細胞培養瓶的使用方法

㈠ 什麼時候用細胞培養瓶 什麼時候用細胞培養板 怎麼選擇

一個T25的細胞瓶相當於6個培養板，所以需要大量擴增細胞的時候用細胞瓶啊，以細胞為載體或者對象的實驗用培養板比較好，因為用的量比較少節約細胞，而且培養板好做對照實驗和梯度實驗（每個板子的量或者濃度不一樣），比如6孔板，可以拿1個做對照，另外5個孔做不同的實驗嘛（比如接不同濃度的病毒），不過培養板相對更容易污染，所以操作要小心

㈡ 細胞培養瓶密封蓋和過濾蓋的區別

細胞培養瓶有多種規格和多種瓶蓋類型可提供,以滿足用戶的不同需求.由高質量的原生聚苯乙烯(PS)製作,表面經過TC處理,促進細胞的貼壁生長,生產批號可追蹤,100%通過完整性檢測,無熱原,均為無菌包裝.
密封蓋(Plug seal caps)：Corning經典瓶蓋類型.一次成形不帶內墊,常用於密閉培養,可保證其密閉性；旋松瓶蓋時也可用於開放培養.
聚酯蓋(Phenolic style caps)：常用於開放培養(需要旋松瓶蓋).只需輕輕旋松瓶蓋便可保證瓶內氣體與環境中氣體的交換.
透氣蓋(Vent caps)：瓶蓋帶有0.2μm疏水濾膜,提供無菌氣體交換,減少污染的風險.常用於開放培養,推薦用於CO2培養箱培養,尤其適用於需要長期培養的實驗.
隔墊蓋(Septum caps)：隔墊帶有預切割口,可承受多次穿插.可使用吸嘴(或者5ml以下規格的移液管)穿插隔墊進行加液、吸液或者收獲細胞,減少污染的機會,維持RoboFlask 培養瓶封閉無菌的環境
直頸(Straight neck)：直頸的設計可減少培養基因晃動而流到瓶里.
斜頸(Canted neck)：易於傾注,移液管或者細胞刮容易進入瓶體.是Corning公司經典的設計.
角度頸(Angled caps)：移液管或者細胞刮易於進入瓶身,並且可減少培養基因晃動而流到瓶蓋.
三角形(Triangular and modified triangular)：移液管或細胞刮更易達到瓶角,寬底增加穩定性.
矩形(Rectangular)：斜頸的矩形培養瓶瓶底至瓶頸是一個坡度設計,易於傾注,移液管或者細胞刮容易進入瓶體,大部分斜頸瓶都有一個裙邊以增加穩定性.直頸和角度頸的矩形培養瓶整個瓶底都是培養面,節省空間並減少培養基因晃動而流到瓶蓋.
RoboFlask 培養瓶(RoboFlask vessels)：微孔板尺寸的培養瓶,兼容自動操作的培養系統,92.6cm2生長面積.

㈢ 傳代細胞的培養步驟

1、附著型胞(adherentcell)

（1）吸掉舊培養液。

（2）用D-PBS洗滌細胞一至二次。

（3）加入trypsin-EDTA溶液(1ml/25cm2,2ml/75cm2)，37℃作用數分鍾，於倒立顯微鏡下觀察，當細胞將要分離而呈現圓粒狀時，吸掉trypsin-EDTA溶液。(若不移去trypsin-EDTA，則在trypsin-EDTA作用後，加入適量含血清之新鮮培養基終止trypsin作用，離心後再吸掉上清液。

（4）輕拍培養瓶使細胞自瓶壁脫落，加入適量之新鮮培養基，以吸管上下吸放數次以打散細胞團塊，混和均勻後，依稀釋比例轉移至新的培養瓶中，以正常培養條件培養。

2、懸浮型細胞(suspensioncell)

（1）吸出細胞培養液，放入離心管中，離心1000rpm5分鍾。

（2）吸掉上清液，加入適量之新鮮培養基，混和均勻後，依稀釋比例轉移至新的培養瓶中，以正常培養條件培養。

3、融合瘤(hybridoma)

有些hybridomacell需培養三天以上才會產生抗體，若是更換培養基，則可能會失去抗體。因此繼代培養不需離心後更換培養基，直接添加新鮮培養基稀釋細胞濃度即可。若體積太大，可傾斜放置，或分殖至新培養瓶中。

(3)細胞培養瓶的使用方法擴展閱讀：

傳代方法：

1、懸浮生長細胞傳代

多採用離心法傳代。1000轉/分,20-30秒後去上清。沉澱細胞加新培養液後再混勻傳代。亦有直接傳代 法，即懸浮細胞沉澱在瓶壁時，將上清培養液去除1/2-1/3，然後用吸管直接吹打形成細胞懸液再傳代.

2、半懸浮生長細胞傳代（Hela細胞）

此類細胞部分呈現貼壁生長現象，但貼壁不牢，可用直接吹打法使細胞從瓶壁脫落下來，進行傳代。

3、貼壁生長細胞傳代

採用酶消化法傳代。常用的消化液有0.25%的胰蛋白酶液。

㈣ 細胞培養常用器材有哪些

1. 超凈工作台

目前絕大部分細胞實驗室使用超凈工作台實現無菌操作，具有操作簡單、安裝方便、佔用空間小且凈化效果很好。安徽人和凈化為您介紹兩種主要超凈工作台-側流式（垂直式）和外流式（水平層流式）。工作原理一般是將室內空氣經粗過濾器初濾，由離心風機壓入靜壓箱，再經高效空氣過濾器精濾，由此送出的潔凈氣流以一定的均勻的斷面風速通過無菌區，從而形成無塵無菌的高潔凈度工作環境。

（1） 側流式工作台：空氣凈化後的氣流由左或右側通過工作檯面流向對側，也有從上向下或從下向上流向對側，形成氣流屏障保持工作區無菌，工作台結構為封閉式；

（2） 外流式工作台：凈化後的空氣面向操作者流動，因而外方氣流不致混入操作，工作台結構為開放式，但進行有害物質實驗操作對操作者不利。超凈工作台應需要定期請有關部門檢查潔凈度，符合要求的超凈工作台其潔凈度應達到100級，用塵埃粒子計數儀檢測粒徑≤5μm的塵埃粒子數量不應超過3.5個/L；空氣流量應控制在0.75-1.0m3/s；細菌菌落數平均<1個，根據無菌狀況必要時需要置換過濾器。

2. 顯微鏡

倒置式顯微鏡是細胞培養實驗室日常工作常規必備設備，主要用於日常了解細胞的生長情況並觀察有無污染發生。如資金允許，建議選用配置有照相系統的高品質相差顯微鏡、解剖顯微鏡、熒光顯微鏡、錄像系統或縮時電影拍攝裝置等，可隨時拍攝並記錄細胞生長情況。

3. 培養箱

體外培養的細胞和體內細胞一樣，需要在恆定的溫度下生存，一般最適生長溫度為37℃，溫差變化不應超過±0.5℃。溫度升高2℃時，變不利於細胞生存，溫度達到40℃以上細胞將很快死亡。因此，可精確控溫的恆溫培養箱、CO2培養箱是最佳選擇。

（1） 恆溫培養箱：應選隔水式或晶體管式自控溫培養箱，此類培養箱靈敏度高，溫度控制較穩定。一般的恆溫培養箱價格較便宜，其缺點是只宜於作密閉式培養。

（2） CO2培養箱：目前多數的細胞培養室已廣泛使用。CO2培養箱的優點是能夠提供進行細胞培養時所需要的一定量的CO2（常用濃度為5％），易於穩定培養液pH，適用於開放或半開放培養。使用培養瓶時，為使培養瓶內與外界保持通氣狀態，可將瓶蓋略微旋松，為避免細胞被污染，使用這種培養方式時，培養箱內空氣必須保持清潔，需定期用紫外線照射或酒精消毒，同時培養箱內應放置盛有無菌蒸餾水的水槽，防止培養液蒸發，保持箱內相對濕度在100%。

（3） 細胞培養耗材：培養細胞的器皿可用培養皿、培養板或培養瓶。

4. 烘箱（乾燥箱）

用於細胞培養的一些器械、器皿必須烘乾後才能使用，玻璃器皿等須乾熱消毒。乾熱消毒時，烘箱內溫度一般要達到160℃以上，通常使用鼓風式烘箱。其優點是溫度均勻、效果較好，缺點是升溫過程較慢。升溫時不能先升溫後鼓風而應鼓風與升溫同時開始，至100℃時，停止鼓風。需注意避免包裹器皿的紙或棉花燒焦，燒焦的碎屑可影響細胞的生長。消毒後不能立即打開箱門，以免驟冷導致玻璃器皿破裂，應等溫度自然下降至100℃以下後可開門。

5. 水純化裝置

細胞培養對水的質量要求較高，細胞培養、細胞培養相關液體的配製用水以及清洗細胞培養器皿用水都必須事先經過嚴格的純化處理。目前有多種純化方法相結合，可使普通水純化為純水和超純水的純水裝置使用非常靈活方便，可掛壁式、台式、可配儲水箱、也可直接用分液槍、還可根據各類實驗用水要求選擇配置殺菌功能，有效去除DNA酶、RNA酶、蛋白酶等，更有可有效去除掉熱源、內毒素的超濾型純水裝置。

6. 冰箱

細胞培養實驗室必備設備，應專用，不得存放易揮發、易燃燒等對細胞有害的物質，且應保持清潔。一般包括普通冰箱、低溫冰箱和超低溫冰箱。

普通冰箱：儲存培養液、生理鹽水、Hanks液試劑等培養用的物品，可短期保存組織樣本。

-20℃低溫冰箱、超低溫冰箱：用於儲存需要冷凍以保持生物活性以及需長時期存放的制劑，如酶、血清等。

7. 細胞冷凍儲存器

儲存器常用的液氮容器，根據使用需要分為不同類型和規格。選擇液氮容器時需要考慮三個因素：容積大小、取放使用方便、液氮揮發量。液氮容器的大小一般在25-500L，可以儲存1ml的凍存管250-15000個左右。液氮溫度最低文帝可達-196℃，使用時應注意避免凍傷。由於液氮易揮發，需注意觀察剩餘液氮量，及時補充，避免液氮不足使細胞受損或死亡。目前有許多智能型細胞冷凍儲存器可供選擇，可配置有電子控制器的液氮儲存器，實現凍存自動化；並可監測液氮水平和樣品溫度，確保樣品溫度始終處於設定溫度點；可配置報警系統，設置液氮液面、溫度、電池、電壓、電源等失常情況下報警；同時具備熱氣體旁路系統，防止高於-130℃的暖空氣進入液氮罐，從而更有效地保護樣品，防止容器內升溫。另外，可選擇液氮供應罐通過連接管給儲存罐補充液氮，保證樣品安全。

8. 離心機

細胞培養時，通常使用離心機制備細胞懸液、調整細胞密度、洗滌和收集細胞。一般常規配置4000rpm台式離心機；若要做細胞沉降，需要使用80-100G離心力，因為離心力過大會損傷細胞。根據不同要求，有大容量、可調溫度離心機、高速離心機和低溫冷凍離心機等更多功能離心機可選擇。

9. 天平

常用的有精密天平和分析天平。分析天平的精確度一般為0.1mg、0.01mg和0.001mg。一般根據取樣量量和精度要求選擇合適的天平：取樣量大於100mg宜選用精確度0.1mg的天平；取樣量100-10mg，選用精確度0.01mg的天平；取樣量10mg宜選用精確度0.001mg的天平。天平需要定期校準，可選擇有自動校準功能的天平，方便維護。天平使用需要注意清潔，避免腐蝕性粉末、液體直接接觸稱量台。答案來自

㈤ 什麼時候用細胞培養瓶什麼時候用細胞培養

原代細胞培養專家齊氏生物認為，細胞培養器材常用的有培養瓶（T12.5\25\35\75\150)、培養板（6、12、24、48、96孔板） 。
一般講細胞的類型分為：貼壁型和懸浮型。這兩種細胞均可用培養板，培養瓶來培養。

總結：一般常規原代細胞培養，傳代培養可用培養瓶培養，目的為獲得大量試驗用細胞，而培養板則用於試驗，如葯敏試驗、MTT（96孔培養板），免疫組化（6孔培養板）等等。
希望能幫到您！

㈥ 養細胞時,什麼時候用培養瓶,什麼時候用培養皿

一般組織塊原代培養時用培養瓶，長出的細胞傳代後就可以依個人喜好而定了，用培養瓶或培養皿都可以，只要注意無菌操作都是沒問題的。不過個人更偏向於用培養皿，操作更方便些。

㈦ T25細胞培養瓶是什麼瓶

T25細胞培養瓶指的是細胞生長面積為25cm²的培養瓶。

細胞培養瓶就是用來培養細胞的。根據材質可以分為玻璃的和塑料的，底部形狀有正方形、長方形、三角形等，根據瓶子容積有5至500ml供選擇。

另外，表面經過特殊改性處理後，可以讓細胞更好的進行貼壁培養，這樣根據細胞貼壁面積又可以分為25～175cm許多種。

用於提供細胞體外培養環境的培養瓶、培養板和培養皿除了具有良好的透明度和無毒、無菌外，還需經表面改性處理使之能夠貼壁、分裂和生長。

(7)細胞培養瓶的使用方法擴展閱讀:

按細胞對產品的貼壁要求分為三類：

1、普通型適合細胞和組織的懸浮培養；

2、標准型具有良好的細胞貼壁性能，適用於細胞的貼壁生長；

3、專用型表面含有含氮官能團，能促進某些特殊細胞(如腫瘤細胞)的貼壁、生長和分化。

細胞培養器材：

一、玻璃器材

培養皿、滴流瓶、刻度吸管、離心管、培養瓶、燒杯、量筒、三角燒瓶

二、塑料器材

多孔培養板、培養皿、培養瓶

三、橡皮器材

橡皮製品（最好是硅製品）做各種瓶或試管的塞子、蓋子。

四、金屬器材

剪刀、鑷子、手術刀、解剖刀、血管鉗、組織鑷、眼科鑷及各種型號針頭

五、其他物品

紗布、注射器和針頭

進入細胞間開始細胞培養時，必須嚴格按照下列步驟操作：

①確定所有的細胞操作用的溶液和耗材都已經消毒並檢測沒有問題，不確定的溶液和耗材請勿使用，除非特殊情況，不要借用別人的溶液。

②確定衣服的袖口已經捲起或者白大褂的袖口已經扎緊。

③確定酒精燈內的酒精量，需要的話及時進行補充。

④確定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置。為了方便單手開啟瓶蓋，實驗開始前可以把所有瓶蓋旋松。

⑤盡量不要直接傾倒溶液，除非瓶口沒有被燒壞。如果傾倒失敗，溶液粘在瓶口，請用噴過75%酒精的紙巾仔細清潔瓶口周圍（不要接觸到瓶口）後在火焰上簡單燒灼。

⑥操作時如果不能肯定所用的耗材是潔凈的，必須及時更換。

⑦實驗完畢及時收拾，保持工作區域清潔整齊，最後用75%酒精清潔檯面。

㈧ 細胞培養一般方法有哪些

細胞培養首先分為原代培養和傳代培養.
一、原代培養需要從組織中消化、分離、純化出單細胞,然後繼續進行傳代、凍存；
二、傳代培養首先進行細胞復甦:
1.應遵守慢凍快融的原則.先將水溫鍋調至37-38度,取出凍存的細胞迅速放入後交細胞面浸至水面以下不斷搖動至融化.
2.在無菌台內將完全培養基加入培養瓶內,然後用無菌吸管從凍存管內取出細胞,置培養瓶內輕輕搖晃,使細胞均勻後置培養箱內培養,24h後換液；也可復甦當時離心（1000rpm 5min左右）後,完全培養基重懸培養,適時換液.
細胞傳代:
1.貼壁細胞:
對於貼壁細胞應先吸(倒)盡培養基,吸的越干凈越好,以免中和後加入的消化液,使強度減弱.PBS清洗2-3次,去除血清和死細胞,50ml培養瓶加入消化液約0.6ml,按此比例進行消化,(根據配製強度經驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養箱約2分鍾,鏡下見細胞收縮變圓或少數脫落後,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml完全培養基後,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然後收集離心（1000rpm 5min左右）,新鮮培養基重懸沉澱,加入完全培養基後繼續培養或實驗.
2.懸浮細胞:
一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養瓶內,加入完全培養基繼續培養,如要高濃度或需更換新培養基,可先離心（1000rpm,5min左右）後加入完全培養基,輕輕吹勻後,分置其它培養瓶內加入完全培養基繼續培養.

㈨ biofil 的培養瓶怎麼用

貼壁細胞一般加12-15ml培養基(不能再少了)平放就行,懸浮細胞,根據細胞的多少加培養基,最少加5-8ml,最多可以加2/30ml立著放。

㈩ 細胞培養瓶和細胞培養轉瓶的區別，各應用於什麼情況

轉瓶就是培養的時候要旋轉的，比如懸浮細胞~
細胞培養瓶就是培養的時候不用旋轉的，一般培養貼壁細胞