㈠ 核酸检测方法有几种
核酸定量常用方法如下:
①
光吸收法:核酸中碱基共轭结构在近紫外光波长260nm处有最大吸收,吸收强度与核酸浓度成正比,因此可以用于核酸定量。
②
定P法:核酸中P含量约为9.5%,因此可以通过测定样品中的有机P量来进行核酸定量。
㈡ 核酸检验方法
核酸检测具体流程如下:
1. 核酸提取
使用硅胶柱离心、磁性硅胶颗粒分离方法以及自动化仪器等商品化试剂或设备并按说明书操作。提取RNA时应注意防止RNA降解。DNA应置于-20℃保存,RNA和需长期保存的DNA应置于-80℃保存。
2. 逆转录合成cDNA
逆转录cDNA合成反应需使用逆转录引物、dNTPs、逆转录酶、RNA酶抑制剂、DTT、缓冲液和适量无RNA/DNA酶的超纯水以及RNA模板。在扩增仪或水浴箱中,在规定的温度和时间下进行逆转录反应。建议使用商品化RT-PCR一步法试剂进行第一轮扩增反应。逆转录cDNA合成反应需使用逆转录引物、dNTPs、逆转录酶、RNA酶抑制剂、DTT、缓冲液和适量无RNA/DNA酶的超纯水以及RNA模板。在扩增仪或水浴箱中,在规定的温度和时间下进行逆转录反应。使用商品化RT-PCR一步法试剂进行第一轮扩增反应。
3. PCR扩增反应(使用二次扩增的套式PCR扩增方法)
PCR反应需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶(如Taq酶等)、缓冲液、和适量无RNA/DNA酶超纯水、以及模板(DNA或cDNA)。在扩增仪中,按照设定的程序进行扩增。使用二次扩增的套式PCR扩增方法。
4. 扩增产物定性分析
扩增产物常用分析方法是琼脂糖凝胶电泳法,与分子量标准比较,判断扩增片段是否在预期的分子量范围内。其它扩增产物分析方法还有限制性内切酶酶切分析、特异性探针杂交分析以及DNA序列分析等。自动化核酸扩增仪使用酶联比色分析或荧光探针杂交等原理测定。
5.结果判定和完成报告单
(1)实验成立的条件:每一次检测需同时做两个阳性对照、两个阴性对照,只有阳性对照扩增出预期的片段、阴性对照没有扩增出任何片段、双份平行样品结果一致的情况下实验才成立,可以作出核酸阳性或阴性反应结果的判定。
(2)HIV核酸检测阳性:发现核酸阳性反应,应该重复采集样品进行复测,复测结果呈核酸阳性反应则判定为核酸阳性,复测结果为核酸阴性反应则判为不确定结果,需进一步随访检测。
(3)HIV核酸检测阴性:只可报告本次实验结果阴性。
(4)应在完成检测后5个工作日内发出检测报告。
㈢ 现在核酸检测都有什么方法
通过呼吸道或口腔内的痰液做检测
㈣ 核酸检测方法有哪些
核酸的检测,每个病例必须采集急性期呼吸道标本,包括上呼吸道标本或下呼吸道标本,重症病例优先采集下呼吸道标本,如支气管或肺泡灌洗液等。出现眼部症状的病例,需采集眼结膜拭子标本,出现腹泻症状的病例需留取便标本,可根据临床表现与采集时间间隔进行采集。标本的类别有上呼吸道标本,包括咽拭子,鼻拭子,鼻咽抽取物等。下呼吸道标本,包括深咳痰液,呼吸道抽取物,支气管肺泡灌洗,肺泡灌洗液,肺组织活检标本。血液标本需要采取发病后7天内的急性期抗凝血,血清标本应尽量采集急性期、恢复期双份血清,第1份血清应尽早在发病后7天内采集,第2份血清应在发病后3~4周采集。
㈤ 核酸检测方法
核酸检测采用咽拭子检测,有口咽拭子采样和鼻咽拭子采样两种方式。
口咽拭子采样就是在咽喉部位用棉签涂擦,刷取咽喉部位上皮细胞的检测。受检测者只要放松心情,张口发出“啊——”的声音就可以了,检测过程并没有创伤风险,是非常安全的检测。
检测时可能会有恶心、想要呕吐的不适感觉,不过这些不适症状通常只需要半分钟到两分钟左右就可以完全缓解了。鼻咽拭子采样是将一根细棉签深入鼻孔,从下鼻道深入抵达鼻咽后壁,然后捻转棉签取样。棉签进入鼻腔的深度约为鼻尖到耳垂的距离。
(5)房间核酸检测方法扩展阅读:
核酸检测相关知识:
核酸检测是检测病毒的方法,它可以更早发现感染。现在临床中对乙肝、丙肝、艾滋病都开展了核酸检测,可以在抗体产生前检测到血液中是否存在病毒。而一些呼吸道疾病可以通过咽拭子或者呼吸道分泌物的核酸检测来判断是否感染,以及推测是否具有传染性。
季节性流感、禽流感、冠状病毒感染等通过咽拭子检测可以方便地判断出上呼吸道是否存在病毒成份,从而判断被检测者是否属于感染者。
新冠病毒的核酸检测已经是比较成熟的检测方法了,只要在咽喉部位擦拭几秒钟就可以采集到标本。通过分析判断是否有新冠病毒的核酸成分,可以尽早发现感染者,甚至在感染者出现症状前就可以检测到阳性。
感染者经过隔离治疗后咽拭子检测阴性说明病毒已经清除,不具有传染性了。目前两次咽拭子核酸检测阴性是确诊病例和无症状感染者解除隔离的标准之一。
㈥ 核酸检测有哪些方法
新冠病毒核酸检测怎么做?
新型冠状病毒肺炎疫情期间,大家在做好个人防护的同时,对于疫情动态也十分关注。原本冬春交际时节就是普通感冒和流感高发的时间段,而控制疫情最重要的手段,就是从众多呼吸道患者中筛选出真正的新冠肺炎患者。那么,新冠肺炎是怎么诊断的呢?
新冠肺炎怎么诊断?
首先,新冠肺炎患者通常是有症状的,尽管有一些患者的症状很轻微。做了血常规以及胸部影像学检查,就可以提示是否有新冠病毒肺炎的可能性。当然,新冠肺炎的确诊还是要靠新冠病毒核酸的检测。不久之后还可能出现血液抗体的检测,以帮助确诊新冠肺炎。
新冠病毒核酸检测怎么做?
新型冠状病毒的核酸检测的取样方法既不需要开刀也不需要打针,只要“轻轻一抹”。
到了发热门诊或者是相应的检查室,医生会让病人张开嘴,用一个像棉签一样的拭子去擦拭扁桃体和咽隐窝附近的分泌物,也可以通过鼻腔取鼻咽后部的分泌物,然后放到试管里面,再交给检验科去做相应的病毒核酸的检查。
X光胸片是否能作为新冠肺炎的诊断手段呢?
其实X光胸片也是可以提示新冠病毒肺炎的。随着积累的病例的总结,可以发现新冠病毒肺炎在胸片上面的影像很淡薄,分布是周边的。因此在分布较好的胸片上也是可以看到的。
对于新冠肺炎最好、最敏感的影像学检查手段就是胸部CT。在胸部CT每个扫描后的层面,可以看到胸片看不到的某些角度以及更淡薄的影子,这样就可以早期提示患者可能患有病毒性肺炎。一旦出现这些特征,就要结合核酸的检测,对病人进行新冠病毒肺炎的确诊。
查血能否确诊新型冠状病毒肺炎呢?
有研究证明,新型冠状病毒肺炎患者的血液中查到病毒的核酸的比例较少,只有15%到20%。机体对新冠病毒入侵后,机体会产生特异性抗体,新冠病毒抗体IgM、IgG是可以在血液中检测到的。但是,病人感染新型冠状病毒后5天后才会先出现IgM,随后才会出现IgG。
目前,我们国家的科研人员做了大量的工作。对于新冠病毒血液检测的方面,现在我国的科研人员也在集中精力,加快提高检测的技术的优化,以提高它的特异性和敏感性。
㈦ 核酸检测的方式有几种
核酸定量常用方法如下:
1、光吸收法:核酸中碱基共轭结构在近紫外光波长260纳米处有最大吸收,吸收强度与核酸浓度成正比,因此可以用于核酸定量。
2、定P法:核酸中P含量约为0.095,因此可以通过测定样品中的有机P量来进行核酸定量。核酸简介:核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物,为生命的最基本物质之一。核酸广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内,生物体内的核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。不同的核酸,其化学组成、核苷酸排列顺序等不同。根据化学组成不同,核酸可分为核糖核酸和脱氧核糖核酸。DNA是储存、复制和传递遗传信息的主要物质基础。RNA在蛋白质合成过程中起着重要作用,其中转运核糖核酸,简称tRNA,起着携带和转移活化氨基酸的作用;信使核糖核酸,简称mRNA,是合成蛋白质的模板;核糖体的核糖核酸,简称rRNA,是细胞合成蛋白质的主要场所。
㈧ 做核酸检测的正确方法
5月11日,武汉市新冠肺炎疫情防控指挥部涉疫大数据与流行病学调查组印发紧急通知,决定以10天为期,在武汉市范围内开展全员新冠病毒核酸筛查。而在全国各地也有一些朋友好奇,核酸检测到底检测哪个部位?鼻咽拭子和口咽拭子有何不同?做核酸检测时有哪些注意事项?
首都医科大学附属北京地坛医院感染中核酸检测标本可以采集深部痰液、鼻咽拭子和口咽拭子。其中口咽拭子和鼻咽拭子统称为咽拭子,经口的为口咽拭子,经鼻的就是鼻咽拭子。
口咽拭子
鼻咽拭子
做核酸检测时,我们需要注意什么呢?
在做核酸检测前2小时尽量避免进食,以免引起呕吐;
采样前30分钟不应吸烟、喝酒、咀嚼口香糖等;
检测者需要正确佩戴口罩,检测前取下口罩,检测后立即戴好,可准备一个备用口罩,污染后方便及时更换;
在采集鼻咽拭子前检测者应告知采集人员是否鼻中隔弯曲及鼻腔手术史,过程中可能出现鼻部酸痒感,刺激打喷嚏,可立即用纸巾或手肘遮挡;
鼻咽拭子采集后可能出现少量鼻腔出血,一般不需要特殊处理,如出血量较多请及时到医院进行处理;
在采集口咽拭子时检测者头后仰,张口发出“啊”音,有助于暴露咽喉,但过程中会出现刺激性干咳、恶心、呕吐等症状,检测者可配合采集人员尽量放松、深呼吸;
核酸检测前后都需要注意手部卫生,可使用免洗手消毒液或免洗酒精擦拭双手。
血清抗体检测不受饮食影响 无需空腹
一般感染新冠病毒7-10天后,人体会产生针对病毒的特异性抗体。最先出现的是IgM抗体,随后会出现IgG抗体,所以检测这些特异性抗体,可以判断人体是否感染过病毒,而检测方法就是血清抗体检测。
血清抗体需要抽取检测者2-4mL的静脉血液进行检测,检测结果不受饮食和药物影响,因此检测前不需要空腹。
为落实好新冠肺炎疫情常态化防控,全国各地陆续公布“核酸检测机构名单”,推动重点人群“应检尽检”、其他人群“愿检尽检”。目前国家卫生健康委推出“核酸检测机构查询”服务,在国务院客户端上线,目前已有北京、天津、河北、辽宁、黑龙江、上海、江苏、安徽、福建、山东、河南、湖北、湖南、广东、广西、海南、四川、贵州、云南、宁夏、新疆生产建设兵团上传的1226家检测机构。
㈨ 核酸检测方法有哪些
核酸检测采用咽拭子检测,有口咽拭子采样和鼻咽拭子采样两种方式。
口咽拭子采样就是在咽喉部位用棉签涂擦,刷取咽喉部位上皮细胞的检测。受检测者只要放松心情,张口发出“啊——”的声音就可以了,检测过程并没有创伤风险,是非常安全的检测。
检测时可能会有恶心、想要呕吐的不适感觉,不过这些不适症状通常只需要半分钟到两分钟左右就可以完全缓解了。鼻咽拭子采样是将一根细棉签深入鼻孔,从下鼻道深入抵达鼻咽后壁,然后捻转棉签取样。棉签进入鼻腔的深度约为鼻尖到耳垂的距离。
(9)房间核酸检测方法扩展阅读:
核酸检测相关知识:
核酸检测是检测病毒的方法,它可以更早发现感染。现在临床中对乙肝、丙肝、艾滋病都开展了核酸检测,可以在抗体产生前检测到血液中是否存在病毒。而一些呼吸道疾病可以通过咽拭子或者呼吸道分泌物的核酸检测来判断是否感染,以及推测是否具有传染性。
季节性流感、禽流感、冠状病毒感染等通过咽拭子检测可以方便地判断出上呼吸道是否存在病毒成份,从而判断被检测者是否属于感染者。
新冠病毒的核酸检测已经是比较成熟的检测方法了,只要在咽喉部位擦拭几秒钟就可以采集到标本。通过分析判断是否有新冠病毒的核酸成分,可以尽早发现感染者,甚至在感染者出现症状前就可以检测到阳性。
感染者经过隔离治疗后咽拭子检测阴性说明病毒已经清除,不具有传染性了。目前两次咽拭子核酸检测阴性是确诊病例和无症状感染者解除隔离的标准之一。
㈩ 核酸检测的方式都有什么
核酸检测主要有酸检测试剂、抗体检测两种方法,第一种方法通常是通过咽拭子进行PCR检测,基因扩增,然后再进行核酸检测。 而抗体检测是选择抽血,抽血的方法得出结果看,观察其抗体滴度是否升高,这种情况常常是指在抽血前常出现不能产生抗体的情况。
核酸检测是一种“进行时”检测,通过聚合酶链反应等方法检测病毒基因组中特定的核酸序列,从而判断被检测者此刻是否感染了病毒。
与核酸检测不同,新冠病毒抗体检测显示的是哪些人曾经被感染。抗体检测又被称为血清学检测,目的是检测血液样本中的抗体。人体感染病毒后,会产生IgM或IgG抗体。
被感染初期,人体会迅速产生IgM抗体,以抗感染;相比之下,产生IgG抗体的速度更慢,但IgG抗体保留时间更长。抗体检测就是检测血清中是否有这些特异性抗体,以确定被测试者是否曾被感染。
(10)房间核酸检测方法扩展阅读:
六种人不宜做核酸检测
一、釆样前30分钟,对于有吸烟、喝酒、嚼口香糖等人群不宜做核酸检测,以免影响检测的准确度。
二、进食太饱的人不宜做核酸检测,否则容易发生恶心呕吐,影响采用结果的准确性。
三、核酸检测前有口服抗病毒和抗感染的药物的,应推迟做核酸检测,避免影响检测结果。
四、若是进行鼻拭子采样的话,对于鼻咽部有病症的急性期,如出血、水肿等人群可以暂不予检测。
五、刚进行核酸检测时出现恶心呕吐的人,应暂缓做核酸检测,需等检测者缓解后再予以进行。
六、被采样者用手或其他物品触及拭子采样冠、棉签的前端的不宜进行,否则容易造成污染,影响检测结果,需更换进行重做。