A. 測定葡萄糖含量的方法
葡萄糖注射液中葡萄糖含量的測定
摘要 運用氧化還原滴定的原理設計葡萄糖注射液中葡萄糖含量的測定方案並具體實施。從而進一步掌握Na2S2O3及I2標准溶液的配製和標定方法，鞏固氧化還原滴定的操作技能。學會間接碘量法測定葡萄糖含量的方法和原理，進一步掌握返滴定法技能。其中，葡萄糖分子中含有醛基，能被IO-定量地氧化為羧基。故可將一定量過量的I2在鹼性條件下加入葡萄糖溶液中，使醛基完全轉化為羧基。再將其酸化，用Na2S2O3標准溶液滴定析出的I2。所用指示劑為澱粉。根據所加I2標准溶液的量及滴定所耗Na2S2O3標准溶液的量結合反應式中各物質之間的計量關系，便可計算葡萄糖的含量。該方法簡便易行且准確度高，基本符合實驗要求。
關鍵詞 葡萄糖注射液 間接碘量法 返滴定法
1引言
葡萄糖注射液中葡萄糖含量的測定目前有以下幾種方法 方案一：旋光測定法
根據葡萄糖分子結構中的五個碳都是手性碳原子，具有旋光性，可採用旋光法測定含量。取出旋光計的測定管，先用蒸餾水為空白對儀器進行校正。用供試液體（5％葡萄糖注射液）沖洗數次，緩緩注入供試液體適量（注意勿使發生氣泡）。置於旋光計內，讀取旋光度，連續測定3次，取平均值。 方案二：間接碘量法。
碘與NaOH作用能生成NaIO，而C6H12O6能定量地被NaIO氧化。在酸性條件下，未與C6H12O6作用的NaIO可轉變為I2析出，只要用標准Na2S2O3溶液滴定析出的I2，便可計算C6H12O6的含量。
本實驗採用第二種方案進行葡萄糖注射液中葡萄糖含量的測定。
2實驗原理
在鹼性溶液中，碘與氫氧化鈉作用可生成次碘酸鈉（NaIO),葡萄糖能定量的被次碘酸鈉氧化成葡萄糖酸（C6H12O7）。過量的NaIO可以轉化為NaIO3和NaI。在酸性條件下，NaIO3和NaI作用析出I2，然後用Na2S2O3標准溶液滴定析出的I2，便可計算出葡萄糖的含量。其反應如下：
1、I2與NaOH作用： I2+2NaOH=NaIO+NaI+H2O
2、C6H12O6和NaIO定量作用： C6H12O6+ NaIO=C6H12O7+NaI 3、總反應式： I2+C6H12O6+2NaOH=C6H12O7+2NaI+H2O
4、C6H12O6作用完後，過量的NaIO發生歧化反應： 3NaIO=NaIO3+2NaI 5、在酸性條件下NaIO3和NaI作用： NaIO3+5NaI+6HCl=3I2+6NaCl+3H2O 6、析出過量的碘用Na2S2O3標准溶液滴定： I2+2Na2S2O3=Na2S4O6+2NaI 實驗還涉及到Na2S2O3和 I2溶液的標定
1、Na2S2O3的標定 Cr2O72-+6I-+14H+=2Cr3++3I2+7H2O I2+2S2O32-=S4O62-+2I
-
Cr2O72-~3I2~6S2O32-
3
223
227
223
2200.256)(6OSNaOSNaOCrKOSNa
VcVcVc
2、碘的標定 I2+2S2O32-
=S4O62-+2I
-
V
Vc3
22322OSNaOSNac2/1
3、葡萄糖注射液中葡萄糖的含量
計算式：
%10050
6
126
L
gOHCW標示量
葡萄糖含量
3實驗儀器及材料
3.1 儀器
稱量瓶、電子台秤、分析天平、容量瓶（250ml）、移液管（25ml）、量筒（10ml）、錐形瓶（25ml，3個）、酸式滴定管（50ml）、燒杯（50ml）、玻璃棒、碘量瓶 3.2 葯品
K2Cr2O7（S）、鹽酸（6mol/L）、KI溶液（100g/L)、澱粉（5g/L)、Na2S2O3溶液（0.1mol/L）、I2溶液（0.05mol/L）、NaOH溶液（1mol/L）、葡萄糖注射液（5%）
4 實驗方法
4.1 0.1mol/L Na2S2O3標准溶液的標定 4.1.1 K2Cr2O7標准溶液的配製
准確稱取1.2~1.3g分析純K2Cr2O7固體於小燒杯中，加少量的水溶解並轉入到250mL的容量瓶中，用水稀釋到刻線，搖勻。並計算其准確濃度
)
(100000
.25100021101612632232222
LgOHCMOSNavOSNacIvIc葡萄糖含量＝
4.1.2 Na2S2O3溶液的標定
准確移取25mlK2Cr2O7標准溶液於碘量瓶中，加5mL 6mol/L HCl溶液和10mL 100g/LKI，立即密塞搖勻，置暗處5min，然後沖洗瓶蓋並用蒸餾水稀釋至100 mL左右，用待標定Na2S2O3溶液滴定至K2Cr2O7標准溶液呈淺黃綠色時，加2mL 5g/L澱粉，繼續滴定至藍色剛好褪去，記錄所需體積，平行測定3次，計算Na2S2O3溶液的准確濃度。 4.2 0.05mol/L I2溶液的標定
准確移取25mLI2標准溶液於錐形瓶中，加50ml蒸餾水，用Na2S2O3標准溶液滴定至溶液呈淺黃綠色，加2ml 5g/L澱粉，繼續滴定至藍色剛好褪去，溶液呈無色即為終點。 4.3 葡萄糖含量的測定
用移液管移取5%葡萄糖注射液25.00ml於250ml容量瓶中，加水稀釋至刻線，搖勻。然後移取25.00ml上述溶液於碘量瓶中，准確加入I2標准溶液25ml，慢慢滴加NaOH邊加邊搖，直至溶液呈淺黃色，將碘量瓶加塞搖勻，於暗處放置10~15min，加2ml 6mol/L HCl酸化，立即用Na2S2O3標准溶液滴定，至溶液呈淺黃色，加2ml 5g/L澱粉，繼續滴定至藍色消失即達到滴定終點，記錄數據，平行滴定3次，計算其含量。
B. 如何測定葡萄糖含量
可以通過以下方法測量葡萄糖含量：
1、如果糖樣中沒有別的帶醛基的有機物，可以用DNS法測還原糖。
2、如果糖樣中有別的帶醛基的有機物，可以考慮採用高效液相色譜法（HPLC）。
3、其它也有一些方法，比如碘量法等。
C. 葡萄糖的驗證方法
食品中葡萄糖的測定方法，一般採用《國際食糖分析方法統一委員會》規定的「蘭━
挨農法」(Lane and Eynon's Method)和「姆松━華爾格法」(Munson and Walker's Met-
hod)，即菲林氏溶液氧化還原滴定法。此法雖沿用已久，但測定結果只是近似值。因使用
菲林氏溶液滴定葡萄糖(還原糖)時,其他具有還原能力的單糖會干擾測定結果。本標准采
用的酶━比色法和酶━電極法是在檢索了近20年107篇國外文獻的基礎上，經過反復實驗、
驗證而制定的。酶━比色法和酶━電極法使用的葡萄糖氧化酶(GOD)具有專一性，只能催
化葡萄糖水溶液中的β—D—葡萄糖起反應(被氧化)，因此測定結果是真實值。本標準的
酶━比色法為仲裁法；酶━電極法為快速法。
葡萄糖與新制的氫氧化銅加熱至沸騰生成紅色沉澱
【總結】碳水化合物
碳水化合物 組成 生成 檢驗 用途
葡萄糖 化學式C6H1206 光6CO2+6H20= C6H1206+6C02綠色植物光合作用產生 與新制的氫氧化銅加熱至沸騰生成紅色沉澱 在體內經緩慢氧化轉化為二氧化碳和水，釋放出能量。C6H1206+602→6CO2+6H20+(能量)
澱粉 高分子化合物 綠色植物可將葡萄糖轉化為澱粉，谷類、甘薯中含有澱粉 澱粉與碘水(或碘酒)作用呈現藍色 主食，釀酒
纖維素 高分子化合物 綠色植物可將葡萄糖轉化為纖維素 通過食草動物體內微生物的作用，將纖維素轉化為葡萄糖
D. 測定糖的含量的方法有哪些
糖的測定方法
一般有四種方法：
1、 直接滴定法。
原理為 糖還原天藍色的氫氧化銅為紅色的氧化亞銅。缺點：水樣中的還原性物質能對糖的測定造成影響。
2、 高錳酸鉀滴定法。
所用原理同直接滴定法。缺點：水樣中的還原性物質能對糖的測定造成影響，過程較為復雜，誤差大。
3、硫酸苯酚法。
糖在濃硫酸作用下，脫水形成的糠醛和羥甲基糠醛能與苯酚縮合成一種橙紅色化合物，在10-100mg范圍內其顏色深淺與糖的含量成正比，且在485nm波長下有最大吸收峰，故可用比色法在此波長下測定。苯酚法可用於甲基化的糖、戊糖和多聚糖的測定，方法簡單，靈敏度高，實驗時基本不受蛋白質存在的影響，並且產生的顏色穩定160min以上。
缺點：如果水樣呈橙紅色（大部分水樣為黃色），會對比色法造成較大的干擾。
4、蒽酮法
糖在濃硫酸作用下，可經脫水反應生成糠醛和羥甲基糠醛，生成的糠醛或羥甲基糠醛可與蒽酮反應生成藍綠色糠醛衍生物，在一定范圍內，顏色的深淺與糖的含量成正比，故可用於糖的測定。
缺點：，不同的糖類與蒽酮試劑的顯色深度不同，果糖顯色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖較淺，五碳糖顯色更淺。
綜合比較；採用蒽酮法能將最為准確地測定尾水中糖的含量。
（一） 直接滴定法
Ⅰ、原理
v 一定量的鹼性酒石酸銅甲、乙液等量混合，立即生成天藍色的氫氧化銅沉澱，這種沉澱很快與酒石酸鈉反應，生成深藍色的可溶性酒石酸鉀鈉銅絡合物。在加熱條件下，以次甲基藍作為指示劑，用標液滴定，樣液中的還原糖與酒石酸鉀鈉銅反應，生成紅色的氧化亞銅沉澱，待二價銅全部被還原後，稍過量的還原糖把次甲基藍還原，溶液由藍色變為無色，即為滴定終點。根據樣液消耗量可計算出還原糖含量。
樣品經除去蛋白質後，在加熱條件下，以次甲基藍做指示劑，滴定標定過的鹼性酒石酸銅溶液（用還原糖標准溶液標定鹼性酒石酸銅溶液），根據樣品溶液消耗體積計算還原糖量。
Ⅱ、儀器和試劑
1．儀器
酸式滴定管，可調電爐（帶石棉板），250ml容量瓶。
2．試劑
1. 鹽酸。
2. 鹼性酒石酸銅甲液：稱取15g硫酸銅（CuSO4·5H2O）及0.05g次甲基藍，溶於水中並稀釋至1000mL。
3. 鹼性酒石酸銅乙液：稱取50g酒石酸鉀鈉與75g氫氧化鈉，溶於水中，再加入4g亞鐵氰化鉀，完全溶解後，用水稀釋至1000 ml，貯存於橡膠塞玻璃瓶內。
4. 乙酸鋅溶液：稱取21.9 g乙酸鋅，加3ml冰乙酸，加水溶解並稀釋至100ml。
5. 亞鐵氰化鉀溶液：稱取10.6g亞鐵氰化鉀，用水溶解並稀釋至100ml。
6. 葡萄糖標准溶液：准確稱取1.0000g經過96℃±2℃乾燥2h的純葡萄糖，加水溶解後加入5ml鹽酸，並以水稀釋至1000L。此溶液相當於1mg/ml葡萄糖（註：加鹽酸的目的是防腐，標准溶液也可用飽和苯甲酸溶液配製）。
7. 果糖標准溶液：按⑹操作，配製每毫升標准溶液相當於1mg的果糖。
8. 乳糖標准溶液：按⑹操作，配製每毫升標准溶液相當於1mg的乳糖。
9. 轉化糖標准溶液：准確稱取1.0526g純蔗糖，用100ml水溶解，置於具塞三角瓶中加5ml鹽酸（1+1），在68℃~70℃水浴中加熱15min，放置至室溫定容至1000ml，每ml標准溶液相當於1.0mg轉化糖。
Ⅲ、實驗步驟
1．樣品處理
⑴ 乳類、乳製品及含蛋白質的食品：稱取約2.50～5.00g固體樣品（吸取25～50ml液體樣品），置於250 ml容量瓶中，加50 ml水，搖勻。邊搖邊慢慢加入5ml乙酸鋅溶液及5ml亞鐵氫化鉀溶液，加水至刻度，混勻。靜置30 min，用乾燥濾紙過濾，棄去初濾液，濾液備用。（注意：乙酸鋅可去除蛋白質、鞣質、樹脂等，使它們形成沉澱，經過濾除去。如果鈣離子過多時，易與葡萄糖、果糖生成絡合物，使滴定速度緩慢；從而結果偏低，可向樣品中加入草酸粉，與鈣結合，形成沉澱並過濾。）
⑵ 酒精性飲料：吸取100ml樣品，置於蒸發皿中，用1 mol/L氫氧化鈉溶液中和至中性，在水浴上蒸發至原體積1/4後，移入250ml容量瓶中，加水至刻度。
⑶ 含多量澱粉的食品：稱取10.00～20.00g樣品，置於250ml容量瓶中，加200ml水，在45℃水浴中加熱1h，並時時振搖（注意：此步驟是使還原糖溶於水中，切忌溫度過高，因為澱粉在高溫條件下可糊化、水解，影響檢測結果。）。冷後加水至刻度，混勻，靜置，沉澱。吸取200ml上清液於另一250ml容量瓶中，慢慢加入5ml乙酸鋅溶液及5ml亞鐵氫化鉀溶液，加水至刻度，混勻，沉澱，靜置30 min，用乾燥濾紙過濾，棄去初濾液，濾液備用。
⑷ 汽水等含有二氧化碳的飲料：吸取100ml樣品置於蒸發皿中，在水浴上除去二氧化碳後，移入250ml容量瓶中，並用水洗滌蒸發皿，洗液並入容量瓶中，再加水至刻度，混勻後備用。（注意：樣品中稀釋的還原糖最終濃度應接近於葡萄糖標准液的濃度。）
2. 標定鹼性酒石酸銅溶液：吸取5.0ml鹼性酒石酸銅甲液及5.0ml乙液，置於150ml錐形瓶中（注意：甲液與乙液混合可生成氧化亞銅沉澱，應將甲液加入乙液，使開始生成的氧化亞銅沉澱重溶），加水10 ml，加入玻璃珠2粒，從滴定管滴加約9 ml葡萄糖標准溶液或其他還原糖標准溶液，直至溶液蘭色剛好褪去為終點，記錄消耗的葡萄糖標准溶液或其他還原糖標准溶液總體積，平行操作三份，取其平均值，計算每10 ml（甲、乙液各5 ml）鹼性酒石酸銅溶液相當於葡萄糖的質量或其他還原糖的質量（mg）。（注意：還原的次甲基藍易被空氣中的氧氧化，恢復成原來的藍色，所以滴定過程中必須保持溶液成沸騰狀態，並且避免滴定時間過長。）
3. 樣品溶液預測：吸取5.0 ml鹼性酒石酸銅甲液及5.0 ml乙液，置於150 ml錐形瓶中，加水10 ml，加入玻璃珠2粒，控制在2 min內加熱至沸，趁沸以先快後慢的速度，從滴定管中滴加樣品溶液，並保持溶液沸騰狀態，待溶液顏色變淺時，以每兩秒1滴的速度滴定，直至溶液藍色褪去，出現亮黃色為終點。如果樣品液顏色較深，滴定終點則為蘭色褪去出現明亮顏色（如亮紅），記錄消耗樣液的總體積。（注意：如果滴定液的顏色變淺後復又變深，說明滴定過量，需重新滴定。） 當試樣溶液中還原糖濃度過高時應適當稀釋，再進行正式測定，使每次滴定消耗試樣溶液的體積控制在與標定鹼性酒石酸酮溶液時所消耗的還原糖標准溶液的體積相近，約在10ml左右。當濃度過低時則採取直接加入10ml樣品溶液，免去加水10ml，再用還原糖標准溶液滴定至終點，記錄消耗的體積與標定時消耗的還原糖標准溶液體積之差相當於10ml試樣溶液中所含還原糖的量。
4. 樣品溶液測定：吸取5.0 ml鹼性酒石酸銅甲液及5.0 ml乙液，置於150 ml錐形瓶中，加水10 ml，加入玻璃珠2粒，在2 min內加熱至沸，快速從滴定管中滴加比預測體積少1 ml的樣品溶液，然後趁沸繼續以每兩秒1滴的速度滴定直至終點。記錄消耗樣液的總體積，同法平行操作兩至三份，得出平均消耗體積。
5. 計算
樣品中還原糖的含量（以某種還原糖計）按下式計算。
X=〔A/(m×V/250×1000)〕×100
式中：X--樣品中還原糖的含量(以某種還原糖計)，單位 g/100g；
A—鹼性酒石酸銅溶液（甲、乙液各半）相當於某種還原糖的質量，單位 mg；
m--樣品質量，單位 g；
V--測定時平均消耗樣品溶液的體積，單位 ml；
計算結果保留小數點後一位。
注意：
滴定結束，錐形瓶離開熱源後，由於空氣中氧的氧化，使溶液又重新變藍，此時不應再滴定。
（二）高錳酸鉀滴定法
v 原理 將樣液與一定量過量的鹼性酒石酸銅溶液反應，還原糖將二價銅還原為氧化亞銅，經過濾，得到氧化亞銅沉澱，加入過量的酸性硫酸鐵溶液將其氧化溶解，而三價鐵鹽被定量地還原為亞鐵鹽，用高錳酸鉀標准溶液滴定所生成的亞鐵鹽，根據高錳酸鉀溶液消耗量可計算出氧化亞銅的量，再從檢索表中查出氧化亞銅量相當的還原糖量，即可計算出樣品中還原糖含量。
（三）硫酸苯酚法
Ⅰ、原理
糖在濃硫酸作用下，脫水形成的糠醛和羥甲基糠醛能與苯酚縮合成一種橙紅色化合物，在10-100mg范圍內其顏色深淺與糖的含量成正比，且在485nm波長下有最大吸收峰，故可用比色法在此波長下測定。苯酚法可用於甲基化的糖、戊糖和多聚糖的測定，方法簡單，靈敏度高，實驗時基本不受蛋白質存在的影響，並且產生的顏色穩定160min以上。
多糖在硫酸的作用下先水解成單糖，並迅速脫水生成糖醛衍生物，然後與苯酚生成橙黃色化合物。再以比色法測定。
Ⅱ、試劑
1． 濃硫酸：分析純，95.5%
2． 80%苯酚：80克苯酚（分析純重蒸餾試劑）加20克水使之溶解，可置冰箱中避光長期儲存。
3． 6%苯酚：臨用前以80%苯酚配製。（每次測定均需現配）
4． 標准葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia）,或分析純葡萄糖。
5． 15%三氯乙酸（15%TCA）：15克TCA加85克水使之溶解，可置冰箱中長期儲存。
6． 5%三氯乙酸（5%TCA）：25克TCA加475克水使之溶解，可置冰箱中長期儲存。
7． 6mol/L 氫氧化鈉：120克分析純氫氧化鈉溶於500ml水。
8． 6mol/L 鹽酸
Ⅲ、操作。
1．製作標准曲線：准確稱取標准葡聚糖（或葡萄糖）20mg於500ml容量瓶中，加水至刻度，分別吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml,各以蒸餾水補至2.0ml，然後加入6%苯酚1.0ml及濃硫酸5.0ml,搖勻冷卻，室溫放置20分鍾以後於490nm測光密度，以2.0ml水按同樣顯色操作為空白，橫坐標為多糖微克數，縱坐標為光密度值，得標准曲線。
2．樣品含量測定：
①取樣品1克（濕樣）加1ml 15%TCA溶液研磨，再加少許5％TCA溶液研磨，倒上清液於10毫升離心管中，再加少許5％TCA溶液研磨，倒上清液，重復3次。最後一次將殘渣一起到入離心管。注意：總的溶液不要超出10毫升。（既不要超出離心管的容量）。
②離心，轉速3000轉/分鍾，共三次。第一次15分鍾，取上清液。後兩次各5分鍾取上清液到25毫升錐形比色管中。最後濾液保持18毫升左右。（測肝胰腺樣品時，每次取上清液時應過濾。因為其脂肪含量大容易夾帶殘渣。）
③水浴，在向比色管中加入2毫升6mol/L 鹽酸之後搖勻，在96℃水浴鍋中水浴2小時。
④定容取樣。水浴後，用流水冷卻後加入2毫升6mol/L 氫氧化鈉搖勻。定容至25毫升的容量瓶中。吸取0.2 ml的樣品液，以蒸餾補至2.0ml，然後加入6%苯酚1.0ml及濃硫酸5.0ml,搖勻冷卻室溫放置20分鍾以後於490nm測光密度。每次測定取雙樣對照。以標准曲線計算多糖含量。
Ⅳ、注意
（1）此法簡單、快速、靈敏、重復性好，對每種糖僅製作一條標准曲線，顏色持久。
（2）製作標准線宜用相應的標准多糖，如用葡萄糖，應以校正系數0.9校正μg數。
（3）對雜多糖，分析結果可根據各單糖的組成比及主要組分單糖的標准曲線的校正系數加以校正計算。
（4）測定時根據光密度值確定取樣的量。光密度值最好在0.1——0.3之間。比如：小於0.1之下可以考慮取樣品時取2克，仍取0.2ml樣品液，如大於0.3可以減半取0.1ml的樣品液測定。
（四）蒽酮法
Ⅰ、實驗原理
糖在濃硫酸作用下，可經脫水反應生成糠醛和羥甲基糠醛，生成的糠醛或羥甲基糠醛可與蒽酮反應生成藍綠色糠醛衍生物，在一定范圍內，顏色的深淺與糖的含量成正比，故可用於糖的測定。
該法的特點是幾乎可以測定所有的碳水化合物，不但可以測定戊糖和己糖，而且可以測所有的寡糖類和多糖類，其中包括澱粉、纖維素等（因反應液中的濃硫酸可以把多糖水解成單糖而發生反應。所以，用蒽酮法測出的碳水化合物含量，實際上是溶液中全部可溶性碳水化合物總量。在沒有必要細致劃分各種碳水化合物的情況下，用蒽酮法可以一次測出總量。此外，不同的糖類與蒽酮試劑的顯色深度不同，果糖顯色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖較淺，五碳糖顯色更淺。故測定糖的混合物時，常因不同糖類的比例不同造成誤差，但測定單一糖類時，則可避免此種誤差。
Ⅱ、試劑：
蒽酮試劑，0.20 g蒽酮溶入100 mL 95%濃硫酸中，冰箱保存；
Ⅲ、方法：
樣品2.0 mL加5.0 mL蒽酮試劑，混勻，然後水浴煮沸10 min，取出冷卻至室溫，在620 nm處測定其吸光度，根據標准曲線計算水樣中糖的濃度。（標線以葡萄糖為標樣）
E. 如何測定葡萄中的葡萄糖含量
葡萄糖氧化酶法。
1．原理
葡萄糖在葡萄糖氧化酶的作用下產生葡萄糖酸和過氧化氫，過氧化氫在過氧化物酶的作用下使鄰聯甲苯胺生成藍色物質，該有色物質在625 nm波長下與葡萄糖濃度成正比。通過側定藍色物質的吸光度值可計算樣品中葡萄糖的含量。
2．儀器
①實驗室常用設備。
②722型分光光度計。
3．試劑
除特殊說明外，實驗用水為蒸餾水，試劑為分析純。
①三氯乙酸(40％)：稱取4．0 g三氯乙酸，用水溶解並稀釋至100 mL。
②無水乙醇。
③2 mol·L-1NaOH溶液：稱取8 g NaOH，用水溶解並稀釋至100 mL。④1％鄰聯甲苯胺溶液：稱取0．1 g鄰聯甲苯胺溶解於10 mL無水乙醇中，倒人棕色瓶中，4℃冰箱保存。
⑤乙酸緩沖液(pH5．O)：稱取14．28 g乙酸鈉(CH。COONa．3H20)溶於水中，加入2．7mL冰乙酸，使pH為5．O，用水定容至1L。
⑥葡萄糖氧化酶溶液：稱取一定量的葡萄糖氧化酶(Sigma公司)用水溶解，使酶含量為100U／mL。4℃冰箱保存一周。
⑦過氧化物酶溶液：0．010 g辣根過氧化物酶溶於10 mL7J(~，4℃冰箱保存一周。
⑧酶溶液：取100 mL乙酸緩沖液，分別加入鄰聯甲苯胺溶液、葡萄糖氧化酶溶液、過氧化物酶溶液各l mL，混勻。4℃冰箱可保存7周。
⑨酶空白液：取100 mI。乙酸緩沖液，分別加人鄰聯甲苯胺溶液、過氧化物酶溶液各l mL，混勻。4℃冰箱保存1周。(注意酶空白液中不含葡萄糖氧化酶)
⑩葡萄糖標准液：將葡萄糖標准品(純度大於99％)於80℃乾燥至恆量。精確稱取O·050 g，用水移人100 mL容量瓶中，定容至刻度線。此標准液相當於濃度為0．5 mg．mI。_。。
4．操作步驟
①樣品處理
a．固體樣品：稱取0．5～5 g已粉碎的樣品於錐形瓶中，加入50 mL水後沸水浴15 min。冷卻後，轉移至100 mL容量瓶中並用水定容至刻度，反復搖動混勻樣品，過濾，棄初始幾滴濾液。收集濾液，如果濾液澄清，可直接用於測定或稀釋後用於測定。如果濾液渾濁，吸取20mL濾液轉移至另一容量瓶中，加人無水乙醇至刻度。混合後靜置至少30 min，過濾，濾液用於測定。
b·液體樣品或少糖、澱粉等碳水化合物水解液：吸取2～10 mL樣品或水解液，加入4倍
量無水乙醇(使乙醇最終濃度為80％，以沉澱不溶性多糖和部分蛋白質)，混合。靜置至少30
min，過濾後濾液定容備用(如果過濾後濾液仍渾濁，或樣液體積過少，可於3 000 r／min離心15
min，上清液備用)。
c．新鮮牛乳等樣品：吸取0．5～2 mL樣品，用水稀釋，加入3 mL 40％三氯乙酸溶液(用於沉澱蛋白質)，用水定容至100 mL，過濾。吸取5 mL濾液，用2 m01．L一，NaOH調節pH至中性，用水定容至i0 mL，備用。
②測定
a-標准空白管的制備：在試管中加入0．5 mL水和5 mL酶溶液。
b·標准管的制備：5支試管中先分別加入葡萄糖標准液0．1、0．2、0．3、0．4、0．5 mL，再分別加入水0．4、0．3、0．2、0．1．0．0 mL，最後各加入酶溶液5 mL。
c·樣品空白管的制備：在試管中加人0．5 mI。樣品提取液和5 mI。酶空白液。
d·樣品測定管的制備：在試管中加人0．5 mL樣品提取液和5 mL酶溶液。
將上述各試管中溶液混合後於37℃水浴反應15 rain，625nm測定吸光度值。(注意：反應時間應嚴格控制，因葡萄糖與酶溶液的成色反應與反應時間密切相關，
5．計算
根據吸光度值求出葡萄糖標准曲線的回歸方程，採用插入法求出測定管中葡萄糖含量，再根據稀釋定容體積和稱樣量，計算出樣品中葡萄糖含量。
6．說明
①此法適用於谷類、乳類、飲料、酒類等食品樣品和血液樣品。檢出量為0．02 mg。
②此方法中的酶溶液只能和葡萄糖反應，特異性強，靈敏度高。
③如果樣品提取液為無色，不需做樣品空白。有色樣品或樣品提取液渾濁，則應做樣品空白以減少干擾。
F. 葡萄糖,果糖的含量怎麼測定
葡萄糖能和溴水反應，果糖不能和溴水反應
葡萄糖和溴水反應後能產生葡萄糖酸和氫溴酸 C5H11O5CHO+H2O+Br2==C5H11O5COOH(葡萄糖酸）+2HBr
用硫代硫酸鈉除去多餘的溴，在用氫氧化鈉滴定酸的含量，除以3後可得葡萄糖的含量
在用總量減即可得果糖含量。
打字不易，如滿意，望採納。
G. 請給一些測定葡萄糖含量辦法，越多越好！
1.向葡萄糖溶液中加入過量新制氫氧化銅加熱，使之充分反應，過濾後加入過量稀硫酸，洗滌乾燥後，稱量剩餘固體（銅）計算出葡萄糖，再除以總體積，就算出葡萄糖的含量。方程式如下：
1）CH2OH（CHOH）4CHO+2Cu(OH)2---加熱→CH2OH（CHOH）4COOH+Cu2O↓+2H2O
2) Cu2O+H2SO4=CuSO4+Cu+H2O
2.把新制氫氧化銅換成銀氨溶液步驟如上，方程式如下：
1）CH2OH-（CHOH）4-CHO+2[Ag（NH3)2]++2OH-==CH2OH-（CHOH）4-COONH4+2Ag↓+H2O+3NH3
不過，這里的固體是銀
3.條件好可以用專業儀器直接幫你測定葡萄糖含量
4.右旋糖酐40葡萄糖注射液—葡萄糖的測定—氧化還原滴定法
方法原理： 供試品精密加碘滴定液後，邊振搖邊滴加氫氧化鈉滴定液，在暗處放置30分鍾，加稀硫酸，用硫代硫酸鈉滴定液滴定，至近終點時，加澱粉指示液繼續滴定至藍色消失，並將滴定結果用右旋糖酐40作空白試驗校正，根據滴定液使用量，計算葡萄糖的含量。 試劑： 1. 碘化鉀 2. 碘滴定液（0.05mol/L） 3. 鹽酸 4. 氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L） 5. 甲基橙指示液 6. 硫酸滴定液（0.5mol/L） 7. 硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L） 8. 稀硫酸 9. 碳酸氫鈉 10. 澱粉指示液 11. 酚酞指示液 12. 甲基紅-溴甲酚綠混合指示液 13. 基準三氧化二砷 14. 基準鄰苯二甲酸氫鉀 15. 基準無水碳酸鈉 1.6 基準重鉻酸鉀 試樣制備： 1.）碘滴定液（0.05mol/L） 配製：取碘13.0g，加碘化鉀36g與水50mL溶解後，加鹽酸3滴與水適量使成1000mL，搖勻，用垂熔玻璃濾器濾過。 標定：取在105℃乾燥至恆重的基準三氧化二砷約0.15g，精密稱定，加氫氧化鈉滴定液（1mol/L）10mL，微熱使溶解，加水20mL與甲基橙指示液1滴，加硫酸滴定液（0.5mol/L）適量使黃色轉變為粉紅色，再加碳酸氫鈉2g、水50mL與澱粉指示液2mL，用本液滴定至溶液顯淺藍紫色。每1mL碘滴定液（0.05mol/L）相當於4.946mg的三氧化二砷。根據本液的消耗量與三氧化二砷的取用量，算出本液的濃度。 2.）氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L） 配製：取氫氧化鈉適量，加水振搖使溶解成飽和溶液，冷卻後，置聚乙烯塑料瓶中，靜置數日，澄清後備用。取澄清的氫氧化鈉飽和溶液5.6mL，加新沸過的冷水使成1000mL，搖勻。 標定：取在105℃乾燥至恆重的基準鄰苯二甲酸氫鉀約0.6g，精密稱定，加新沸過的冷水50mL，振搖，使其盡量溶解，加酚酞指示液2滴，用本液滴定，在接近終點時，應使鄰苯二甲酸氫鉀完全溶解，滴定至溶液顯粉紅色。每1mL氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）相當於20.42mg的鄰苯二甲酸氫鉀。根據本液的消耗量與鄰苯二甲酸氫鉀的取用量，算出本液的濃度。 貯藏：置聚乙烯塑料瓶中，密封保存；塞中有2孔，孔內各插入玻璃管1支，1管與鈉石灰管相連，1管供吸出本液使用。 3）. 甲基橙指示液 取甲基橙0.1g，加水100mL使溶解。 4.） 硫酸滴定液（0.5mol/L） 配製：取硫酸30mL，緩緩注入適量水中，冷卻至室溫，加水稀釋至1000mL，搖勻。 標定：取在270~300℃乾燥至恆重的基準無水碳酸鈉約1.5g，精密稱定，加水50mL使溶解，加甲基紅-溴甲酚綠混合指示液10滴，用本液滴定至溶液由綠色轉變為紫紅色時，煮沸2分鍾，冷卻至室溫，繼續滴定至溶液由綠色變為暗紫色。每1mL硫酸滴定液（0.5mol/L）相當於53.00mg的無水碳酸鈉。根據本液的消耗量與無水碳酸鈉的取用量，算出本液的濃度。 5）. 硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L） 配製：取硫代硫酸鈉26g與無水碳酸鈉0.20g，加新沸過的冷水適量使溶解成1000mL，搖勻，放置1個月後濾過。 標定：取在120℃乾燥至恆重的基準重鉻酸鉀0.15g，精密稱定，置碘瓶中，加水50mL使溶解，加碘化鉀2.0g，輕輕振搖使溶解，加稀硫酸40mL，搖勻，密塞，在暗處放置10分鍾後，加水250mL稀釋，用本液滴定至近終點時，加澱粉指示液3mL，繼續滴定至藍色消失而顯亮綠色，並將滴定結果用空白試驗校正。每1mL硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）相當於4.903mg的重鉻酸鉀。根據本液的消耗量與重鉻酸鉀的取用量，算出本液的濃度。 室溫在25℃以上時，應將反應液及稀釋用水降溫至約20℃。 6）.稀硫酸 取硫酸57mL，加水稀釋至1000mL。 7. ）澱粉指示液 取可溶性澱粉0.5g，加水5mL攪勻後，緩緩傾入100mL沸水中，隨加隨攪拌，繼續煮沸2分鍾，放冷，傾取上層清液，即得，本液應臨用新制。 8.） 酚酞指示液 取酚酞1g，加乙醇100mL使溶解。 9.）甲基紅-溴甲酚綠混合指示液 取0.1%甲基紅的乙醇溶液20mL，加0.2%溴甲酚綠的乙醇溶液30mL，搖勻。 操作步驟： 精密量取供試品2mL，置具塞錐形瓶中，精密加碘滴定液（0.05mol/L）25mL，邊振搖邊滴加氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）50mL，在暗處放置30分鍾，加稀硫酸5mL，用硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）滴定，至近終點時，加澱粉指示液2mL，繼續滴定至藍色消失，並將滴定結果用0.12g（6%規格）或0.20g（10%規格）的右旋糖酐40作用白試驗校正。每1mL碘滴定液（0.05mol/L）相當於9.909mg的C6H12O6·H2O。
H. 求三種葡萄糖的測定方法（除了碘量法）
1、乙醯化法，用過量乙酸酐酯化Glc，用NaHCO3除去多餘的乙酸酐，然後用鹼處理Glc乙醯化產物，測水解出來的乙酸根的量，n(Glc)：n(乙酸根)=1：5
2、高碘酸法：用高碘酸鹽處理Glc，Glc一般是吡喃糖，遇高碘酸鹽反應產生甲酸，測生成的甲酸的量，n(甲酸)：n(Glc)=1：1
3、糠醛-蒽酮法：用熱的12%HCl處理Glc，然後用蒽酮處理，形成藍綠色復合物，然後用分光光度法
4、糠醛-間苯二酚法：用熱的12%HCl處理Glc，然後用間苯二酚處理，形成紅色復合物，然後用分光光度法
——PS第三、四招都不大好用，Glc作為己醛糖，與12%HCl進行糠醛反應的時間慢，而且如果共熱的時間太長，還會形成暗黑色的腐黑物（糠醛反應，一般用來測戊糖或者己酮糖）
另
如果lz測的Glc裡面含有別的糖，那必須先預處理掉
I. 葡萄糖含量的測定 方法有哪些啊 越多越好 謝謝哈
銀鏡反應[氫氧化二氨合銀Ag(NH3)2OH]
與氧氣在加熱、銅或銀催化的條件下反應
婓林試劑
以上是檢驗的方法，定量的話用分析化學的方法，可以是滴定、光譜等
J. 葡萄糖含量的測定方法
1、如果糖樣中沒有別的帶醛基的有機物，可以用DNS法測還原糖。
2、如果糖樣中有別的帶醛基的有機物，可以考慮採用高效液相色譜法（HPLC）。
3、其它也有一些方法，比如碘量法等。