產孢子的微生物常用的保藏方法

Ⅰ 菌種保藏的常用方法及特點

（1）斜面低溫保藏。是一種最常用、最簡便的菌種保藏方法。首先將需要保藏的菌種接到斜面培養基上，在適宜的溫度條下培養，當菌絲健壯地長滿斜面時，即將此試管菌種取出，放置於4 ℃的冰箱中保藏。特點：
①簡單易行，適用於各類菇類菌種保藏，是目前生產及科研普遍採用的一種方法；②保藏時間短，需6個月轉接一次，轉管次數多菌絲變異的可能性大；③如改用橡皮塞並用石蠟扣，可保藏1年～3年。
（2）液體石蠟保藏。液體石蠟保藏也稱為礦油保藏，即用礦油覆蓋試管斜面試管保藏的方法。礦油是指無色、透明、黏稠、性質穩定、不易被微生物分解的石蠟油和液體石蠟，將其覆蓋在斜面菌種之上，可以隔絕空氣，防治培養基水分蒸發，抑制微生物的代謝活動，推遲細胞老化，從而達到長期保藏菌種的目的。特點：
①方法簡便易行，保藏條件不嚴格，保藏時間長，可作為長期保藏菌種的方法；②菌種必須垂直放，放置不方便。
（3）濾紙保藏。濾紙保藏是一種以無菌濾紙作為食用菌孢子吸附載體長期保藏菌種的方法，又稱濾紙孢子保藏法。特點：技術要求高，設備費用大，菌種不易衰老退化，菌種保藏時間長很少變異。
（4）自然基質保藏。自然基質保藏就是以不含毒性、刺激性和抑菌性而富含營養的自然生長的基質作培養基來保藏菌種的方法。自然基質很多，食用菌常用的自然基質有發酵的糞草、木屑及枝條基質等，取材方便，製作方法簡便，保藏時間也較長。使用時，只需取一塊、一粒或一條培養物放在新鮮的培養基上，並在適溫下培養即可。特點：方法簡便易行，保藏時間長。

Ⅱ 菌種的長期保存用什麼方法呢

1、定期移植法

將菌種接種於適宜的培養基中，最適條件下培養，待生長充分後，於4～6℃進行保存並間隔一定時間進行移植培養的菌種保藏方法。

2、液體石蠟法

將菌種接種在適宜的斜面培養基上，最適條件下培養至菌種長出健壯菌落後注入滅菌的液體石蠟，使其覆蓋整個斜面，再直立放置於低溫（4～6℃）乾燥處進行保存的一種菌種保藏方法。

3、沙土管法

將培養好的微生物細胞或孢子用無菌水製成懸浮液,注入滅菌的沙土管中混合均勻，或直接將成熟孢子刮下接種於滅菌的沙土管中，使微生物細胞或孢子吸附在沙土載體上，將管中水分抽干後熔封管口或置乾燥器中於4～6℃或室溫進行保存的一種菌種保藏方法。

4、真空冷凍乾燥法

將微生物冷凍，在減壓下利用升華作用除去水分，使細胞的生理活動趨於停止，從而長期維持存活狀態。

長期保存菌種的方法有很多，定期移植法、液體石蠟法、沙土管法、真空冷凍乾燥法都是不錯的保存方法，使用效果是非常好的。

(2)產孢子的微生物常用的保藏方法擴展閱讀：

注意事項

無論採用何種保藏方法，首先應該挑選典型菌種的優良純種來進行保藏，最好保藏它們的休眠體，如分生孢子、芽孢等。其次，應根據微生物生理、生化特點，人為地創造環境條件，使微生物長期處於代謝不活潑、生長繁殖受抑制的休眠狀態。

這些人工造成的環境主要是乾燥、低溫和缺氧，另外，避光、缺乏營養、添加保護劑或酸度中和劑也能有效提高保藏效果。

Ⅲ 經常使用的細菌菌株用哪種保藏方法比較好

1．斜面低溫保藏法

將菌種接種在適宜的固體斜面培養基上，待菌充分生長後，棉塞部分用油紙包紮好，移至2—8℃的冰箱中保藏。

保藏時間依微生物的種類而有不同，黴菌、放線菌及有芽孢的細菌保存2—4個月，移種一次。酵母菌兩個月，細菌最好每月移種一次。

此法為實驗室和工廠菌種室常用的保藏法，優點是操作簡單，使用方便，不需特殊設備，能隨時檢查所保藏的菌株是否死亡、變異與污染雜菌等。缺點是容易變異，因為培養基的物理、化學特性不是嚴格恆定的，屢次傳代會使微生物的代謝改變，而影響微生物的性狀；污染雜菌的機會亦較多。（北納生物www.bnbio.com）

2．液體石蠟保藏法

（1）將液體石蠟分裝於三角燒瓶內，塞上棉塞，並用牛皮紙包紮，1．05kg/cm2>，121．3℃滅菌30分鍾，然後放在40℃溫箱中，使水汽蒸發掉，備用。

（2）將需要保藏的菌種，在最適宜的斜面培養基中培養，使得到健壯的菌體或孢子。

（3）用滅菌吸管吸取滅菌的液體石蠟，注入已長好菌的斜面上，其用量以高出斜面頂端1cm為准，使菌種與空氣隔絕。

（4）將試管直立，置低溫或室溫下保存（有的微生物在室溫下比冰箱中保存的時間還要長）。

此法實用而效果好。黴菌、放線菌、芽孢細菌可保藏2年以上不死，酵母菌可保藏1—2年，一般無芽孢細菌也可保藏1年左右，甚至用一般方法很難保藏的腦膜炎球菌，在37℃溫箱內，亦可保藏3個月之久。此法的優點是製作簡單，不需特殊設備，且不需經常移種。缺點是保存時必須直立放置，所佔位置較大，同時也不便攜帶。從液體石蠟下面取培養物移種後，接種環在火焰上燒灼時，培養物容易與殘留的液體石蠟一起飛濺，應特別注意。

3．濾紙保藏法

（1）將濾紙剪成0．5×1．2cm的小條，裝入0．6×8cm的安瓿管中，每管1—2張，塞以棉塞，1．05kg/cm2>，121．3℃滅菌30分鍾。

（2）將需要保存的菌種，在適宜的斜面培養基上培養，使充分生長。

（3）取滅菌脫脂牛乳1—2ml滴加在滅菌培養皿或試管內，取數環菌苔在牛乳內混勻，製成濃懸液。

（4）用滅菌鑷子自安瓿管取濾紙條浸入菌懸液內，使其吸飽，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。

（5）將安瓿管放入內有五氧化二磷作吸水劑的乾燥器中，用真空泵抽氣至干。

（6）將棉花塞入管內，用火焰按圖Ⅶ-13熔封，保存於低溫下。

（7）需要使用菌種，復活培養時，可將安瓿管口在火焰上燒熱，滴一滴冷水在燒熱的部位，使玻璃破裂，再用鑷子敲掉口端的玻璃，待安瓿管開啟後，取出濾紙，放入液體培養基內，置溫箱中培養。

細菌、酵母菌、絲狀真菌均可用此法保藏，前兩者可保藏2年左右，有些絲狀真菌甚至可保藏14—17年之久。此法較液氮、冷凍乾燥法簡便，不需要特殊設備。

4．沙土保藏法

（1）取河沙加入10％稀鹽酸，加熱煮沸30分鍾，以去除其中的有機質。

（2）倒去酸水，用自來水沖洗至中性。

（3）烘乾，用40目篩子過篩，以去掉粗顆粒，備用。

（4）另取非耕作層的不含腐植質的瘦黃土或紅土，加自來水浸泡洗滌數次，直至中性。

（5）烘乾，碾碎，通過100目篩子過篩，以去除粗顆粒。

（6）按一份黃土、三份沙的比例（或根據需要而用其他比例，甚至可全部用沙或全部用土）摻合均勻，裝入10×100mm的小試管或安瓿管中，每管裝1g左右，塞上棉塞，進行滅菌，烘乾。

（7）抽樣進行無菌檢查，每10支沙土管抽一支，將沙土倒入肉湯培養基中，37℃培養48小時，若仍有雜菌，則需全部重新滅菌，再作無菌試驗，直至證明無菌，方可備用。

（8）選擇培養成熟的（一般指孢子層生長豐滿的，營養細胞用此法效果不好）優良菌種，以無菌水洗下，製成孢子懸液。

（9）於每支沙土管中加入約0．5ml（一般以剛剛使沙土潤濕為宜）孢子懸液，以接種針拌勻。

（10）放入真空乾燥器內，用真空泵抽干水分，抽干時間越短越好，務使在12小時內抽干。

（11）每10支抽取一支，用接種環取出少數沙粒，接種於斜面培養基上，進行培養，觀察生長情況和有無雜菌生長，如出現雜菌或菌落數很少或根本不長，則說明製作的沙土管有問題，尚須進一步抽樣檢查。

（12）若經檢查沒有問題，用火焰熔封管口，放冰箱或室內乾燥處保存。每半年檢查一次活力和雜菌情況。

（13）需要使用菌種，復活培養時，取沙土少許移入液體培養基內，置溫箱中培養。

此法多用於能產生孢子的微生物如黴菌、放線菌，因此在抗生素工業生產中應用最廣，效果亦好，可保存2年左右，但應用於營養細胞效果不佳。

5．液氮冷凍保藏法

（1）准備安瓿管用於液氮保藏的安瓿管，要求能耐受溫度突然變化而不致破裂，因此，需要採用硼硅酸鹽玻璃製造的安瓿管，安瓿管的大小通常使用75×10mm的，或能容1．2mm液體的。

（2）加保護劑與滅菌保存細菌、酵母菌或黴菌孢子等容易分散的細胞時，則將空安瓿管塞上棉塞，1．05kg/cm2，121．3℃滅菌15分鍾：若作保存黴菌菌絲體用則需在安瓿管內預先加入保護劑如10％的甘油蒸餾水溶液或10％二甲亞碸蒸餾水溶液，加入量以能浸沒以後加入的菌落圓塊為限，而後再用1．05kg/cm2>，121．3℃滅菌15分鍾。

（3）接入菌種將菌種用10％的甘油蒸餾水溶液製成菌懸液，裝入已滅菌的安瓿管；黴菌菌絲體則可用滅菌打孔器，從平板內切取菌落圓塊，放入含有保護劑的安瓿管內，然後用火焰熔封。浸入水中檢查有無漏洞。

（4）凍結再將已封口的安瓿管以每分鍾下降1℃的慢速凍結至-30℃。若細胞急劇冷凍，則在細胞內會形成冰的結晶，因而降低存活率。

（5）保藏經凍結至-30℃的安瓿管立即放入液氮冷凍保藏器的小圓筒內，然後再將小圓筒放入液氮保藏器內。液氮保藏器內的氣相為-150℃，液態氮內為-196℃。

（6）恢復培養保藏的菌種需要用時，將安瓿管取出，立即放入38—40℃的水浴中進行急劇解凍，直到全部融化為止。再打開安瓿管，將內容物移入適宜的培養基上培養。

此法除適宜於一般微生物的保藏外，對一些用冷凍乾燥法都難以保存的微生物如支原體、衣原體、氫細菌、難以形成孢子的黴菌、噬菌體及動物細胞均可長期保藏，而且性狀不變異。缺點是需要特殊設備。

6．冷凍乾燥保藏法

（1）准備安瓿管用於冷凍乾燥菌種保藏的安瓿管宜採用中性玻璃製造，形狀可用長頸球形底的，亦稱淚滴型安瓿管，大小要求外徑6—7．5mm，長105mm，球部直徑9—11mm，壁厚0．6—1．2mm。也可用沒有球部的管狀安瓿管。塞好棉塞，1．05kg/cm2>，121．3℃滅菌30分鍾，備用。

（2）准備菌種，用冷凍乾燥法保藏的菌種，其保藏期可達數年至十數年，為了在許多年後不出差錯，故所用菌種要特別注意其純度，即不能有雜菌污染，然後在最適培養基中用最適溫度培養，使培養出良好的培養物。細菌和酵母的菌齡要求超過對數生長期，若用對數生長期的菌種進行保藏，其存活率反而降低。一般，細菌要求24—48小時的培養物；酵母需培養3天；形成孢子的微生物則宜保存孢子；放線菌與絲狀真菌則培養7—10天。

（3）制備菌懸液與分裝以細菌斜面為例，用脫脂牛乳2ml左右加入斜面試管中，製成濃菌液，每支安瓿管分裝0．2ml。

（4）冷凍冷凍乾燥器有成套的裝置出售，價值昂貴，此處介紹的是簡易方法與裝置，可達到同樣的目的。

將分裝好的安瓿管放低溫冰箱中冷凍，無低溫冰箱可用冷凍劑如乾冰（固體CO2>）酒精液或乾冰丙酮液，溫度可達-70℃。將安瓿管插入冷凍劑，只需冷凍4—5分鍾，即可使懸液結冰。

（5）真空乾燥為在真空乾燥時使樣品保持凍結狀態，需准備冷凍槽，槽內放碎冰塊與食鹽，混合均勻，可冷至-15℃。

抽氣一般若在30分鍾內能達到93．3Pa（0．7mmHg）真空度時，則乾燥物不致熔化，以後再繼續抽氣，幾小時內，肉眼可觀察到被乾燥物已趨乾燥，一般抽到真空度26．7Pa（0．2mmHg），保持壓力6—8小時即可。

（6）封口抽真空乾燥後，取出安瓿管，接在封口用的玻璃管上，可用L形五通管繼續抽氣，約10分鍾即可達到26．7Pa（0．2mmHg）。於真空狀態下，以煤氣噴燈的細火焰在安瓿管頸中央進行封口。封口以後，保存於冰箱或室溫暗處。

Ⅳ 微生物的保藏技術各自特點

1、傳代保存法：有些微生物當遇到冷凍或乾燥等處理時，會很快死亡，因此在這種情況下，只能求助於傳代培養保存法。傳代培養就是要定期地進行菌種轉接、培養後再保存，它是最基本的微生物保存法，例如酸奶等常用生產菌種的保存。傳代保存時，培養基的濃度不宜過高，營養成分不宜過於豐富，尤其是碳水化合物的濃度應在可能的范圍內盡量降低。培養溫度通常以稍低於最適生長溫度為好。若為產酸菌種，則應在培養基中添加少量碳酸鈣。傳代培養保存法雖然簡便，但其缺點也很明顯，如：①菌種管棉塞經常容易發霉;②菌株的遺傳性狀容易發生變異;③反復傳代時，菌株的病原性、形成生理活性物
質的能力以及形成孢子的能力等均有降低;④需要定期轉種，工作量大;⑤雜菌的污染機會較多。

2、液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時間更長，適用於黴菌、酵母菌、放線菌及需氧細菌等的保存。此法可防止乾燥，並通過限制氧的供給而達到削弱微生物代謝作用的目的。其具有方法簡便的優點，同時也適用於不宜冷凍乾燥的微生物(如產孢能力低的絲狀菌)的保存。

、載體保存法：即將微生物吸附在適當載體上進行乾燥保存的方法。常用的有方法包括以下幾種，如
①土壤保存法：主要用於能形成孢子或孢囊的微生物菌種的保藏。②砂土保存法。③硅膠保存法。④磁珠保存法。⑤麩皮保存法。⑥紙片(濾紙)保存法

4、懸液保存法：即使微生物混懸於適當溶液中進行保存的方法。常用的有①蒸餾水保存法：本法應注意避免水分的蒸發。②糖液保存法

5、寄主保存法：即令微生物侵入其寄主後加以保存的方法。

6、冷凍保存法：適用於抗凍力強的微生物。這些微生物可在其菌體細胞外遭受凍結的情況下而不受損傷，而對其它大多數微生物而言，無論在細胞外凍結還是在細胞內凍結，都會對菌體造成損傷，

7、冷凍乾燥保存法：其原理是首先將微生物冷凍，然後在減壓下利用升華現象除去水分。事實上，從菌體中除去大部分水分後，細胞的生理活動就會停止，因此可以達到長期維持生命狀態的目的。該方法適用於絕大多數微生物菌種(包括噬菌體和立克次氏體等)的保存。

8、甘油管保藏法

Ⅳ 微生物菌種的微生物菌種保藏方法

有些微生物當遇到冷凍或乾燥等處理時，會很快死亡，因此在這種情況下，只能求助於傳代培養保存法。傳代培養就是要定期地進行菌種轉接、培養後再保存，它是最基本的微生物保存法，例如酸奶等常用生產菌種的保存。
傳代保存時，培養基的濃度不宜過高，營養成分不宜過於豐富，尤其是碳水化合物的濃度應在可能的范圍內盡量降低。培養溫度通常以稍低於最適生長溫度為好。若為產酸菌種，則應在培養基中添加少量碳酸鈣。 即使微生物混懸於適當溶液中進行保存的方法。常用的有：
① 蒸餾水保存法：適用於黴菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮於蒸餾水中即可在室溫下保存數年。本法應注意避免水分的蒸發。
② 糖液保存法：適用於酵母菌，如將其菌體懸浮於10%的蔗糖溶液中，然後於冷暗處保存，可長達10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進行保存。 將微生物吸附在適當載體上進行乾燥保存的方法。常用的有方法包括以下幾種：
①土壤保存法
主要用於能形成孢子或孢囊的微生物菌種的保藏。方法是在滅菌的土壤中加入菌液，立即在室溫下進行乾燥或使菌體繁殖後再乾燥，然後冷藏或在室溫下密封保存。保存用的土壤原則上以肥沃的耕土為宜，土壤需風干、粉碎、過篩和滅菌。
使微生物在土壤中繁殖後進行乾燥保存的方法是：取適量土壤(5克)置於塞有棉塞的試管中，加水或加入充分稀釋的液體培養基(以含水量為土壤最大持水量的60%為宜)，然後高壓滅菌。再將需保存的微生物進行大量接種，培養至菌絲能用肉眼確認的程度為止，移入乾燥器中經短時間乾燥或風干後密封，冷藏或室溫保存。
②砂土保存法
取清潔的砂，過60目篩去掉大砂粒，並用磁鐵吸去砂中鐵屑，再用NaOH溶液、10% HCl溶液和水交替清洗數次，乾燥後，置於試管或安瓶管中保持2～3cm深，再經乾熱滅菌後，加入1ml菌種培養液，經充分混勻後，放入真空乾燥器中，完全乾燥後熔封保存。也可用二份洗凈的砂(經HCl預處理)和一份貧瘠、過篩的黃土攙和後滅菌，再進行菌種保藏。
③硅膠保存法
以6～16目的無色硅膠代替砂子，乾熱滅菌後，加入菌液。加菌液時，由於硅膠的吸附熱常使溫度升高，因而需設法加以冷卻。
④磁珠保存法
將菌液浸入素燒磁珠(或多孔玻璃珠)後再進行乾燥保存的一種方法。在螺旋口試管中裝入1/2管高的硅膠(或無水CaSO4)，上鋪玻璃棉，再放上10～20粒磁珠，經乾熱滅菌後，接入菌懸液，最後冷藏、室溫保藏或減壓乾燥後密封保藏。本法對酵母菌很有效，特別適用於根瘤菌，可保存長達兩年半時間。
⑤麩皮保存法
在麩皮內加入60%的水，經滅菌後接種培養，最後乾燥保藏。
⑥紙片(濾紙)保存法
將滅菌紙片浸入培養液或菌懸液中，常壓或減壓乾燥後，置於裝有乾燥劑的容器內進行保存。
寄主保存法
微生物侵入其寄主後加以保存的方法。 ① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時菌液加量不宜過多，有些可添加保護劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液，然後把玻璃珠置於塑料容器內，再放入低溫冰箱內進行保存的。
② 乾冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入乾冰內，再置於冰箱內進行冷凍保存。
③ 液氮保存法(-196℃)：是適用范圍最廣的微生物保存法。 它的原理是首先將微生物冷凍，然後在減壓下利用升華現象除去水分。從菌體中除去大部分水分後，細胞的生理活動就會停止，因此可以達到長期維持生命狀態的目的。該方法適用於絕大多數微生物菌種(包括噬菌體和立克次氏體等)的保存。

Ⅵ 四大微生物最適合的保藏方法是什麼

找了半天~~~給個最佳唄

1、低溫定期移植保藏法。將需要保藏的菌種接種在適宜的斜面培養基上，適溫培養，當菌絲健壯地長滿斜面時取出，放在3-5℃低溫乾燥處或4℃冰箱、冰櫃中保藏，每隔4-6個月時間移植轉管一次，具體應根據菌種特性決定。保藏時要注意環境溫度不能太高，以防黴菌通過棉塞進入管內。因此，若用棉塞，可用干凈的硫酸紙或牛皮紙包紮棉塞，即可減少污染的機會，也可防止培養基乾燥。除草菇菌種外，其他食用菌菌種都能採用此法保藏。

2、液體石蠟保藏法。取化學純液體石蠟(要求不含水分、不霉變)裝於三角瓶中加棉塞並包紙，在1公斤/平方厘米壓力下滅菌1小時，再放入40℃恆溫箱中數天，以蒸發其中水分，至石蠟油完全透明為止。將處理好的石蠟油移接在空白斜面上，28-30℃下培養2-3天，證明無雜菌生長方可使用。然後用無菌操作的方法把液體石蠟注入待保藏的斜面試管中。注入量以高出培養基斜面1-1.5厘米，塞上橡皮塞，用固體石蠟封口，直立於低溫乾燥處保藏。保藏時間在一年以上，在低溫下，保藏時間還可延長。

3、沙土管保藏法。取河沙用水浸泡洗滌數次，過60目篩除去粗粒，再用10%鹽酸浸泡2-4小時，除去其中有機物質，再用水沖洗至流水的ph達到中性，烘乾備用。同時取貧脊土或菜園土用水浸泡，使呈中性，沉澱後棄去上清液，烘乾碾細，用100目篩子過篩，將處理好的沙與土以(2-4):1混勻，用磁鐵吸出其中的鐵質，然後分裝小試管或安瓿內，每管裝量0.5-2克，塞棉塞，用紙包紮滅菌(1.5公斤/平方厘米，1小時)，再乾熱滅菌(160℃，2-3小時)1-2次，進行無菌檢驗，合格後使用。將已形成孢子的斜面菌種，在無菌條件下注入無菌水3-5毫升，刮菌苔，製成菌懸液，再用無菌吸管吸取菌液滴入砂土管中，以浸透砂土為止。將接種後的沙土管放入盛有乾燥劑的真空乾燥器內，接上真空泵抽氣數小時，至沙土乾燥為止。真空乾燥操作需在孢子接入後48小時內完成，以免孢子發芽。制備好的沙土管用石蠟封口，在低溫下可保藏2-10年。

4、濾紙片保藏法。取白色(收集深色孢子)或黑色(收集白色孢子)濾紙，剪成4×0.8厘米的小紙條，平鋪在培養皿中用紙包裹進行滅菌(1公斤/平方厘米，30分鍾)。採用鉤懸法收集孢子，讓孢子落在濾紙條上。將載有孢子的濾紙條放入保藏試管中，再將保藏試管放入乾燥器中1-2天，除去濾紙水分，使濾紙水分含量達2%左右，然後

Ⅶ 跪求：微生物保存方法，各種保存方法的保存時間

1斜面低溫保藏法：有芽孢細菌存半年，無則一個月。2液體石蠟保藏：兩年。3沙土保藏：十年。4麩皮保藏：一年。5懸液保藏：一到兩年。6冷凍真空乾燥法：五到十五年。7液氮超低溫法：十到二十年。8低溫保藏法：一年。9甘油保藏法：半年

Ⅷ 常用的菌種保存方法有哪些

菌種保藏是食用菌產業的一項基礎工作，是確保野生種質資源基因留存和現有生產用種遺傳性能相對穩定的必要手段。菌種保藏的方法多種多樣，有的雖然保藏效果好，但投資高或操作繁雜。在生產實踐中，更需要設備投入少，能保障菌種不死亡、不污染、最大限度地保持優良種性的簡便方法，如斜面低溫短期保藏和自然基質較長期保藏相結合的方法。

一般而言，對母種進行長期保存，對原種進行短期保存。須保證優良菌種的性狀和活力不發生變異，不死亡，不被污染，確保其純度。因此，保存方法應具備取材容易、操作方便、菌種不易退化、長期保存不污染雜菌等優點。常用的菌種保存方法如下：

（一）斜面低溫保藏 該法的優點是保藏方便且所佔空間較小。具體做法是：菌絲長滿斜面後，放在0～5℃保存。以後每隔一定時間（2～3個月）轉管一次。轉管保存不能長期用PDA培養基，否則種性易退化，灰樹花降解木質纖維素的能力減弱。因此隔一定時間（1年左右）須把菌種轉接到木屑培養基上復壯，之後挑選健壯無污染的菌絲再轉回PDA培養基保存。在長期保存過程中，要防棉塞受潮滋生雜菌。菌種試管口最好用蠟燙封，以防培養基內水分過快蒸發。增加瓊脂用量（2.5%～3%）可減緩水分蒸發。還要防止菌種管上的標簽脫落而造成種系混雜。

斜面低溫保藏方法簡便易行，能隨時觀察保藏菌株的活力和純度，一旦染雜，肉眼能及時發現。

（二）自然基質保藏 此法是根據灰樹花的特性，利用自然基質保藏其菌種的方法。灰樹花是木腐菌，可以採用以木屑為主料的培養基。自然基質營養全面，且大部為緩釋養分，不易產生營養過剩或飢餓；其次，培養基理化性狀好，可吸收或緩沖菌絲代謝出的有害物質，水分與通氣協調平衡，部分菌絲扎入基質內生長，不裸露於空氣中，菌絲呼吸強度低，生命力強。

1.原料與配方 粗、細木屑比例適當，採用板栗樹木屑最佳，粗木屑粒徑為2毫米左右，細木屑為一般圓盤鋸屑，粗、細的比例為1∶2，添加干木屑重量20%的麩皮和1%的糖，含水率為60%左右。這樣的基質通氣性好，營養豐富且供菌絲分解利用的時間長，長到基質內部的菌絲比包裹在基質外部暴露於空氣中的菌絲耐受性強。不同粒徑的基質比例適當，還能協調氣與水的矛盾。粗粒過多，架空菌絲多；細粒過多，透氣性差，菌絲生長慢。應用配方如下：

栗木屑78%，麩皮20%，石膏1%，蔗糖1%，水65%配料，裝入較粗大的試管中，裝料量為試管的1/3～1/2，1.5千克/厘米2滅菌1.5小時。冷卻後，接入需保藏的菌種，在28℃下培養，待菌絲長滿木屑培養基時取出換上無菌橡皮塞，在0～5℃冰箱內保藏1～2年轉管一次。

2.容器與裝量 採用容量250毫升的葡萄糖玻璃瓶，清洗潔凈，裝量一般不超過玻璃瓶容量的3/5，填料不能過滿，瓶壁所殘留的顆粒須擦拭乾凈，否則保藏的菌種易引起污染。

3.滅菌和冷藏 滅菌時若採用棉塞封口，基質表層易失水，接種成活率低，即使菌絲復活，生長也很緩慢，所以最好採用聚丙烯膜封口，接種後換用無菌棉塞培養，待菌絲長滿後再換成有孔滅菌膠塞冰箱保藏。

用上述方法保藏的菌種經3年貯放後，接出成活率均達90%以上，出菇驗證產量及子實體形態特徵均無明顯變化。因此，自然基質保藏法具有保存期長，菌種遺傳性能相對穩定的特點。

（三）木粒PDA斜面保藏 灰樹花在自然狀態下易發生於栗樹根部，這說明其營養需求較為特殊。根據灰樹花這種習性，在PDA基礎上添加適量的栗樹木粒製成母種培養基。在多年的使用中發現，用該培養基培養的母種生長勢好，在轉接原種時，適應能力強，萌發定植快；用作菌種保藏基質時，保藏時間長，並能很好保持菌種的優良性狀。

1.木粒PDA的製作 選取栗樹邊材，加工成0.3～0.5厘米的顆粒，及時烘乾或曬干備用。稱取葡萄糖10克，KH2PO41克，1溶解於1升清水中配製成營養液。將營養液倒入盛有木粒的小鋁鍋中，營養液以完全浸沒木粒為准。煮沸10分鍾，以加快木粒對營養液的吸收速度，起鍋靜置30分鍾讓木粒吸足營養液。撈出木粒，瀝掉表面的水，裝入試管，裝量為試管長的1/6，最多不得超過試管長的1/5，否則在擺制斜面時，不易使木粒均勻分散於斜面的表面上。

選取新鮮的馬鈴薯，去皮並切成薄片，稱取200克放入小鋁鍋中，加入1升清水，文火煮沸30分，趁熱過濾取汁，並補足1升的體積。稱取瓊脂20克，葡萄糖20克，KH2PO4 2克，MgSO47H2O 2克。先將瓊脂剪碎，加入到馬鈴薯濾液中，繼續用文火加熱，使瓊脂溶化。待瓊脂完全溶化後，加入稱好的其他3種營養成分，攪拌使這些物質溶解均勻，趁熱裝入已裝有木粒的試管中，裝至試管長的1/3處，塞上棉塞。

在0.8～1千克/厘米2蒸氣壓下滅菌40分，待氣壓降至0時，開蓋取出，趁熱輕輕抖拍試管，使木粒分散後即可擺制斜面，並使木粒呈半裸狀分布於斜面上，待凝固後便製成了木粒PDA培養基。

2.生長及保藏效果 木粒PDA斜面上培養的灰樹花母種，菌絲生長迅速、良好，12天即可長滿試管，但菌絲的後期生長勢更為粗壯、濃密，後勁足。轉接原種時，菌種適應力強，定植快。這表明，灰樹花菌絲的生長速度、生長勢不僅取決於本身的遺傳性，而且很大程度上取決於培養基的營養。常規PDA的營養成分，主要是可溶性的速效性營養，前期營養豐富，營養利用直接，因而前期菌絲生長迅速、良好，後期營養則不足，菌絲生長不良，長勢欠佳。木粒PDA由於在增添了木粒這一緩效性營養，就木腐性的灰樹花而言，營養配伍合理，補充了菌絲生長後期所需的營養，因此後勁足。

菌絲體對基質的分解利用是通過菌絲細胞分泌的胞外酶，將基質中的大分子營養分解成小分子營養後才被吸收利用的，而這些胞外酶大多為誘導酶，其合成與分泌受基質的誘導和分解產物阻遏機制調節。就纖維素酶而論，許多易代謝碳源（如葡萄糖等）具有引起酶合成阻遏作用，同時伴隨著菌絲體的旺盛生長，酶的大量合成則出現在易代謝碳源基本耗盡之後，且受到基質纖維素的誘導，常規PDA基質，到葡萄糖等易代謝碳源基本耗盡的後期，由於營養的缺乏，菌絲生理機能下降，酶的合成量減少。而木粒PDA不僅含有易代謝碳源——葡萄糖，又含有木粒這一緩效性營養，前期葡萄糖促進了菌絲體旺盛生長，獲取了大量的菌絲體，表現為菌絲粗壯、濃密。到了易代謝碳源耗盡的後期，木粒一方面補充了後期所需的營養，使菌絲的生埋機能維持在一定的水平；另一方面木粒的纖維素激活菌絲細胞纖維素酶的誘導機制，合成了大量的酶，保持了木腐生性灰樹花較強的分解木材的能力，因此，用該培養基培養的母種在轉接原種時適應力強，萌發定植快。因部分菌絲長入木粒內部，抵抗不良環境的生存能力增強，種質不易退化。木粒PDA灰樹花菌種，在0～5℃保藏2～3年再轉管活化，成活率仍達到90%左右。此外，木粒PDA應用於木腐性灰樹花種的提純復壯，效果也較理想。

（四）石蠟隔氧封藏 具體做法是將液態石蠟分裝入三角瓶內，裝量達瓶空間的1/3，塞好棉塞，於121℃滅菌2小時，然後置40℃溫箱中，使其水分蒸發，或置於乾燥器內數日以除去水分，石蠟呈透明狀為宜。在無菌條件下，用無菌吸管裝入已長好菌絲的斜面試管，使液面高出斜面頂部1厘米左右。塞上無菌橡皮塞，豎直保存。此法可使菌種存活3年以上，但以1～2年移植一次為好。移植時不必倒出石蠟，用接種鉤取一塊菌絲即可。因轉移時帶有石蠟，菌絲生長弱，需要再轉管1～2次，方能復壯。

Ⅸ 微生物菌種保藏的方法有哪些

菌種的優劣是食用菌生產成敗的關鍵。菌種是國家重要的生物資源，也是微生物工廠首要的生產資料。由於微生物繁殖快、易變異，因此微生物菌種特別需要妥善保藏。世界各國對微生物菌種都很重視。中國科學院微生物研究所專門設立了菌種的保藏機構，為各生產單位收藏和供應各種優良菌種。當然就具體的生產單位而言，大量的生產用菌種還得靠自己來生產和保藏。
菌種保藏的目的：是使優良菌種經過較長時間後，仍能保持菌種的優良性狀、生活能力及純度，降低菌種的衰亡速度，確保菌種的純一，防止雜菌污染及絕種。
保藏菌種的方法：人們在長期的生產實踐中，積累了不少保藏菌種的經驗，常用的保藏方法有：斜面低溫保藏法、液體石蠟保藏法、砂土管保藏法、濾紙片保藏法、穀粒保藏法等。常用保藏菌種的方法有以下幾種：
（1）斜面低溫保藏法這是最簡單最普通的保藏方法。首先將菌種在適宜的斜面培養基（一般PDA）上培養成熟後，選擇菌絲生長粗壯，邊緣保存。一般保存溫度4～6℃，除草菇和銀耳菌種外（10～15℃），此方法對其他食用菌都適宜，一般菌種可保藏2～4個月，所以需定時移接。此法保藏雖然方便，但是保藏時間短，需經常轉管，也很容易發生衰退變異現象。因此，不能用作長期保藏，最好與其他方法結合起來保藏。
另外，為了減少保藏期間培養基水分蒸發，瓊脂最好加到2.5%。為防止菌種在保藏過程中產酸分的積累，應加入0.2%的磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀等緩沖鹽類，同時，培養成熟後，最好將棉塞管口外剪平，並用礦蠟封或換以無菌木塞，這樣做也可以減少培養基水分的散失，延長保存時間。
在農村如果沒有冰箱，可採用土法保藏。即把保藏用的斜面菌種換上無菌橡皮塞，並用礦燭蠟封後密閉的廣口瓶中，懸入井底保藏。（2）貯藏室保藏法原種和栽培種一般只在貯藏室短期保藏，貯藏室溫度0～10℃為好。室內應清潔、乾燥、無光，應經常檢查溫度和濕度，以降低其生活力，減少變異退化，防止雜菌污染，避免過早出菇。溫度越高，保存的時間越短。

Ⅹ 菌種保存的方法有哪些，菌種傳代操作規程

二、菌種傳代操作規程
1、點燃酒精燈，在火焰旁的上方灼燒接種環。
2、將原有的菌種斜面培養基（菌種管）和待接種的新斜面培養基（接種管）用左手的拇指、食指和中指夾住，菌種管在前，接種管在後，然後斜持試管（45°），讓試管內斜面向上，兩個試管的口子平齊。
3、右手在火焰旁邊轉動兩管的棉塞，然後右手拿著接種環的柄端，垂直將接種環在火焰上灼燒，頂端的環必須燒紅，而且凡是接種時進入試管的部分，均應通過火焰灼燒。
4、使用右手的小指和手掌之間以及無名指和小指之間，將兩管的棉塞拔出，拿住，然後將試管在火焰上通過。
5、將接種環插入菌種管內，接觸無菌苔生長的培養基，待冷後，從斜面上挑取少許菌苔，然後迅速插入接種管，在斜面上輕輕劃線接種（由下而上劃直線，然後由下往上劃曲線）。
6、接種完畢後，將管口通過火焰滅菌，並將棉塞塞上。