『壹』 將目的基因導入受體細胞的方法有哪些
常用方法:基因工程中常用的受體細胞有大腸桿菌,枯草桿菌,土壤農桿菌,酵母菌和動植物細胞等。其中,對於細菌或植物細胞,常用質粒作為載體將目的基因導入細胞內;動物細胞則用顯微注射的方法將目的基因導入動物受精卵的雄性原核中。
過程:用人工方法使體外重組的DNA分子轉移到受體細胞,主要是借鑒細菌或病毒侵染細胞的途徑。例如,如果運載體是質粒,受體細胞是細菌,一般是將細菌用氯化鈣處理,以增大細菌細胞壁的通透性,使含有目的基因的重組質粒進入受體細胞。目的基因導入受體細胞後,就可以隨著受體細胞的繁殖而復制,由於細菌的繁殖速度非常快,在很短的時間內就能夠獲得大量的目的基因。
『貳』 基因克隆的方法主要有哪幾種,簡述各種方法的原理和用途
基因克隆的方法主要有:平板劃線克隆法、液體克隆法、PCR擴增克隆法和基因重組克隆技術。下面詳細介紹各種方法的原理和用途:
平板劃線克隆法:
原理是通過將微生物細胞在固體培養基表面劃線分離,通過單菌落的形成來實現基因的克隆。這種方法適用於微生物的基因克隆。操作簡便,能夠直觀觀察克隆效果。
用途:主要用於微生物學領域,如細菌、真菌等基因的克隆和分離。特別適用於從復雜的微生物群體中分離出特定的菌株或基因。
液體克隆法:
原理是在液體培養基中通過細胞的增殖來實現基因的克隆。通過細胞在液體環境中的增殖,達到大量復制基因的目的。
用途:適用於大規模生產細胞系或需要培養細胞以進行進一步研究的場合,如蛋白質表達等。同時,也可用於從細胞中提取特定基因或進行基因功能研究。
PCR擴增克隆法:
原理是利用聚合酶鏈式反應技術,通過特定的引物對目標基因進行選擇性擴增,從而實現基因的克隆。PCR技術具有高靈敏度和特異性,能在短時間內大量擴增目標基因。
用途:廣泛應用於分子生物學研究,用於從復雜的基因組中擴增特定的基因片段,如基因診斷、法醫鑒定、疾病研究等。此外,PCR技術也常用於基因工程中的基因表達調控研究。
基因重組克隆技術:
原理是通過將目的基因與載體結合,然後導入受體細胞中進行擴增和表達。這種技術可以實現跨物種的基因克隆和基因功能研究。
用途:廣泛應用於基因工程領域,如轉基因動植物制備、基因治療、葯物研發等。基因重組克隆技術是實現基因功能研究和應用的重要手段。
總之,以上四種基因克隆方法各具特色,根據研究目的和對象的不同選擇合適的方法至關重要。隨著技術的不斷進步,這些方法在生命科學和基礎研究領域將發揮更加重要的作用。