1. 基因克隆的方法主要有哪幾種簡述各種方法的原理和用途。
【答案】：(1)RACE技術
基本原理：根據已知序列設計基因片段內部特異引物，由該片段向外側進行PCR擴增得到目的序列。用於擴增5'端的方法稱為5'RACE，用於擴增3'端的稱為3'RACE。
用途：是用於從已知cDNA片段擴增全長基因的方法。
(2)應用cDNA差示分析法克隆基因
基本原理：該法充分發揮了PCR技術以指數形式擴增雙鏈DNA模板的特性，通過降低cDNA群體復雜性和更換cDNA兩端接頭等方法，特異性擴增目的基因片段。因為試驗對象和供試探針在接受差示分析前均經一個4鹼基切割酶處理，形成平均長度256bp的代表群，保證絕大部分遺傳信息能被擴增。每次T減D反應後僅設置72℃復性與延伸，94℃復性這兩個參數共20個PCR循環，PCR產物的特異性和所得探針的純度非常高。
用途：對染色體步移技術、定位克隆技術、cDNA差顯技術等方法的補充。
(3)Gateway大規模克隆技術
基本原理：利用入噬菌體進行位點特異性DNA片段重組，通過整合與切出反應，實現基因快速克隆和載體間平行轉移。
用途：為大規模克隆基因組注釋的可譯框架提供了保障。
(4)基因的圖位克隆
基本原理：首先，通過構建遺傳連鎖圖，將目的基因定位到某染色體的特定位點，並在其兩側確定緊密連鎖的RFLP或RAPD分子標記。其次通過對許多不同的生態型及大量限制性內切酶和雜交探針的分析，找出與目的基因距離最近的RFLP標記，通過染色體步移技術將位於這兩個標記之間的基因片段克隆並分離出來。然後，根據基因功能互作原理鑒定目的基因。
用途：分離未知性狀的目的基因。
2. 基因克隆的方法主要有哪幾種,簡述各種方法的原理和用途
基因克隆的方法主要有：平板劃線克隆法、液體克隆法、PCR擴增克隆法和基因重組克隆技術。下面詳細介紹各種方法的原理和用途：
平板劃線克隆法：
原理是通過將微生物細胞在固體培養基表面劃線分離，通過單菌落的形成來實現基因的克隆。這種方法適用於微生物的基因克隆。操作簡便，能夠直觀觀察克隆效果。
用途：主要用於微生物學領域，如細菌、真菌等基因的克隆和分離。特別適用於從復雜的微生物群體中分離出特定的菌株或基因。
液體克隆法：
原理是在液體培養基中通過細胞的增殖來實現基因的克隆。通過細胞在液體環境中的增殖，達到大量復制基因的目的。
用途：適用於大規模生產細胞系或需要培養細胞以進行進一步研究的場合，如蛋白質表達等。同時，也可用於從細胞中提取特定基因或進行基因功能研究。
PCR擴增克隆法：
原理是利用聚合酶鏈式反應技術，通過特定的引物對目標基因進行選擇性擴增，從而實現基因的克隆。PCR技術具有高靈敏度和特異性，能在短時間內大量擴增目標基因。
用途：廣泛應用於分子生物學研究，用於從復雜的基因組中擴增特定的基因片段，如基因診斷、法醫鑒定、疾病研究等。此外，PCR技術也常用於基因工程中的基因表達調控研究。
基因重組克隆技術：
原理是通過將目的基因與載體結合，然後導入受體細胞中進行擴增和表達。這種技術可以實現跨物種的基因克隆和基因功能研究。
用途：廣泛應用於基因工程領域，如轉基因動植物制備、基因治療、葯物研發等。基因重組克隆技術是實現基因功能研究和應用的重要手段。
總之，以上四種基因克隆方法各具特色，根據研究目的和對象的不同選擇合適的方法至關重要。隨著技術的不斷進步，這些方法在生命科學和基礎研究領域將發揮更加重要的作用。