① 如何检验酸奶中的乳酸菌要具体的实验步骤和方法及原理
太麻烦的，要有条件，把样品稀释后，例如估计含乳酸菌的量，稀释到每毫升大约30-300个左右，再用特殊的平板培养基，添加了1%碳酸钙的平板培养基，采用倾注法与呈液体状态的40度含碳酸钙的琼脂营养培养基混合，倒制于90毫米在小平皿中，培养后，长出菌落，同时，菌落周围有透明圈的，就是乳酸菌，还可以计数，再剩稀释倍数，还可得含量。
② 如何测定乳酸菌的含量
菌种的分离 取lmL卤汁以10倍递增稀释方法（一份酸奶，九份无菌水，再取一份第一只管中溶液，加九份无菌水，依次类推），将其稀释至1/10～10的-10次幂（我打不上去），然后从不同浓度稀
释液中分别取lmL倾注在平皿中，再倒入培养基相混合，待培养基凝固后倒置于30~C恒温下
培养48h。挑取长势良好的单个茵落划线分纯，直至纯化(茵落单个大小一致，革兰氏染色镜
检，茵体一致)。结果分离得到3株不同菌株，分别编号为菌株1、菌株2、菌株3。再分别转移
到试管斜面上进行保存。
分离用培养基：牛肉膏5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，蒸馏水1 000 mL，琼脂20g，pH7．0—7．2
；保存用斜面培养基：酵母膏1％ ，碳酸钙2％ ，葡萄糖1％ ，琼脂2％ ，pH 7．0。
培养条件
将分离出的菌株1、菌株2、菌株3分别接种在上述4种不同的培养基上，
在30。【=恒温条件下培养48h后观察并测定其培养结果。
测定方法 菌落总数采用逐级稀释法来计数；pH值用pHS一2C酸度计测定；乳酸定性
及含量测定依据食品检验技术
1I．2．1乳酸菌的分离与筛选的试验程序 自然发酵酸奶---稀释---培养---挑起单菌落染色、镜检一挑
选革兰氏阳性球菌单菌落一Ⅲ号培养基一挑选溶钙圈大的球菌反复在Ⅲ号培养基上几次纯化筛选一单菌落优
良菌株一试管穿刺低温保存。
1．2 1．2 乳酸菌的鉴定 用光学显微镜、放大镜进行乳酸菌的形态特征鉴定。生理生化特征鉴定：产乳
酸定性试验——乳酸纸层析法0- 、过氧化氢酶(接触酶)反应�6�8、明胶水解反应 、硫化氢反应 、乳酸菌
发酵营养型试验0 、耐盐、酸、温度试验。
1．2．I．3 乳酸菌的保存�6�8 采用定期移植低温保藏法。培养基配方：葡萄糖1％ 、蛋白胨0 2％ 、
l(}l2PQ|0．2％、琼脂20％、pH值7 0，分装试管，121。c灭菌30min。将使用对数生长期后期的细胞进行穿刺
培养，然后密封存于冰箱玲藏室内(5qc左右)，2个月移植1次。
1．2．2 分离乳酸菌的生理特点试验
1 2 2．1 最适生长温度的测定OD值以同温下不接种培养基作对照，定期取出接种培养基在721分光光度
计上，用最大吸收光波长 =6001RIifl测定。
1．2．2．2 生长周期的测定oD值(方法同上)；pH值：PHB一4pH计；可滴定酸(以乳酸计)：吸取ImL菌液
加入9Ⅱ1L蒸馏水，加入1～2滴酚酞，用0．1NNaOH滴定。
1．2 2．3 最适pH值的测试、最适盐浓度的测试。
供试样品及培养基
分离用样品：酸奶、酸奶及西红柿均为市售
分离用培养基：①BCP培养基：酵母膏2 5g，蛋白胨5g，葡萄糖5g，溴甲酚紫0 04g，琼脂15g，
蒸槽水lO00ml，pH7 0；②MRS培养基见文献 。
菌种保藏用培养基：脱脂乳培养基：新鲜牛乳离心去掉上层乳脂，下层奶液分装试管，105℃
灭菌20mln。
菌利 鉴定用培养基见文献 6。
1 2 方法
1 2 1 乳酸菌的分离纯化 取泡菜汁、酸奶、西红柿表面洗液进行梯度稀释，分别用倾注法、涂布
法和划线法在BCP和MRS培养基平板上进行菌种分离。挑取在BCP平板上有透明目的菌落，在
MRS平扳上有溶钙圈的菌落，反复纯化至纯种，挑菌至脱脂牛奶试管中保存
1．2 2 乳酸菌复筛对初筛菌株进行革兰氏染色，保留革兰氏阳性菌株．并对其所产乳酸能力进
行定性、定量分析，筛选出产酸高的菌株保存，再把产酸高的菌株经萝l、汁发酵 】，进一步选择产
酸高、_l】味纯正的菌株保存鉴定
1 2 3 乳酸定性测定果用纸层析法。溶剂系统为乙醇：浓氨水：水=80：5：15，显色剂为0 04％
的溴甲酚紫酒精溶液。层析时将乳酸、柠檬酸配成1％ 的标准溶液，两种标准溶液 及乳酸发酵液
均点样3 ．上行层析，显色与标准样比较
1．2 4 乳酸的定量测定采用气相色谱法，利用苄酯化法制备乳酸衍生物，将待测乳酸菌株在产
酸培养基内37"C培养3d，离心。取上清液剃备衍生物，气相色谱分析含量。气相色谱工作条件为：
EGS色谱柱，柱温160'C，气化温度180'17．，检测器温度l70"C，载气为N，。
1．2 5 菌种鉴定根据《简明第八版伯杰细菌鉴定手册》 和《一般细菌常用鉴定手册》[6 对复筛
出的菌株的形态、生理生化、碳源利用等方面进行系统鉴定，并提取乳酸菌株DNA，采用熔链温度 .
③ 乳酸度怎样测
乳酸度（%）=V*F*0.009/（乳样的体积（mL）*乳的相对密度）；
式中，V——中和乳样的酸所消耗的0.1mol/L的氢氧化钠体积（mL）；F——0.1mol/L的氢氧化钠的校正系数；0.009——1mL0.1mol/L氢氧化钠能结合0.009g乳酸。
很简单，将一定量的乳酸溶于水中，以酚酞做指示剂，用标准氢氧化钠溶液滴定就可以了。
⑤ 乳酸、丙酮酸和乙酸如何鉴定
丙酮酸检测试剂盒可测各种动物血清（浆）、组织以及培养细胞、细胞培养上清液等样本中丙酮酸含量。丙酮酸与显色剂反应，反应产物在碱性溶液中显红棕色，颜色深浅与丙酮酸含量成正比，通过比色可以测定出丙酮酸的含量。
原理：丙酮酸盐检测试剂盒提供了一种简单、直接和可自动化操作的程序来测量不同生物学标本中丙酮酸的含量。适用标本类型包括：食物、细胞、培养基和发酵培养基。丙酮酸盐检测试剂盒基本原理如下：丙酮酸盐被丙酮酸酶氧化，在酶反应过程中产生颜色（λ=570 nm）或者荧光（Ex/Em=535/587 nm），可使用酶标仪或荧光计检测到。光的强度与丙酮酸含量是成正比的，因此通过检测光的强度即可精确的得到丙酮酸的含量。试剂盒检测范围为1-10 uM丙酮酸。
丙酮酸检测试剂盒
丙酮酸分子式CH3COCOOH，原称焦性葡萄酸(德Brenztr-aubensure)，是参与整个生物体基本代谢的中间产物之一。丙酮酸可通过乙酰CoA和三羧酸循环实现体内糖、脂肪和氨基酸间的互相转化，因此，丙酮酸在三大营养物质的代谢联系中起着重要的枢纽作用。
丙酮酸是糖无氧代谢的产物，研究工作者将丙酮酸和乳酸一同测定，并用二者的比值推测循环衰竭的严重程度；此外，它还对维生素B1缺乏有一定的研究意义，同时作为一种重要的精细化工中间体,广泛应用于医药、农药、食品等领域,尤其是作为医药中间体,具有良好的发展前景。
应用[4][5]
用于大肠杆菌丙酮酸代谢途径改造及丙酮酸高产菌株培育
丙酮酸作为最重要有机酸之一,在医药、食品、化工等领域以及科学研究中都具有广泛的用途。目前高质量的丙酮酸在国内市场缺口较大,丙酮酸工业化生产的前景十分广阔。
从野生型大肠杆菌K-12 MG1655菌株出发,利用CRISPR/Cas9技术敲除了乳酸脱氢酶基因（ldh A）,截断了乳酸合成途径;敲除了丙酮酸氧化酶基因（pox B）、磷酸转乙酰基酶基因（pta）和乙酸激酶基因（ack A）,截断了乙酸合成途径;敲除了丙酮酸-甲酸裂解酶基因（pfl B）,截断了甲酸合成途径;敲除了磷酸烯醇丙酮酸合成酶基因（pps A）,减少了丙酮酸生成磷酸烯醇式丙酮酸;敲除了磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因（ppc）,减少了磷酸烯醇式丙酮酸的消耗;通过敲除延胡索酸还原酶复合体基因（frd BC）,削弱了三羧酸循环途径。最后得到了一株可以初步积累丙酮酸的基因工程改造菌株MG1655-GP7（E.coli K-12 MG1655Δldh AΔpfl BΔack AΔptaΔpox BΔppcΔfrd BCΔpps A）,这株菌在使用5 L发酵罐发酵68小时后丙酮酸产量达到32.07 g/L。
这表明只利用基因工程的手段是可以使大肠杆菌积累丙酮酸的。大肠杆菌利用葡萄糖作为碳源时,葡萄糖经糖酵解途径会产生过量的ATP与NADH从而抑制丙酮酸的积累,使用氧化程度较高的葡萄糖酸作为碳源可解决此问题;当葡萄糖进入细胞后不经EMP途径而是进入Entner-Doudoroff（ED）途径,产生的ATP与NADH的量只有前者的一半,会相应的促进丙酮酸的积累。为了进一步提高产量,作者又敲除磷酸葡萄糖异构酶基因（pgi）以抑制糖酵解途径;同时敲除6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶基因（gnd）以抑制磷酸戊糖途径,并减少6-磷酸-葡萄糖酸的消耗;还在敲除磷酸葡萄糖转移酶基因（pts G）和磷酸烯醇丙酮酸葡萄糖转移酶基因（pts I）的基础上敲入运动发酵单胞菌中葡萄糖转运蛋白基因（glf）来改良葡萄糖转运系统,减少大肠杆菌细胞转运葡萄糖时磷酸烯醇式丙酮酸的消耗。
并计划上调葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因（zwf）、葡萄糖酸-6-磷酸脱水酶基因（edd）和2-酮-3-脱氧葡萄糖酸-6-磷酸醛缩酶基因（eda）的表达以强化ED途径,平衡ATP和NADH的水平,引导碳流更多的流向丙酮酸合成方向。
目前通过基因编辑的方法得到了一株生产丙酮酸能力理论上较MG1655-GP7菌株有所提高的MG1655-GP12（E.coli K-12 MG1655Δldh AΔpfl BΔack AΔptaΔpox BΔppcΔfrd BCΔpps AΔgndΔpgiΔpts GΔpts I::glf）菌株,该菌株的生产能力正在评估中。但经多次基因改造后,基因工程菌株MG1655-GP12出现了较野生型菌株生长缓慢的现象,本实验对该菌株进行了实验室适应性进化,经多次传代后筛选到一株生长速度恢复到野生型菌株75%的MG1655-GP12-1菌株。
⑥ 乳酸的检验方法是什么
您好3M微生物快速检测片包括：细菌总数测试片，乳酸菌测试片，大肠菌群测试片，大肠杆菌(同时检测大肠菌群)测试片，金黄色葡萄球菌测试片，霉菌酵母菌测试片，肠杆菌科测试片，环境李斯特测试片，快速大肠菌群测试片，高灵敏度大肠菌群测试片，沙门和李斯特试剂盒，3M快速涂抹棒，电子移液枪，ATP荧光检测仪。3M微生物快速检测片是一种检测微生物的快速检测方法，操作简单，结果准确，只需要三步即可完成，接种，培养，判读。不需要很熟练的化验技巧。Petrifilm能减少测试时间。对于大肠菌群测试时间能从48小时以上减少到24小时，对于大肠菌群，测试时间能从120小时减少到24小时，而金黄色葡萄球菌的测试时间能从96小时以上减少到24小时。操作简单，无须验证实验，结果准确。因此，使用Petrifilm，你将能得到更好的现金流，减少库存和储存的费用，更好的财务控制以及赢得更有利的市场时间。（三）全球化的认证，国际化的使用方法：目前3M微生物测试片已是中国的国家行业标准：细菌总数，SN/T1897-2007大肠菌群SN/T1896-2007，大肠杆菌SN/T1896-2007，金黄色葡萄球菌SN/T1895-2007山东省出入境检验检疫局食品实验室，青岛市出入境检验检疫局食品实验室以及潍坊市商检局，临沂局，济南局等也在应用该产品进行微生物含量的常规检测。作为全球化的一种快速测试方法，3M测试片已得到国际上许多权威机构的认证。如：美国分析化学协会（AOAC），法国标准化协会（AFNOR），北欧国家认证(NordValValidation)，加拿大健康保护协会(HealthProtectionBranch)，新西兰食品安全认可方法(NewZealandFoodSafetyAuthority)，日本食品安全法规标准分析方法()，韩国联邦法典(KoreaCodeofFederalRegulation)澳大利亚VictorianDiaryInstryAuthority。目前已是韩国国家的检测方法，而且通过了日本的检测机构-------农林水产省的认可。另外也是比利时，芬兰，智力等国的国家官方推荐方法。（四）提高准确性，减少安全隐患：在生产车间，传统检测方法使用的试管，培养皿等玻璃器具一旦进入设备或是原料，半成品，带来的风险是不可估量的。3M的产品全部使用塑料聚合物，避免了这一隐患，降低了传统方法可能引入物理性污染的可能性。同时，对在生产车间的表面接触实验，空气监控，3M方法简便准确，有助于长期监控，得到稳定可比对的实验结果。采用Petrifilm测试片，大大提高了实验室的工作效率，这使得员工可以有时间去开展其他较为复杂病原菌实验（如分析沙门氏菌和李斯特氏菌等），在工厂使用传统的方法进行检测的时候，这些工作常常会因为没有足够的时间而被忽略。另外，节省的时间和人力也能用于某些预防工作：环境保护，培训和在工厂实施HACCP。想购买3M测试片找我，[email protected]
⑦ 如何快速测定乳酸含量
这………………
快速是要多快速？还有，对准确度的要求怎样？您是要测什么东西里的乳酸含量？不说清楚的话，还真不好办……毕竟测定乳酸含量的方法有酸碱滴定法、EDTA定钙法、旋光法、UV-酶法、酶电极法、层析法、液相色谱法（这个还分为高效液相色谱法、反相高效液相色谱法……）……而每种测定方法又都有一定的使用范围和要求，准确性也不同。另外，还受测定方法的成本以及对检测速度要求的影响。
所以，请您说清楚点好吗？
⑧ 如何测定乳酸是L
乳酸,学名为2-羟基丙酸.分子中有一个不对称碳原子,具有旋光性,因此有L-乳酸与D-乳酸两种旋光异构体.用旋光仪测定旋光度就可以判定.
⑨ 酒醅中的酸度，用口尝，怎样能判断出准确数据
酸度的概念
酸在大曲酒醅发酵中是不可缺少的物质，在生产中，对酸度有三种测定方法。
1.1 在酒醅化验中，其酸度是指利用酸碱中和原理测定，其定义为100克酒醅滴定消耗氢氧化钠的毫克分子数，以度表示。
1.2 酒中有机酸，以酚酞为指示剂，用氢氧化钠溶液中和滴定，以乙酸计总酸量，单位为每升克数。
1.3 用pH计或试纸测定其pH值
pH值的测定可用简单的pH试纸来进行，这种方法简单快速，但测定精确度低，易受检查液色泽或所含的杂质干扰，影响它的准确性。
用酸度计测定，不但测定精确度更高，而且测定样品的范围也更广。它操作方便、迅速、准确，除可用于酿造、发酵酒醪和酒糟以及黄水等的pH值的测定外，也可用于对浓香型曲酒生产的窖泥的pH值的测定。在测定中，可排除或减小这些样品中所含的色泽和杂质对测定结果造成的影响，测得较准确的数据。
2.酸在酒醅发酵中的作用
酸的作用，业内人士公认的有以下几点：
2.1 酒醅中适当的酸度，可以抑制部分有害杂菌的生长繁殖，起到以酸制酸的作用，不影响酵母菌的发酵能力。
2.2 酸能把淀粉等物质水解成糖，有利于糊化和糖化作用。
2.3 酸能增加呈香呈味物质的形成。
2.4 酸能参与酯化反应。
3.酸度、总酸、pH值三者之间的关系
酸度、总酸、pH值三者之间有一定的内在联系，但因检测方法、换算单位不同，它们又不能相互替代。
3.1 酒醅酸度与pH值两者之间的关系
酒醅酸度是100克酒醅滴定消耗氢氧化钠的毫克分子数，以度表示。与总酸检测原理和方法是一致的，但计算方法和换算单位不同，所得值也不同。酒醅酸度与pH的关系见图1、图2。
酸度与pH值两者之间的关系大体上是酸值高，pH值低，但不是线性或曲线的关系，说明它们有一定的内在联系，但不是对等的关系。
3.2 酒中总酸与pH值的关系如图3、图4
从图3、图4中可以看出，总酸与pH两者呈无规律的变化，表明酒中总酸的大小不能依pH值的高低来判断。
4.讨论
4.1 酒中酸的情况
对而言，它的酸类物质主要由有机酸组成，主要来源于酒醅发酵过程中的乙酸、丙酸、丁酸、乳酸、己酸和高级酸等。其大部分以游离状态存在，小部分以盐类形式存在。计算总酸时，以有机酸为主，折算为乙酸的含量。总酸的概念并未直接表示出酒的酸度强弱，只表明了酒中有机酸相对含量即每升的克数。我们设计了一个试验，分别称重甲酸、乙酸等9种有机酸，用30%乙醇溶液定容至100mL，测得总酸为0.359g/L。用称重法，按乙酸折算总酸是0.307g/L，每升相差52mg，两者之间误差可能来自于操作等方面的原因，可以忽略不计。此实验说明用氢氧化钠滴定测总酸能较好的反应酒中有机酸的确切总含量。
从大量的试验数据分析，中酸的总体变化趋势是酸度大，pH值则低。但从小区域范围内来看，实际情况并非如此，pH值并不能比较中总酸含量的多寡。
有机酸都属于弱酸，弱酸在水溶液中只有一小部分发生电离，大部分仍以未电离分子形式存在。如一种强酸在水溶液中，它的酸含量多少与pH值的高低，应该呈较好的线性关系。但酒中酸大都是有机酸，受发酵、蒸馏等多种因素的影响，酸的种类和含量并不固定，即便是同一个酿酒小组，不同的窖池，所产的酒也难有固定的值。当测定相同总酸的不同样品时，由于样品中所含酸的种类不同，酸的电离程度就各不相同，各自离解氢离子的能力也不同，所测的pH值就会存在差异性。中的pH值大小取决于各种有机酸的性质、相对含量及在中的状态。
酒醅的酸度因检测方法同总酸检测方法一样，也是可以折算成总酸的。
4.2 酒中乳酸的测定
乳酸是中一种重要的酸，检测方法多用常规化学分析中采用的比色法进行定量分析，但并不属于食品分析上酸度这一概念。气相色谱的普及特别是毛细管的运用，可以分析多种有机酸，但由于乳酸易在汽化室受热分解，质谱分析仅检出它的分解物二氧六环，因此，不能直接进样分析，只能通过其它途径解决。