鹼性磷酸酶測定都有哪些方法

Ⅰ 鹼性磷酸酶是測定什麼的指標

正常范圍：成人 32～92U／L；
兒童 （小於10歲）36～213U／L。

檢查介紹：鹼性磷酸酶是一種磷酸單酯酶，廣泛存在於人體組織和體液中，以骨、肝、乳腺、腸粘膜、腎，胎盤中。

臨床意義：增高：
①阻塞性黃疸、肝硬化、肝壞死，鹼性磷酸酶明顯升高（肝細胞性黃疸則升高不明顯）。
②原發性和繼發性肝癌時鹼性磷酸酶亦明顯升高，與癌組織中或癌腫周圍肝細胞合成鹼性磷酸酶增加有關。
③其他腫瘤如乳腺癌、肺癌、卵巢癌、骨細胞瘤、骨肉瘤等，鹼性磷酸酶增高時，提示可能有肝臟轉移。
④變形性骨炎、成骨細胞癌、佝僂病、骨軟化、甲狀腺及甲狀旁腺功能亢進、腎小管性酸中毒、遺傳性磷酸酶過多症
⑤很多葯物可使鹼性磷酸酶增高，如巴比妥類、抗生素（紅黴素、慶大黴素、氯黴素、卡那黴素、氨苄青黴素等）。
減低：常見於重症慢性腎炎、乳糜瀉、貧血、惡病質、兒童甲狀腺功能不全或減退、維生素C缺乏症壞血病）。營養不良、呆小症、遺傳性低磷酸酶血症。

Ⅱ 鹼性磷酸酶染色法 怎麼做

本試驗是一個酶組織化學試驗，酶組織化學是在不破壞組織細胞的條件下，檢測酶的存在，定位與活性的學科，即在酶的存在，分布及其用在顯微鏡下變成可見的。生命是有序的，包括時間的有序及其空間的有序。其中美的空間有序性在於其細胞組織結構的精確位置，各種酶的自己的位置保證了化學活動的有效進行。
酶的定位方法必須准確，其顯示方法必須具有高度的特異性，使酶本身具有可見性，這是一種直接的方法，目前主要有免疫熒光化學法，該法敏感性高，速度快，但成本高。如果有相同的抗原決定簇時，則會有交叉反應。方法成熟，使用廣泛的還是經典的組織化學方法。下面以鹼性磷酸酶的顯示方法來學習經典酶組織化學的理論及操作。經典酶組織化學不是顯示酶本身，常採用的方法是：在一定條件下，使細胞中的酶作用於酶的底物，使其產物在原地進行捕捉、沉澱轉化為有色產物。鹼性磷酸酶（AKP）的顯示方法最早由Gomeri（1939）提出，現在這種方法稱為Gomeri法。鹼性磷酸酶是指磷酸單酯酶Ⅰ，它能在pH8.6~10.0的最適條件下分解磷酸單酯，對於與磷酸相接的醇基沒有特異性，Gomeri法是讓該酶在鹼性條件下，分解甘油磷酸鈉，產生磷酸根。
在孵育液中加入CaCl2，分解產生的磷酸根離子立即被Ca2 原位捕捉形成沉澱。
HPO2-- Ca2 →→CaHPO4 ↓（無色沉澱）
因出現的是無色沉澱，故還不能在光鏡下觀察到，尚需轉化為有色沉澱，先讓製片與Co（NO3）2反應生成磷酸鈷：
CaHPO4 Co（NO3）2 →→CoHPO4 ↓（無色沉澱） Ca（NO3）2
再讓它與硫化銨反應生成黑色的硫化鈷沉澱。
CoHPO4 （NH4）2S→→（NH4）2HPO4 CoS ↓（黑色沉澱）
我們可以在顯微鏡下觀察到黑色沉澱的位置，由於以上的這些操作都是在原位進行的，可以認為黑色沉澱的位置就是酶所在的位置，這類方法是讓酶作用於底物而將酶顯示出來。因此製作酶組織切片的時候不能使酶失活，還要盡量避免酶所需的反應的產物擴散，否則不會得到正確的結果。

Ⅲ 請教5，試述顯示細胞內DNA和鹼性磷酸酶的原理和方法

（1）細胞內特異顯示DNA的方法是福爾根反應：首先用酸水解去除RNA，僅保留DNA，同時除去DNA上嘌呤脫氧核糖核苷酸的嘌呤，使脫氧核糖的醛基暴露，所暴露的自由醛基與希夫試劑反應呈紫色，從而顯示細胞內DNA所在部分。
（2）特異檢測鹼性磷酸酶的方法是格莫瑞方法：
①樣品制備時首先要保存酶的活性；採用冷凍切片，以冷丙酮，甲醛進行短期固定；
②將樣品與甘油磷酸酯（底物）共同溫育，恢復酶2+的活性；
③酸水解作用釋放的磷酸根與Ca結合生成不溶性的磷酸鈣；
④進一步轉變成金屬銀或硫化鉛等有顏色的化合物；
⑤金屬沉澱或顯色的部分，即鹼性磷酸酶存在的活性部分

Ⅳ 肝功能檢查鹼性磷酸酶升高原因有哪些

很多化驗肝功能的檢查者對於鹼性磷酸酶升高的原因不了解，那麼，呢?下面我們專門請教了濟南中醫肝病醫院的專家們。 鹼性磷酸酶在肝臟中存在於肝小管膜，肝鹼性磷酸酶是在人體發現的幾種鹼性磷酶酶同工酶中的一種。各種實驗室方法可以檢測血清鹼性磷酸酶，因此，比較通過不同技術測得的結果可能會有差別。鹼性磷酸酶升高的原因是什麼呢? 鹼性磷酸酶是反映膽道梗阻的敏感指標(在明顯的膽道梗阻者中極少見正常值)，受肝內或肝外膽汁排泄的影響。 輕度鹼性磷酸酶升高的原因常見於肝炎、肝硬化; 單獨的鹼性磷酸酶升高的原因可能提示浸潤性肝病，包括腫瘤、膿腫、肉芽腫、澱粉樣變。 鹼性磷酸酶升高的原因與膽道梗阻、硬化性膽管炎、原發性膽汁性肝硬化有關，進一步檢查常包括肝臟超聲檢查、抗線粒體抗體和膽管造影術。 肝病病毒要提高警惕，切勿忽視不理，要及時到正規肝病醫院進行正規治療。濟南中醫肝病醫院是一家肝病專科醫院，在治療肝病上有著豐富的經驗，擁有國際先進的檢測診療設施、權威的專家隊伍、規范高效的治療方案。 獨家引進的「超氧自體血激活療法」更是治療肝病的一大利器，大部分患者在使用該療法後當天即可好轉，5-7天明顯見效，一般一個療程病毒臨床治癒。是廣大乙肝患者最佳的選擇。同時配合七十六辨扶正還原療法，從七十六個方面辨證分析、科學用葯、扶正為本、祛除毒邪;治療手段多樣化、固本還原、標本兼治;還能夠調理腑臟，改善人體內環境。與西醫有效結合，滋養肝臟。 通過介紹，相信您對鹼性磷酸酶升高有了一定的了解，如果您還有什麼疑問，可以撥打我們的免費救助熱線與權威肝病專家進行咨詢。他們一定會解開您心中的疑問，給予您最耐心的解答。

Ⅳ 酶活性分析的常用方法

一、量氣法

在封閉的反應系統中如有氣體變化，通過測量變化後的氣體體積或壓力很容易計算出氣體變化量，這是量氣法的基本原理。曾在檢驗科廣泛應用的Van-slyke測二氧化碳結合力的方法就是量氣法的一個典型例子。Warburg進一步加以發展，設計出專用於測定酶活性的華勃呼吸儀。這種儀器特別適用於測定那些在反應中產生或消耗氣體的酶，例如氧化酶反應涉及到O2的消耗，脫羧酶會產生CO2。但也不僅限於這些酶，科學家採用與CO2氣體保持平衡過的重碳酸鹽體系，可用來測定各種產生H+的酶反應，如各種還原酶，可使NADH變為NAD和H+，而H+會促使反應體系中重碳酸鹽變為CO2氣體。

二、比色法與分光光度法

在20世紀上半個世紀華勃儀得到研究實驗室廣泛的應用，並在酶學上得到豐碩的成果。但此法操作煩瑣，技術要求高而且靈敏度低。臨床常規中很少使用。多使用簡單易行的比色法測酶活性。在上半個世紀建立了一些適用於常規工作的測酶活性濃度的方法，如測定澱粉酶的Somogyi法，鹼性磷酸酶的Bodansky法、King法等等。這些方法都是在酶和底物作用一段時間後停止酶反應，加入各種化學試劑與產物或基質反應呈色，用比色計在可見光處比色，同時將被測物質作標准管或標准曲線，比較後計算出在此段時間內產物生成量或底物消耗量，從而求得反應速率v。

比色法從50年代起逐步被分光光度法所取代。這是因為分光光度法有以下幾個顯著優點：一是測定范圍不只局限在可見光，還可擴展到紫外和紅外部分。這就為擴大測定酶范圍提供了可能性。二是提供了尋找一類不需停止酶反應就可直接測定產物生成量或底物消耗量方法的可能性。例某一酶催化下列反應A－＞B＋C，A、B、C三種物質用分光光度法的吸收光譜如圖17-1所示。

圖17-1 A、B、C三種物質的吸收曲線

可以看到C在560nm處有一吸收峰，而A和B在此處無吸光度變化因此無需停止酶反應，只要在560nm處測定吸光度變化就很容易計算出C的變化速度，而且C物質比A、B二物質有更高的吸收峰，即靈敏度最高。

這類方法中最成功的是Warburg在50年代利用NAD（P）H和NAD（P）吸收光譜差異建立的測酶活性濃度方法。NAD（P）H在340nm處有一吸收峰，而NAD（P）在此波段卻毫無吸光性。因此建立了一類和原來比色法截然不同方法。不需停止酶反應，在340nm根據吸光度變化，就可觀察到酶反應變化全過程。

第三個優點是不需要如比色法那樣，作標准管或標准曲線，因為分光光度計使用近似單色光的光源，在此條件下，某一特定物質的吸光度為常數，即人們所熟悉的摩爾吸光度（molar absorbance）。根據此值從吸光度△A/△T不難計算出酶催化反應速度v。

分光光度計的這些簡便、准確等特點使它在近年來已逐步取代比色法而成為目前最流行的方法。其缺點是需要精確帶恆溫裝置的分光光度計，在經濟不發達地區尚難推廣。

分光光度法的技術多樣化。設計得當可用於各種酶的測定。表17-2是一些可用於分光光度法的氧化還原物質特性。

除了前述的NAD(P)H系統可用於脫氫酶測定外，可利用黃素單核苷酸（FMN）和黃素腺嘌呤二核苷酸（FAD）來測定各種含這二個輔基的酶。它們的氧化型在450nm有一很強吸收峰，而還原型的吸光度很低，同樣細胞色素還原型在可見光有一個非常明顯和很窄的吸收峰，都使人們很容易用分光光度法研究這些酶的作用。上述物質主要用於氧化還原酶的測定。

科學家還設計出一系列人工合成酶的底物，用於其它酶的分光光度法測定。例如合成了很多對硝基酚的衍生物，用於各種水解酶的測定。鹼性磷酸酶底物磷酸對硝基酚就是一個成功例子。又如測芳香基硫酸酯酶，可使用人工合成的硫酸對硝基酚為底物，其分解產物的吸收峰由原來的278nm變為318nm，Webb成功地在330nm進行此酶監測

表17-2 一些氧化還原物質的特性

物質 波長（nm） 克分子吸光度
還原型 氧化型
NAD，NADP 340 6300 0
FMN 450 12200
FAD 450 11300
細胞色素C 550 29500 8300
亞甲藍（等消光點） 610 0 41000
二氫酚吲哚酚 600 0 21000
吩嗪甲酯硫酸 388 1500 22000
抗壞血酸 265 15100
連二亞硫酸鹽 314 8000 0
氰化鐵（亞鐵） 420 0 1020

分光光度法的上述原理還可以用於其它酶的測定，如烯醇化酶、延胡索酸水解酶的底物由於含不飽和鍵，在330nm處有很強吸收峰，而酶作用產物無此不飽和鍵。則不難在330nm處對這些酶進行直接測定。

此後在分光光度法的發展過程中又導入了酶偶聯技術。使得分光光度法幾乎能測定所有的酶。因此臨床實驗室工作者如不能很好掌握分光光度法的技術，不了解各種影響因素，要作好酶的測定是很困難的。

三、熒光法和同位素法

分光光度法有一個缺點，即靈敏度較低。有些標本中酶濃度很低時往往測不出來。此時可考慮改用熒光法，可將測定靈敏度提高2-3個數量級。如科學家合成了一系列甲基傘形酮的衍生物，可取代對硝基酚衍生物做為一些水解酶的底物，由於水解產物甲基傘形酮有強烈熒光，大大提高測定的靈敏度，就是分光光度法中最常用的NAD(P)H反應系統，也可改用熒光法，在340nm紫外線激發下NAD(P)H產生強烈的藍色熒光，而NAD(P)不被激發。此外，還可使用在熒光法基礎上發展起來的時間分辨熒光法，例如北京醫院就曾利用此種靈敏度極高方法測定很難用其它方法檢測的腦脊液中微量的烯醇化酶。熒光法不易掌握，對所用的試劑、容器和儀器都要求很高，否則易產生非特異熒光干擾測定，或者引起熒光的淬滅使測定不準，故此種方法多用於研究實驗室，少用於常規實驗室。為提高靈敏度，還可使用同位素標記的底物進行酶測定，例如，有人以C12標記的乙醯膽鹼為底物測定膽鹼酯酶，在酶作用後以離子交換法分離出含C14的乙酸。同位素方法由於對人體有害，操作麻煩，目前已很少使用。

四、其它方法

離子選擇電極法，旋光法等有時用於測定特定的酶，當酶反應牽涉到有酸鹼變化時，很容易用pH儀直接觀察酶反應過程中H+的變化。直接用pH儀測酶反應有兩個缺點：一是隨pH變化，會偏離酶作用的最適pH值，不可避免地引起酶反應速度變慢。其二是如測定的標本不是純酶時標本中其他蛋白及其它有緩衡能力的物質將會影響所測pH變化的程度。此時如改用電位滴定儀則更為適合。此儀器可在酶反應過程中不斷向反應體系中加入酸或鹼以維持反應體系pH的恆定，而加入的酸鹼量只與體系中H+變化量相關，和反應體系中緩衡能力無關。

同樣如酶反應中有O2變化，可使用氧電極來監測酶反應過程，這可用來測定葡萄糖氧化酶活性，Chappell還成功地將此技術用於測線粒體的氧化能力。還曾有人嘗試用二氧化碳和氨電極測酶，由於這些電極反應時間較慢，不利於檢測酶反應速度。有些酶的反應物為光學異構體，則可根據旋光度變化來追蹤酶反應。某些反應物如羥基酸本身雖無旋光性，但與鉬結合後產生很高的旋光性。根據此特性建立了測定延胡索酸水合酶的方法。還有個別酶的測定使用了極譜法、高效液相色譜法等。總之，實驗室工作者完全可以根據實驗室現有儀器和技術，創造性地建立一些新的測活性濃度的方法。

Ⅵ 謝謝你的答復，我已經採納你的答案為最佳答案。我想問你：骨鹼性磷酸酶怎麼檢測是通過抽血嗎

人血清中含有的鹼性磷酸酶同工酶分別來自骨骼、肝臟、小腸和胎盤組織(在妊娠時)。胎盤型和小腸型鹼性磷酸酶同工酶的活性能相對容易被區分，而區別骨型和肝型這兩種同工酶活性就相當困難，因為這兩種同工酶來源於同一基因，其動力學性質、電泳遷移率和其他理化性質均十分相似，且相互間有交叉免疫反應，目前鑒別和定量測定骨型鹼性磷酸酶的方法可以分為兩大類：電泳法和非電泳法。
電泳法主要利不同的同工酶之間物理性狀、分子大小及荷電量的不同而進行。根據所用的支持特和操作的方法可分為：醋酸纖維薄膜電泳、瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯醯胺凝膠電泳、等電聚焦電泳和親和電泳等。其中以等電聚焦電泳和親和電泳的分辨效果較好。等電聚焦電泳解析度高特別適合次級同工酶的分離。Sinaha等報告的一種固相pH梯度等電聚焦電泳以聚丙烯醯胺為載體，用兩性電解質製成固定的pH梯度凝膠，避免了由於不穩定的pH梯度而引起的所謂「陰極漂移」現象。該法可將等電點准確到小數點後兩位並把正常血清的10條酶帶壓縮在pH3.90～4.79范圍。Rosalki等建立的親和電泳法是利用麥胚植物血凝素(WGA)能特異地和骨型鹼性磷酸酶結合形成WGA-骨型鹼性磷酸酶復合物，該復合物在電場中不泳動或泳動很慢，從而將骨、肝型鹼性磷酸酶清楚地分開。該方法簡便，重復性好，骨型鹼性磷酸酶的批內與批間CV分別為3.2％和5.2％。親和電泳的分離效果與WGA的濃度有關，其最適濃度隨電泳條件而異。因此，採用不同的電泳載體和不同的緩沖液時均應重新評價WGA的最適用量。
非電泳法有化學抑製法、熱失活試驗、親和沉澱法和免疫分析法等[1]。化學抑製法、熱失活試驗靈敏度和特異性較差。目前只用作鑒別某些病理血清鹼性磷酸酶組織來源的過篩試驗。親和沉澱法和親和電泳法一樣利用麥胚植物血凝素的作用將骨型鹼性磷酸酶和其他組織來源的鹼性磷酸酶分開，然後測定骨型鹼性磷酸酶的活性。該方法操作簡便，有較好的靈敏度和特異性，但是當血清標本含有膽汁型鹼性磷酸酶時，由於該酶也能和麥胚植物血凝素結合而使骨型鹼性磷酸酶假性增高。近年建立的免疫分析法能把靈敏度、特異性、可靠及操作簡便等特性很好地結合起來，從而滿足了臨床的常規應用。由Garnro等報道的放射免疫測定法測定的是骨型ALP的免疫活性蛋白而不是酶活力，並具有可以接受的特異性。而最近由Gomez等[1]應用對骨型鹼性磷酸酶特異很強的單克隆抗體建立的免疫分析法具有高度的敏感性和特異性，而且操作簡便重復性好，被認為是目前鑒別和定量骨型ALP的最佳方法。

本文來自:大眾醫葯網
http://www.51qe.cn/pic/30/15/13/19/037.htm

Ⅶ 誰能告訴我，怎樣用對-硝基苯磷酸鹽（即PNPP）法測定鹼性磷酸酶（ALP）活性

【步驟】
（1）用吸管吸掉96孔板內的培養液，用PBS沖洗3遍，加入含25mmol/L二乙醇胺，1mmol/L氯化鎂和6.7mmol/L PNPP的反應液。
（2）每孔150ul.37℃避光放置半小時,然後加0.1mol/L氫氧化鈉100ul終止反應,用酶標儀於405nm波長下測定OD值.
（3）樣品OD值在ALP標准曲線上讀取酶活性值(U/L).
ALP標准曲線繪制:
取PNP0.0111克用三蒸水溶解後稀釋至250ml,此時PNP的濃度為320umol/L.依次稀釋到160 umol/L，80umol/L,40umol/L,20umol/L,10umol/L和5mol/L.相當於ALP1280 U/L,640U/L,320U/L,160U/L,80U/L,40U/L和20U/L(活性值).用酶標儀於405nm波長下測定PNP的OD值.以ALP活性值作為自變數,對應的OD值作為應變數,求得直線回歸方程.
【結果】測定鹼性磷酸酶的含量

還有其他方法來測定，比如
以ALP為目標物的檢測方法有
1 Gomori鈣鈷法
2偶氮偶聯法
3鹼性磷酸酶染色試劑盒法。
4.PNPP偶氮法
5. BCIP/NBT比色法
6 茜素紅法
7. von Kossa法

Ⅷ 鹼性磷酸酶米氏常數的測定底物濃度的選擇要注意什麼

鹼性磷酸酶米氏常數的測定底物濃度的選擇要注意：加入鹼性溶液是為了終止反應。從底物濃度高的開始加起是因為低的可能本來就已經停止反應了，所以影響不大，濃度高的還在反應的可能性比低的大。

酶濃度：在反應條件一定時，酶濃度與反應速度成正比。按照中間產物學說，只有［S］>>［E］時，酶才能被底物分子飽和，反應速度才能達到最大值。因此當標本酶活力過高時，應將標本適當稀釋後再加以測定。

臨床意義

臨床上測定ALP主要用於骨骼、肝膽系統疾病的診斷和鑒別診斷，尤其是黃疸的鑒別診斷。對於不明原因的高ALP血清水平，可測定同工酶以協助明確其器官來源。兒童在生理性的骨骼發育期，鹼性磷酸酶活力可比正常人高1～2倍。處於生長期的青少年，以及孕婦和進食脂肪含量高的食物後均可以升高。

以上內容參考：網路-鹼性磷酸酶

Ⅸ 如何看血常規化血+清鈣磷鹼性磷酸酶測定+肝功十三項測定+微量元素3項

有感染的可能，建議一個星期後復查。