叶绿素检测方法

❶ 叶绿素的提取液和层析液分别是什么

提取液：丙酮5ml。

层析液：石油醚。

在做叶绿体色素分离时用到,将叶片碾碎，浸出绿色液体，将液体与层析液（石油醚）混合，将滤纸一段进入混合液体，四种色素在层析液中的溶解度不同，在滤纸上留下4条色素带。由此观查出各种色素的相对含量和种类。

纸层析法一般用于叶绿体中色素的分离，叶绿体中色素主要包括胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b，它们在层析液中的溶解度不同，溶解度大的随层析液在滤

纸上扩散地快，反之则慢；含量较多者色素带也较宽。最后在滤纸上留下4条色素带，所以利用纸层析法

能清楚地将叶绿体中的色素分离。

叶绿素提取后的色素带分布：最上端橙黄色为胡萝卜素，其次黄色为叶黄素，再下面蓝绿色为叶绿素a，最后的黄绿色为叶绿素b。

(1)叶绿素检测方法扩展阅读

叶绿素含量的测定方法主要有紫外分光光度法、荧光分析法、活体叶绿素仪法、光声光谱法和高效液相色谱法。不过目前应用最为广泛的还是分光光度法。

叶绿素提取液的吸收光谱表明：有两个强吸收峰，分别在红光区和蓝紫区，不同提取溶剂和原料所得的叶绿素溶液的吸收光谱比较相似。

叶绿素a、叶绿素b的红区最大吸收峰分别在663nm、645nm附近，在蓝紫区分别为429nm、453nm附近。由于提取溶剂和原料不同，对叶绿素提取液进行光谱扫描后，所得的最大吸收值可能有较小范围的浮动。

高效液相色谱(HPLC)定量检测叶绿素含量准确率较高，效果很好。用甲醇和丙酮作为流动相，体积比为80：20时，同时在流动相中加入质量分数为0.1%的冰醋酸，流速为1.0mL/min。利用每一种色素的色谱峰面积进行定量，叶绿素a、叶绿素b的定量可通过外标法由工作曲线求得。

❷ 叶绿素a的测定方法有哪些各有哪些优缺点

叶绿素a的测定方法有哪些
一.单色分光光度法测定叶绿素含量时，要测定665和750nm处的吸光度．根据文献，665nm处光密度值应该在0.1-0.8之间.
叶绿素含量测定选取待测样品0.5g,用80%丙酮溶液抽提,定容到10mL,测652nm处吸光度.
计算方法方式:
计算样品叶绿素总量
Ct= D652× 1000/34.5 (1)
式中Ct-- 样品总叶绿素含量,mg/L;D652-- 样品丙酮抽提液在652nm处的吸光值。
回

二.叶绿素含量测定选取待测样品0.5g,用80%丙酮溶液抽提,定容到10mL,测652nm处吸光度.
计算方法方式:
计算样品叶绿素总量
Ct= D652× 1000/34.5 (1)
式中Ct-- 样品总叶绿素含量,mg/L;D652-- 样品丙酮抽提液在652nm处的吸光值。

❸ 液相色谱能测叶绿素含量吗怎么测

可以

液相色谱法的最早应用是用于分离植物色素，其方法是这样的：在一玻璃管中放入碳酸钙，将含有植物色素（植物叶的提取液）的石油醚倒入管中。此时，玻璃管的上端立即出现几种颜色的混合谱带。然后用纯石油醚冲洗，随着石油醚的加入，谱带不断地向下移动，并逐渐分开成几个不同颜色的谱带，继续冲洗就可分别接得各种颜色的色素，并可分别进行鉴定。色谱法也由此而得名。
现在的色谱法早已不局限于色素的分离，其方法也早已得到了极大的发展，但其分离的原理仍然是一样的。我们仍然叫它色谱分析。
一、色谱分离基本原理：
由以上方法可知，在色谱法中存在两相，一相是固定不动的，我们把它叫做固定相；另一相则不断流过固定相，我们把它叫做流动相。
色谱法的分离原理就是利用待分离的各种物质在两相中的分配系数、吸附能力等亲和能力的不同来进行分离的。
使用外力使含有样品的流动相（气体、液体）通过一固定于柱中或平板上、与流动相互不相溶的固定相表面。当流动相中携带的混合物流经固定相时，混合物中的各组分与固定相发生相互作用。
由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中先后流出。与适当的柱后检测方法结合，实现混合物中各组分的分离与检测。
二、色谱分类方法：
色谱分析法有很多种类，从不同的角度出发可以有不同的分类方法。
从两相的状态分类：
色谱法中，流动相可以是气体，也可以是液体，由此可分为气相色谱法（GC）和液相色谱法（LC）。固定相既可以是固体，也可以是涂在固体上的液体，由此又可将气相色谱法和液相色谱法分为气-液色谱、气-固色谱、液-固色谱、液-液色谱。

❹ 怎么测叶绿素

液相色谱法的最早应用是用于分离植物色素，其方法是这样的：在一玻璃管中放入碳酸钙，将含有植物色素（植物叶的提取液）的石油醚倒入管中。此时，玻璃管的上端立即出现几种颜色的混合谱带。然后用纯石油醚冲洗，随着石油醚的加入，谱带不断地向下移动，并逐渐分开成几个不同颜色的谱带，继续冲洗就可分别接得各种颜色的色素，并可分别进行鉴定

❺ 辣椒植株叶绿素含量的测定方法怎么取材怎么测定

辣椒植株叶绿素含量的测定方法，取材，测定如下：
材料、仪器设备及试剂

（一）材料：新鲜（或烘干）的植物叶片。
（二）仪器设备：1. 分光光度计；2. 电子顶载天平（感量0.01g）；3. 研钵；4. 棕色容量瓶；5. 小漏斗；6. 定量滤纸；7. 吸水纸；8. 擦境纸；9. 滴管。
（三）试剂：96％乙醇（或80％丙酮）；石英砂；碳酸钙粉。
步骤
1. 取新鲜植物叶片（或其它绿色组织）或干材料，擦净组织表面污物，剪碎（去掉中脉），混匀。2. 称取剪碎的新鲜样品0.2g，共3份，分别放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及2～3ml95％乙醇，研成均浆，再加乙醇10ml，继续研磨至组织变白。静置3～5min。3. 取滤纸1张，置漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤到25ml棕色容量瓶中，用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。4. 用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用乙醇定容至25ml，摇匀。5. 把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内。以95％乙醇为空白，在波长665nm、649nm下测定吸光度。

实验结果计算：将测定得到的吸光值代入下面的式子：Ca=13.95A665－6.88A649；Cb=24.96A649－7.32A665。据此即可得到叶绿素a和叶绿素b的浓度（Ca、Cb：mg/L），二者之和为总叶绿素的浓度。最后根据下式可进一步求出植物组织中叶绿素的含量：
叶绿素的含量（mg/g）= [叶绿素的浓度×提取液体积×稀释倍数]/样品鲜重（或干重）。

❻ 叶绿素含量测定分光光度法实验中,总叶绿素测定波长为什么选取652nm

叶绿素a的测定方法有哪些
一.单色分光光度法测定叶绿素含量时，要测定665和750nm处的吸光度．根据文献，665nm处光密度值应该在0.1-0.8之间.
叶绿素含量测定选取待测样品0.5g,用80%丙酮溶液抽提,定容到10mL,测652nm处吸光度.
计算方法方式:
计算样品叶绿素总量
Ct= D652× 1000/34.5 (1)
式中Ct-- 样品总叶绿素含量,mg/L;D652-- 样品丙酮抽提液在652nm处的吸光值。
回
二.叶绿素含量测定选取待测样品0.5g,用80%丙酮溶液抽提,定容到10mL,测652nm处吸光度.
计算方法方式:
计算样品叶绿素总量
Ct= D652× 1000/34.5 (1)
式中Ct-- 样品总叶绿素含量,mg/L;D652-- 样品丙酮抽提液在652nm处的吸光值。

❼ 怎样测叶绿素a 以及怎样进行蓝藻计数

欲知封闭水域会否出现藻类疯长，如蓝藻爆发等现象，应监测水域中的藻类数量以及水质，由于对藻类等浮游植物采用计数的方法测定误差较大，耗时费力，对检测人员的工作经验要求相对较高，一般可测定水中的叶绿素a含量代替藻类测定。当水中的叶绿素a含量突然增高，而且水中含有大量氮、磷等营养物质，加上阳光照射强烈，气候炎热等因素，该水域极有可能发生藻类疯长，可通知各有关部门尽早采取应对措施。

因为藻类是一类含叶绿素的、光合自养的、无胚的原植体植物，在浮游藻类里叶绿素a的含量大约占有机物比重的1～2%，是估算藻类生物量的较好指标。可预先测定藻类计数和叶绿素含量的相关关系，以叶绿素a的含量来推算藻类的数量，即通过测定水中的叶绿素来快速了解藻类的大致数量。

测定叶绿素a的仪器和方法有许多种，分光光度法测定叶绿素a是一简便易行的测定方法，水样经离心或过滤浓缩、研磨、丙酮提取后，定容，取上清液分别测量750nm、645nm、663nm、652nm等几个波长下的吸光度值，根据经验公式可分别计算出叶绿素a、叶绿素b和总叶绿素的含量。

分光光度法测定叶绿素a，与测定其他物质稍有不同，如：测磷只需测定单一波长的吸光度值，再以该吸光度值代入由标准溶液测得的校准曲线计算含磷量。而叶绿素a无法使用校准曲线，需用几个波长下的吸光度值，根据经验公式来分别计算出各项指标的含量。因为叶绿体色素由叶绿素a、叶绿素b等物质组成，试液是多组分的混合溶液，在试液中分离这几类物质的难度较大，且无必要。叶绿素a在645nm和663nm 处均有吸收，在645nm处吸光系数较小，为16.75，在663nm 处较大，为82.04；叶绿素b 在645nm和663nm 处亦都有吸收，但在645nm处吸光系数较大，为45.60，在663nm 处较小，为9.27。由此可知：叶绿素a的吸收峰值出现在663nm 处，该吸收曲线延伸到645nm处，在此波长处的吸收系数不如在663 nm 处大，因此在计算公式中求算叶绿素a的含量时，需扣除叶绿素b在663nm和645nm 处的吸光度值，再进行计算。

标准分析方法要求，叶绿体色素提取液不可浑浊，在710nm或750nm波长下测量吸光度，其值应小于叶绿素a吸收峰的吸光度值的5％，否则应重新过滤。假定样品在663nm处的吸光度值为0.03，则在750nm处的吸光度值不得大于0.0015，对试液的清澈程度要求很高，测量710nm或750nm的目的是避免悬浮物质的干扰，一般测量水中的浑浊度所采用的波长为680nm，为避免在680nm处仍有叶绿素a产生的吸收值，故将测量浑浊度的波长选在710nm以上。在计算公式中，凡参与计算的各吸光度值都应减去710nm处的吸光度值，以扣除悬浮物质的干扰。

采用分光光度法测定叶绿素含量，对测量仪器分光光度计的波长精确度要求较高。如果波长与原吸收峰波长相差1nm，则叶绿素a的测定误差为2％，叶绿素b为19％，使用前必须对分光光度计的波长进行校正。校正方法除按仪器说明书外，还应以纯的叶绿素a和b来校正。