測定多肽鏈的常用方法

A. 測定多肽氨基酸的最好方法

是測氨基酸的序列吧…
1.先測一下有幾條鏈。根據N-末端/C-末端的數目和蛋白質的相對分子質量確定。
2.把多肽鏈拆開。
3.如果有二硫鍵就斷開二硫鍵。
4.把每條肽鏈的序列測出來。

你所說的最好方法應該具體到每一步吧，對不同的氨基酸
要具體情況具體分析啊

B. 肽鏈的推斷問題請大俠幫忙！！

首先，寫肽鏈順序時必須指出C端、N端。
測序步驟：
1.因為胰蛋白酶只斷裂Lys或Arg殘基的羧基參與形成的肽鍵，所以用它斷裂多肽鏈得到的是以Arg和Lys為C-末端殘基的肽段， 所以肯定上述C 片斷 肯定是這個9肽的C端
2.而溴化氫只斷裂Met殘基的羧基參與形成的肽鍵，

根據 以上分析，得出C-末端是: Tyr
藉助重疊肽原理 得出兩套肽段的大致排列：

第一套：Ser-Ala-Arg Met-Glu-Lue-Lys Gly-Tyr
第二套：Ser-Ala-Arg－Met Glu-Leu-Lys-Gly-Tyr

推斷此9肽的全序列為：N-Ser-Ala-Arg－Met-Glu-Leu-Lys-Gly-Tyr-C

(其實，這道題只要知道胰蛋白酶的斷裂點，結合兩套肽段，就可以直接的、一目瞭然的看出9肽的N、C末端和 全序列，不需要這么復雜的過程。不過，不知道斷裂點就得用兩組片斷進行重疊法推測。)

C. 常用於蛋白質多肽鏈N端。C端測定的方法有幾種基本原理是什麼

(1)N-末端測定
A.二硝基氟苯法(FDNB，DNFB)：1945年Sanger提出此方法，是他的重要貢獻之一。
DNP-氨基酸用有機溶劑抽提後，通過層析位置可鑒定它是何種氨基酸。Sanger用此方法測定了胰島素的N末端分別為甘氨酸及苯丙氨酸。
B.氰酸鹽法：1963年Stank及Smyth介紹了一種測定N末端的新方法，步驟如下：
由於乙內醯脲氨基酸不帶電荷，因此可用離子交換層析法將它與游離氨基酸分開，分離所得的乙內醯脲氨基酸再被鹽酸水解，重新生成游離的氨基酸，鑒別此氨基酸即可了解N-末端是何種氨基酸。
C.二甲基氨基萘磺醯氯法：1956年Hartley等報告了一種測定N-末端的靈敏方法，採用1-二甲基氨基萘-5-磺醯氯，簡稱丹磺醯氯。它與游離氨基末端作用，方法類似於Sanger的DNFB法，產物是磺醯胺衍生物。
丹磺醯鏈酸具有強烈的黃色熒光。此法優點為靈敏性較高(比FDNB法提高100倍，樣品量小於1毫微克分子)及丹磺醯氨基酸穩定性較高(對酸水解穩定性較DNP氨基酸高)，可用紙電泳或聚醯胺薄膜層析鑒定。
(2)C-末端分析
A.肼解法：這是測定C-末端最常用的方法。將多肽溶於無水肼中，100℃下進行反應，結果羧基末端氨基酸以游離氨基酸狀釋放，而其餘肽鏈部分與肼生成氨基酸肼。
這樣羧基末端氨基酸可以採用抽提或離子交換層析的方法將其分出而進行分析。如果羧基末端氨基酸側鏈是帶有醯胺如天冬醯胺和谷氨醯胺，則肼解時不能產生游離的羧基末端氨基酸。此外肼解時注意避免任何少量的水解，以免釋出的氨基酸混淆末端分析。
B.羧肽酶水解法：羧肽酶可以專一性地水解羧基末端氨基酸。根據酶解的專一性不同，可區分為羧肽酶A、B和C。應用羧肽酶測定末端時，需要事先進行酶的動力學實驗，以便選擇合適的酶濃度及反應時間，使釋放出的氨基酸主要是C末端氨基酸。

D. 鑒定蛋白質多肽鏈N端的第一個氨基酸,可以用的物質有哪些

常用於蛋白質多肽鏈N端.C端測定的方法有幾種
(1)N-末端測定 A.二硝基氟苯法(FDNB，DNFB)：1945年Sanger提出此方法，是他的重要貢獻之一。DNP-氨基酸用有機溶劑抽提後，通過層析位置可鑒定它是何種氨基酸。Sanger用此方法測定了胰島素的N?末端分別為甘氨酸及苯丙氨酸。B.氰酸鹽法：1963年Stank及Smyth介紹了一種測定N?末端的新方法，步驟如下：由於乙內醯脲氨基酸不帶電荷，因此可用離子交換層析法

E. 肽鏈測續方法

短肽的序列，你應該是指氨基酸的序列吧。
有以下幾種方法：1.Edman降解法：是一種化學法對蛋白質進行測序的方法，是從多肽鏈游離的N末端測定氨基酸殘基的序列的過程。N末端氨基酸殘基被苯異硫氰酸酯修飾，然後從多肽鏈上切下修飾的殘基，再經層析鑒定，餘下的多肽鏈（少了一個殘基）被回收再進行下一輪降解循環。

2.羧肽酶法：羧肽酶是一組外肽酶，至少包括A.B.C三種。但是由於這些酶不能給出准確的氨基酸殘基順序，所以一般很少運用。

3.氨基酸順序的質譜分析法：這項原理是將肽主鏈和側鏈的極性基團用些化學試劑進行修飾，然後導入質譜儀中，在質譜儀的真空裝置中揮發，並在電子束的作用下碎裂，從而產生不同的陽離子。然後根據陽離子的質量與電荷之比進行鑒定。

實驗到此結束，但是想要知道順序 還要通過實驗中獲取的片段來重疊重構完整肽鏈的氨基酸順序。

F. 常用於蛋白質多肽鏈N端.C端測定的方法有幾種基本原理是什麼

(1)N-末端測定 A.二硝基氟苯法(FDNB，DNFB)：1945年Sanger提出此方法，是他的重要貢獻之一。DNP-氨基酸用有機溶劑抽提後，通過層析位置可鑒定它是何種氨基酸。Sanger用此方法測定了胰島素的N末端分別為甘氨酸及苯丙氨酸。B.氰酸鹽法：1963年Stank及Smyth介紹了一種測定N末端的新方法，步驟如下：由於乙內醯脲氨基酸不帶電荷，因此可用離子交換層析法將它與游離氨基酸分開，分離所得的乙內醯脲氨基酸再被鹽酸水解，重新生成游離的氨基酸，鑒別此氨基酸即可了解N-末端是何種氨基酸。C.二甲基氨基萘磺醯氯法：1956年Hartley等報告了一種測定N-末端的靈敏方法，採用1-二甲基氨基萘-5-磺醯氯，簡稱丹磺醯氯。它與游離氨基末端作用，方法類似於Sanger的DNFB法，產物是磺醯胺衍生物。丹磺醯鏈酸具有強烈的黃色熒光。此法優點為靈敏性較高(比FDNB法提高100倍，樣品量小於1毫微克分子)及丹磺醯氨基酸穩定性較高(對酸水解穩定性較DNP氨基酸高)，可用紙電泳或聚醯胺薄膜層析鑒定。(2)C-末端分析A.肼解法：這是測定C-末端最常用的方法。將多肽溶於無水肼中，100℃下進行反應，結果羧基末端氨基酸以游離氨基酸狀釋放，而其餘肽鏈部分與肼生成氨基酸肼。這樣羧基末端氨基酸可以採用抽提或離子交換層析的方法將其分出而進行分析。如果羧基末端氨基酸側鏈是帶有醯胺如天冬醯胺和谷氨醯胺，則肼解時不能產生游離的羧基末端氨基酸。此外肼解時注意避免任何少量的水解，以免釋出的氨基酸混淆末端分析。B.羧肽酶水解法：羧肽酶可以專一性地水解羧基末端氨基酸。根據酶解的專一性不同，可區分為羧肽酶A、B和C。應用羧肽酶測定末端時，需要事先進行酶的動力學實驗，以便選擇合適的酶濃度及反應時間，使釋放出的氨基酸主要是C末端氨基酸。

G. 如何預測一段多肽鏈的氨基酸序列

如何預測一段多肽鏈的氨基酸序列
有兩種方法，一是直接測序列法，常用Edman降解法，在弱鹼性條件下多肽連N端氨基酸（阿爾發）與PITC反應，標記為苯氨基硫代甲醯蛋白質。肽鏈中的第一個肽鍵變弱，在無水酸的存在下發發生降解，第一個氨基酸（AA1）經過分子重排成為PTH-AA1結合層析技術即可確定氨基酸的性質。C端氨基酸殘基分析，可用；羧基肽酶，肼解法；二是串聯質譜測定多肽鏈氨基酸測序。

氨基酸（amino acid）：含有氨基和羧基的一類有機化合物的通稱。生物功能大分子蛋白質的基本組成單位，是構成動物營養所需蛋白質的基本物質。是含有鹼性氨基和酸性羧基的有機化合物。氨基連在α-碳上的為α-氨基酸。組成蛋白質的氨基酸均為α-氨基酸。

H. 如何通過末端氨基酸分析和蛋白質分子量確定多肽鏈數目

1
多肽鏈的拆分。由多條多肽鏈組成的蛋白質分子，必須先進行拆分。幾條多肽鏈藉助非共價鍵連接在一起，稱為寡聚蛋白質，如，血紅蛋白為四聚體，烯醇化酶為二聚體;可用8mol/L尿素或6mol/L鹽酸胍處理，即可分開多肽鏈(亞基).
2
測定蛋白質分子中多肽鏈的數目。通過測定末端氨基酸殘基的摩爾數與蛋白質分子量之間的關系，即可確定多肽鏈的數目。
3
二硫鍵的斷裂。幾條多肽鏈通過二硫鍵交聯在一起，可在8mol/L尿素或6mol/L鹽酸胍存在下，用過量的-巰基乙醇處理，使二硫鍵還原為巰基，然後用烷基化試劑保護生成的巰基，以防止它重新被氧化。
二硫鍵的切割與保護(元素後數字為下標)
a
過甲酸〔performic
acid〕
不可逆
-CH2SO3H
b、還原+氧化
不可逆
[
巰基乙醇，DTT
]
+
碘乙酸等
-S-CH2-COOH
c、亞硫酸分解〔Sulfitolysis〕
可逆
-R1-S-S-R2
+
HSO3-
R1-S-
+
R2-S-SOH3
可以通過加入鹽酸胍的方法解離多肽鏈之間的非共價力;應用過甲酸氧化法或巰基還原法拆分多肽鏈間的二硫鍵。
巰基(-SH)的保護4
測定每條多肽鏈的氨基酸組成，並計算出氨基酸成分的分子比(如右圖)
5
分析多肽鏈的N-末端和C-末端
多肽鏈端基氨基酸分為兩類:N-端氨基酸(amino-terminal)和C-端氨基酸(Carboxyl-terminal)
。在肽鏈氨基酸順序分析中，最重要的是N-端氨基酸分析法。N末端分析法(Sanger法;Edman法;DNS-Cl;酶降解法)，C末端分析法(肼解法;酶降解法;硼氫化鋰法)。
6
多肽鏈斷裂成多個肽段。可採用兩種或多種不同的斷裂方法將多肽樣品斷裂成兩套或多套肽段或肽碎片，並將其分離開來。
7
測定每個肽段的氨基酸順序
8
確定肽段在多肽鏈中的次序。
利用兩套或多套肽段的氨基酸順序彼此間的交錯重疊，拼湊出整條多肽鏈的氨基酸順序。
9
確定原多肽鏈中二硫鍵的位置
一般採用胃蛋白酶處理沒有斷開二硫鍵的多肽鏈，再利用雙向電泳技術分離出各個肽段，用過甲酸處理後，將可能含有二硫鍵的肽段進行組成及順序分析，然後同其它方法分析的肽段進行比較，確定二硫鍵的位置。

I. 多肽鏈的序列分析題怎麼做

直接測序列法：常用Edman降解法，在弱鹼性條件下多肽連N端氨基酸（阿爾發）與PITC反應，標記為苯氨基硫代甲醯蛋白質。

肽鏈中的第一個肽鍵變弱，在無水酸的存在下發發生降解，第一個氨基酸（AA1）經過分子重排成為PTH-AA1結合層析技術即可確定氨基酸的性質。C端氨基酸殘基分析，可用；羧基肽酶，肼解法。

多肽的生物合成

同時，游離在細胞質中的轉運RNA（tRNA）把它攜帶的特定氨基酸放在核糖體的mRNA的相應位置上，然後tRNA離開核糖體，再去搬運相應的氨基酸。

這樣，在合成開始時，總是攜帶甲硫氨酸的tRNA先進入核糖體，接著帶有第二個氨基酸的tRNA才進入，此時帶甲硫氨酸的tRNA把甲硫氨酸卸下，放在mRNA的起始密碼位置上，然後自己離開核糖體，甲硫氨酸的－COOH端與第二個氨基酸的-NH2形成肽鍵。

以上內容參考：網路-多肽鏈

J. 常用於蛋白質多肽鏈N端.C端測定的方法有幾種

常用於蛋白質多肽鏈N端測定的方法：

1、二硝基氟苯法（FDNB法）

2、二甲基氨基萘磺醯氯法（DNS－Cl法）

3、異硫氰酸笨酯法（Edman法）

常用於蛋白質多肽鏈C端測定的方法

1、肼解法

2、還原法

3、羧肽酶法

(10)測定多肽鏈的常用方法擴展閱讀：

多肽合成是一個固相合成順序，一般從N端即氨基端向C端即羧基端合成。過去的多肽合成是在溶液中進行的稱為液相合成法。

液相合成基於將單個N-α保護氨基酸反復加到生長的氨基成份上，合成一步步地進行， 通常從合成鏈的C端氨基酸開始，接著的單個氨基酸的連接通過用DCC，混合炭酐， 或N-carboxy酐方法實現。