① 檢測目的基因是否表達的方法
檢測目的基因是否表達的方法主要包括以下幾步:
Realtime檢測mRNA水平:
Western blot檢測蛋白水平:
檢測細胞功能指標:
綜上所述,檢測目的基因是否表達需要綜合運用多種技術手段,從mRNA水平到蛋白水平,再到細胞功能指標,進行全面而准確的評估。
② 怎樣用抗原-抗體的方法檢驗目的基因是否翻譯出蛋白質原理是什麼
檢測目的基因是否進入到受體細胞的方法,一般包括分子水平檢測和個體水平檢測。其中分子檢測有3個層次:1目的基因是否整合到受體細胞染色體dna上,2目的基因是否轉錄出mrna,3目的基因是否翻譯出蛋白質。1和2都可以用dna分子雜交技術檢測,3可以用抗體-抗原的方法檢測。個體水平的檢測包括抗蟲、抗病的接種實驗,以確定是否具有抗性及抗性的程度;基因工程產品需要與天然產品的功能進行活性比較等。
stern雜交──蛋白質分子(抗原—抗體)之間的雜交。它是檢測目的基因是否表達出蛋白質的一種方法。
具體做法是:
第一步,將目的基因在大腸桿菌中表達出蛋白質;
第二步,將表達出的蛋白質注射動物進行免疫,產生相應的抗體,並提取出抗體(一抗);
第三步,從轉基因生物中提取蛋白質,走凝膠電泳;
第四步,將凝膠中的蛋白轉移到硝酸纖維素膜上;
第五步,將抗體(一抗)與硝酸纖維素膜上的蛋白雜交,這時抗體(一抗)與目的基因表達的蛋白(抗原)會特異結合。
由於這種抗原—抗體的結合顯示不出條帶,所以加入一種稱為二抗的抗體,它可以與一抗結合,二抗抗體上帶有特殊的標記。如果目的基因表達出了蛋白質,則結果為陽性。
③ 高二生物中的目的基因的檢測與鑒定
目的基因的檢測與鑒定分分子水平檢測和個體水平鑒定。
個體水平鑒定簡單說就是把導入了目的基因的生物體培養出來,看生物個體中是否能表達出你所需要的性狀。
分子水平檢測就相當麻煩了,它有三個步驟。
首先,要檢測轉基因生物的DNA上是否插入了目的基因。方法是採用DNA分子雜交技術,即將轉基因生物的基因組DNA提取出來,同時,在外面(像基因文庫中)取一段新的含有目的基因的DNA片段,用放射性同位素等作標記,以此來作為探針,將探針與基因組DNA雜交,來檢測。(實際上就是DNA復制的情況,DNA復制時,一條雙鏈的DNA分子解旋成了兩條單鏈的DNA,而探針也是一條雙鏈的DNA片段解旋成了兩條單鏈的DNA片段,因為探針上也有目的基因,基因組的DNA上也有目的基因,在重新形成新的2條DNA,也就是復制時,鹼基互補配對,則含目的基因的探針上的單鏈能與同樣含目的基因的基因組DNA單鏈配對,形成一條新的DNA雙鏈分子,一旦形成新的DNA分子後,放射性標記能在新的DNA分子中含目的基因處發出熒光,從而表明目的基因已導入。)
其次,就是大大你說的檢測目的基因是否轉錄出了mRNA,方法和上面一樣,但不同之處是,從轉基因生物中提取出的是mRNA,同樣,同時,在外面(像基因文庫中)取一段新的含有目的基因的DNA片段,用放射性同位素等作標記,以此來作為探針,將探針與mRNA雜交,來檢測。(這里實際上和DNA的轉錄翻譯有點像,畢竟mRNA是單鏈的,實際上是探針DNA解旋成兩條單鏈的DNA片段,就像轉錄一樣,這時的mRNA會與單鏈的DNA鹼基互補配對,顯現出標記的同位素熒光,表明mRNA上有目的基因。)所以說,mRNA與目的基因雜交,是和DNA雜交,不是mRNA與目的基因的轉錄出的mRNA雜交。
最後要檢驗的就是看目的基因能否翻譯成蛋白質,就不多說了。
不知道講的清不清楚,語文表達有限,希望你能理解啊。