⑴ gus染色原理
这是由其初始产物经氧化二聚作用形成的靛蓝染料,它使具Gus活性的部位或位点呈现蓝色,用肉眼或在显微镜下可看到,且在一定程度下根据染色深浅可反映出Gus活性。
因此利用该方法可观察到外源基因在特定器官、组织,甚至单个细胞内的表达情况。
根据gus基因检测所用的底物不同,可以选择三种检测方法:组织化学法、分光光度法和荧光法(灵感度为分光光度检测法最高)。其中最为常用的是组织化学法。
(1)可用于葡萄糖苷化学检测的方法是扩展阅读
gus基因存在于E.coli等一些细菌基因组内,编码β-葡萄糖苷酸酶。β-葡萄糖苷酸酶是一个水解酶,以β-葡萄糖苷酸酯类物质为底物,其反应产物可用多种方法检测出来。
由于绝大多数植物没有检测到葡萄糖苷酸酶的背景活性,因此这个基因被广泛应用于基因调控的研究中。其中组织化学法检测以5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸(X-Gluc)作为反应底物,将被检材料用含有底物的缓冲液浸泡。若组织细胞发生了gus基因的转化,并表达出Gus,在适宜的条件下,该酶就可将X-Gluc水解生成蓝色产物。
⑵ 如何鉴别葡萄糖、果糖、甲基葡萄糖苷
一、沸点不同
1、葡萄糖:沸点为527.1 ℃。
2、果糖:沸点为551.7 ℃。
3、甲基葡萄糖苷:沸点为200 ºC (0.2 MMHG)。
二、 熔点不同
1、葡萄糖:熔点为146ºC。
2、果糖:熔点为103 至 105 ℃(分解)。
3、甲基葡萄糖苷:熔点为169-171 º;C。
三、特点不同
1、葡萄糖:葡萄糖在生物学领域具有重要地位,是活细胞的能量来源和新陈代谢中间产物,即生物的主要供能物质。植物可通过光合作用产生葡萄糖,在糖果制造业和医药领域有着广泛应用。
2、果糖:以游离状态大量存在于水果的浆汁和蜂蜜中,果糖还能与葡萄糖结合生成蔗糖。
3、甲基葡萄糖苷:是一种高效的增稠剂且它性质温和、对眼睛无刺激,在与其他表面活性剂(如月桂醇硫酸钠等) 配伍时,可以明显降低对眼睛的刺激性;它与其他原料有良好的协同性。
⑶ 用化学方法鉴别 半乳糖 果糖 葡萄糖甲苷 最简单的方法是
三种物质中分别加入硝酸银的氨水溶液,不反应的是葡萄糖甲苷,而半乳糖和果糖会产生金属银沉积于玻璃反应器皿壁上。
在剩余两种物质中分别加入溴水溶液,因半乳糖含有醛基,能使溴水褪色,与溴水反应生成相应的糖酸。而果糖是酮糖,在酸性条件下不能被溴水氧化,所以不能使溴水褪色。
(3)可用于葡萄糖苷化学检测的方法是扩展阅读
会使溴水褪色的的物质有:
1、烯烃、炔烃、二烯烃等不饱和烃类及其不饱和烃的衍生物反应,使溴水褪色。如:CH₂=CH₂+Br₂→CH₂Br-CH₂Br。
2、与苯酚反应生成白色沉淀。
3、与醛类等有醛基的物质反应,使溴水褪色。
4、因萃取作用使溴水褪色,有机溶剂溶解溴呈橙色(或棕红色)。
(1)密度大于1的溶剂(四氯化碳、氯仿、溴苯、二硫化碳等);
(2)密度小于1的溶剂(液态的饱和烃、直馏汽油、苯及其同系物、液态环烷烃、液态饱和酯)。
5、与碱性溶液(如NaOH溶液、Na₂CO₃溶液等)反应,使溴水褪色。
6、与较强的无机还原剂(如H₂S、SO₂、KI和FeSO₄等)发生反应,使溴水褪色。
⑷ 用化学方法鉴别 半乳糖 果糖 葡萄糖甲苷 最简单的方法是
三种物质中分别加入硝酸银的氨水溶液,不反应的是葡萄糖甲苷,而半乳糖和果糖会产生金属银沉积于玻璃反应器皿壁上。
在剩余两种物质中分别加入溴水溶液,因半乳糖含有醛基,能使溴水褪色,与溴水反应生成相应的糖酸。而果糖是酮糖,在酸性条件下不能被溴水氧化,所以不能使溴水褪色。
(4)可用于葡萄糖苷化学检测的方法是扩展阅读
会使溴水褪色的的物质有:
1、烯烃、炔烃、二烯烃等不饱和烃类及其不饱和烃的衍生物反应,使溴水褪色。如:CH₂=CH₂+Br₂→CH₂Br-CH₂Br。
2、与苯酚反应生成白色沉淀。
3、与醛类等有醛基的物质反应,使溴水褪色。
4、因萃取作用使溴水褪色,有机溶剂溶解溴呈橙色(或棕红色)。
(1)密度大于1的溶剂(四氯化碳、氯仿、溴苯、二硫化碳等);
(2)密度小于1的溶剂(液态的饱和烃、直馏汽油、苯及其同系物、液态环烷烃、液态饱和酯)。
5、与碱性溶液(如NaOH溶液、Na₂CO₃溶液等)反应,使溴水褪色。
6、与较强的无机还原剂(如H₂S、SO₂、KI和FeSO₄等)发生反应,使溴水褪色。
⑸ 用化学方法如何鉴别葡萄糖和蔗糖
葡萄糖是醛糖,可被溴水氧化。蔗糖中不含醛基,含的是酮基,不能使银氨溶液或新制的氢氧化铜产生银镜或砖红色沉淀。
葡萄糖的银镜反应:先制备银氨溶液,再滴入一滴管的葡萄糖溶液,振荡后把试管放在热水中温热。不久可以看到,试管被加热区内壁上附着一层光亮如镜的金属银。
银镜反应是银(Ag)化合物的溶液被还原为金属银的化学反应,由于生成的金属银附着在容器内壁上,光亮如镜,故称为银镜反应。
(5)可用于葡萄糖苷化学检测的方法是扩展阅读:
常见的银镜反应是银氨络合物(氨银配合物,又称托伦试剂)被醛类化合物还原为银,而醛被氧化为相应的羧酸根离子的反应,不过除此之外,某些银化合物(如硝酸银)亦可被还原剂(如肼)还原,产生银镜。
银镜反应是用来检验醛及还原性糖的一个定性实验,主要用来检测醛基(即-CHO)的存在。此实验操作简单,现象明显,易于观察。实验室中用这个反应来鉴定含有醛基的化合物。
工业上则用这个反应来对玻璃涂银制镜和制保温瓶胆。本实验主要用于制镜工业,同时用于在工业实验室中的有机物原料的浓度鉴别,热水瓶内胆镀银有效防止热辐射从而保温。
网络-银镜反应
⑹ 什么是葡萄糖测定(干化学法)
用银氨溶液可以检验葡萄糖。
⑺ 大家帮忙啊!!!!β-葡萄糖苷酶活性测定的方法,越详细越好.
以京尼平苷为底物氨基酸为显色剂测定β-葡萄糖苷酶活力的方法。β-葡萄糖苷酶水解京尼平苷的温度为50℃,pH为5.0,京尼平苷浓度为0.625mmol/L,水解10min后,立即加入1ml1mol/LNa2CO3终止反应,混匀,再加入体积比为1:1的0.2mg/ml的精氨酸溶液,沸水浴显色10min,冷却后于590nm处测光吸收度值。该方法的检测线性范围为0.05~1U/ml,相关系数为0.9998,检测限为0.02U/ml,精密度为1.5%(n=5),回收率为99.5%~101.1%,该方法准确度高,结果稳定。
⑻ 用化学方法咋鉴别甘露糖,甲基α-β-吡喃葡萄糖苷
加银氨溶液,甘露糖有醛基,可发生银镜反应,甲基葡萄糖苷没有醛基,无反应。
⑼ 化学鉴别 葡萄糖,葡萄糖酸和α-甲基葡萄糖苷
葡萄糖是醛糖~~果糖是酮糖~~加入溴水~~葡萄糖可以与之反应~~而果糖不能~~甲基葡萄糖苷中的醛基已经形成缩醛结构~~也不反应~~~ 剩下果糖和甲基葡萄糖苷~~可以加入苯肼~~果糖可以反应生成糖脎~~甲基葡萄糖苷不可以~~~~ 这样就ok咯~~~~
⑽ 用简单的化学方法鉴别甲基-D-吡喃葡萄糖苷和D-葡萄糖
两个名称是一样的,有时候将甲基放在前面称为甲基葡萄糖苷,有时候将甲基放在后面称为葡萄糖甲苷。这有点像甘油羧酸酯又可以称为羧酸甘油酯一样。
淀粉用碘水鉴别;葡萄糖用银镜反应;果糖和蔗糖先水解,后会发生银镜反应的是蔗糖,不会的是果糖。
哈沃斯式通常把含氧的六元环单糖看成杂环吡喃的衍生物,称为吡喃糖。葡萄糖通常以吡喃糖的形式存在。因此,两种环状结构的葡萄糖分别称为α-D-(+)-吡喃葡萄糖和β-D-(+)-吡喃葡萄糖。
(10)可用于葡萄糖苷化学检测的方法是扩展阅读:
吡喃糖以吡喃为主体结构,葡萄糖、甘露糖、半乳糖等己糖大都以吡喃糖的形式存在,吡喃环上的羟基朝向因己糖的结构而变。葡萄糖醛酸、甘露糖醛酸、氨基葡萄糖也以吡喃糖的形式存在,木糖、核糖、阿拉伯糖等戊糖也能形成吡喃糖的衍生物。
游离的吡喃糖与呋喃糖在一定比例下处于平衡中。淀粉、纤维素、甲壳素等多糖都是由吡喃糖连接而成的多糖。自然界的戊糖、己糖等都有两种不同的结构,一种是多羟基醛的开链形式;另一种羰基与羟基反应成环反应生成的产物——半缩醛。