㈠ 青黴素鈉無菌檢查的方法驗證
青黴素鈉無菌檢查的方法驗證
目的 建立健全注射用青黴素鈉無菌檢查方法，保證檢驗結果的准確性和可靠性。方法 按中國葯典2010年版二部(附錄XI H)無菌檢查法中的薄膜過濾法進行。
1 試驗環境與材料
1．1 試驗環境在環境潔凈度萬級、局部潔凈度百級的單向流空氣的菌無室中進行。
1．2 儀器智能集菌儀(杭州泰林生物技術設備有限公司)、PY330一次性全封閉集菌培養器(杭州泰林生物技術設備有限公司)、生化培養箱(蘇州威爾實驗用品有限公司)、黴菌培養箱(蘇州威爾實驗用品有限公司)、生物安全櫃(蘇州安泰空氣技術公司)
1．3 試葯注射用青黴素鈉
1．4 試驗用菌株金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26 003l、大腸埃希菌[CMCC(B)44 102]、枯草芽孢桿菌[CMCC(B)63501]、生孢梭茵[CMCC(B)64 941]、白色念珠菌[CMCC(F)98 001]、黑麴黴[CMCC(V)98 003]。
1．5 培養基、稀釋液及緩沖液1．5．1 乾粉培養基 硫乙醇酸鹽流體培養基、改良馬丁培養基、營養瓊脂培養基、瓊脂粉。
1．5．2 細菌稀釋液0．9％ 滅菌氯化鈉溶液。
1．5．3 沖洗用緩沖液pH7．0氯化鈉-蛋白腖緩沖液。
2 方法與結果
2．1 菌液制備按中國葯典2010年版附錄ⅪH無菌檢查法菌液制備法制備 。
2．2 菌落計數取金黃色葡萄球菌菌液、大腸埃希菌菌液、枯草芽孢桿菌菌液各1 m1分別接種於營養瓊脂培養基中，生孢梭菌接種至含1．5％瓊脂的硫乙醇酸鹽流體培養基中，30~C～35'E生化培養箱培養24～48 h，取白色念珠菌菌液、黑麴黴菌液各1 m1分別接種至改良馬丁瓊脂培養基中，經23℃ 一28~C黴菌培養箱培養48～72 h，計數。(上述各菌液分別接種兩個平板，取平均值，同時設陰性對照)
2．2 方法學驗證
2．3．1 試驗組(樣品+陽性) 取一次性全封閉集菌培養器(三聯裝)一套，先用少量pH7．0無菌氯化鈉-蛋白腖緩沖液潤濕濾膜，取樣品15瓶溶解於250 ml緩沖液中，按薄膜過濾法過濾，樣品過濾完畢後，再用pH7．0無菌氯化鈉-蛋白腖緩沖液沖洗，每次每管注人沖洗液100 ml，充分振搖，完全排空後循環操作5次，總沖洗量達到500 ml每管。沖洗完畢後在2管中分別注人改良馬丁培養基100 ml，另1管中注入硫乙醇酸鹽流體培養基100 ml。另取一套集菌培養器(三聯裝)取本品依上述方法過濾並沖洗後，均注入硫乙醇酸鹽流體培養基100 ml，將上述6管集菌培養器移至陽性對照室，於含硫乙醇酸鹽流體培養基的集菌培養器中，分別接種金黃色葡萄球菌菌液、大腸埃希菌茵液、枯草芽孢桿菌菌液、生孢梭菌菌液各1 ml，於含改良馬丁培養基的集茵培養器中，分別接種白色念珠菌菌液和黑麴黴菌液各1 ml，按前述規定溫度培養3～5 d，觀察結果。
2．3．2 陽性對照組取一次性全封閉集菌培養器(三聯裝)二套，4管中分別注入硫乙醇酸鹽流體培養基各100 ml、2管中分別注入改良馬丁培養基各100 ml，在陽性對照室內將6種菌液分別接種至相應管內，作為陽性對照，按前述規定溫度培養3～5 d，觀察結果。
2．3．3 陰性對照組取一次性全封閉集菌培養器(二聯裝)一套，濾過適量緩沖液後分別注入硫乙醇酸鹽流體培養基和改良馬丁培養基各100 ml，作為陰性對照，按前述規定溫度培養14 d，觀察結果。
2．3．4 樣品的無菌檢查 取樣品15支依上述方法同法操作，以500 ml／管的沖洗量沖洗，加入培養基後，按規定溫度培養14 d，逐日觀察，若培養14 d均澄清；由此判定供試品符合規定。
結果判斷 與對照管比較，如含供試品各容器中的試驗菌均生長良好，則說明供試品的該檢驗量在該檢驗條件下無抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不計，照此檢查方法和檢查條件進行供試品的無菌檢查。 如含供試品的任一容器中的試驗菌生長微弱、緩慢或不生長，則說明供試品的該檢驗量在該檢驗條件下有抑菌作用，可採用增加沖洗量、增加培養基的用量、使用中和劑或滅活劑、更換濾膜品種等方法，消除供試品的抑菌作用，並重新進行方法驗證試驗。
討論 目前，抗生素類葯物的應用非常廣泛，針對每種抗生素類葯物建立嚴格的質量標准，提高抗生素的質量就顯得尤為關鍵。所以對一個新品種建立無菌檢查法時，對其方法進行驗證就顯得尤為必要。薄膜過濾法作為無菌檢查中的一種方法，具有準確、方便、快捷的優點，是無菌檢查時所採用的一種重要方法。試驗表明上述方法操作方便快捷、結果准確。所以，該無菌檢查方法驗證對保證結果的可信度和准確性具有重要意義。
首先可以參考國家標准。其次要按照分析化學的原則進行方案設計。比如取樣均一、處理過程不要有損失、選擇合適的光譜儀器等。浙大哲博檢測幫助您！
基本上都是哪些內容：系統適用性、專屬性、進樣精密度、線性、檢測限、定量限、溶液穩定性、精密度（重復性、中間精密度、回收率）、耐用性試驗，具體操作見《中國葯典》2010年版二部，附錄XIX A葯品質量標准分析方法驗證指導原則
原料葯：有關物質、含量、殘留溶劑方法學認證。
制劑：有關物質、含量、溶出度（固體或半固體制劑）