原代細胞的提取方法包括哪些

⑴ 如何進行細胞原代培養

原代培養是指直接從機體取下細胞、組織和器官後立即進行培養。因此，較為嚴格地說是指成功傳代之前的培養，此時的細胞保持原有細胞的基本性質，如果是正常細胞，仍然保留二倍體數。但實際上，通常把第一代至第十代以內的培養細胞統稱為原代細胞培養。最常用的原代培養有組織塊培養和分散細胞培養。
分散細胞培養大致步驟為：將動物組織從機體中取出離散成單個細胞（常用胰蛋白酶），置合適的培養基中培養，使細胞 得以生存、生長和繁殖（注意整個過程無菌）。
組織塊培養是將剪碎的組織塊直接移植在培養瓶壁上，加入培養基後進行培養。

⑵ 原代細胞的提取方法包括哪些

原代細胞的提取方法包括：一般懸浮細胞，如血液細胞，就分離後，直接培養。

培養組織中的細胞，就需要消化過後，進行培養，也有用組織塊培養的。取出生後1-3天內的大鼠腦組織後，先仔細剝除腦膜和血管等纖維成分，置入Hanks液中漂洗1～2次後，置於30～50倍的Hanks液中，腦組織比較柔軟，反復吹打即可製成細胞懸液。

原代細胞的培養

原代細胞的培養是指直接從機體取下細胞、組織和器官後立即進行培養。因此，較為嚴格地說是指成功傳代之前的培養，此時的細胞保持原有細胞的基本性質，如果是正常細胞，仍然保留二倍體數。但實際上，通常把第一代至第十代以內的培養細胞統稱為原代細胞培養。

⑶ 原代細胞培養實驗原理步驟哪裡有

原理 將動物機體的各種組織從機體中取出，經各種酶（常用胰蛋白酶）、螯合劑（常用EDTA）或機械方法處理，分散成單細胞，置合適的培養基中培 養，使細胞得以生存、生長和繁殖，這一過程稱原代培養。

操作步驟
（一）胰酶消化法
1、器材：將孕鼠或新生小鼠拉頸椎致死，置75%酒精泡2—3秒鍾（時間不能過長、以免酒精從口和肛門浸入體內）再用碘酒消毒腹部，取胎鼠帶 入超凈台內（或將新生小鼠在超凈台內）解剖取肝臟，置平皿中。
2、用Hank』s液洗滌三次，並剔除脂肪，結締組織，血液等雜物。
3、用手術剪將肝臟剪成小塊（1mm2），再用Hank』s液洗三次，轉移至小青黴素瓶中。
4、視組織塊量加入5—6倍的0.25%胰酶液，37℃中消化20—40分鍾，每隔5分鍾振盪一次，或用吸管吹打一次，使細胞分離。
5、加入3—5ml培養液以終止胰酶消化作用（或加入胰酶抑制劑）。
6、靜置5—10分鍾，使未分散的組織塊下沉，取懸液加入到離心管中。
7、1000rpm，離心10分鍾，棄上清液。
8、加入Hank』s液5ml，沖散細胞，再離心一次，棄上清液。
9、加入培養液l—2 ml（視細胞量），血球計數板計數。
10、將細胞調整到5×105/ml左右，轉移至25ml細胞培養瓶中，37℃下培養。 上述消化分離的方法是最基本的方法，在該方法的基礎上，可進一步分離不同細胞。細胞分離的方法各實驗室不同，所採用的消化酶也不相同（如 膠原酶，透明質酶等）。
（二）組織塊直接培養法 自上方法第3步後，將組織塊轉移到培養瓶，貼附與瓶底面。翻轉瓶底朝上，將培養液加至瓶中，培養液勿接觸組織塊。入37℃靜置3—5小時，輕 輕翻轉培養瓶，使組織浸入培養液中（勿使組織漂起），37℃繼續培養。

⑷ 為了進行細胞培養,首先要從生物體取得細胞,目前獲取細胞的方法有兩種,分離法

實驗:細胞培養

1.實驗目的

初步掌握哺乳動物細胞的原代培養與傳代培養的基本操作過程，為生物工程在醫學上的應用打下基礎。

實驗原理 2.

從生物體中取出某種組織或細胞，模擬體內生理條件，在人工培養條件下使其生存、生長、繁殖或傳代，這一過程稱為細胞培養。細胞培養技術的最大優點是使我們得以直接觀察活細胞，並在有控制的環境條件下進行實驗，避免了體內實驗時的許多復雜因素，還可以與體內實驗互為補充，可同時提供大量生物性狀相同的細胞作為研究對象，耗費少，比較經濟，因此成為生物學研究的重要手段。近年來，在體細胞遺傳、分化、胚胎發生、腫瘤發生、免疫學、細胞工程、放射生物學以及老年學等一系列的研究領域中得到廣泛的應用，並取得了豐碩的成果。

細胞培養可分為原代培養和傳代(繼代)培養。直接從體內獲取的組織細胞進行首次培養為原代培養;當原代培養的細胞增殖達到一定密度後，則需要做再培養，即將培養的細胞分散後，從一個容器以1:2或其他比率轉移到另一個或幾個容器中擴大培養，為傳代培養，傳代培養的累積次數就是細胞的代數。

細胞培養是一種程序復雜、要求條件多而嚴格的實驗性工作。所有離體細胞的生長都受溫度、滲透壓、pH值、無機鹽影響，消毒、配液等均有嚴格的規范和要求，特別是無菌操作是細胞培養成敗的關鍵。

⑸ 什麼叫原代細胞和傳代細胞啊麻煩告訴我

原代細胞是指從活體動物或者活體組織中直接提取，分離後，進行體外培養的細胞，可以在體外進行擴增分裂。但是原代細胞並不是和細菌一樣能夠無線增值的，原代細胞在體外的存活增值時間並不是無限，存在一個Hayflick界限。即是，細胞在體外分裂超過一段的代次後，會自發性的死亡，其壽命是受到一些和細胞壽命有關的基因的控制的。
而傳代細胞一般指越過了Hayflick界限，可以在體外進行無限次的傳代擴增的永生化細胞，具有類似於癌細胞的特徵。一般而言，在體外培養的過程中，可能會有部分細胞基因的表達調控發生突變，使的細胞的存活不再受到限制而可以無限擴增，但是這種概率發生很少。此外也可以通過給原代細胞導入一個外源性的致癌基因來實現，最常用的有SV40大T抗原，以及人乳頭瘤病毒的E6E7基因，也可以通過表達一些已知的和細胞壽命有關的基因，比如端粒酶來實現原代細胞的永生化。永生化後的細胞，即為傳代細胞。

⑹ 原代細胞培養方法有哪些

組織塊培養法，單層細胞培養法，懸浮細胞培養法

⑺ 如何提取細胞

是提取細胞膜嗎？用哺乳動物紅細胞滲透吸脹提取

⑻ 原代神經細胞培養實驗方法有哪些

1．取出生後1-3天內的大鼠腦組織後，先仔細剝除腦膜和血管等纖維成分，置入Hanks液中漂洗1～2次後，置於30～50倍的Hanks液中，腦組織比較柔軟，反復吹打即可製成細胞懸液。
2．為排除脂肪成分和其它碎塊，把懸液注入離心管中，在室溫直立5～10分鍾後，細胞或細胞團塊自然下沉，脂肪等雜物易漂浮於懸液表層，吸除上清，如此反復二三次可獲得較多的細胞成分。
3．向末次沉澱物中加入適量營養液，通過紗網或紗布濾過，計數細胞並調整好細胞密度，接種入培養瓶或皿中，置5％CO2溫箱中培養。
4．細胞生長匯合後，可用0.25％胰蛋白酶消化法做傳代處理，加消化液的量以能覆蓋細胞層即可，待細胞開始從瓶壁脫離（平均5～10分鍾），加入含有血清培養液，吹打製成細胞懸液。生物幫上面有這方面的介紹，
http://www.bio1000.com/reseach/microbiology/

微生物學,細菌,病毒,真菌
。

⑼ 原代培養的細胞原代培養

一、原理
將動物機體的各種組織從機體中取出，經各種酶（常用胰蛋白酶）、螯合劑（常用EDTA）或機械方法處理，分散成單細胞，置合適的培養基中培養，使細胞得以生存、生長和繁殖，這一過程稱原代培養。
二、儀器、材料及試劑
儀器：培養箱（調整至37℃），培養瓶、青黴素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、紗布、手術器械、血球計數板、離心機、水浴箱（37℃）
材料：胎鼠或新生鼠
試劑：1640培養基（含20%小牛血清），0.25%胰酶，Hank』s液，碘酒
三、操作步驟
（一）胰酶消化法
1.器材：將孕鼠或新生小鼠拉頸椎致死，置75%酒精泡2-3秒鍾（時間不能過長、以免酒精從口和肛門浸入體內）再用碘酒消毒腹部，取胎鼠帶入超凈台內（或將新生小鼠在超凈台內）解剖取組織，置平皿中。
2.用Hank』s液洗滌三次，並剔除脂肪，結締組織，血液等雜物。
3.用手術剪將組織剪成小塊（1mm3），再用Hank』s液洗三次，轉移至小青黴素瓶中。
4.視組織塊量加入5-6倍體積的0.25%胰酶液，37℃中消化20-40分鍾，每隔5分鍾振盪一次，或用吸管吹打一次，使細胞分離。
5.加入3-5ml培養液以終止胰酶消化作用（或加入胰酶抑制劑）。
6.靜置5-10分鍾，使未分散的組織塊下沉，取懸液加入到離心管中。
7.1000rpm，離心10分鍾，棄上清液。
8.加入Hank』s液5ml，沖散細胞，再離心一次，棄上清液。
9.加入培養液1-2ml（視細胞量），血球計數板計數。
10.將細胞調整到5×105/ml左右，轉移至25ml細胞培養瓶中，37℃下培養。
細胞分離的方法各實驗室不同，所採用的消化酶也不相同（如膠原酶，透明質酶等）。
（二）組織塊直接培養法
自上方法第3步後，將組織塊轉移到培養瓶，貼附與瓶底面。翻轉瓶底朝上，將培養液加至瓶中，培養液勿接觸組織塊。於37℃靜置3—5小時，輕輕翻轉培養瓶，使組織浸入培養液中（勿使組織漂起），37℃繼續培養。
四、注意事項
1、自取材開始，保持所有組織細胞處於無菌條件。細胞計數可在有菌環境中進行。
2、在超凈台中，組織細胞、培養液等不能暴露過久，以免溶液蒸發。
3、凡在超凈台外操作的步驟，各器皿需用蓋子或橡皮塞，以防止細菌落入。
五、無菌操作的幾個注意事項
1、操作前要洗手，進入超凈台後手要用75%酒精或0.2%新潔爾滅擦試。試劑等瓶口也要擦試。
2、點燃酒精燈，操作在火焰附近進行，耐熱物品要經常在火焰上燒灼，金屬器械燒灼時間不能太長，以免退火，並冷卻後才能夾取組織，吸取過
營養液的用具不能再燒灼，以免燒焦形成碳膜。
3、操作動作要准確敏捷，但又不能太快，以防空氣流動，增加污染機會。
4、不能用手觸已消毒器皿的工作部分，工作檯面上用品要布局合理。
5、瓶子開口後要盡量保持45°斜位。
6、吸溶液的吸管等不能混用。
附：Hank』s液配方：
KH2PO4 0.06g，Nacl 8.0g，NaHCO3 0.35g，KCl 0.4g，葡萄糖1.0g，Na2HPO4·H2O 0.06g，加H2O至 1000ml
註：Hank』s液可以高壓滅菌。4℃下保存。

⑽ 如何進行細胞原代培養

如何進行細胞原代培養
細胞原代培養和傳代培養的區別
原代細胞(primary cell) 是指從機體的組織(如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔組織等)經蛋白酶或其它的方法獲得單個細胞並在體外進行模擬機體培養的細胞，稱為原代細胞。一般認為，培養的原代的第1代細胞和傳代到第10代以內的細胞統稱為原代細胞培養。在人工條件下使其原代細胞生存、生長、繁殖和傳代，進行細胞生命過程、細胞癌變、細胞工程等問題的研究。
細胞株(cell strain) 是通過選擇法或克隆形成法從原代培養細胞中獲得具有特殊性質或標志物的細胞稱為細胞株。一般認為，細胞株是用單細胞分離培養或通過篩選的方法，由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養期間始終存在。