蛋白酶k使用方法

A. 蛋白酶K用三蒸水溶解了，怎么办

提基因组DNA时，都用双蒸水溶解的。
50mmol/L的Tris-Hcl（PH8.0）、1.5mmol/L乙酸钙，这是指终浓度。可以先配100m/L的Tris-Hcl(pH8.0,也就是算出Tris的量后，加水约到终体积，再在用PH计下用HCL滴到pH8.0，最后定容至终体积）。再配3mmol/L乙酸钙溶液，最后1:1混合，加入蛋白酶K.

B. 蛋白酶k有什么作用

蛋白酶k是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶，从林伯氏白色念球菌中纯化得到。该酶有两个Ca2+结合位点，它们离酶的活性中心有一定距离，与催化机理并无直接关系。然而，如果从该酶中除去Ca2+，由于出现远程的结构变化，催化活性将丧失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酶制品的蛋白质。所以，蛋白酶k消化过程中通常加入edta（以抑制依赖于mg2+的核酸酶的作用）。但是，如果要消化对蛋白酶k具有较强耐性的蛋白，如角蛋白一类，则可能需要使用含有1mmol/lCa2+而不含edta的缓冲液。在消化完毕后、纯化核酸前要加入egt（ph8.0）至终浓度为2mmol/l，以鳌合Ca2+。

C. 蛋白酶k的应用

蛋白酶K已广泛应用在皮革、毛皮、丝绸、医药、食品、酿造等方面。皮革工业的脱毛和软化已大量利用蛋白酶，既节省时间，又改善劳动卫生条件。蛋白酶还可用于蚕丝脱胶、肉类嫩化、酒类澄清。临床上可作药用，如用胃蛋白酶治疗消化不良，用酸性蛋白酶治疗支气管炎，用弹性蛋白酶治疗脉管炎以及用胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶对外科化脓性创口的净化及胸腔间浆膜粘连的治疗。加酶洗衣粉是洗涤剂中的新产品，含碱性蛋白酶，能去除衣物上的血渍和蛋白污物，但使用时注意不要接触皮肤，以免损伤皮肤表面的蛋白质，引起皮疹、湿疹等过敏现象。

D. 蛋白酶k 究竟是37度还是65度

曾经作过脑组织的TUNEL，也指导过别人做心肌的TUNEL，谈谈我的意见：
蛋白酶K37度30min，好像有点偏长，我是10min。
你是NBT/BICP显色的话，
这说明你用的是AP系统，而不是HRP
这样的话就不是用3%H2O2来去除内源性酶的了，（H2O2是去过氧化氢酶的）；
你现在要去除的是内源性碱性磷酸酶，要用乙酸或左旋咪唑：
我们用的是乙酸，效果很是不错，要不你也试试用乙酸吧，
方法：新鲜配置的3%乙酸（pH2.5）孵育（我当时是37℃ 10min）
可以复染：
用核固红（fast red，也有人叫 快红）

E. 10 mg/mL蛋白酶K怎么配

0.1g 蛋白酶K溶解于10mL去离子水中
建议：蛋白酶K最好不要称量了，因为本身量就很少，称量过程中会有损失，你就看看包装上是多少克或者多少毫克，按比例算一下需要多少水，加进去就好了。

F. 蛋白酶k的简介

从林伯氏白色念球菌（tritirachium album limber）中纯化得到。据资料显示：该酶有两个ca2+结合位点，它们离酶的活性中心有一定距离，与催化机理并无直接关系。然而，如果从该酶中除去ca2+，由于出现远程的结构变化，催化活性将丧失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酸制品的蛋白质。所以，蛋白酶k消化过程中通常加入edta（以抑制依赖于mg2+的核酸酶的作用）。但是，如果要消化对蛋白酶k具有较强耐性的蛋白，如角蛋白一类，则可能需要使用含有1mmol/l ca2+而不含edta的缓冲液。在消化完毕后、纯化核酸前要加入EGTA（ph8.0）至终浓度为2mmol/l,以鳌合ca2+。
蛋白酶K，是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键。此酶经纯化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中稳定，还具有降解天然蛋白质的能力，因而它应用很广泛，包括制备脉冲电泳的染色体DNA，蛋白质印迹以及去除DNA和RNA制备中的核酸酶。蛋白酶K的一般工作浓度是50—100μg/ml。在较广的pH范围内（pH 4-12.5）均有活性。
推荐反应缓冲液：50mMTris-HCl(pH7.5),10mM CaCl2 。
蛋白酶K配制标准：20mg/ml蛋白酶K配制标准（proteinase K）：将200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

G. 蛋白酶K溶液怎么配制

蛋白酶K溶液怎么配制
蛋白酶，顾名思义，降解蛋白的酶，是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键，用于生物样品中蛋白质的一般降解。 在RNA提取中，蛋白酶k的作用主要是降解RNA酶，防止RNA的降解。
蛋白酶K广泛应用于分子生物学，药理学等科研方面。一种非特异性、枯草杆菌蛋白酶相关的丝氨酸蛋白酶，具有很高的比活性。一般储存在-20°C，避光防潮密闭干燥 蛋白酶是所有能够催化分解蛋白质的酶类的统称

H. 我做的TUNEL，说明书上说是要20ug/ml的蛋白酶k，我买来的蛋白酶K是20mg/ml的不知道怎么稀释

1mg=1000ug，这个浓度不用稀释了，用的时候1ml反应体系中加1ul就可以了，终浓度为20ug/ml。蛋白酶k分不分装应该都可以，因为保存温度是-20℃，是液态的，用的时候不需要融解，所以直接拿出来用就可以了。保存时间应该挺长的，具体看说明书。good luck！

I. 提取组织中DNA时蛋白酶K怎么配

估计你看的是分子克隆2吧。

在分3中(中文p1656)用水就可以直接溶解了。

如果想用你说的溶液的话，可以直接配50 mL上述缓冲液 (50 mM Tris-HCl, 1.5 mM CaAc2, pH 8.0)就可以了，最好高压灭菌一下，用时直接取来溶解蛋白酶K。

J. 请教：用蛋白酶K消化组织提取DNA，灭活后是否需

用蛋白酶K消化组织提取DNA，灭活后是否需
1、你说的那种方法是用蛋白酶K消化然后酚氯仿抽提的方法,这种方法中蛋白酶K可以消化掉各种蛋白,释放出各种核酸(包括RNA),RNaseA可以用来消化掉RNA,那么就只剩下DNA了.这种方法中蛋白酶K和RNaseA是必须的,不加蛋白酶K的话核酸释放不充分,而且提取的DNA中容易出现蛋白污染,不加RNaseA的话可能会导致提取的DNA中残留有RNA.
2、提取贴壁细胞的方法很多,你用PBS洗涤一下细胞,然后刮下来或者用酶消化细胞后离心收集之后就可以用随便什么方法提取了,说的那种方法可靠的,嫌麻烦的话就用试剂盒,比如天根的血液组织细胞基因组提取试剂盒(DP304)