‘壹’ 细胞传代后不贴壁了，成团浮在培养基里，怎么办
看下培养液颜色，是不是要更换培养液了，做下活性检测，看是不是有污染，细胞是不是死了。细胞和人一样，环境不舒服的时候就会表现出来的，养细胞是个细心活，慢慢来
‘贰’ 细胞复苏后贴壁细胞较少怎么办
1、你冻存的时候是不是消化的时间过长，这是一般人所注意不到的，即使书上也不讲这个问题，但我因为这个问题就两种肺癌细胞和一种肝癌细胞专门做过试验，这个绝对是绝大部分人细胞复不活的一个原因。太长的消化时间会让细胞复苏时失去贴壁能力，表现为先贴后死，原因是在你复苏的时候细胞已进入凋亡程序，不可逆转的死亡。
2、你的冻存液好不好，是什么，甘油还是DMSO，质量非常重要，否则也会死亡。
3、你的冻存液的量加的是不是太多，ATCC推荐是不超过7%，大于5%，太多也不好。
4、你在冻存的时候是不是把DMSO混均匀，这个有一些影响，但不算太大。
5、你的冻存是否按部就班，就是所温度梯度是不是把握严格，很多人容易忘却这个事情，因为这个东西流程长。
生物帮上面有详细的介绍方法。干细胞信号通路 http://doc.bio1000.com/show-3137.html
‘叁’ 细胞贴壁状体啊不理想
解决方案如下：
1.如果你手上这支细胞已经传代次数很多的话，建议复苏一支新的细胞，这是最直接的方法
2.检查培养基、胰酶、pbs中是否有污染
3.如果只有手头上的细胞，那么检测一下是否有支原体或者病毒感染，黑胶虫实际是一种细胞残留的胶质成分并不是一种污染源但是视野中会有黑色点状物好像悬浮细胞但略小，注意区别
4.贴壁不佳可以在传代或复苏前选用包被液包被培养瓶，增加细胞贴壁性，一般用多聚赖氨酸包被，效果很好，可以一试
5.有时候细胞分裂是贴壁-悬浮-分裂-再贴壁的一个过程，悬浮细胞不一定都是死细胞，可能是正在分裂的细胞，一般来说贴壁好的细胞换液一次总会有大概5-15%再次悬浮，少量的话不必过分担心
补充你的问题：观察消化时间是以你的细胞在加入胰酶后变圆开始到细胞间连接消失细胞脱落为消化完成，消化时间过短镜下观察可能会有贴壁残留，消化过久会损伤细胞导致状态不佳，建议两步法消化，效率比较高，吹打以吹散细胞为目的不必太过用力，其实吹打对细胞的损伤相比胰酶是很小的，稍加注意即可
‘肆’ 细胞实验中培养细胞不贴壁有哪些原因
答：
支原体污染.
培养瓶瓶底不干净.
培养液pH
值过碱（NaHCO3
分解）.
消化液或培养液配制错误、过期储存、储存不当.
细胞老化（如传代前细胞已汇合导致失去贴附性）.
接种细胞起始浓度太低或太高.
建议解决方法：
缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度.
分离培养物,检测支原体.清洁支架和培养箱.如发
现支原体污染,丢弃培养物.
注意刷洗,或换用一次性塑料培养瓶.
使用无菌醋酸溶液调整pH
值或充入无菌CO2（将培
养液敞口放入培养箱也可）.
重新配置消化液或培养液.
启用新的保种细胞.
调节最佳接种细胞浓度.
南昌中洪博元技术部
‘伍’ 培养细胞不贴壁可能是什么原因应怎样处理 详细
②支原体污染。 ③培养瓶瓶底不干净。 ④培养液pH 值过碱（NaHCO3 分解）。 ⑤消化液或培养液配制错误、过期储存、储存不当。 ⑥细胞老化（如传代前细胞已汇合导致失去贴附性）。 ⑦接种细胞起始浓度太低或太高。 建议解决方法： ①缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度。 ②分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发 现支原体污染，丢弃培养物。 ③注意刷洗，或换用一次性塑料培养瓶。 ④使用无菌醋酸溶液调整pH 值或充入无菌CO2（将培 养液敞口放入培养箱也可）。 ⑤重新配置消化液或培养液。 ⑥启用新的保种细胞。 ⑦调节最佳接种细胞浓度。
‘陆’ 培养细胞不贴壁可能是什么原因应怎样处理
培养细胞不贴壁的原因可能如下：
1.支原体污染.
2.培养瓶瓶底不干净.
3.培养液pH 值过碱（NaHCO3 分解）.
4.消化液或培养液配制错误、过期储存、储存不当.
5.细胞老化（如传代前细胞已汇合导致失去贴附性）.
6.接种细胞起始浓度太低或太高.
建议解决方法：
1.缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度.
2.分离培养物,检测支原体.清洁支架和培养箱.如发现支原体污染,丢弃培养物.
3.注意刷洗,或换用一次性塑料培养瓶.
4.使用无菌醋酸溶液调整pH 值或充入无菌CO2（将培养液敞口放入培养箱也可）.
5.重新配置消化液或培养液.
6.启用新的保种细胞.
7.调节最佳接种细胞浓度.
‘柒’ 如何使原代细胞更好的贴壁
大多数原代贴壁细胞贴壁时间是6h到12h，细胞不贴壁有好多种原因的：
1、如果你用玻璃培养瓶培养的话，有可能你的瓶子没处理好；建议你用一次性培养瓶，进口的都可以。
2、一般做原代细胞贴壁培养用胰酶消化，消化的程度要掌握好，如果消化时间不到、分散不均匀不贴壁。一般消化有热消化，就是放在37度里消化，时间比较短不好控制，传代培养常用。还有就是冷消化放在4度里，一般在几个小时以上，胰酶浓度也有要求的，一般都用0.125－0.25％之间。ph在7.6左右。
3、还有就是天然培养基的选择，就是血清种类，血清能够使细胞贴壁，并且提供细胞生长的重要营养成分。
‘捌’ 培养细胞不贴壁可能是什么原因应怎样处理
②支原体污染.
③培养瓶瓶底不干净.
④培养液pH 值过碱（NaHCO3 分解）.
⑤消化液或培养液配制错误、过期储存、储存不当.
⑥细胞老化（如传代前细胞已汇合导致失去贴附性）.
⑦接种细胞起始浓度太低或太高.
建议解决方法：
①缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度.
②分离培养物,检测支原体.清洁支架和培养箱.如发
现支原体污染,丢弃培养物.
③注意刷洗,或换用一次性塑料培养瓶.
④使用无菌醋酸溶液调整pH 值或充入无菌CO2（将培
养液敞口放入培养箱也可）.
⑤重新配置消化液或培养液.
⑥启用新的保种细胞.
⑦调节最佳接种细胞浓度.