⑴ 破碎红细胞膜的方法
可以使用磷酸二酯酶溶解红细胞膜,红细胞溶解彻底,但是酶价格高,会引入新的蛋白质,不好分离
也可以加入到蒸馏水中,使红细胞溶胀破碎,细胞膜有一定的机械力,此方法速度较慢,破碎后使用梯度离心便可去除碎片
也可以使用超声破碎仪使得红细胞破碎,超声法机械力强,但是有可能会使得血红蛋白丧失空间结构
⑵ 破碎酵母细胞的方法
酵母细胞破碎方法很多。有化学、生化、超声波、机械研磨,使用果汁匀浆机匀浆破碎,以及近几年诞生的纳米级微生物细胞破碎机的广泛应用。1、化学法破碎酵母细胞
使用NaOH水解酵母细胞。细胞浓度10%,水90%,碱解24h,50·C,pH值为碱性,结果见表1。当酵母细胞浓度10%,水90%,温度为50%,pH2(3、4)时见表2。
由表1、表2可以看出,碱解、酸解酵母细胞在啤酒、酱油生产上影响物理化学指标,啤酒辅料可以增加,但口味变坏,虽说酱油发酵周期可缩短但氯化物含量超标。
2 生化法破碎酵母细胞,一是自溶,二是酶解 自溶法破碎酵母细胞,表面上看很经济,但保湿操作需要保湿设备而且作用时间长,条件要求高。试验结果见表3。
由于破碎率低总氮低,在啤酒、酱油生产上应用没有好的效果,氯化完全、硫酸盐不高,经济效益不明显,再加上自溶时间长,很难与生产同步
生产方法2 主要是使用酶制剂破碎酵母细胞。在水、酵母中加0.1%的A酶,0.1%的F酶,0.05%。A+0.05%。F分别做试验。此时酵母浓度10%,水90%,pH7.0,温度68·C,作用时间2h,结果见表4。
从表4可知,酶解时间较长,破液对啤酒、酱油质量没有影响,需较高保湿条件,否则很难在生产中应用
3 珠磨机与超声波破碎酵母细胞试验
珠磨机破碎率较低,在12h~24h内研磨,破碎率最高可达80%,产量小很难工业化生产,超声波破碎只能在试验室内进行,不能用于生产,两者均属试验室设备
4 高压匀浆机与纳米级微生物细胞破碎机破碎 高压匀浆机结构如图1所示
高压液流夹带酵母进到喷嘴3碰撞到匀浆阀1后折弯,碰撞到耐磨壁2上,酵母细胞发生破碎。在酵母破碎后,胞内粘和物符到阀1和耐磨壁,呈现较大缓冲作用,影响细胞破碎,这种机械需多次反复破碎才会有较好的效果,破碎率不会超过80%。
纳米级微生物细胞破碎机结构如图2。
1 对撞室,2 振荡片,3 左喷嘴,4 右喷嘴
图2 纳米级微生物细胞破碎机结构图
当高压液流夹带酵母细胞进入左右喷嘴3和4,在对撞室1中相撞,之后碰撞到震荡片2上,使酵母细胞在对撞室和发出2x10 4HZ频率的震荡片上实现两级瞬时破碎,破碎率可达97.8%,对撞室和震荡片上不存在粘稠物,有利酵母细胞破碎
在匀浆机工作中,假设有一质点,附着阀1上,受到冲力
该质点质量,1g,即0.001kg
流体速度,
⑶ 求助超声波破碎细菌细胞的方法,条件
超声波细胞破碎仪 工作原理 超声波细胞破碎仪是利用超声波在液体中的分散效应,使液体产生空化的作用,从而使液体中的固体颗粒或细胞组织破碎. 超声波细胞破碎仪由超声波发生器和换能器两大部分组成.超声波发生器电路将50/60Hz的市电转换成18-21KHz的高频高压电能,该能量被输到“压电换能器”中,并被转换成高频机械震动,再经“变幅杆”的聚能和振幅位移放大后作用于液体中而产生强大的压力波,这个压力波则会形成千百万的微观气泡,随着高频振动,气泡将迅速增长,然后突然闭合,在气泡闭合时,由于液体间相互碰撞产生强大的冲击波,在其周围产生上千个大气压的压力(即超声空化)。它使得变幅杆顶部产生强有力的剪切活动,并使得气体中的分子强力地被搅动。该能量足以将细胞及各类无机物质破碎重组。 主要用途 超声波细胞破碎仪具有破碎组织、细菌、病毒、孢子及其它细胞结构,匀质、乳化、混合、脱气、崩解和分散、浸出和提取,加速反映等功能,故广泛应用于生物、医学、化学、制药、食品、化妆品、环保等实验室研究及企业生产。
⑷ 求超声波细胞破碎仪详细的使用方法,包括参数的设置,清洁方法等。
超声波细胞破碎仪主要用途是1.破碎细胞2.破碎DNA
参数的设置:对于动物细胞可以设置超声0.2秒,停止2秒。其他不同细胞可以进行改动,寻找合适的超声条件。如若一次超声后,细胞还很粘稠,可以进行第二次超声,直到满意。注意要在冰水浴上进行。
清洁方法:先用0.1M HCL超声,水洗,0.1M NaOH超声,水超声。程序可以按上面的设置。
⑸ 如何破碎大肠杆菌细胞且让蛋白有活性啊
可以用反复冻融法,-20摄氏度冷冻,4摄氏度复融。反复几次,即可。但是需要注意的是,具体条件需要自己摸索。
还有一种方法,将E.Coli制成部分原生质体,然后采用低渗状态,让细胞涨破。
如果觉得还不行,还可结合各种表面活性剂,如NP-40等
呵呵!最好的建议还是找一台超声波细胞破碎仪,因为条件是现成的不需要花大力气摸条件………………
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详细资料请参考:
细胞活性/细胞增殖/细胞毒性分析:
http://proct.bio1000.com/100112/
⑹ 超声波细胞破碎仪使用说明
超声波细胞破碎仪一种利用强超声在液体中产生空化效应,对物质进行超声处理的多功能、多用途的仪器,能用于动植物组织、细胞、细菌、芽胞菌种的破碎,同时可用来乳化、分离、分散、匀化、提取、脱气、清洗及加速化学反应等等。下面介绍一下JY-650N超声波细胞破碎仪使用说明:
1、打开超声波细胞粉碎仪的电源开关,指示灯亮。
2、按“设定”键,显示窗1(工作/间歇)显示“-1”,进入间隔时间设定状态,此时显示窗3 (温度)显示的是原始数据或“--”,按置数键设定间隔时间(建议1秒)。
3、按功能键,显示窗1显示“-2”,进入超声时间设定状态,按置数键设定超声时间(最好5秒以下,建议1秒)。
4、按功能键,显示窗1显示“-3”,进入全程时间设定状态,按置数键设定全程时间(此时时间单位为分)。
5、按功能键,显示窗1显示“-4”,进入温度保护设定状态,按置数键设定保护温度(0-40℃)。
6、按设定键结束设定并按“复位”键复位,按启动/暂停键开始超声粉碎,全程时间到后显示显示窗闪烁跳动并自动报警停止工作。
7、如需重复上述实验,先按超声波细胞粉碎仪的清零再按启动键。如工作中需要暂停,再次按启动/暂停键。
⑺ 超声波破碎的原理及方法
超声波细胞破碎仪的原理并不是太神秘、太复杂。简单说就是将电能通过换能器转换为声能,这种能量通过液体介质而变成一个个密集的小气泡,这些小气泡迅速炸裂,产生的象小炸弹一样的能量,从而起到破碎细胞等物质的作用。超声波细胞破碎仪具有破碎组织、细菌、病毒、孢子及其它细胞结构,匀质、乳化、混合、脱气、崩解和分散、浸出和提取,加速反应等功能,故广泛应用于生物、医学、化学、制药、食品、化妆品、环保等实验室研究及企业生产。
⑻ 超声破碎的原理及方法
超声波细胞破碎仪就是将电能通过换能器转换为声能,这种能量通过液体介质而变成一个个密集的小气泡,这些小气泡迅速炸裂,产生的象小炸弹一样的能量,从而起到破碎细胞等物质的作用。
超声波细胞破碎仪具有破碎组织、细菌、病毒、孢子及其它细胞结构,匀质、乳化、混合、脱气、崩解和分散、浸出和提取,加速反应等功能,故广泛应用于生物、医学、化学、制药、食品、化妆品、环保等实验室研究及企业生产。
超声破碎,是用频率大于1.6千周1} (}fiICG/Sy #7声波破坏液体培养基中的微生物的方法。
定义
超声波是由声波发生器产生的。超声破碎在微生物酶学研究中,可用于破碎细胞。用广泛频率的声波测试了抗橄生物的活性,一般说来,频率越高,活性越大,但似乎不存在一个最适的杀微生物频率。超声破碎对革兰氏阴性菌的作用一般大于革兰氏阳性菌,而汗菌比球菌更敏感,抱子的抗性则比营养细胞大得多。处理病毒得到}1}果是不规律的,病毒粒子的形态可能影响处理效果(超声破碎一般并不认为是可靠的灭菌方法)。超声处理的致死效应似乎是由千,(1y空腔形成(cavitation),即在液体的一定时刻,声波传播稀琉区域中形成微小的、短暂的气泡或蒸汽泡。据悉,在空腔的形成和瓦解期间,微环境中发生巨大而突然的压力变化,使空腔内的或邻近空腔的细胞破裂(由于声能的吸收而恒定地产生的热效应与空腔效应不同)。(Z)在空腔形成期间,在通气培养中过氧化氢和(或》单线态氧的形成。