Ⅰ 我想检查身体中的乳酸含量，请问怎么检查
正常情况下人体内的乳酸含量是十分微量的,只有在进行比较强的体力劳动或者运动的时候才会产生的有所增加,比如长跑以后会肌肉酸疼有一方面原因就是因为肌肉无氧呼吸产生了乳酸.但即使这样产生的乳酸量也是很少的,并且这些乳酸在体内是很快就会被代谢掉了(转化成了其它人体可以利用的物质),所以人体内一般不会有乳酸的积累.一般认为在乳酸耐受能力训练时以血乳酸在15mmol/L左右为宜. 但是如果是因为疾病使身体代谢失常的话就有可能产生较多量乳酸,这对人体是十分有害的.
Ⅱ 乳酸冬天是否结晶
纯净物乳酸不会结晶，除非与其他物质发生化学反应后会随浓度及温度结晶，但会结冰。详见下述：
基本信息
CAS NO.50-21-5
中文别名 DL-乳酸
英文名称 DL-Lactic acid
英文别名 2-Hydroxypropanoic acid; 2-Hydroxypropionic acid; Lactic acid; Lactic acid, dl-; Propanoic acid, 2-hydroxy-; (RS)-2-Hydroxypropionsaeure; 1-Hydroxyethanecarboxylic acid; AI3-03130; Acim lacticum; BRN 5238667; CCRIS 2951; Lactovagan; Tonsillosan; alpha-Hydroxypropionic acid
EINECS 200-018-0;209-954-4
分子式 C3H6O3
分子量 90.08
2安全术语
S26In case of contact with eyes, rinse immediately with plenty of water and seek medical advice.
不慎与眼睛接触后，请立即用大量清水冲洗并征求医生意见。
S36/37/39Wear suitable protective clothing, gloves and eye/face protection.
穿戴适当的防护服、手套和护目镜或面具。
S45In case of accident or if you feel unwell, seek medical advice immediately (show the label whenever possible.)
若发生事故或感不适，立即就医(可能的话，出示其标签)。
3风险术语
R34 Causes burns.
引起灼伤。
R38 Irritating to skin.
刺激皮肤。
R41Risk of serious damage to the eyes.
对眼睛有严重伤害。
4概述
在发酵过程中乳酸脱氢酶将丙酮酸转换为左旋乳酸。在一般的
乳酸
新陈代谢和运动中乳酸不断被产生，但是其浓度一般不会上升。只有在乳酸产生过程加快，乳酸无法被及时运走时其浓度才会提高。乳酸运输速度由一系列因素影响，其中包括单羧基转运体、乳酸脱氢酶的浓度和异构体形式、组织的氧化能力。一般来说血液中的乳酸浓度在不运动时为1-2mmol/L，在强烈运动时可以上升到20mmol/L。
一般来说当组织的能量无法通过有氧呼吸得以满足，组织无法获得足够的氧或者无法足够快地处理氧的情况下乳酸的浓度会上升。在这种情况下丙酮酸脱氢酶无法及时将丙酮酸转换为乙酰辅酶A，丙酮酸开始堆积。在这种情况下假如乳酸脱氢酶不将丙酮酸还原为乳酸的话糖酵解过程和三磷酸腺苷的合成会受到抑制。产生乳酸的过程为：丙酮酸+NADP+H+→乳酸+NAD
这个过程的意义在于重建糖酵解所需要的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）来保持三磷酸腺苷的合成。在氧气充足的肌肉细胞中乳酸可以被氧化为丙酮酸，然后直接用来作为三羧酸循环的燃料。它也可以在肝脏内糖异生的过程中通过科里布斯循环转化为葡萄糖。乳杆菌属的细菌也可以进行乳酸发酵。这些细菌可以生活在口内，它们产生的乳酸是导致龋齿的原因。在医学里乳酸常被用在乳酸林格氏液中。这是一种与人的血液等张的氯化钠、氯化钾和乳酸在蒸馏水中的溶液。在损伤、手术或烧伤失血后常使用乳酸林格氏液来补充失血。
5基本信息
名称：乳酸
英文名：Lactic acid；2-Hydroxy propionic acid
其它名称：2-羟基丙酸；α-羟基丙酸；丙醇酸
CAS号：50-21-5
分子式：C3H6O3
结构简式：CH3CH(OH)COOH
缩写式：HL（其中L表示乳酸根）
分子量：90.08
相对密度：1.200
熔点 18℃
密度 1.209
沸点 122℃ (15 mmHg)[1]
解离常数：pKa=4.14(22.5℃)
闪点：大于110℃
燃烧热：15.13kj/kg
等渗量：2.3%（W/V）溶液与血浆等渗
溶解度：与乙醇（95%）、乙醚、水混溶，不溶于氯仿
比热：2.11 KJ/g[2]
6药物分析
方法名称： 乳酸的测定—中和滴定法
应用范围： 本方法采用滴定法测定乳酸(C3H6O3)的含量。
本方法适用于乳酸。
方法原理： 供试品加水溶解后，再精密加入氢氧化钠滴定液（1mol/L）25mL，煮沸5分钟，加酚酞指示液2滴，趁热用硫酸滴定液（0.5mol/L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正，酚酞指示液变红时停止滴定，读出硫酸滴定液使用量，计算乳酸含量。
试剂： 1. 水（新沸放置至室温）
2. 氢氧化钠滴定液（1mol/L）
3. 硫酸滴定液（0.5mol/L）
4.酚酞指示液
5.甲基红-溴甲酚绿混合指示液
6.乙醇
7.基准邻苯二甲酸氢钾
8.基准无水碳酸钠
仪器设备：
试样制备： 1. 氢氧化钠滴定液（1mol/L）
配制：取澄清的氢氧化钠饱和溶液56mL，加新沸过的冷水使成1000mL。
标定：取在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约6g，精密称定，加新沸过的冷水50mL，振摇，使其尽量溶解；加酚酞指示液2滴，用本液滴定，在接近终点时，应使邻苯二甲酸氢钾完全溶解，滴定至溶液显粉红色。每1mL氢氧化钠滴定液（1mol/L）相当于204.2mg的邻苯二甲酸氢钾。根据本液的消耗量与邻苯二甲酸氢钾的取用量，算出本液的浓度。
贮藏：置聚乙烯塑料瓶中，密封保存；塞中有2孔，孔内各插入玻璃管1支，1管与钠石灰管相连，1管供吸出本液使用。
2.酸滴定液（0.5mol/L）
配制：取硫酸30mL，缓缓注入适量的水中，冷却至室温，加水稀释至1000mL，摇匀。
标定：取在270-300℃干燥恒重的基准无水碳酸钠约1.5g，精密称定，加水50mL使溶解，加甲基红-溴甲酚绿混合指示液10滴，用本液滴定至溶液由绿色变为紫红色时，煮沸2分钟，冷却至室温，继续滴定至溶液颜色有绿色变为暗紫色。每1mL硫酸滴定液（0.5mol/L）相当于53.00mg的无水碳酸钠。根据本液消耗量与无水碳酸钠的取用量，算出本液的浓度，即得。
3. 酚酞指示液
取酚酞1g，加乙醇100mL使溶解。
4. 溴甲酚绿混合指示液
取0.1% 甲基红的乙醇溶液20mL，加0.2%溴甲酚绿的乙醇溶液30mL，摇匀，即得。
操作步骤： 精密称取供试品1g，精密加水50mL，再精密加入NaOH氢氧化钠滴定液（1mol/L）25ml，煮沸5min，加酚酞指示液2滴，趁热用硫酸滴定液（0.5mol/L）滴定，至溶液显粉红色，并将滴定的结果用空白试验校正，记录消耗硫酸滴定液的体积数（mL），每1mL氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于90.08mg乳酸（C3H6O3）。
注1：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一，“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。[3]
7理化性质
纯品为无色液体，工业品为无色到浅黄色液体。无气味，具有
吸湿性。相对密度1.2060(25/4℃)。熔点18℃。沸点122℃（2kPa)。折射率nD(20℃)1.4392。能与水、乙醇、甘油混溶，水溶液呈酸性，PKa=3.85。不溶于氯仿、二硫化碳和石油醚。在常压下加热分解，浓缩至50%时，部分变成乳酸酐，因此产品中常含有10%～15%的乳酸酐。由于具有羟基和羧基，一定条件下，可以发生酯化反应，产物有三种。
毒性：大鼠经口LD50为3.73g/kg体重；ADI无限制规定。乳酸有三种同分异构体：DL-型、D-型和L-型。将大鼠分为三组，每组投药剂量为1.7g/kg体重的DL-型、D-型和L-型乳酸，口服三小时后解剖检测，DL-型乳酸可使肝中肝糖增高，40%~95%在3h内吸收转化；D-型和L-型乳酸使血中乳酸盐增高，由尿液排出体外。
8生产方法发酵法
发酵法的主要途径是糖在乳酸菌作用下，调节pH值5左右，保持大约50或60dm;C发酵三到五天得粗乳酸。
发酵法的原料一般是玉米、大米、甘薯等淀粉质原料（也有以苜蓿、纤维素等作原料，有研究提出厨房垃圾及鱼体废料循环利用生产乳酸的）。乳酸发酵阶段能够产酸的乳酸菌很多，但产酸质量较高的却不多，主要是根霉菌和乳酸杆菌等菌系。不同菌系其发酵途径不同，可分同型发酵和异型发酵，实际由于存在微生物其它生理活动，可能不是单纯某一种发酵途径。
发酵法分同型发酵和异型发酵。
合成法
合成方法制备乳酸有乳腈法、丙烯腈法、丙酸法、丙烯法等，用于工业生产的仅乳腈法(也叫乙醛氢氰酸法)和丙烯腈法。
（1）乳腈法
乳腈法是将乙醛和冷的氢氰酸连续送入反应器生成乳腈（或直接用乳腈作原料），用泵将乳腈打入水解釜，注入硫酸和水，使乳腈水解得到粗乳酸。然后再将粗乳酸送人酯化釜，加入乙醇酯化，经精馏、浓缩、分解得精乳酸。美国斯特林化学公司及日本的武藏野化学公司均采用此法合成乳酸。
（2）丙烯腈法
丙烯腈法是将丙烯腈和硫酸送入反应器中水解，再把水解物送人酯化反应器中与甲醇反应；然后把硫酸氢铵分出后，粗酯送入蒸馏塔，塔底获精酯；再将精酯送入第二蒸馏塔，加热分解，塔底得稀乳酸，经真空浓缩得产品。
（3）丙酸法
丙酸法以丙酸为原料，经过氯化、水解得粗乳酸；再经酯化、精馏、水解得产品。该法原料价格较贵，仅日本大赛路公司等少数厂家采用。反应如下：
CH3CH2COOH Cl2一→CH3CHClCOOH NaOH—→CH3CH(OH)COOH NaCl
酶化法
（1）氯丙酸酶法转化
东京大学的本崎[6]等研究利用纯化了的L-2-卤代酸脱卤酶和DL-2-卤代酸脱卤酶分别作用于底物L-2-氯丙酸和DL-2-氯丙酸，脱卤制得L-乳酸或D-乳酸。L-2-卤代酸脱卤酶催化L-2-氯丙酸，而DL-2-卤代酸脱卤酶既可催化L-2-氯丙酸，又可催化L-2-氯丙酸生成相应的旋光体，催化同时发生构型转化。
（2）丙酮酸酶法转化
从活力最高的乳酸脱氢酶的混乱乳杆菌DSM20196菌体中得到D-乳酸脱氢酶，以无旋光性的丙酮酸为底物可得到D-乳酸。
工业生产乳酸方法主要是发酵法和合成法。发酵法因其工艺简单，原料充足，发展较早而成为比较成熟的乳酸生产方法，约占乳酸生产的70以上，但周期长，只能间歇或半连续化生产，且国内发酵乳酸质量达不到国际标准。化学法可实现乳酸的大规模连续化生产，且合成乳酸也已得到美国食品和药品管理局(FDA)的认可，但原料一般具有毒性，不符合绿色化学要求。酶法工艺复杂，其工业应用还有待于进一步研究。
9用途食品行业
1) 乳酸有很强的防腐保鲜功效，可用在果酒、饮料、肉类、食品、糕点制作、蔬菜 ( 橄榄、小黄瓜、珍珠洋葱 ) 腌制以及罐头加工、粮食加工、水果的贮藏，具有调节 pH 值、抑菌、延长保质期、调味、保持食品色泽、提高产品质量等作用；
啤酒
2) 调味料方面，乳酸独特的酸味可增加食物的美味，在色拉、酱油、醋等调味品中加入一定量的乳酸，可保持产品中的微生物的稳定性、安全性，同时使口味更加温和；
3) 由于乳酸的酸味温和适中，还可作为精心调配的软饮料和果汁的首选酸味剂；
4) 在酿造啤酒时，加入适量乳酸既能调整 pH 值促进糖化，有利于酵母发酵，提高啤酒质量，又能增加啤酒风味，延长保质期。在白酒、清酒和果酒中用于调节 pH ，防止杂菌生长，增强酸味和清爽口感；5.缓冲型乳酸可应用于硬糖，水果糖及其它糖果产品中，酸味适中且糖转化率低。乳酸粉可用于各类糖果的上粉，作为粉状的酸味剂；
5) 天然乳酸是乳制品中的天然固有成分，它有着乳制品的口味和良好的抗微生物作用，已广泛用于调配型酸奶奶酪、冰淇淋等食品中，成为倍受青睐的乳制品酸味剂；
6) 乳酸粉末是用于生产荞头的直接酸味调节剂。乳酸是一种天然发酵酸，因此可令面包具有独特口味；乳酸作为天然的酸味调节剂，在面包、蛋糕、饼干等焙烤食品用于调味和抑菌作用，并能改进食品的品质，保持色泽，延长保质期。[4]
医药方面
1) 在病房、手术室、实验室等场所中采用乳酸蒸气消毒，可有效杀灭空气中的细菌，起到减少疾病，达到提高健康之目的；
2) 在医药方面广泛用作防腐剂、载体剂、助溶剂、药物制剂、 pH 调节剂等；
3) 乳酸聚合得到聚乳酸，聚乳酸可以抽成丝纺成线，这种线是良好的手术缝线，缝口愈合后不用拆线，能自动降解成乳酸被人体吸收，无不良后果。尤其是体内手术缝线，免除二次手术拆线的麻烦。这种高分子化合物可做成粘接剂在器官移植和接骨中应用；
4) 乳酸可以直接配制成药物或日常保健品使用；如娇妍私处沐浴露是欧洲专家研制的配方，针对成熟女性阴道乳酸杆菌制造慢，加入了乳酸成份，维护好阴道的自洁作用。
5) 节肌肉活力和抗疲劳的制约作用。
其它工业
1) 乳酸在发酵工业中用于控制 pH 值和提高发酵物纯度；
2) 在卷烟行业中可以保持烟草湿度，除去烟草中杂质，改变口味，提高烟草档次，乳酸还可中和尼古丁烟碱，减少对人体有害成份提高烟草品质；
3) 在纺织行业中用来处理纤维，可使纤维易于着色，增加光泽，使触感柔软；
4) 在涂料墨水工业中用作 pH 调节剂和合成剂；在塑料纤维工业是可降解新型材料聚乳酸 PLA 的首选原料；
5) 乳酸亦可作为聚乳酸的起始原料，生产新一代的全生物降解塑料；
6) 在制革工业中，乳酸可脱去皮革中的石灰和钙质，使皮革柔软细密，从而制成高级皮革；
7) 乳酸由于对镍具有独一无二的络合常数，常被用于镀镍工艺，它同时可作为电镀槽里的酸碱缓冲剂和稳定剂。在微电子工业中，其独特的高纯度及低金属含量满足了半导体工业对高质量的要求，它作为一种安全的有机溶解剂可用于感光材料的清洗；
8) 乳酸作为 pH 调节剂和合成剂可应用于各种水基涂层的粘合系统。如：电积物的涂层。乳酸产品沸点低，非常适用于为高固体涂层制定的安全溶解系统。乳酸产品系列为生产具有良好流体性能的含高固形物的涂料提供了机会；
9) 乳酸具有清洁去垢等作用，用于洗涤清洁产品比传统的有机除垢剂性能更佳，因此它可应用于众多除垢产品中。如：厕所，浴室，咖啡机的清洁剂。乳酸具有抗微生物性，当它与其他抗微生物剂如乙醇配合使用，可产生协同作用。
化妆品业
1) 由于L-乳酸是皮肤固有天然保湿因子的一部分被广泛用作许多护肤品的滋润剂。L-乳酸是最有效的一种 AHA 且刺激性甚微；
2) 由于 L-乳酸天然存在于头发中，作用是使头发表面光泽亮丽，因此乳酸常作为各种护发产品的 pH 调节剂；
3) 乳酸可作为保湿剂用于各种浴洗用品中，如私处沐浴液，条状肥皂和润肤蜜。在液体肥皂，香皂和香波中可作为 pH 调节剂。此外，乳酸添加在条状肥皂中可减少储藏过程中水分的流失，因而防止肥皂的干裂。
农业畜业
1) 光学纯度高达 99% 以上的乳酸，在农药方面可用于生产缓释农药，例如除草剂，具有对农作物和土壤无毒无害且高效的特点；
2) 乳酸聚合物用于生产农用薄膜，可用其取代塑料地膜，能被细菌分解后让土壤吸收，利于环保；
3) 乳酸还用于青饲料贮藏剂、牧草成熟剂；
4) 在猪禽饲料中作为生长促进剂。乳酸可以降低胃内的 pH 值，起到活化消化酶、改善氨基酸消化能力的作用，并对肠道上皮的生长有好处。小猪在断乳后的几个星期喂食含有酸化剂的饲料，其在断乳期间的体重可以增加 15%；
5) 乳酸抑制微生物的生长。哺乳期的小猪会染上由大肠杆菌和沙门氏菌引起的疾病，在饲料中加入乳酸能防止小猪下胃肠道中病原菌生长；
6) 乳酸可以作为饲料的防腐剂并增进饲料、谷物和肉类加工产品副产品的微生物稳定剂；
7) 在家禽和小猪的饮用水中加入乳酸，可以有效地抑制病原菌的生长，动物体重增加速度提高。
毒性防护 纯品无毒。其盐类只要不是重金属盐也无毒。对大鼠经口LD50为3730mg/kg。
10网络语言
相对于蛋疼而言，为表达相同的意思，一般理解为“无聊，悠闲”。女网友可以使用“乳酸”一词，以避免出现“你有蛋吗”一类的质疑。
11人与乳酸
对于人的身体来说，乳酸是疲劳物质之一，是身体在保持体温和肌体运动而产生热量过程中产生的废弃物。我们身体生存所需要的能量大部分来自于糖分。血液按照需要把葡萄糖送至各个器官燃烧，产生热量。这一过程中会产生水、二氧化碳和丙酮酸，丙酮酸和氢结合后生成乳酸。如果身体的能量代谢能正常进行，不会产生堆积，将被血液带至肝脏，进一步分解为水和二氧化碳，产生热量，疲劳就消除了。
如果运动过于剧烈或持久，或者身体分解乳酸所必需的维生素和矿物质不足，那么体内的乳酸来不及被处理，造成乳酸的堆积。乳酸过多将使呈弱碱性的体液呈酸性，影响细胞顺利吸收营养和氧气，削弱细胞的正常功能。堆积乳酸的肌肉会发生收缩，从而挤压血管，使得血流不畅，结果造成肌肉酸痛、发冷、头痛、头重感等。乳酸堆积在初期造成酸痛和倦怠，若长期置之不理，造成体质酸化，可能引起严重的疾病。
有些人用在假日睡懒觉来消除疲劳，这是无效的。用化学药品也只能求得一时的缓解，而且有副作用。正确的方法是用恰当的运动，尤其是舒展运动来放松肌肉，促进血液循环，选择均衡清淡的营养，尤其是富含维生素B族的食物，再加上高质量的睡眠，那将得到最好的效果。
12研究新解
在强烈运动的过程中人体需要大量能量。这时人体内乳酸的生产比组织移走乳酸的速度高，组织内的乳酸浓度提高。这个过程的意义在于重建糖酵解所需要的烟酰腺嘌呤二核苷酸（NAD）来保持三磷酸腺苷生产，并为运动提高源源不断的能量，该过程可以描述为[5]：
丙酮酸 + NADH + H → 乳酸 + NAD
不像一般错误的描述乳酸浓度的上升本身并不导致酸中毒，它也不是肌肉酸痛的原因。在人体内乳酸无法释放质子，因此没有酸性。对人体内糖酵解途径的分析证明这个过程不会导致酸中毒。强烈运动时造成的酸中毒有另一个原因。
在三磷酸腺苷被分裂释放能量是它释放一个质子。这些质子是导致酸中毒的原因。在强烈运动时有氧新陈代谢无法保障三磷酸腺苷的生产，因此无氧新陈代谢开始。这个过程可以产生大量三磷酸腺苷，这些三磷酸腺苷在分解时释放大量质子，降低组织内的pH值，造成酸中毒。这是强烈运动过程中肌肉酸痛的众多原因之一。有人认为通过强离子浓度梯度乳酸可以造成酸中毒，但是对这个过程的研究还非常不完善，因此它是否存在还不清楚。
Ⅲ 如何测定乳酸菌的含量
菌种的分离 取lmL卤汁以10倍递增稀释方法（一份酸奶，九份无菌水，再取一份第一只管中溶液，加九份无菌水，依次类推），将其稀释至1/10～10的-10次幂（我打不上去），然后从不同浓度稀
释液中分别取lmL倾注在平皿中，再倒入培养基相混合，待培养基凝固后倒置于30~C恒温下
培养48h。挑取长势良好的单个茵落划线分纯，直至纯化(茵落单个大小一致，革兰氏染色镜
检，茵体一致)。结果分离得到3株不同菌株，分别编号为菌株1、菌株2、菌株3。再分别转移
到试管斜面上进行保存。
分离用培养基：牛肉膏5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，蒸馏水1 000 mL，琼脂20g，pH7．0—7．2
；保存用斜面培养基：酵母膏1％ ，碳酸钙2％ ，葡萄糖1％ ，琼脂2％ ，pH 7．0。
培养条件
将分离出的菌株1、菌株2、菌株3分别接种在上述4种不同的培养基上，
在30。【=恒温条件下培养48h后观察并测定其培养结果。
测定方法 菌落总数采用逐级稀释法来计数；pH值用pHS一2C酸度计测定；乳酸定性
及含量测定依据食品检验技术
1I．2．1乳酸菌的分离与筛选的试验程序 自然发酵酸奶---稀释---培养---挑起单菌落染色、镜检一挑
选革兰氏阳性球菌单菌落一Ⅲ号培养基一挑选溶钙圈大的球菌反复在Ⅲ号培养基上几次纯化筛选一单菌落优
良菌株一试管穿刺低温保存。
1．2 1．2 乳酸菌的鉴定 用光学显微镜、放大镜进行乳酸菌的形态特征鉴定。生理生化特征鉴定：产乳
酸定性试验——乳酸纸层析法0- 、过氧化氢酶(接触酶)反应�6�8、明胶水解反应 、硫化氢反应 、乳酸菌
发酵营养型试验0 、耐盐、酸、温度试验。
1．2．I．3 乳酸菌的保存�6�8 采用定期移植低温保藏法。培养基配方：葡萄糖1％ 、蛋白胨0 2％ 、
l(}l2PQ|0．2％、琼脂20％、pH值7 0，分装试管，121。c灭菌30min。将使用对数生长期后期的细胞进行穿刺
培养，然后密封存于冰箱玲藏室内(5qc左右)，2个月移植1次。
1．2．2 分离乳酸菌的生理特点试验
1 2 2．1 最适生长温度的测定OD值以同温下不接种培养基作对照，定期取出接种培养基在721分光光度
计上，用最大吸收光波长 =6001RIifl测定。
1．2．2．2 生长周期的测定oD值(方法同上)；pH值：PHB一4pH计；可滴定酸(以乳酸计)：吸取ImL菌液
加入9Ⅱ1L蒸馏水，加入1～2滴酚酞，用0．1NNaOH滴定。
1．2 2．3 最适pH值的测试、最适盐浓度的测试。
供试样品及培养基
分离用样品：酸奶、酸奶及西红柿均为市售
分离用培养基：①BCP培养基：酵母膏2 5g，蛋白胨5g，葡萄糖5g，溴甲酚紫0 04g，琼脂15g，
蒸槽水lO00ml，pH7 0；②MRS培养基见文献 。
菌种保藏用培养基：脱脂乳培养基：新鲜牛乳离心去掉上层乳脂，下层奶液分装试管，105℃
灭菌20mln。
菌利 鉴定用培养基见文献 6。
1 2 方法
1 2 1 乳酸菌的分离纯化 取泡菜汁、酸奶、西红柿表面洗液进行梯度稀释，分别用倾注法、涂布
法和划线法在BCP和MRS培养基平板上进行菌种分离。挑取在BCP平板上有透明目的菌落，在
MRS平扳上有溶钙圈的菌落，反复纯化至纯种，挑菌至脱脂牛奶试管中保存
1．2 2 乳酸菌复筛对初筛菌株进行革兰氏染色，保留革兰氏阳性菌株．并对其所产乳酸能力进
行定性、定量分析，筛选出产酸高的菌株保存，再把产酸高的菌株经萝l、汁发酵 】，进一步选择产
酸高、_l】味纯正的菌株保存鉴定
1 2 3 乳酸定性测定果用纸层析法。溶剂系统为乙醇：浓氨水：水=80：5：15，显色剂为0 04％
的溴甲酚紫酒精溶液。层析时将乳酸、柠檬酸配成1％ 的标准溶液，两种标准溶液 及乳酸发酵液
均点样3 ．上行层析，显色与标准样比较
1．2 4 乳酸的定量测定采用气相色谱法，利用苄酯化法制备乳酸衍生物，将待测乳酸菌株在产
酸培养基内37"C培养3d，离心。取上清液剃备衍生物，气相色谱分析含量。气相色谱工作条件为：
EGS色谱柱，柱温160'C，气化温度180'17．，检测器温度l70"C，载气为N，。
1．2 5 菌种鉴定根据《简明第八版伯杰细菌鉴定手册》 和《一般细菌常用鉴定手册》[6 对复筛
出的菌株的形态、生理生化、碳源利用等方面进行系统鉴定，并提取乳酸菌株DNA，采用熔链温度 .
Ⅳ 乳酸菌的鉴定方法
1.形态和培养特征观察
采用牛肉膏蛋白胨培养基,将已纯化后的甘油菌种活化后于37℃下培养20～24h ,并进行革兰氏染色及菌体形态和菌落特征的观察。染色方法参照微生物鉴定实验指导
2.生长条件试验
(1)耐盐性试验(NaCl 浓度:0. 85 、1. 20 和1. 71) (mol/ L) ;
(2)耐酸碱试验(p H :4. 3 、5. 7 、6. 8 、8. 4 、8. 6 和8. 7) ;
(3)温度梯度试验(温度: 10℃、30℃、40℃、50℃、55℃、60℃和65℃) 。
分别将参试菌接种于以上处理的液体培养基中培养48 h ,记录生长状况。
3.生理生化试验
⑴过氧化氢酶测定
将实验菌接种于PGY培养基斜面上,37℃培养20h—24h,取一环接种的培养物,涂于干净的载玻片上,然后在其上滴加3%－—15%的过氧化氢,有气泡则为阳性反应,无气泡为阴性反应。
⑵葡萄糖产酸产气实验
在PY基础培养基内加入30g葡萄糖和5%吐温-80,1.6g/100mL的溴甲酚紫1.4mL作指示剂, 在培养基内放置一小倒管,分装试管置37℃培养24h, 经培养后,指示剂变黄表示产酸,倒管内出现气泡,表示产气。
⑶淀粉水解实验
接种新鲜的菌种于含有0.5g可溶性淀粉的PY基础培养基中,取少许培养液于比色盘内,同时取未接种的培养液作对照,分别在其中加入卢哥氏碘液.不显色表示淀粉水解,显蓝黑色或蓝紫色时,表示淀粉未水解或水解不完全。
⑷明胶液化实验
将实验菌接种于明胶基础培养基中,置37℃培养,以一支未接种的试管作为对照。将接种的和未接种的对照管置于冰箱或冷水中,等待对照管凝固后记录实验结果,反复观察对比多次。如对照管凝固时,接种管液化为阳性反应,凝固为阴性反应
⑸甲基红（M.R）试验
接种实验细菌于PYG培养基，于37℃培养2天后，于培养物中加入几滴甲基红酒精溶液，如呈红色，表示阳性。
⑹乙酰甲基甲醇V-P实验
接种新鲜的实验菌种于培养基中, 37℃培养2天后,取培养液1mL在其中
加入1ml 10％的NaOH，混匀，再加入3－4滴2%氯化铁溶液。数小时后，培养基表面的下层出现红色者，为阳性
⑺柠檬酸盐
取幼龄菌种接种于柠檬酸盐斜面培养基上，适温培养3－7天，培养基呈碱性（蓝色）者为阳性反应，不变者则为阴性
⑻酪素水解试验
牛奶平板的制备：取5g脱脂奶粉加入50mL蒸馏水中（或用50mL脱脂牛奶），另称1.5g琼脂溶于50mL蒸馏水中，将两液分开灭菌。待冷至45－50℃时，将两液混匀倒平板，即成牛奶平板。将平板倒置过夜，使表面水分干燥，然后将菌种点接在平板上，每皿可点接3－5株菌。适温培养1、3、5天，记录菌落周围和下面酪素是否已被分解而呈透明。配制该培养基时，切勿将牛奶和琼脂混合灭菌，以防牛奶凝固
⑼厌氧生长测定
将菌种接入营养肉汤平板后,用密封带包好放入CO2培养箱37℃培养2天后,观察生长情况,生长则为阳性
(10)厌氧硝酸盐产气
接种封油：以斜面菌种用接种环接种后，用凡士林油（凡士林和液体石蜡为1:1）封管，封油的高度约1厘米。必须同时接种不含有硝酸钾的肉汁胨培养液作对照。
观察结果：培养2－7d，观察在含有硝酸钾的培养基中有否生长和产生气泡。如有气泡产生，表示反硝化作用产生氮气，为阳性反应。但如不含硝酸钾的对照培养基也可产生气泡，则只能按可疑或阴性处理。
(11)石蕊牛奶的反应
牛奶中主要含有乳糖和酪蛋白，在牛奶中加入石蕊是作为酸碱指示剂和氧化还原指示剂。石蕊在中性时呈淡紫色，酸性时呈粉红色，碱性呈蓝色，还原时则自上而下地褪色变白。观察其产酸、产碱、胨化、酸凝固、凝乳酶凝固、还原情况
(12)糖发酵实验
将需要测定的糖或醇类等碳水化合物加入PY基础培养基中,按表分装含5mL培养基的试管.分别取0.2mL,被鉴定菌株接到灭菌后的碳水化合物培养基中37℃培养24h,振荡培养。检测时取培养液少许置于比色盘内,同时取未加碳水化合物的PY培养液作为对照,滴加试剂比较颜色的变化,记录产酸的强弱.
附一些培养基：
①PY培养基（100mL）：蛋白胨1.0g,酵母提取物1.0g,无机盐溶液4.0mL[盐溶液成分:无水CaCl2 0.2g,MgSO4 20.0g ,K2HPO4 1.0g, ,KH2PO4 1.0g,NaHCO3 10.0g,NaCl 2.0g](将CaCl2和MgSO4一起溶解于300mL蒸馏水中,再加500mL蒸馏水,一边搅拌一边缓慢加入其他盐类.继续搅拌直到全部溶解,加蒸馏水定容至1000mL,混合后贮备于4℃)
②PYG培养基:PY在基础培养液内加入1.0g葡萄糖
③营养明胶 蛋白胨5g、牛肉膏3g、明胶120g、蒸馏水1000mL、pH6.8～7.0；加热溶解、校正至pH7.4～7.6，分装小管，121℃高压灭菌10min，取出后迅速冷却，使其凝固。复查最终pH应为6.8～7.0
④柠檬酸盐斜面培养基：柠檬酸钠 3g NH4H2PO4 1g MgSO4 0.2g
K2HPO4 1g NaCl 5g 琼脂15—20g 水1000mL 加热溶解后，调pH至7，再加入1.6%溴麝香草酚蓝指示剂10mL,培养基呈绿色，分装试管，每管5mL，121灭菌30min
⑤含硝酸钾的营养肉汤 加入2g硝酸钾入营养肉汤
4.16S rDNA 序列分析
这个LZ另外查好了，很多学问。
5.生长曲线
活菌计数方法：采用涂布法,进行菌落计数，每隔一段时间（2-4小时）测
Ⅳ 乳酸含量检测方法，EDTA钙定法
EDTA定钙法是目前测定发酵液中乳酸含量的主要方法.本文采用对照乳酸结合高效液相色谱法对该方法的测定条件进行了研究.结果表明,发酵液中的乳酸必须预先用过量的 CaCO3中和,再用 NaOH调节 pH至 12.0以上,以钙黄绿素为指示剂时,测定结果的重复性和回收率较好.HPLC法与 EDTA定钙法测定结果比较,发现 EDTA定钙法测定的乳酸含量偏大,但可通过适当校正用于生产过程检测.
Ⅵ 听说有细胞抗氧化水能喝，是如何细胞抗氧化法
一种基于细胞水平测定乳酸菌抗氧化活性的方法,属于微生物技术领域.本发明在细胞水平利用96孔酶标板的全波频荧光扫描型酶标仪代替常规的分光光度计测定处理后样品的抗氧化能力,利用荧光探针和自由基引发剂能够在1h的时间内,对乳酸菌菌体批量进行快速,准确的测定,从而从细胞水平为乳酸菌的抗氧化活性研究提供一个快速检测方法,利用本发明可在极短的时间内批量测定乳酸菌不同菌株的抗氧化能力,能够迅速准确的反映乳酸菌菌体的抗氧化水平.
人间充质干细胞内源性抗氧化水平影响干细胞存活的分子机制。方法:利用细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)/双氧水(H2O2)协同诱导了一个与体内环境相似的体外氧化炎症压力环境。应用依达拉奉作为抗氧化剂和马来酸二乙酯(diethylmaleate,DEM)作为促氧化剂预处理人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,h UCMSCs)后的不同时间点,测定干细胞存活能力、细胞凋亡和内源性抗氧化水平的动态变化。其中,采用免疫荧光染色法和caspase-3/7活性法测定细胞凋亡的变化;用MTT评估细胞活性;用活性氧(reactive oxygen species,ROS)染色和GSH/GSSH比值显示细胞内抗氧化水平。然后,用定量PCR系统检测细胞抗凋亡基因Bcl-2和促凋亡基因Bax-1的m RNA表达水平变化;用蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)测定内源性抗氧化酶中超氧化物歧化酶1(superoxide dismutase-1,SOD1)、过氧化氢酶(catalase,CAT)和MAPK、PKC通路各蛋白的表达变化;用试剂盒测定Nrf2转录活性,以期对调控干细胞凋亡和内源性抗氧化水平的分子机制进行探究。最后,用PD98059和staurosporine分别阻断MAPK和PKC通路;用基因沉默的方法阻断Nrf2的抑制蛋白质Keap1的表达,进一步验证MAPK-PKC-Nrf2通路在影响干细胞内源性抗氧化水平中的作用。结果:(1)与对照组比较,LPS/H2O2处理组干细胞活性降低(P0.05);与LPS/H2O2组比较,促氧化剂DEM预处理后在所有时间点都进一步降低了干细胞活性(P0.05);与LPS/H2O2组比较,两种不同浓度的依达拉奉处理组(Eda)均提高了LPS/H2O2刺激下干细胞的增殖活性,差异均有统计学意义(P0.05),且两组Eda浓度间比较无统计学差异(P0.05);此外,依达拉奉预处理改善了由LPS/H2O2刺激导致的h UCMSCs细胞形态的异常,而DEM则进一步加剧该异常;(2)结果显示与LPS/H2O2处理组比较,依达拉奉预处理组的10μM和20μM浓度组均降低了h UCMSCs细胞凋亡率,DEM预处理组增高了h UCMSCs细胞凋亡率,二者均有统计学意义(P0.05;P0.001);caspa se-3/7的活性变化与细胞凋亡率变化一致;q PCR结果显示,与对照组比较,在处理后12、24、36、48、60、72小时(h)后,LPS/H2O2组的抗凋亡蛋白Bcl-2的m RNA表达率低,而促凋亡蛋白Bax1的m RNA表达率增高(P0.001);不同浓度的依达拉奉预处理后,可以抵消这种作用;DEM预处理后,进一步降低了Bcl-2和提高了Bax1的水平;(3)从处理后24h开始,与对照组比较,LPS/H2O2组培养基中DCFH-D A(ROS荧光染色剂)信号更明显,依达拉奉预处理组减弱,而DEM预处理组加剧;GSH/GSSG比值变化与ROS表达情况相符:与对照组比较,在处理后12、24、36、48、72h时,LPS/H2O2组均引起胞内GSH/GSSG比率降低,差异均有统计学意义(P0.001);这种降低在依达拉奉组(10μM和20μM)被抵消,而在DEM组更低;(4)Western Blot结果显示,与对照组比较,LPS/H2O2处理后的12、24、36、60和72 h,过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶1(SOD1)蛋白的表达显着降低,尤其是SOD1的表达;与LPS/H2O2组比较,依达拉奉预处理组蛋白表达高,DEM预处理组蛋白表达低(P0.05);(5)测定MAPK通路结果显示:与对照组比较,LPS/H2O2处理组在大部分时间点表达更高水平的磷酸化的p38MAPK和ERK1/2。依达拉奉预处理组及DEM预处理组分别可以消除和增强LPS/H2O2的该效应;用PD98059和PKC抑制剂分别阻断MAPK和PKC通路后,20μM依达拉奉组对细胞活性降低的升高作用被消除;应用基因沉默Keap1可以增强Nrf2的活性(P0.001),并可以部分逆转DEM对细胞活性的影响。结论:(1)抗氧化剂依达拉奉预处理改善了氧化炎症刺激下h UCMSCs的形态学和生存能力;(2)抗氧化剂依达拉奉预处理后通过上调抗凋亡基因Bcl-2 m RNA的水平和下调促凋亡基因Bax-1 m RNA水平降低h UCMSCs的凋亡率;(3)抗氧化剂依达拉奉预处理后的h UCMSCs,通过修复氧化炎症刺激导致的内源性抗氧化酶活性损伤,提高干细胞内源性抗氧化水平;(4)干细胞部分通过调控自身MAPK-PKC-Nrf2通路的变化调节内源性抗氧化水平。
Ⅶ 乳酸菌的检测方法和培训资料！（越详细越好）
摘要：
〔目的〕探索用细菌学方法检测酵母浸出粉中维生素B族的存在。〔方法〕采用五种乳酸菌接种于含有被测的五种中外产的酵母粉培养基，用细菌学灵敏度、菌落计数和菌落直径测定的方法进行比较。〔结果〕经统计学处理，生长波度、菌落计数和菌落直径试验结果说明五种酵母粉之间有显着性差异，而灵敏度试验则未见显着性差异。〔结论〕酵母浸出粉中维生素B族生长因子的细菌学实验方法估计，可以参考生长浓度、菌落计数和菌落直径等综合性实
指标。
关键词：
乳酸菌；酵母浸出粉；维生素B族生长因子；生长浓度；菌数计数；菌落直径
看到的
不知是不是想要的
还有另个
http://www.cnki.com.cn/Article/CJFD2002-RPGY200201006.htm
乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物学检验
1 主题内容与适用范围
本标准规定了乳酸菌饮料中乳酸菌检验的技术要求。
本标准适用于以鲜乳、乳粉或辅以大豆等为原料，经乳酸菌发酵加工制成的具有相应风味的活性乳酸菌饮料。
2 引用标准
GB 4789.28 食品卫生微生物学检验 染色法、培养基和试剂
3 术语
乳酸菌：一群能分解葡萄糖或乳糖产生乳酸，需氧和兼性厌氧，多数无动力，过氧化氢酶阴性，革兰氏阳性的无芽胞杆菌和球菌。
乳酸菌菌落总数：检样在一定条件下培养后，所得1mL检样中所含乳酸菌菌落的总数。
4 设备和材料
4.1 温箱：36±1℃。
4.2 冰箱：0～4℃。
4.3 恒温水浴：46±1℃。
4.4 电炉：可调式。
4.5 吸管：容量为1，10和25mL。
4.6 广口瓶或三角瓶：容量为500mL。
4.7 平皿：直径为9cm。
4.8 试管：18×180mm。
4.9 显微镜。
5 培养基和试剂
5.1 改良TJA培养基(改良番茄汁琼脂培养基)。
5.2 改良MC培养基(Modified Chalmers培养基)。
5.3 0.1%美兰牛乳培养基。
5.4 6.5%氯化钠肉汤。
5.5 pH9.6葡萄糖肉汤。
5.6 40%胆汁肉汤。
5.7 淀粉水解培养基。
5.8 精氨酸水解培养基。
5.9 乳酸杆菌糖发酵管。
5.10 七叶苷培养基。
5.11 革兰氏染色液：按GB 4789.28规定执行。
5.12 3%过氧化氢溶液：按GB 4789.28规定执行。
5.13 蛋白胨水、靛基质试剂：按GB 4789.28规定执行。
5.14 明胶培养基：按GB 4789.28规定执行。
5.15 硝酸盐培养基、硝酸盐试剂：按GB 4789.28规定执行。
5.16 生理盐水：定量分装于三角瓶和试剂管内灭菌。
6 乳酸菌菌落总数的测定
6.1 检验程序
乳酸菌菌落总数检验程序如下：
（略）
6.2 操作步骤
6.2.1 以无菌操作将经过充分摇匀的检样25mL(或25g)放入含有225mL灭菌生理盐水的灭菌广口瓶内作成1∶10的均匀稀释液。
6.2.2 用1mL灭菌吸管吸取1∶10稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液)。
6.2.3 另取1mL灭菌吸管，按上述操作顺序，作10倍递增稀释液，如此每递增一次，即换用1支1mL灭菌吸管。
6.2.4 选择2～3个以上适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。
6.2.5 稀释液移入平皿后，应及时将冷至50℃的乳酸菌计数培养基(改良TJA或改良MC)注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀。同时将乳酸菌计数培养基倾入加有1mL稀释液检样用的灭菌生理盐水的灭菌平皿内作空白对照，以上整个操作自培养物加入培养皿开始至接种结束须在20min内完成。
6.2.6 待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养72±3h取出，观察乳酸菌菌落特征(见表1)，选取菌落数在30～300之间的平板进行计数。计算后，随机挑取5个菌落数进行革兰氏染色，显微镜检查并做过氧化氢酶试验。革兰氏阳性，过氧化氢酶阴性，无芽胞的球菌或杆菌可定为乳酸菌。根据证实为乳酸菌菌落计算出该皿内的乳酸菌数，然后乘其稀释倍数即得每毫升样品中乳酸菌数。例如，检样10－4的稀释液在改良TJA琼脂平板上，生成的可疑菌落为35个，取5个鉴定，证实为乳酸菌的是4个，则1mL检样中乳酸菌数为：
6.3 乳酸菌在改良TJA和改良MC培养基上菌落生长形态特征见表1。
表1 乳酸菌在不同培养基上菌落特征
（表略）
7 乳酸菌的鉴定
对上述分离到的乳酸菌需进行菌种鉴定时，则作以下试验。
7.1 菌种制备：自平板上挑取菌落，接种于改良TJA或改良MC琼脂斜面，于36±1℃，24～48h培养，刮取菌苔，分别进行下列试验。
7.2 乳酸杆菌鉴定试验：极少见还原硝酸盐，不液化明胶，不产生靛基质和硫化氢。
7.3 常见乳杆菌属内种的碳水化合物反应，见表2。
7.4 产乳酸的链球菌的鉴别试验，见表3。
表2 常见乳杆菌属内种的碳水化合物反应
（表略）
表3 乳酸的链球菌的鉴别表
（表略）
参考资料：http://www.hopebiol.com/asphtml/refere85.htm
Ⅷ 怎么检测细胞培养液中的乳酸含量
原代动物细胞培养： 1、实验材料要新鲜,从活体分离材料后要低温保存,并尽快进行细胞分离实验. 2、无菌操作.操作时用的培养液,可加平时细胞培养液5倍含量的青链霉素. 3、用酶法分离细胞时,注意酶液的浓度和控制消化时间. 贴块法分离细胞时,注意动作要轻柔,不要伤到细胞组织,组织块边缘尽量平整有利于细胞游离. 4、培养液的选择.不同的细胞有对培养液中营养的要求不同,根据所分离细胞的特性选择. 传代细胞培养： 1、无菌操作 2、控制消化时间 3、及时关注细胞生长状态
Ⅸ 如何检验酸奶中的乳酸菌要具体的实验步骤和方法及原理
太麻烦的，要有条件，把样品稀释后，例如估计含乳酸菌的量，稀释到每毫升大约30-300个左右，再用特殊的平板培养基，添加了1%碳酸钙的平板培养基，采用倾注法与呈液体状态的40度含碳酸钙的琼脂营养培养基混合，倒制于90毫米在小平皿中，培养后，长出菌落，同时，菌落周围有透明圈的，就是乳酸菌，还可以计数，再剩稀释倍数，还可得含量。