1. 早期病毒感染的實驗室快速診斷方法有哪些
實驗室對早期病毒感染進行快速診斷的方法包括病毒分離與鑒定、病毒核酸與抗原的直接檢測以及特異性抗體的檢測。臨床醫生在綜合評估患者的流行病學背景、症狀和體征後,判斷可能的病毒感染類型,並收集適宜的標本進行實驗室檢測。
一、檢材的採集與送檢
針對不同類型的病毒感染,通常採集的檢材包括血液、鼻咽分泌液、咳出的痰液、糞便、腦脊液、皰疹內容物、活檢組織或屍檢組織等。為了確保檢測的准確性,建議在患者發病初期(即急性期)採集標本。此時,病毒活性較高,更易於檢測。
用於分離病毒、檢測核酸及抗原的標本,應滿足以下要求:(一)盡早採取,以提高檢測成功率;(二)保存得當,避免標本污染或變性,確保檢測結果的准確性;(三)正確包裝和運輸,確保標本在運輸過程中保持穩定,不影響檢測結果。
二、實驗室診斷方法
1. 病毒分離與鑒定:通過組織培養、細胞培養或動物接種等方法,分離病毒,然後進行病毒形態、大小、包膜結構、核酸類型等的鑒定,以確定病毒的種類。
2. 病毒核酸與抗原的直接檢測:採用實時熒光定量PCR、逆轉錄PCR、酶聯免疫吸附試驗(ELISA)等方法,檢測病毒核酸或抗原的存在,快速識別病毒感染。
3. 特異性抗體的檢測:通過ELISA、免疫熒光、免疫印跡等免疫學方法,檢測患者血清中的特異性抗體,判斷是否曾感染某種病毒,或評估免疫反應的強度。
綜上所述,實驗室通過綜合運用病毒分離、核酸與抗原檢測以及抗體檢測等方法,能夠快速、准確地診斷早期病毒感染,為臨床治療提供依據。
2. 病毒感染的血清學診斷方法
常用的血清學方法有中和試驗、補體結合試驗、血凝抑制試驗等傳統的方法,以及應用免疫學標記技術發展的酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、放射免疫試驗(RIA)及免疫熒光試驗(IF)等特異、靈敏的微量血清學方法。
1.中和試驗(NT)是指病毒在活體內或細胞培養中,被特異性抗體中和而失去感染性的一種試驗。它既可用來檢查患病後或人工免疫後機體血清中抗體的增長情況,也可用來鑒定病毒或研究其抗原結構。中和抗體特異性高、持續時間較長,因此流行病學調查也常用此指征。
2.血凝抑制試驗許多病毒能凝集雞、豚鼠、人等的紅細胞,稱為血凝現象。這種現象能被相應抗體所抑制,稱血凝抑制試驗。其原理是相應抗體與病毒結合後,阻抑了病毒表面的血凝素與紅細胞的結合。
3.酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、放射免疫試驗(RIA)及免疫熒光試驗(IF)參見第八節細菌感染的血清學診斷方法的介紹。
4.蛋白印跡試驗(Westernblot,WB)用於檢測HIV抗體,是HIV感染的確認試驗。應用WB也可檢測病毒抗原,但一般不常用。
5.檢測病毒核酸的分子生物學試驗檢測患者血清等標本或病毒培養物中病毒基因或核酸片段的技術有多種:①病毒核酸擴增試驗即聚合酶鏈反應(PCR);②核酸雜交技術,包括點雜交、原位雜交、DNA-DNA印跡雜交(Southernblot)及RNA-DNA印跡雜交(Northernblot)等;③基因晶元技術(genechip);④病毒基因測序等。目前,分子生物學技術日益廣泛地應用於對病毒及其感染的檢測和研究中。