍染液，染色20分鍾，用自來水緩緩沖凈染液，晾乾。
3、每孔加0.2ml 0.33mol/L鹽酸溶解美藍，振盪混勻。在665nm波長處測定光吸收度。計算TNF的活性。
4）中性紅染色檢測法：
1、用細胞因子處理靶細胞，在含100μL細胞培養液的檢測孔中，每孔加50μl 5%中性紅染液。繼續培養2小時。
2、小心倒去培養液。用200μl Hanks液洗滌細胞1次。小心倒去培養液，減少細胞丟失。
3、每孔加100μl脫色液，在搖床中輕輕搖晃溶解30分鍾。在550nm波長處測定OD值。
十、直接計數細胞：
1、如果靶細胞是帖壁細胞，在細胞因子作用適當時間後，用生理鹽水洗去死亡細胞，用0.25%胰蛋白酶液消化細胞。加適量生理鹽水吹打，使細胞分散成單個細胞。直接在血細胞計數板上計數細胞。
2、如果靶細胞是懸浮細胞，則需要用染色劑區分死細胞和活細胞然後再計數。通常用台盼藍染色細胞，活細胞可以排除進入細胞的台盼藍而不著染，死細胞著染呈深藍色。
3、計數血細胞計數板上4個大方格中的全部活細胞，按下式計算活細胞數：活細胞數（個/ml）＝計數的全部活細胞數×10 000×2×1/4。

『伍』 細菌菌落總數的測定方法

菌落總數的測定，一般將被檢樣品製成幾個不同的10倍遞增稀釋液，然後從每個稀釋液中分別取出1mL置於滅菌平皿中與營養瓊脂培養基混合，在一定溫度下，培養一定時間後（一般為48小時），記錄每個平皿中形成的菌落數量，依據稀釋倍數，計算出每克（或每ml）原始樣品中所含細菌菌落總數。
基本操作一般包括：樣品的稀釋－－傾注平皿－－培養48小時－－計數報告。
國內外菌落總數測定方法基本一致，從檢樣處理、稀釋、傾注平皿到計數報告無何明顯不同，只是在某些具體要求方面稍有差別，如有的國家在樣品稀釋和傾注培養進，對吸管內液體的流速，稀釋液的振盪幅度、時間和次數以及放置時間等均作了比較具體的規定。

『陸』 菌落總數的結果怎麼看

第一步：選取單個平板上菌落數目在30-300之間的平板進行計數。
第二步：計數時，選菌落明顯，邊緣清晰的（並非連成一片的）菌落進行計數。
如果菌落數目較多，可以計數1\4平板（注意將菌落分布較為均勻的4部分），再×4。
如果不確認是不是單菌落，可以用顯微鏡查看。
第三步：根據接種稀釋的倍數，換算出菌落總數。

P.S.這個是上課時學的，不知道是不是myziyou醬想要的答案呢？

『柒』 菌落總數大腸桿菌和致病菌的檢測方法

大腸菌群測定的操作細則
大腸菌群系指一群能發酵乳糖、產酸產氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。該菌主要來於人畜糞便,故以此作為糞便污染指標來評價食品的衛生質量,推斷食品中有否污染腸道致病菌的可能。
食品中大腸菌群數系以100mL(g)檢樣內大腸菌群最可能數(MPN)表示。
1
設備和材料
1.1
溫箱：36±1℃。
1.2
冰箱:0～4℃。
1.3
恆溫水浴
:44.5±0.5℃。
1.4
天平。
1.5
顯微鏡。
1.6
均質器或乳缽。
1.7
平皿:直徑為90mm。
1.8
試管。
1.9
吸管。
1.10
廣口瓶或三角燒瓶:容量為500mL。
1.11
玻璃珠:直徑約5mm。
1.12
載玻片。
1.13
酒精燈。
1.14
試管架。
2
培養基和試劑
2.1
乳糖膽鹽發酵管:按GB
4789.28中4.9規定。
2.2
伊紅美藍瓊脂平板:按GB
4789.28中4.25規定。
2.3
乳糖發酵管:按GB
4789.28中4.10規定。
2.4
EC
肉湯:按GB
4789.28中4.11規定。
2.5
磷酸鹽緩沖稀釋液:按GB
4789.28中3.22規定。
2.6
生理鹽水。
2.7
革蘭氏染色液:按GB
4789.28中2.2規定。
3
操作步驟
3.1
檢樣稀釋
3.1.1
以無菌操作將檢樣25mL(或g)放於有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(瓶內予置適當數量的玻璃珠)或滅菌乳缽內,經充分振搖或研磨做成1:10的均勻稀釋液。固體檢樣最好用均質器,以8
000-10
000
r/min的速度處理1min,做成1:10的均勻稀釋液。
3.1.2
用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL,注入含有9mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內,振搖試管混勻,做成1:100的稀釋液。
3.1.3
另取1mL滅菌吸管,按上條操作依次做10倍遞增稀釋液,每遞增稀釋一次,換用1支1mL滅菌吸管。
3.1.4
根據食品衛生標准要求或對檢樣污染情況的估計,選擇三個稀釋度,每個稀釋度,接種3管。
3.2
乳糖發酵試驗
將待檢樣品接種於乳糖
膽鹽發酵管內,接種量在1mL以上者,用雙料乳糖膽鹽發酵管,1mL及1mL以下者,用單料乳糖膽鹽發酵管。每一稀釋度接種3管,置36±1℃
溫箱內,培養24±2h,如所有乳糖膽鹽發酵管都不產氣,則可報告為大腸菌群陰性,如有產氣者,則按下列程序進行。
3.3
分離培養
將產氣的發酵管分別轉種在伊紅美藍瓊脂平板上,置36±1℃
溫箱內,培養18-24h,然後取出,觀察菌落形態,並做革蘭氏染色和證實試驗。
3.4
證實試驗
在上述平板上,挑取可疑大腸菌群菌落1-2個進行革蘭氏染色,同時接種乳糖發酵管,置
36±1℃溫箱內培養24±2h,觀察產氣情況。凡乳糖管產氣、革蘭氏染色為陰性的無芽胞桿菌,即可報告為大腸菌群陽性。
3.5
報告
根據證實為大腸菌群陽性的管數,查MPN檢索表,報告每100mL(g)大腸菌群的MPN值。
4
糞大腸菌群(faecal
coliform)
4.1
用接種環將所有產氣的乳糖膽鹽發酵管培養物(見3.2條)轉種於EC肉湯管內,置44.5±0.2℃水浴箱內(水浴箱內的水面應高於EC肉湯液面),培養24±2h,經培養後,如所有EC肉湯管均不產氣,則可報告為陰性;如有產氣者,則將所有產氣的EC肉湯管分別轉種於伊紅美藍瓊脂平板上,置
培養18-24h,凡平板上有典型菌落者,則證實為糞大腸菌群陽性。
4.2
結果報告
根據證實為糞大腸菌群的陽性管數,查MPN檢索表,報告每100mL(g)糞大腸菌群的MPN值。

『捌』 菌落記數 分析

不知道，沒聽說過

『玖』 細菌學有哪些檢驗方法

直接塗片檢查：取混勻新鮮尿塗片，健康人的尿塗片無細菌。若每個油鏡視野下可見1條或以上的細菌，提示為菌尿。並可行革蘭氏染色，初步確定尿路感染細菌是陽性球菌或陰性桿菌。細菌培養：目前多採用定量接種環法，培養24h，計數菌落。陰性桿菌分裂快，菌落數>l〇5cfo/ml，提示菌尿，菌落數104〜105cfo/ml為可疑。陽性球菌分裂慢，菌落數>103cfU/ml為菌尿。結核菌檢查：尿結核菌檢查是確定有無泌尿系結核的重要方法，尿沉渣塗片抗酸染色較簡單，陽性率為50%〜70%;清晨第1次尿送檢則陽性率高。尿結核菌培養陽性率可達90%，但結核菌生長緩慢。使用改良羅氏培養基，一般需4〜8周始能報告結果。近年常用聚合酶鏈反應（PCR)方法，使含微量結核菌DNA擴增，40條結核菌即可有陽性結果，此法特異性強，2d可有結果，但時有假陽性或假陰性的情況。菌尿的輔助檢查亞硝酸鹽試驗：革蘭陰性桿菌如大腸、副大腸桿菌能將尿中的硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，而球菌和結核菌無還原硝酸鹽的能力，因此亞硝酸鹽試驗陽性，提示革蘭陰性桿菌的感染。氯化三苯四氮唑試驗（TTC試驗）；大部分革蘭陰性活桿菌能將無色TTC還原為紅色的三苯甲替，而球菌及變形桿菌則呈陰性。故可用以初步判定是哪一類細菌感染。尿抗體包裹細菌（ACB):腎盂腎炎為腎實質感染，在細菌抗原作用下，機體可產生相應抗體，抗體將致病菌包裹，在熒光鏡下觀察用熒光素標記的抗人體蛋白抗體處理的尿細菌，若表面有熒光抗體包裹則大多屬腎盂腎炎，膀胱炎為黏膜淺表感染，故細菌表面無熒光抗體包裹。用ACB法有助於上、下尿路感染的定位診斷。但在前列腺炎患者，其ACB試驗亦呈陽性，應注意鑒別。其他：另外還有過氧化物酶試驗、葡萄糖氧化酶試驗、鱟試驗及尿氧壓測定均可幫助診斷尿路感染，但目前臨床上應用較少。

『拾』 食品中細菌總數和菌落總數是怎麼樣測定的

食品中細菌總數和菌落總數的測定方法如下：

平板培養計數法

實驗方法原理

菌落總數是指食品經過處理，在一定條件下培養後，所得1 g或1 ml檢樣中所含細菌菌落總數。菌落總數主要作為判別食品被污染程度的標志，也可以應用這一方法觀察細菌在食品中繁殖的動態，以便對被檢樣品進行衛生學評價時提供依據。菌落總數並不表示樣品中實際存在的所有細菌總數，菌落總數並不能區分其中細菌的種類，所以有時被稱為雜菌數，需氧菌數等。 實驗材料

瓊脂培養基 食品檢樣

試劑、試劑盒

乙醇生理鹽水氫氧化鈉溶液

儀器、耗材

電熱恆溫培養箱、冰箱、恆溫水浴鍋、托盤、天平、電爐、吸管、廣口瓶、三角瓶、玻璃珠、平皿、試管、試管架、酒精燈、均質器、乳缽、滅菌刀、剪刀、滅菌鑷子、酒精、棉球、玻璃、蠟筆、登記薄

實驗步驟

一、檢驗程序

菌落總數檢驗程序見圖5—1

二、檢樣稀釋及培養

1. 以無菌操作，將檢樣25 g(或25 mL)剪碎以後，放於含有225 mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(瓶內預先置適當數量的玻璃珠)或滅菌乳缽內，經充分振搖或研磨做成1：10的均勻稀釋液。固體檢樣在加入稀釋液後，最好置滅菌均質器中以8 000 r／min—1 0000 r／mln的速度處理1 min做成1：10的均勻稀釋液。

2. 用1 mL滅菌吸管吸取1：10稀釋液1 mL，沿管劈徐徐注入台有9 mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內(注意吸管尖端不要觸及管內稀釋液，下同)，振搖試管混合均勻，做成1：100的稀釋液。

3. 另取1 mL的滅菌吸管，按上項操作順序作10倍遞增稀釋液，如此每遞增稀釋一次，即換用1支1 mL滅菌吸管。

4. 根據食品衛生標准要求或對檢樣污染情況的估計，選擇2—3個適宜稀釋度，分別在作10倍遞增稀釋的同時，即以吸取該稀釋度的吸管移1mL稀釋液於滅菌平皿內，每個稀釋度作兩個平皿。

5. 稀釋液移入平皿後，應及時將涼至46℃營養瓊脂培養基[可放置在(45土1) ℃水浴鍋內保溫注入平皿15 mI一20 mL，並轉動平皿位混合均勻，同時將營養瓊脂培養基傾入加有1 mL稀釋液(不含樣品)的滅菌平皿內作空白對照。

6. 待瓊脂凝固後，翻轉平板，置(36土1) ℃恆溫箱內培養(48土2) h取出板內菌落數目，乘以稀釋倍數，即得I g(1 mL)樣品所含菌落總數。

注意事項

1. 平板培養計數法只能檢出生長的活菌，不能檢出樣品中全部的細菌數，總是比實際生存在食品中的細菌數要少，這是因為食品中存在多種細菌，它們的生活特性各異，不可能在統一培養條件下全部生長出來。但是，仍能藉此評定整個食品被細菌污染的程度，所以目前一般食品的衛生檢驗中都普遍採用這種方法。

2. 平板菌落計數測定食品中的菌落總數，一般均採用中溫培養，特別是已屬於直接供食用的製成食品，因為這些食品衛生的要求，是嚴格防止消化道傳染病病原菌和食物中毒病原菌污染，這些病原菌都屬於嗜溫性菌，因而測定細菌數時，採用中溫培養是比較合理的。