⑴ 微生物鑒別染色方法有哪些
檢驗常用染色法包括多種方法,如革蘭氏染色法、抗酸染色法、美蘭染色法、異染顆粒染色法、細菌鞭毛染色法、莢膜染色法、芽孢染色法、布氏桿菌科茲洛夫斯基染色法和結核桿菌熒光染色法。其中,革蘭氏染色法是一種廣泛應用的技術,能夠區分革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌,對細菌分類研究具有重要意義。
革蘭氏染色法的具體染液配製方法如下:
1. 結晶紫染液:稱取結晶紫(龍膽紫)14g,溶於95%酒精100ml中,配成飽和液。再取20ml飽和液與1%草酸銨溶液(1g草酸銨溶於100ml蒸餾水溶解即成)80ml混勻。
2. 盧戈氏碘液:碘化鉀2g於10ml蒸餾水中,再加碘1g,待碘全部溶解後,加蒸餾水200ml即成。
3. 95%酒精:用於後續脫色步驟。
4. 石碳酸復紅液:稱取鹼性復紅(鹼性品紅)4g溶於95%酒精100ml中成飽和液。再取飽和液10ml與5%石碳酸溶液(5ml石碳酸溶於100ml蒸餾水)90ml混勻。另外,還可以制備稀釋石碳酸復紅液,通過將石碳酸復紅液10ml加入蒸餾水90ml製成。
革蘭氏染色法的染色步驟如下:
1. 塗片:將菌液直接塗在載玻片上,經培養的菌落要加生理鹽水混勻塗片,等待乾燥。
2. 染色:將結晶紫染液滴加在已固定的塗片上,染色1分鍾後用水沖去剩餘燃料。
3. 碘液固定:滴加盧戈氏碘液1分鍾後水洗。
4. 脫色:在滴加95%酒精脫色,搖動玻片至紫色不在脫色為止(約需1分鍾),水洗。
5. 復染:用稀釋石碳酸復紅液復染30秒至1分鍾。
6. 水洗待干,鏡檢:水洗後待干,進行鏡檢。
革蘭氏陽性菌染成紫色,革蘭氏陰性菌染成紅色,這一特性對於細菌的快速分類具有重要價值。