㈠ 外泌体的提取与鉴定-鹿明生物4D-DIA+超微量蛋白质组技术
外泌体是细胞外囊泡的一种，直径约为30-150纳米，由脂质双分子层包裹，内含蛋白质、核酸等多种生物活性分子。外泌体广泛存在于各种体液中，包括血液、尿液、唾液等。
外泌体的提取方法多样，如超速离心法、密度梯度离心、超滤离心、磁珠免疫法、PEG-base沉淀法和试剂盒提取等。超离法操作简便，回收率较高，但过程耗时且可能损害外泌体质量；密度梯度离心法纯度较高，但步骤繁琐、耗时；超滤离心法简单高效，不影响外泌体生物活性；磁珠免疫法具有特异性高、操作简便的优点，但效率低、生物活性易受影响；PEG-base沉淀法早先应用于病毒收集，原理与竞争性结合水分子有关；试剂盒提取法通过特殊设计过滤器或空间排阻色谱法实现分离纯化。
外泌体的鉴定方法包括电镜检测、粒径检测和Western Blot检测。电镜检测通过负染方法直接观察单个外泌体形态和大小；粒径检测准确、快速、重复性好，对外泌体大小进行整体评估；Western Blot检测通过抗原抗体特异性结合原理，对外泌体标志蛋白进行检测，实现蛋白质层面对外泌体的鉴定。
外泌体在生理病理标志物和药物递送方面有巨大应用潜力。它们作为肿瘤液体活检的新前沿，具有非侵入性、样本易收集、稳定循环、富含标志物等优势，成为液体活检中最具潜力的生物标志物。此外，外泌体作为无细胞治疗的新兴方案，因其低免疫原性、高耐受性、高通透性、可靶向改造、易获得等特性，在疾病治疗中展现出巨大潜力。
鹿明生物提供专业的蛋白质组学服务，具有丰富的外泌体分离及蛋白质组检测经验。通过结合4D-DIA技术，实现高深度鉴定、高重复性、高定量准确性。基于超微量蛋白质组技术，鹿明生物能够极大节约样本，适用于稀有难收集样本的外泌体分离及蛋白质组检测，扩大了检测样本类型。
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㈡ 分离外泌体后，鉴定怎么做
研载生物科技（上海）有限公司为您解答：国际细胞外囊泡学会（ISEV）建议对于分离获得的外泌体需从大小、形态、表面标志物这三个方面进行鉴定。首先，大小鉴定通常通过流式细胞术、纳米粒度分析等方法进行，以确保外泌体颗粒尺寸符合预期。其次，形态鉴定主要关注外泌体的形状、完整性及是否有聚集现象，可通过电子显微镜观察来实现。最后，表面标志物的鉴定则需确认外泌体表达的特定蛋白质或糖类，常用方法包括免疫荧光染色、免疫印迹及流式细胞术等。
除此之外，对于外泌体的内含物，通过高通量测序、蛋白质谱、代谢组分析等组学方法进行全方面分析。高通量测序可以揭示外泌体携带的RNA种类和数量，蛋白质谱则能识别外泌体中特定蛋白质的组成，而代谢组分析则可检测外泌体中的代谢产物，从而了解其功能特性。
研载生物科技（上海）有限公司提供从细胞培养、外泌体提取、鉴定、示踪、测序、整体实验等相关实验服务，凭借丰富经验，致力于为客户提供高质量、高效率的解决方案。欢迎咨询。
㈢ 外泌体标志物怎么选择鉴定
外泌体标志物的选择鉴定是外泌体研究中的关键环节，以下从标志物类型及选择依据、鉴定方法等方面进行介绍：
常见外泌体标志物类型
膜蛋白标志物
CD63：属于四次跨膜蛋白超家族，在多种细胞来源的外泌体表面高度表达，常被用于外泌体的鉴定和分离。
CD81：也是四次跨膜蛋白，参与细胞间的相互作用和信号传导，在不同细胞分泌的外泌体中广泛存在。
CD9：同样是四次跨膜蛋白家族成员，与外泌体的生物发生和功能调节有关，可作为外泌体的通用标志物。
细胞质蛋白标志物
GAPDH：作为一种糖酵解途径中的关键酶，在细胞内广泛存在且含量相对稳定，常被用作内参蛋白，也可作为外泌体的标志物之一。
热休克蛋白（HSP）：如 HSP70、HSP90 等，参与蛋白质的折叠、转运和降解，在应激条件下，外泌体中 HSP 的表达会发生变化，可作为外泌体的特征性标志物。
脂质标志物
神经酰胺：是外泌体膜的重要组成成分，在维持外泌体膜的结构和功能方面发挥重要作用，其含量和组成可作为外泌体鉴定的指标之一。
磷脂酰丝氨酸（PS）：正常情况下位于细胞膜内侧，在细胞凋亡或外泌体形成过程中，PS 会外翻到细胞膜外侧，可作为外泌体的一个特征性标志物。
选择依据
特异性：理想的标志物应在目标外泌体来源的细胞或组织中特异性表达，而在其他细胞或组织中表达量极低或不表达，这样可以准确地识别和鉴定目标外泌体。
稳定性：标志物在不同的生理和病理条件下，以及在不同的实验处理过程中，都应具有良好的稳定性，能够可靠地反映外泌体的存在和特征。
丰度：标志物在目标外泌体中的表达量应相对较高，以便于检测和分析。高丰度的标志物可以提高检测的灵敏度和准确性，减少假阴性结果的出现。
功能相关性：选择与外泌体的生物发生、分泌、摄取或功能相关的蛋白质作为标志物，不仅可以用于外泌体的鉴定，还可以为研究外泌体的生物学功能提供线索。
鉴定方法
免疫印迹法（Western blot）：利用抗原与抗体的特异性结合原理，通过电泳分离外泌体蛋白，然后与特异性抗体反应，检测外泌体标志物的表达情况，可用于确定外泌体中是否存在特定的标志物蛋白。
酶联免疫吸附试验（ELISA）：将外泌体捕获在固相载体上，然后与特异性抗体结合，通过酶标二抗检测结合的抗体量，从而定量分析外泌体标志物的含量，具有较高的灵敏度和特异性。
流式细胞术：将外泌体与荧光标记的特异性抗体结合，通过流式细胞仪检测外泌体表面标志物的表达情况，可对单个外泌体进行分析，快速、准确地鉴定外泌体及其亚群。
免疫电镜：将外泌体样品与特异性抗体结合，然后用电子显微镜观察，可直观地看到外泌体表面标志物的分布和定位，同时还能观察外泌体的形态和大小。
㈣ 外泌体定量蛋白质组学服务
外泌体作为CNS核心期刊的热门研究对象，其携带的膜蛋白尤其在临床转化中展现出重大价值。通过组织与血浆外泌体对比，它们被视为疾病标志物发现的黄金途径。在复杂样本如血浆/血清中，外泌体蛋白研究面临脂蛋白干扰的挑战，华盈生物为此开发了一套高效技术方案。
华盈生物的外泌体蛋白质组服务采用了专门的提取方法，如超速离心、尺寸排阻和密度梯度离心，确保在样本用量极低的情况下，如0.5mL血浆，仍能获取高质量的蛋白质组数据。他们的技术平台在检测外泌体蛋白数量上达到行业领先，已鉴定出超过2300种蛋白质，涵盖了多种样本类型，包括特殊样本如胃液、脑脊液等。
纯度是外泌体研究的关键，华盈生物的组织外泌体分离技术保证了高纯度，符合顶级期刊的要求。华盈生物整合质谱和抗体芯片技术，质谱擅长新蛋白尤其是膜蛋白的鉴定，抗体芯片则凭借高灵敏度准确检测分泌蛋白（可检测500+种）。
以血浆外泌体S100-A9蛋白的研究为例，它被发现能激活NF-κB促进淋巴瘤复发，展示了外泌体蛋白的临床潜力。通过客户文献，华盈生物的外泌体研究已应用于多个领域，包括肿瘤、肝炎、干细胞治疗、免疫疗法等，揭示了外泌体在疾病诊断、预后和机制解析中的重要作用。
华盈生物的技术成果和丰富案例，为外泌体定量蛋白质组学研究提供了强大支持，帮助科研人员在探索疾病标志物和理解外泌体生物学作用的道路上取得了突破性进展。