laminol检测ros的方法

❶ ros染色原理

ROS(reactive oxygen species)即活性氧自由基，主要包括活性氧族如超氧阴离子自由基(O2-·)、过氧化氢(H2O2)、羟自由基(OH·)和单线态氧，通常是有氧代谢的副产物。

在病理条件下，由于活性氧的产生和清除失去了正常平衡，会对组织细胞造成损伤。

二氢乙锭(Dihydroethidium, DHE)，可自由透过活细胞进入细胞内，并被细胞内的ROS氧化，形成氧化乙锭;氧化乙锭可掺入染色体DNA中，产生红色荧光。

根据活细胞中红色荧光的产生，可以判断细胞ROS含量的多少和变化。检测ROS水平常用于凋亡、衰老、自噬、炎症、缺血再灌注损伤、神经退行疾病等领域的研究。

ROS染色是活氧检测，组织冰冻切片不能用固定液固定，最好是新鲜组织，ROS阴性细胞仅有较低的荧光强度，ROS阳性细胞有较强的红色荧光。

❷ huvecs细胞用DCF探针检测ROS时，阳性对照双氧水的浓度是多大

huvecs细胞用DCF探针检测ROS时，阳性对照双氧水的浓度
这个浓度我也试了很多次，最后确定用的是2mM，比阴性对照高8倍左右！

❸ 如何用流式细胞仪检测细胞内的ROS

流式检测ROS的特异性比较差。一般来说，针对过氧化氢和超氧化物有荧光探针。加到细胞培养液后，细胞摄龋遇到ROS，可以发出荧光，上机检测可以比较各组之间荧光强度的变化从而代表ROS水平的不同。你这个图横坐标代表的是相对荧光强度，纵坐标代表的是细胞计数。 图的含义就是在每个荧光强度有多少细胞。 估计你用了氧化敏感的荧光指针，ROS反应后荧光增加。所以你应该先用对照组设一个阈值，看实验组的荧光强度有没有高于或者低于该阈值。

❹ 谁能告诉我怎么看流式检测ROS的图啊

你是不是想问winbox中interfaces----traffic，这里显示的图？
如是的，当中，就是tx与rx，一个出一个进，或是说一个下载，一个上传，上下两图是相对的。
其实，可以简单的看，大的数字为下载的流量，小的数字为上传的。一般的都是下载大于上传的。
就此图没有多大的意义。
能观察到的，也就是流量的峰值。

❺ 求助各位专家DHE染色检测ROS的具体步骤

细胞免疫荧光的详细操作步骤1，取出细胞爬片放到35mm或60mm用过的细胞培养皿里，PBS洗三遍。注意有的时候作的细胞爬片可能比较小，因此夹取的时候要小心。2，4%多聚甲醛固定20分钟，PBS洗三遍。3，0.2%TritonX100通透10分钟，PBS洗三遍。4，与二抗相同宿主的血清封闭30分钟，PBS洗三遍。5.，一抗4度湿盒内过夜，也可37度2小时，感觉前者效果好，PBS洗三遍。6，二抗室温2小时，或者37度1半小时，PBS洗三遍。7，最好用DAPI染核，然后直接照荧光片。8，蒸馏水洗掉PBS，甘油封片，指甲油封片子的四周。

❻ 求助关于用氧化敏感探针DCFH-DA检测细胞内ROS

DCFH-DA 的使用步骤：
DCFH-DA使用仅提供指导和参考，具体实验方案应针对您的特定应用进行修改：
1. BCECF开封前，适当的做离心，以保证粉末落入样品管低,确保染料足量；
2.加入适量无水DMSO（DMSO检验用有机滤器进行过滤使用） 或者其他有机溶剂配制成 1～10mM储存液进行使用，剩余的制备液分装存储，避免重复冻融影响试剂活性；
3. 正式开始实验前，采用生理盐缓冲液（常用的缓冲液有：PBS缓冲液，HBSSS缓冲液 和HEPESS缓冲液）稀释至工作浓度1～10μM之间，不同实验需根据需求调整至合适的工作浓度；
4. 从培养基中取出细胞，向细胞中加入染料工作溶液，然后在室温或 37℃条件孵育细胞 5-60 分钟时长；
5. 吸走染色用的工作液，然后用预热的缓冲液 或 细胞培养液进行清洗一遍。之后再加入预热的缓冲液或者细胞培养液，在适宜恒温条件下孵育。对于二乙酸酯的衍生物，需要短暂复原时间让细胞内酯酶将其水解，从而让染料对氧化应激产生反应。最佳的复原时间范围很广，由于某些细胞类型通常显示极其低水平的酯酶活性；
6.将细胞置于刺激物钱，需要先测定加载细胞的背景荧光强度；
7. 评估阴性对照：

• 绿色发射光谱内检查未染色细胞的自荧光情况；

• 对于流式分析，查明染料加载和处理后细胞的前向角散射和侧向角散射是不变。细胞尺寸的变化可能与起泡或萎缩有关，由于处理或有毒反应引起的。

• 对包含和不包含刺激物的染料和缓冲液/培养基的无细胞混合物进行荧光检测。在不含细胞外酯酶和其他氧化酶的情况下，随着时间荧光的逐渐增加可能与瞬间水解、空气氧化、和/或光诱导氧化有关。

• 检查培养在生长培养液或简单缓冲液内的未处理加载细胞（对照）的荧光。在健康细胞内，细胞内酶和/或天然抗氧化剂会清除这些氧自由基。经过染料加载复原时间后，健康细胞应该表现出低水平的荧光信号，且在整个实验期间相对稳定。然而，逐渐增加（由于自氧化）或降低（由于细胞内染料丧失或光淬灭）也有可能观察到。在不含任何刺激物或诱导剂的体系内，健康和未处理细胞突然发现强荧光，表明细胞发生死亡或一些其他的氧化事件。

• 8. 建立阳性对照，可采用下面方法刺激氧化活性：

• 肿瘤促进剂（PMA，工作浓度100pM～10μM）

• H2O2 或者 TBHP（终浓度~100μM）（可以调节浓度：根据细胞对其的灵敏度以及反应性提高或降低浓度）。

• 9. 需要确保其他化合物或者刺激试剂不造成起染料荧光淬灭。同时检查化合物的吸收光谱，确认化合物的吸收峰不会与氧化后的染料最大激发或者是发射光谱出现重读。

❼ 如何用ping指令来检测ROS路由器网络连接

PING命令
用于验证与远程计算机的连接。该命令只有在安装了 TCP/IP 协议后才可以使用。Ping命令的主要作用是通过发送数据包并接收应答信息来检测两台计算机之间的网络是否连通。当网络出现故障的时候，可以用这个命令来预测故障和确定故障地点。Ping命令成功只是说明当前主机与目的主机之间存在一条连通的路径。如果不成功，则考虑：网线是否连通、网卡设置是否正确、IP地址是否可用等。

❽ 组织中的ros一般用什么方法检测

活性氧检测试剂盒是利用荧光探针DCFH-DA进行活性氧检测的。DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。活性氧检测试剂盒。

荧光法检测线粒体产生和释放的反应性氧化物（ROS）[10]。羟基自由基的检测（二羟苄胺DHBAs和水杨酸盐Salicylate）[11] ROS was evaluated by the staining of 2’，7’- dichlorofluorescein diacetate（二氯荧光乙酰乙酸盐）.ROS proction was detected by nitroblue tetrazolium （NBT，硝基四氮唑蓝）assay。

目前，对于细胞线粒体产生的ROS 测定，所发展的方法有（荧光标记后）激光扫描共聚焦显微术（Takahashi et al.，2002）和荧光探剂DCFDA标记后的荧光分光光度法（Esposti ，2002）等，本实验以lucigenin 或luminol 为探剂，用化学发光技术，对从正常大鼠肝细胞及心肌细胞分离的线粒体的METC 电子漏进行了测定

❾ 流式检测检测ros，细胞数要一致吗

流式细胞检测的是相对值，所以每个样本的细胞数和细胞浓度在染色前都应该一致