环境大肠杆菌检测方法

‘壹’ 大肠杆菌的检查方法

细菌的分离鉴定
1、标本：肠道外感染取中段尿、血液、脓液、脑脊液等，腹泻者取粪便。
2、分离培养与鉴定：粪便标本直接接种肠道杆菌选择性培养基。血液需先经肉汤增菌，再转种血琼脂平板。其他标本可同时接种血琼脂平板和肠道杆菌选择性培养基。37℃孵育18～24小时后，观察菌落并涂片染色镜检。采用一系列生化反应进行鉴定。肠致病性大肠杆菌须先作血清学定型试验。必要时检定肠霉毒素。
泌尿系统除确定大肠杆菌外，还应计数，每毫升尿含菌量≥100，000时，才有诊断价值。
卫生细菌学检查
大肠杆菌不断随粪便排出体外，污染周围环境和水源、食品等。取样检查时，样品中大肠杆菌越多，表示样品被粪便污染越严重，也表明样品中存在肠道致病菌的可能性越大。故应对饮水、食品、饮料进行卫生细菌学检查。
1、细菌总数：检测每毫升或每克样品中所含细菌数，采用倾注培养计算。中国规定的卫生标准是每毫升饮水中细菌总数不得超过100个。
2、大肠菌数指数：指每立升中大肠菌群数，采用乳糖发酵法检测。中国的卫生标准是每1000ml饮水中不得超过3个大肠菌群；瓶装汽水、果汁等每100ml大肠菌群不得超过5个。
全自动微生物定量分析仪（TEMPO）检测
全自动微生物定量分析（TEMPO）仪的大肠杆菌群计数检测有TC和CC两种方法。TEMPO TC的开发是为了获得NF ISO4832标准相当性能水平。TEMPO CC法是TEMPO仪器上根据BAM方法专门用于24h计数食品中大肠杆菌群的方法。该法是为了获得和AOAC官方方法966.24及美国公共健康联合会检测乳制品检测方发（SMEDP）一致的效果。TEMPO系统根据阳性空的大小和数目来推算出原始样本中大肠杆菌群数目。
食品检测方法 大肠菌群MPN 计数法 1 样品的稀释 1.1 固体和半固体样品：称取25 g 样品,放入盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,
8000 r/min～10000 r/min 均质1 min～2 min,或放入盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋
中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min，制成1:10 的样品匀液。
1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶
（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液。
1.3 样品匀液的pH 值应在6.5～7.5 之间，必要时分别用1 mol/L NaOH 或1 mol/L HCl 调节。
1.4 用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1 mL，沿管壁缓缓注入9 mL 磷酸盐缓冲液
或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1 支1 mL 无菌
吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。
1.5 根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释
1 次，换用1 支1 mL 无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15 min。 2.初发酵试验 每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3
管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL（如接种量超过1 mL，则用双料LST肉汤），36
℃±1 ℃培养24 h±2 h，观察倒管内是否有气泡产生，24 h±2 h产气者进行复发酵试验，如未产气则继续
培养至48 h±2 h，产气者进行复发酵试验。未产气者为大肠菌群阴性。 3.复发酵试验 用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）管中，36 ℃±1
℃培养48 h±2 h，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。 4.大肠菌群最可能数（MPN）的报告 按3确证的大肠菌群LST阳性管数，检索MPN表（见附录B），报告每g（mL）样品中大肠菌群的
MPN值。 大肠菌群平板计数法 1 样品的稀释 按上一方法稀释。 2 平板计数 2.1 选取2个～3个适宜的连续稀释度, 每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿1 mL。同时取1 mL生理盐
水加入无菌平皿作空白对照。
2.2 及时将15 mL～20 mL冷至46 ℃的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）约倾注于每个平皿中。小心
旋转平皿，将培养基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，再加3 mL～4 mLVRBA覆盖平板表层。翻转平
板，置于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。 3 平板菌落数的选择 选取菌落数在15 CFU～150 CFU 之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。
典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5 mm 或更大。 4 证实试验 从VRBA 平板上挑取10 个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB 肉汤管内，36 ℃±1 ℃
培养24 h～48 h，观察产气情况。凡BGLB 肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。

‘贰’ 如何鉴定大肠杆菌

1、发酵法

这种方法主要是在44.5℃下的培养基上进行大肠杆菌的培养，该培养基含有荧光底物，需要培养 24 h。然后对荧光底物进行释放，需要采用葡萄糖醛酸进行，让培养基能够在紫外光的照射下发出荧光。

采用这样的方式方法，还可以进行统计学估计原来样品中的菌落。主要步骤包括发酵、分离培养、二次发酵、显微镜观察等 。

2、滤膜法

该方法主要过程：加入 10 mL 左右的无菌水于滤器中，然后掺入一些无菌水进行清洁滤器的内壁，再进行过滤，将滤膜放在 M-FC 培养基中，两者之间不能够有气泡，然后进行密封，存放温度为 44.5℃，存放时间约 24 h，直到大肠杆菌的菌群变成蓝色或蓝绿色。

然后记录数据，估算每一单位的水溶液菌群数量，然后进行大肠杆菌量值的换算 。

(2)环境大肠杆菌检测方法扩展阅读：

大肠杆菌是短杆菌，两端呈钝圆形，革兰阴性。有时因环境不同，个别菌体出现近似球杆状或长丝状 ；大肠杆菌多是单一或两个存在，但不会排列呈长链形状。

大多数的大肠杆菌菌株具有荚膜或微荚膜结构，但是不能形成芽孢；多数大肠杆菌菌株生长有菌毛，其中一些菌毛是针对宿主及其他的一些组织或细胞具有黏附作用的宿主特异性菌毛 。

生化特性

大肠杆菌在常用的生化特性检测项目中，甲基红试验呈阳性，吲哚产生和乳糖发酵是阳性（个别菌株表现阴性），维-培试验是阴性，尿素酶和柠檬酸盐利用呈阴性（极个别菌株表现阳性），硝酸盐还原试验表现阳性，氧化酶表现阴性，氧化-发酵试验表现为F型

‘叁’ 大肠杆菌的检测与培养

希望以下资料能对你有所帮助
药敏试验
试验目的：因为细菌极易产生耐药性，为防止盲目用药减少成本，通过本试验筛选出细菌的高敏药物，从而指导临床用药。
试验原理：通过抑菌圈的大小来判断细菌对药物的敏感度，抑菌圈越大说明细菌对药物越敏感，从而选择。
试验器材:打孔器
圆形滤纸 培养皿 镊子 营养琼脂 接种环
分析天平 普通天平 恒温箱 锥形瓶 酒精灯
青霉素瓶 冰箱 高压锅 各种药品
药敏片的制备：在超净环境下，先用打孔器把滤纸打孔，约5毫米，放在恒温箱干燥备用。用分析天平精密称取要制的药物0.0050克（0.0046~0.0054克），放在青霉素瓶，用注射器打入5毫升蒸馏水溶解，然后放入已制备好的滤纸片浸泡，待滤纸片浸透后，用镊子夹到培养皿里放在恒温箱干燥，干燥后放到青霉素瓶放到冰柜冷藏备用。
培养基的制备：按琼脂瓶上的用量用小天平称取质量，一般是4.5克配100毫升蒸馏水,放入锥形瓶里,用纱布塞住,再用报纸包住口,培养皿用报纸包住,然后锥形瓶和培养皿都放在高压锅内高压灭菌。
高压锅的使用：先往锅内加水至担架处，把要灭菌的物品放入高压锅内胆内，拧紧高压锅盖，对头拧蝶形螺母，插上电源，注意放气阀要开着，待锅内冷空气排出后关闭，然后高压锅自己升温，注意看压力表，到121°并恒温15分钟，然后拔掉电源自然冷却，到压力表降为零，放气，对头拧开蝶形螺母，拿出已灭菌的锥形瓶和培养皿，在超净工作台内趁热将琼脂倒在培养皿内，琼脂覆盖住培养皿底部为准，冷却使之凝固，放入冷藏内备用。
试验步骤：用接种环钩取鸡的肝或心上的菌,涂抹在培养基上（注意不能将培养基划破）,放在恒温箱37°培养约十多小时至长出菌落。再用接种环勾取菌落上的大肠杆菌均匀涂在培养基上（可用十字划线或环行划线法），然后贴上药敏片，距离要均匀，放在恒温箱37度培养至抑菌圈出现。通过抑菌圈大小，判断细菌对药物的敏感度。

‘肆’ 大肠杆菌检测方法国标是用什么方法检测的

大肠杆菌检测方法分为三种：

1、细菌分离鉴定法

分离培养与鉴定：粪便标本直接接种肠道杆菌选择性培养基。血液先经肉汤增菌，然后转种血琼脂平板。其他标本同时接种血琼脂平板和肠道杆菌选择性培养基。

37℃孵育18～24小时后，观察菌落涂片染色镜检。肠致病性大肠杆菌须先作血清学定型试验。必要的时候检定肠霉毒素。

2、卫生细菌学检查法

大肠杆菌会不断随粪便排出体外，污染周围环境水源、食品等。取样检查时，样品中大肠杆菌越多，则表示样品被粪便污染的越严重，表明样品中存在肠道致病菌的可能性也就越大。

大肠菌数指数：指每立升中大肠菌群数，采用乳糖发酵法检测。中国卫生标准是每1000ml饮水中不得超过3个大肠菌群，瓶装汽水和果汁中每100ml大肠菌群不能超过5个。

3、全自动微生物定量分析仪（TEMPO）检测法

全自动微生物定量分析（TEMPO）仪大肠杆菌群计数检测有TEMPOTC和TEMPOCC两种方法。

TEMPOTC的开发是为获得NF ISO4832标准相当性能水平。

TEMPOCC法是TEMPO仪器上根据BAM方法专门用于24h计数食品中大肠杆菌群方法。

(4)环境大肠杆菌检测方法扩展阅读：

大肠杆菌在生物技术中的应用

这些菌株由于失去了细胞壁等重要组分，所以在自然条件下已无法生长。甚至普通的清洁剂都可以轻易地杀灭这类菌株。即便由于操作不慎导致活菌从实验室流出，也不易导致生化危机。

生物工程用的菌株基因组都被优化过，使之带有不同基因型（例如β半乳糖苷酶缺陷型），可以更好的用于分子克隆实验。

真核基因在大肠杆菌中表达，必须有合适的表达载体(Vector),常用载体：pBV220,pET系统。

目的基因在大肠杆菌中表达的情况：

大肠杆菌更适合原核基因的表达，外源基因表达产量与单位体积产量是正相相关的，外源基因拷贝数和表达 产物产量之间存在动态平衡，单个细胞的产量又与外源基因拷贝数，基因表达效率，表达产物的稳定性和细胞代谢负荷等因素有关。

‘伍’ 大肠杆菌的检测方法有哪些

大肠杆菌的检测方法有以下几种：一、大便常规化验加大便潜血化验，如果化验结果提示有细菌感染，那么就需要完善大便培养加药敏试验，进一步明确感染细菌的类型和敏感抗生素类型，从而可以作为大肠杆菌的一种监测方法。二、肛门或者直肠内分泌物化验，也可以作为大肠杆菌这种细菌的一种监测手段。三、大肠杆菌还可以在其他部位出现，比如口腔、胃部、呼吸道等，如果在口腔，进行口腔内分泌物化验可以化验出大肠杆菌感染，如果在胃部，进行胃镜检查后病例组织活检可能检出大肠杆菌。如果是呼吸道，进行痰培养加药敏试验，可以化验出大肠杆菌。总之大肠杆菌的检测通常都是标本化验发现的。

‘陆’ 大肠杆菌群落测出为20L是什么意思

大肠杆菌检测方法分为三种：

1、细菌分离鉴定法

分离培养与鉴定：粪便标本直接接种肠道杆菌选择性培养基。血液先经肉汤增菌，然后转种血琼脂平板。其他标本同时接种血琼脂平板和肠道杆菌选择性培养基。

37℃孵育18～24小时后，观察菌落涂片染色镜检。肠致病性大肠杆菌须先作血清学定型试验。必要的时候检定肠霉毒素。

2、卫生细菌学检查法

大肠杆菌会不断随粪便排出体外，污染周围环境水源、食品等。取样检查时，样品中大肠杆菌越多，则表示样品被粪便污染的越严重，表明样品中存在肠道致病菌的可能性也就越大。

大肠菌数指数：指每立升中大肠菌群数，采用乳糖发酵法检测。中国卫生标准是每1000ml饮水中不得超过3个大肠菌群，瓶装汽水和果汁中每100ml大肠菌群不能超过5个。

3、全自动微生物定量分析仪（TEMPO）检测法

全自动微生物定量分析（TEMPO）仪大肠杆菌群计数检测有TEMPOTC和TEMPOCC两种方法。

TEMPOTC的开发是为获得NF ISO4832标准相当性能水平。

TEMPOCC法是TEMPO仪器上根据BAM方法专门用于24h计数食品中大肠杆菌群方法。

‘柒’ 求 滤膜法测大肠杆菌的方法

简单版：
取样，将这一定量的水通过滤膜，将膜铺在适宜大肠杆菌的培养基上，在适宜的环境下培养，得到的大肠杆菌菌落个数就是这些水中的菌体数，样品中的按比例放大就行了

专业版：
1. 消毒设备按照产品使用说明操作，待设备运转正常后，取水样进行消毒效果检验。消毒剂发生器按照产品使用说明书操作，待设备运转正常后，在出口处采集样品，按说明书规定的有效剂量稀释后，进行消毒效果检验。消毒剂按产品使用说明书稀释配制水样。2. 细菌加标操作程序(1) 在脱氯自来水中加入大肠杆菌，实验用菌种为大肠杆菌8099。加标量为>5×100-2×1000/100ml。(2) 将装有加标菌水样的三角烧瓶放入恒温水浴箱(20℃)中，开动磁力搅拌器5min，使细菌在水中分布均匀。先取2份细菌加标的水样，进行大肠杆菌活菌计数(阳性对照组)。(3) 待水温恒定后按说明书规定的最小剂量加入消毒剂，迅速搅拌均匀，从加入消毒剂起计时。设定3个工作时间，说明书规定的最短作用时间为T，3个作用时间分别为0.5T，T和1.5T，作用后分别吸取水样，注入装有中和剂(如硫代硫酸钠)无菌三角烧瓶中，以终止消毒作用。 对饮用水消毒处理器和消毒剂发生器应根据消毒产物的产生量及处理水最高流量进行加标采样。(4) 将中和的水样，分别取100ml、10ml、1ml各两份，用滤膜法进行大肠菌活菌计数。(5) 将未接种大肠杆菌的试验用同批培养基平板2个，置温箱中培养(阴性对照组)。试验重复三次。3. 上述试验同时，测定消毒成分和剂量，记录作用时间和水温。4. 结果评价消毒后水中大肠菌群指标应符合《生活饮用水水质卫生规范》规定5．√－ 必需测定项目 ； △ －如含有，需测定http://szbbs.soufun.com/2810026793~-1/23633781_23633781.htm

水中大肠菌群检验方法的改进
晁福环;芮期义;王新为;高明;欧阳川
<正> 水中细菌,包括致病菌与指标菌,因受自然条件或水处理过程的影响可以形成生理上存在缺陷,这些细菌称为损伤菌。损伤菌在适宜条件下仍可发育成正常菌落,可是直接暴露于含有抑制剂的选择性培养基时就不易生长。因此,现有远藤培养基滤膜法有可能使大肠菌检
【作者单位】：军事医学科学院卫生学环境医学研究所;军事医学科学院卫生学环境医学研究所;军事医学科学院卫生学环境医学研究所;军事医学科学院卫生学环境医学研究所;军事医学科学院卫生学环境医学研究所 300050 天津;300050 天津;300050 天津;300050 天津;300050 天津
【DOI】：cnki:ISSN:1004-8685.0.1991-01-021
【正文快照】：
水中细菌,包括致病菌与指标菌,因受自然条件或水处理过程的影响可以形成生理上存在缺陷,这些细菌称为损伤菌.损伤菌在适宜条件下仍可发育成正常菌落,可是直接暴露于含有抑制剂的选择性培养基时就不易生长.因此,现有远藤培养基滤膜法有可能使大肠菌检出菌数偏低,影响水质卫生学评价的准确性。为提高检出率,本文在水中大肠菌损伤状况及生长特点研究的基础上,对现用远膝培养基进行了改进研究. 一、天然水及经不同条件处理后水中大肠菌损伤状况见表l、2.裹l不同条件处理后水中大肠,抓伤状况实较条件翻伤和.。,卜飞,了气P侧价与脚脚日)‘t习分钟…
http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-ZWJZ199101021.htm

1 材料 呋喃唑酮片（地产及市售，规格0．10g／片），混合纤维素酯微孔滤膜，孔径规格0．45μm、1．2μm、3．0μm，大肠杆菌CMCC（B）〔4〕、胆盐乳糖增菌液（BL）、伊红美蓝琼脂（EMB）及大肠杆菌生化反应用培养基均由中国药品生物制品检定所提供。

2 方法和结果 供试液先经离心，取上清液依次经过孔径为1．2μm或3．0μm的微孔滤膜和0．45μm的微孔滤膜过滤后取0．45μm的滤膜加入BL中增菌。
2．1 由于呋喃唑酮几乎不溶于水，故选用一次离心法、二次离心法和离心-滤膜法〔1，2〕以及离心-双重滤膜法进行方法比较，结果表明只有离心-双重滤膜结合法能确保阳性菌的检出。

表1 不同方法阳性菌的检出试验结果

方法 BL增菌48h EMB平板分离 大肠杆菌
检出结果
一次离心法 微混 未长菌落 未检出
二次离心法 澄清 未长菌落 未检出
离心-滤膜法 澄清 未长菌落 未检出
离心-双重滤膜法 混浊、产气 典型的大肠
杆菌菌落 检出

2．2 人工污染呋喃唑酮片大肠杆菌的检出情况 选用8批样品加入大肠杆菌进行人工污染5d后，采用离心-双重滤膜法进行检验，结果表明8批均能检出。
表2 人工污染大肠杆菌的阳性检出情况

药品
批次 BL增菌
48h EMB
平板分离 大肠杆菌
检出结果 检出率
％
8批 8批出现混
浊、产气 8批呈典型菌落 8批检出 100

注：上述EMB平板分离的典型菌落均经生化反应确认检出大肠杆菌
3 讨论

3．1 虽然呋喃唑酮在水中的溶解仅达40mg／L〔3〕，但由于呋喃唑酮在BL增菌液中的最低抑菌浓度即MIC为0．01mg／L〔4〕，采用一次离心、二次离心法均未能使BL增菌液中的浓度低于0．01mg／L，采用2次离心-滤膜法，则由于供试液经孔径0．45μm滤膜过滤时残留呋喃唑酮，当加入BL增菌液后，呋喃唑酮的浓度仍高于MIC，因此大肠杆菌仍无法繁殖，而本文采用的离心-双重滤膜法，既能除去水中溶解的微量呋喃唑酮，又能把离心后上清液残留的呋喃唑酮截留在孔径1．2μm或3．0μm的滤膜上，最大程度地降低孔径0．45μm滤膜上的呋喃唑酮，也降低了BL增菌液中的呋喃唑酮浓度，所以大大提高了阳性检出率。
3．2 人工污染大肠杆菌5d仍能检出，说明离心-双重滤膜法检验过程中不影响大肠杆菌在BL增菌液中的繁殖，能有效地保证样品的阳性检出率。
3．3 离心-双重滤膜法能在很大程度上解决难溶于水的抗菌剂在BL增菌液中的浓度，故对今后开展口服抗生素控制菌的检验具有较高的参考意义。
3．4 因埃希氏杆菌属的菌体，直径为0．4～0．7μm，长度为1．0～3．0μm，笔者认为采用3．0μm孔径的滤膜比1．2μm的滤膜可使实际检验效果更佳。同时，笔者也认为选择何种规格的滤膜可因样品而异，这方面还有待进一步深入探讨。http://www.wanfangdata.com.cn/qikan/periodical.articles/haixyx/haix99/haix9903/990393.htm

‘捌’ 大肠杆菌的检测方法

大肠菌群测定的操作细则
大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。
食品中大肠菌群数系以100mL(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。
1
设备和材料
1.1
温箱：36±1℃。
1.2
冰箱:0～4℃。
1.3
恒温水浴
:44.5±0.5℃。
1.4
天平。
1.5
显微镜。
1.6
均质器或乳钵。
1.7
平皿:直径为90mm。
1.8
试管。
1.9
吸管。
1.10
广口瓶或三角烧瓶:容量为500mL。
1.11
玻璃珠:直径约5mm。
1.12
载玻片。
1.13
酒精灯。
1.14
试管架。
2
培养基和试剂
2.1
乳糖胆盐发酵管:按GB
4789.28中4.9规定。
2.2
伊红美蓝琼脂平板:按GB
4789.28中4.25规定。
2.3
乳糖发酵管:按GB
4789.28中4.10规定。
2.4
EC
肉汤:按GB
4789.28中4.11规定。
2.5
磷酸盐缓冲稀释液:按GB
4789.28中3.22规定。
2.6
生理盐水。
2.7
革兰氏染色液:按GB
4789.28中2.2规定。
3
操作步骤
3.1
检样稀释
3.1.1
以无菌操作将检样25mL(或g)放于有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。固体检样最好用均质器,以8
000-10
000
r/min的速度处理1min,做成1:10的均匀稀释液。
3.1.2
用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内,振摇试管混匀,做成1:100的稀释液。
3.1.3
另取1mL灭菌吸管,按上条操作依次做10倍递增稀释液,每递增稀释一次,换用1支1mL灭菌吸管。
3.1.4
根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择三个稀释度,每个稀释度,接种3管。
3.2
乳糖发酵试验
将待检样品接种于乳糖
胆盐发酵管内,接种量在1mL以上者,用双料乳糖胆盐发酵管,1mL及1mL以下者,用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管,置36±1℃
温箱内,培养24±2h,如所有乳糖胆盐发酵管都不产气,则可报告为大肠菌群阴性,如有产气者,则按下列程序进行。
3.3
分离培养
将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上,置36±1℃
温箱内,培养18-24h,然后取出,观察菌落形态,并做革兰氏染色和证实试验。
3.4
证实试验
在上述平板上,挑取可疑大肠菌群菌落1-2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,置
36±1℃温箱内培养24±2h,观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌,即可报告为大肠菌群阳性。
3.5
报告
根据证实为大肠菌群阳性的管数,查MPN检索表,报告每100mL(g)大肠菌群的MPN值。
4
粪大肠菌群(faecal
coliform)
4.1
用接种环将所有产气的乳糖胆盐发酵管培养物(见3.2条)转种于EC肉汤管内,置44.5±0.2℃水浴箱内(水浴箱内的水面应高于EC肉汤液面),培养24±2h,经培养后,如所有EC肉汤管均不产气,则可报告为阴性;如有产气者,则将所有产气的EC肉汤管分别转种于伊红美蓝琼脂平板上,置
培养18-24h,凡平板上有典型菌落者,则证实为粪大肠菌群阳性。
4.2
结果报告
根据证实为粪大肠菌群的阳性管数,查MPN检索表,报告每100mL(g)粪大肠菌群的MPN值。

‘玖’ 怎么检验饮料中的大肠杆菌

大肠杆菌检验（包括(一)检验方法；(二)培养基 ）

(一)检验方法
1．乳糖发酵试验。以无菌操作采取样品，采取量及稀释倍数，依据国家或当地卫生标准要求及样品污染情况而定。将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在l m J以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，lm1及1mI以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管，置36±l℃温箱内，培养24±2小时，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性；如有产气者，则按下列程序进行。
2．分离培养。将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36±l℃温箱内，培养18～24小时，然后取出，观察菌落形态，并作革兰氏染色和证实试验。
3．证实试验。在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落l～2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36±1℃ 温箱内培养24±2小时，观察产气情况。凡乳糖管产气，革
兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。
4．报告。根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每l 00ml(g)大肠菌群的最可能数。
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(二)培养基

①乳糖胆盐发酵培基

成分：蛋白胨：20g
猪胆盐(或牛，羊胆盐)：5g
乳糖:10g
0．04％溴甲酚紫水溶液: 25m1
蒸馏水: 1 000m1
制法：将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，分装每管l 0ml，并放入一个小倒管，高压灭菌115℃15分钟。
附注：双料乳糖胆盐发酵培基除蒸馏水外，其他成分加倍。
用途：乳糖发酵试验用。
原理：细菌分解糖类是依靠细菌细胞所产生的各种酶类的作用，细菌产生的分解糖类的酶，随细菌种类不同而异，可以此来鉴别细菌。
乳糖是双糖，细菌分解双糖的酶大多是胞外酶。乳糖被乳糖酶水解成葡萄糖和半乳糖，葡萄糖可直接被细菌利用，而半乳糖则需在细胞内转化为葡萄糖后再被利用。
糖发酵试验主要是测定细菌分解糖类以后所产生的酸，以培基pH降低(指示剂变色)作为观察结果的指标。
大肠杆菌等细菌在酸性环境中，由于甲酸脱氢酶的作用，可使甲酸分解成CO2和H2，在培基中产生大量气体，进入倒管中，以便观察。
注：常用于供发酵试验的各种糖类、醇类和糖苷类(见表3-1)

②伊红美蓝琼脂培基
成分：蛋白胨 10g
乳糖 10g
磷酸氢二钾 2g
琼脂 17g
2％伊红Y溶液 20ml
0．65％美蓝溶液 10ml
蒸馏水 1000ml
pH7.1
制法：将蛋l白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正pH，分装于烧瓶内，高压灭菌121℃15分钟备用。临用时加入乳糖，并加热溶化琼脂，冷至50一55℃，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。
原理：大肠菌群细菌发酵乳糖产酸，使伊红与美蓝结合而成黑色化合物，故菌落呈黑紫色，有时还可产生金属光泽。黑色程度与光泽产生情况与伊红、美蓝二者比倒有关。不发酵乳糖的细菌(如沙门氏菌、志贺氏菌)则为无色菌落。

③乳糖发酵培基
成分：蛋白胨 20g
乳糖 10g
O．04％溴甲酚紫水溶液 25ml
蒸馏水 1000ml
pH7．4
制法：将蛋白胨及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，按检验要求分装30ml、10ml或3ml，并放入一个小倒管，高压灭菌115℃15分钟。
附注： ’
(1)双料乳糖发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍。
(2)30ml和10ml乳糖发酵管专供酱油及酱类检验用．3ml乳糖发酵管供大肠菌群
证实试验用。
4．蛋白胨水
成分：蛋白胨(或胰蛋白胨) 20g
氯化钠 5g
蒸馏水 1 000ml pH7．4