葯品里金黃色葡萄球菌檢測方法

1. 葡萄球菌生化鑒定試劑盒有哪些試驗

血漿凝固酶試驗是用於鑒定葡萄球菌的一種關鍵方法，特別是金黃色葡萄球菌。這種試驗區分結合型和游離型血漿凝固酶。結合型凝固酶直接作用於菌體表面的纖維蛋白原，將其轉化為纖維蛋白；而游離型則分泌到菌體外，激活血漿中的凝血酶原轉化為凝血酶，進一步作用於纖維蛋白原。測量方法有玻片法和試管法兩種。玻片法中，待試菌落乳化於鹽水中，加人血漿後出現凝集者為陽性。試管法則需將兔血漿與培養物混勻，37℃培養觀察凝固現象。

耐熱核酸酶試驗涉及24小時肉湯培養物沸水浴處理15分鍾後，劃線刺種於甲苯胺蘭-DNA平板，35℃培養24小時。若刺種線周圍出現淡粉色，則為陽性。這一試驗用於快速鑒別金黃色葡萄球菌。甘露醇發酵試驗則用於檢測金黃色葡萄球菌是否能發酵甘露醇。

Staphaurex膠乳凝集試驗是一種快速簡便的直接凝集試驗，用於鑒定金黃色葡萄球菌。其原理是在紙片上滴加包被有纖維蛋白原和IgG抗體的聚苯乙烯膠乳，加入待鑒定菌株培養物後，若出現凝集塊則為陽性。生化鑒定需注意與凝固酶陽性的葡萄球菌鑒別，可通過PYR（陰性）、VP（陽性）、鳥氨酸脫羧酶試驗（陰性）等試驗。

免疫學方法如酶聯免疫吸附試驗和對流免疫電泳可用於檢測金葡菌的磷壁酸抗體。分子生物學方法如PFGE脈沖場凝膠電泳以及酶切圖譜分析等，可用於更深層次的鑒定。

2. 金黃色葡萄球菌的檢驗過程

1、樣品制備：

稱取25g樣品至盛有225mL7.5%氯化鈉肉湯中，固體樣品研磨或置均質器中做成1:10的樣品混懸液。若供計數檢驗，可按十進制遞增稀釋法將樣品勻液再進行適當稀釋。

2、增菌與分離培養：

將上述樣品勻液於36℃±1℃培養18h～24h。金黃色葡萄球菌在7.5%氯化鈉肉湯中呈混濁生長。將上述培養物，分別劃線接種到Baird-Parker平板和血平板，血平板36℃±1℃培養18h～24h。Baird-Parker平板36℃±1℃培養24h～48h。

金黃色葡萄球菌在Baird-Parker平板上，菌落直徑為2mm～3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明圈見圖[4]。用接種針接觸菌落有似奶油至樹膠樣的硬度，偶然會遇到非脂肪溶解的類似菌落；但無混濁帶及透明圈。長期保存的冷凍或乾燥食品中所分離的菌落比典型菌落所產生的黑色較淡些，外觀可能粗糙並乾燥。在血平板上，形成菌落較大，圓形、光滑凸起、濕潤、金黃色（有時為白色），菌落周圍可見完全透明溶血圈見圖[5]。挑取上述菌落進行革蘭氏染色鏡檢及血漿凝固酶試驗。

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