快速鑒定病毒方法

1. 早期病毒感染的實驗室快速診斷方法有哪些

病毒感染的實驗室檢查包括病毒分離與鑒定、病毒核酸與抗原的直接檢出以及特異性抗體的檢測。臨床醫師根據流行病學資料，疾病的症狀與體征綜合判斷可能為何種病毒感染，留取適宜的標本送檢。

一、檢材的採集與送檢

病毒性疾病通常採集血液、鼻咽分泌液、咯痰、糞便、腦脊液、皰疹內容物、活檢組織或屍檢組織等。

供分離病毒、檢出核酸及抗原的標本的，要求：

(一)盡早採取 在發病初期(急性期)採取，較易檢出病毒，越遲陽性率越低。

(二)部位適宜 由感染部位採取，如呼吸道感染採取鼻咽洗漱液或咯痰；腸道感染採取糞便；腦內感染採取腦脊液；皮膚感染採取病灶組織；有病毒血症時採取血液。

(三)冷藏速送 病毒離活體後在室溫下很易死亡，故採得檢材應盡快送檢。若距離實驗室較遠，應將檢材放入裝有冰塊或乾冰的空器內送檢。病變組織則應保存於50%的甘油緩沖鹽水中。污染檢材，如鼻咽分泌液、糞便等應加入青黴素、鏈黴素或慶大毒素等，以免雜菌污染細胞或雞胚，而影響病毒分離。

檢測特異性抗體需要採取急性期與恢復期雙份血清，第一份盡可能在發病後立即採取，第二份在發病後2～3周採取。血清標本放4℃-20℃保存，試驗前血清標本以56℃30分鍾處理去除非特異性物質及補體。無菌性腦炎患者也可取腦脊液檢測特異性lgM。

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2. 如何辨別細菌,真菌 ,病毒

最近搶飯碗的也多了，日子難混啊。他們都太廢話了，姐教你一個簡單的方法：
首先要知道病毒無細胞結構，細菌是原核生物，真菌是真核生物。（不知道的話想快都難）
微觀的講（在顯微鏡中觀察），首先看有無細胞結構，這可分辨出病毒，再看有無細胞壁或細胞核（或核膜）這可分辨細菌和真菌。夠快吧！
宏觀的講（在培養皿中觀察），啥也看不見的就是病毒，因為它太小了。看得見的，小一團的，表面光滑的是細菌。看得見的，大一團的，表面粗糙的是真菌。
在生活中，你看不見細菌和病毒。能看得到的都是真菌（如蘑菇、靈芝等）。

3. 常用的植物病毒分子檢測診斷技術有哪些

1 RT-PCR技術

RT-PCR是英文Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction的簡寫，中文稱之為反轉錄聚合酶鏈式擴增反應。在反轉錄酶M-MLV或AMV的作用下，以RNA為模板、以20個左右的核苷酸為引物，反轉錄合成cDNA。再以cDNA為模板，兩個3和5端互補寡核苷酸引物，由Taq聚合酶從5→3進行一系列DNA聚合反應，擴增出所需要的目的DNA，可將極微量的靶DNA特異性地擴增上百萬倍，從而大大提高了對DNA分子的分析和檢測能力。

利用PCR技術，可以檢測到單分子核酸或對每10萬個細胞中僅含1個靶核酸分子的樣品。因此，該技術創立至今十年來，迅速地形成為常規的標准程序，為生物科學提供了從微量微生物材料中快速得到大量特定的遺傳物質的實驗手段。PCR在植物病毒的檢測、鑒定和植物病毒的檢疫工作中也將具有重要意義。如果病毒核酸是DNA類型，不需要反轉錄（RT），直接可以進行聚合酶鏈式擴增（PCR）。而大多數植物病毒的核酸類型為RNA，因此，需要先進行反轉錄（RT），再進聚合酶鏈式（PCR）擴增。用1%瓊脂糖和5%聚丙烯醯胺進行電泳，即可檢出擴增片段。

這里以香石竹斑駁病毒為例，介紹RT-PCR檢測香石竹斑駁病毒的實驗技術。

用已知病毒核酸保守序列設計引物，分別提取病、健植物總RNA為模板，進行RT-PCR反應，瓊脂糖或PAGE電泳檢測擴增結果。感病材料會出現特異擴增帶。如香石竹斑駁病毒（Carnation mottle virus，CarMV）。根據該病毒的RNA序列設計引物，P1引物（5′端引物，與CarMV RNA的2516～2538同源）：5′-〔TTA，GTT，TGC，CCC，CGT，TGG，TAA，CC〕-3′。P2引物（3′端互補引物，與CarMV RNA的3100～3124對應）：5′-〔AAG，CGT，CAT，CGT，TGA，ATC，CCA，GAG〕-3′。目標片段大小為608nt。對病健材料進行了RT-PCR，從感病材料中可以擴增出了大約600bp的特異片段，而健康植物無此擴增帶。用此方法可以快速、准確地檢測香石竹斑駁病毒。操作如下：

（1）RNA提取

分別取感病及健康葉片0.2～0.5g，加液氮研成粉末，按1g∶2ml的比例懸浮於RNA抽提緩沖液（20mmol/L Tris-HC1 pH8.0，1mmol/L EDTA，1%SDS，0.2%巰基乙醇）。按1∶1比例加入水飽和苯酸—氯仿—異戊醇（25∶24∶1）混合液，抽提數次，乙醇沉澱總RNA。溶入20～50μl TE緩沖液中，-70℃冰箱保存備用。

（2）cDNA合成反應體系組分為

待檢測材料總RNA或健康材料總RNA各0.5/μg，20pmol/L引物P21μl，5×MMLV緩沖液4μl，ddH2O7μl，該混合液於88℃處理10min後冰上迅速冷卻，然後加入10mmol/L dNTPs 1μl，40U/μl Rnasin 0.5μl，100mmol/L DTT 2μl，200U/μl MMLV逆轉錄酶1μl，混合後經42℃處理lh，合成cDNA。

（3）PCR擴增

取上述的cDNA各0.5μg，分別加入10×PCR緩沖液5μl，20pmol/L引物P1和引物P2各1μl，10mmol/LdNTPs 1μl，88℃10min之內加2U/μl Taq DNA聚合酶1μl，加ddH2O至50/μl。然後在液面上加三滴石蠟油，進行如下PCR熱循環：94℃3min，60℃1min，72℃1min，1次循環；94℃40s、60℃1min，72℃1min，35次循環，最後72℃延伸10min。PCR產物用1%瓊脂糖凝膠電泳檢查。攜帶CarMV的樣品會出現600bp的特性擴增帶。如圖1。

圖1 CarMV PCR產物的瓊脂糖凝膠電泳結果

4. 病毒鑒定常用方法有哪些

寨卡病毒病的檢測方法包括病毒核酸檢測、IgM抗體檢測、中和抗體檢測和病毒分離等。寨卡病毒與黃病毒屬其他病毒具有較強的血清學交叉反應，目前主要採用病毒核酸檢測。
開展蚊媒寨卡病毒檢測時，對捕獲的伊蚊成蚊或幼蟲進行病毒核酸檢測。
開展寨卡病毒實驗室檢測時，應同時考慮登革病毒和基孔肯亞病毒感染可能。登革病毒和基孔肯亞病毒實驗室檢測應按照相應的技術指南開展。
（一）臨床標本檢測。
1．病原學檢測
病原學檢測主要適用於急性期血液標本，一般認為發病7天內檢測陽性率高。
（1）核酸檢測：採用熒光定量RT-PCR方法，是目前早期診斷寨卡病毒病的主要檢測手段。
（2）病毒分離：將標本接種於蚊源細胞（C6/36）或哺乳動物細胞（BHK21、Vero）進行分離培養，出現病變以後，用檢測核酸的方法鑒定病毒。也可使用乳鼠腦內接種進行病毒分離。
2．血清學檢測
（1）血清特異性IgM抗體：發病3天後可檢出病毒特異性IgM抗體，但發病7天後檢出率高。可採用ELISA、免疫熒光等方法檢測。IgM抗體陽性，提示患者可能新近感染寨卡病毒，但寨卡病毒IgM抗體與登革病毒、黃熱病毒和西尼羅病毒等黃病毒有較強的交叉反應，易於產生假陽性。
（2）中和抗體：採用空斑減少中和試驗方法檢測。患者恢復期血清中和抗體陽轉或滴度較急性期呈4倍及以上升高，且排除登革、乙腦等其他常見黃病毒感染，可以確診。
（二）媒介標本檢測。
1．標本處理
將分類後的伊蚊成蚊或幼蟲，按照採集地點，每10～20隻為一份進行研磨處理。
2．病毒核酸檢測
用RT-PCR的方法進行寨卡病毒核酸檢測
3．病毒分離
病毒核酸陽性的標本進行病毒分離。

5. 腺病毒的鑒定方法

對難於培養的腸道腺病毒，從糞便標本中粗提後，經電子顯微鏡或免疫電鏡觀察。
病毒分離與鑒定
1．分離培養 標本應盡早從感染部位採集。採集患者咽喉、眼分泌物，糞便和尿液等，加抗生素處理過夜，離心取上清接種敏感細胞（293、Hep-2或HeLa細胞等），37℃孵育後可觀察到典型CPE，即細胞變圓、團聚、有拉絲現象，最突出的表現是許多病變細胞聚在一起呈葡萄串狀。
2．病毒鑒定 用熒游標記的抗六鄰體抗體與分離培養細胞作用來鑒定腺病毒，也可用血凝抑制（hemoagglutination inhibition，HI）試驗或中和試驗（neutralization test，NT）檢測屬和組特異性抗原並鑒定病毒的血清型。
腺病毒可用Shell vial技術進行快速鑒定。病毒標本經抗生素和離心處理，取上清接種於有細胞的Shell vial培養瓶，孵育1～2天，用特異性六鄰體單克隆抗體對其抗原表位進行檢測。也可用病人鼻粘膜上皮脫落細胞直接染色檢測病毒抗原。
用DNA雜交或內切酶酶切等鑒定分離培養的病毒DNA；PCR可用於腺病毒感染的診斷，引物設計主要根據腺病毒六鄰體、VAI和VAII編碼區序列，能檢測所有血清型，而且其敏感性很高，能檢測某些病人潛在的腺病毒。用腺病毒41型BgIII-D片段作探針診斷腺病毒腹瀉，其檢出率可達80%。 常用來直接檢測腺病毒在呼吸道和胃腸道的感染,較快速且靈敏度較高。免疫熒光(尤其對呼吸道標本、咽拭子和活組織標本)和酶免疫分析(尤其對於糞便標本)是常用的方法,與細胞培養相比,免疫熒光所測腺病毒的靈敏性能提高40%~60%,其它直接測定抗原的方法包括免疫層析法和乳膠凝集法。研究證實,與細胞培養檢測方法相比,使免疫層析試劑盒所測定的靈敏度可達90%。

6. 各種新冠病毒的檢測方式，哪種最為准確

各種新冠病毒的檢測方式，肛拭子是最准確的。

新冠病毒出現之後，醫院很快就推出了檢測的方式，而其中全球使用最多的檢測方式主要有三種。其中有兩種是主流的檢測方式，那就是鼻拭子或者咽拭子。主要是通過把一個長長的棉簽深入到呼吸道之中，然後取樣進行檢測。因為新冠病毒在呼吸道停留的時間是比較久的，檢測到樣品的機會就更大，檢測結果也就比較准確。

在做新冠病毒檢測的時候，很多人會頻繁的清理喉嚨，或者嚼口香糖，希望保持口腔的清潔，但是這完全沒有必要，頻繁的吞咽反而會讓新冠病毒停留時間變短，存在檢測不到病毒的可能性。因此在做新冠病毒的檢測之前，最好不要喝水、不要清嗓子、不要抽煙、不要嚼口香糖，佩戴好口罩，等待進行檢測即可。檢測的過程是非常快速的，一般幾秒鍾就可以完成，所以不要對於長棉簽有太大的恐懼感，不然反而會耽誤檢測的進度。

7. 有哪些物理學方法可以鑒別植物病毒

物理學測定方法是指用電鏡、光學和熒光顯微鏡對植物病毒內含體的觀察。許多植物病毒都在植物體內產生內含體，用電鏡觀察病毒引起的內含體，對快速鑒定病毒很有幫助，有些病毒就憑它們誘導的內含體就能區分開來，現將9個病毒屬在分屬水平上具有的診斷特徵列於下表。

9個具特徵性內含體的病毒屬

8. 怎麼快速識別系統是否中病毒或者木馬，從哪幾方面看呢，

1.看系統的開機關機速度，一般的病毒都會使系統開機關機的速度減慢
2.打開任務管理器，看看裡面有沒有奇怪的事項，如：在system用戶名以及當前的操作用戶名下有沒有相同的關鍵系統進程，如lsass等如果有則是中病毒了，
3.看網速，一般網速如果突然減慢了或時斷時續的就是有病毒了（當然要先詢問網路運行商是不是近來有在維修網路）
4.在開機時是不是會出現載入**.dll出錯，一般這種情況下就是病毒主體已經被清楚了，但是在注冊表裡還有殘留的文件
5.看殺毒軟體是不是不能在開機時隨系統自動啟動
6.看網路游戲的帳戶是不是莫名其妙的被盜了
7.and so on

9. 迄今為止，我國檢測新冠病毒有哪些方法

1、熒光PCR法。PCR法指的是聚合酶鏈式反應，能將微量的DNA大幅增加。熒光PCR檢測的原理為——隨著PCR的進行，反應產物不斷累積，熒光信號強度也等比例增加。最後通過熒光強度變化監測產物量的變化，從而得到一條熒光擴增曲線圖。
2、聯合探針錨定聚合測序法。這種檢測主要是用專門的儀器檢測測序載片上DNA納米球攜帶的基因序列。這種檢測的靈敏度高，不容易漏診，但結果也容易受多種因素的影響而不準。
3、恆溫擴增晶元法。檢測原理是基於核酸之間的互補結合特性開發的一種檢測方式，能夠用於定性或定量測量存在於生物體內的核酸。
4、病毒抗體檢測。抗體檢測試劑是檢測血清中由病毒進入人體後刺激人體產生的IgM或IgG抗體，IgM抗體出現較早，IgG抗體出現較晚。
5、膠體金法。膠體金法是用膠體金試紙進行檢測，也就是常說的快速檢測試紙。這種試紙經過特殊標記，上面有孔，用於滴入受檢者的血清樣本。
6、磁微粒化學發光法。化學發光法是一種高度敏感的免疫檢測，凡具有抗原性的物質都可以用這種方法測定。