⑴ 檢測蛋白質的方法有哪些
凱氏定氮法是一種測定化合物或混合物中總氮量的方法。它利用催化劑和濃硫酸將樣品中的有機氮轉化為無機銨鹽,然後在鹼性條件下將銨鹽轉化為氨,並隨水蒸氣蒸餾出來。這些氨被過量的硼酸液吸收後,用標准鹽酸進行滴定,從而計算出樣品中的氮含量。由於蛋白質含氮量相對恆定,因此這種方法也被廣泛用於經典蛋白質定量。
雙縮脲法則是另一種鑒定蛋白質的分析方法。它使用鹼性的含銅試液,當底物中含有肽鍵時,試液中的銅與多肽配位形成紫色配合物。通過比色法分析濃度,可以在特定波長下測定蛋白質的濃度。這種方法具有高靈敏度,適用於檢測微量蛋白質。
酚試劑法是通過比色法測定蛋白質濃度的一種方法。它利用蛋白質與酚試劑反應產生顏色變化,通過測定吸光度值來計算蛋白質濃度。該方法適用於不同濃度的標准蛋白溶液和待測蛋白質溶液的測定。
紫外吸收法則基於大多數蛋白質在280nm波長處有特徵的最大吸收峰。這種方法可用於測定低濃度(0.1~0.5mg/mL)的蛋白質溶液。通過比較不同濃度標准蛋白溶液的吸光度值,可以計算出待測蛋白質的濃度。
最後,考馬斯亮藍法是一種基於蛋白質與考馬斯亮藍G-250定量結合的原理來測定蛋白質含量的方法。當考馬斯亮藍G-250與蛋白質結合後,其最大吸收峰從465nm變為595nm。在考馬斯亮藍G-250過量且濃度恆定的情況下,蛋白質濃度的增加會導致595nm處吸光度的線性增加,因此可以用該方法來測定溶液中蛋白質的含量。