常用大肠杆菌细胞固定方法

⑴ 大肠杆菌的革兰氏染色是什么颜色

大肠杆菌的形态是杆状的，经革兰氏染色菌体颜色变成红色，说明大肠杆菌是革兰氏阴性（G-）细菌。

金黄色葡萄球菌的形态是球状的，经革兰氏染色菌体颜色变成蓝紫色，说明金黄色葡萄球菌是革兰氏阳性（G+）细菌。

革兰氏染色法之所以能将细菌分为G+菌和G-菌，是因为一般认为革兰氏染色是基于细菌细胞壁特殊化学组分进行染色的。

(1)常用大肠杆菌细胞固定方法扩展阅读

革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：

（1）涂片固定。

（2）草酸铵结晶紫染1分钟。

（3）蒸馏水冲洗。

（4）加碘液覆盖涂面染约1分钟。

（5）水洗，用吸水纸吸去水分。

（6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。

（7）蕃红染色液（稀）染1分钟后，蒸馏水冲洗，干燥，镜检。

⑵ 大肠杆菌的转化原理及方法

大肠杆菌的转化原理及方法
大肠杆菌转化可以：（1）将重组DNA分子导入大肠杆菌受体细胞进行复制，增殖和表达，以获得目的基因；（2）验证大肠杆菌感受态细胞效果；（3）用于分子生物学其他研究。
实验方法原理：质粒DNA或重组DNA粘附在细菌细胞表面，经过42°C短时间的热击处理，促进吸收DNA.然后在非选择培养基中培养一代，待质粒上所带的抗菌素基因表达，就可以在含抗菌素的培养基中生长。
实验步骤
一、实验材料准备
1. 器材
旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，1.5 ml 微量离心管，双面微量离心管架，干式恒温气浴（或恒温水浴锅），制冰机，恒温摇床，培养皿（已铺好固体LB-Amp），超净工作台，酒精灯，玻璃涂棒，恒温培养箱。
2. 试剂
培养基（不加抗菌素），LB培养基（加抗菌素），无菌ddH2O，IPTG，X-gal。
3. 材料处理
无菌ddH2O，1.5 ml 离心管装入铝制饭盒（灭菌）、移液器吸头装入相应的吸头盒（灭菌），20%IPTG（M/V），2% X-gal（M/V，用N,N-二甲基甲酰胺配）。
二、操作步骤
1. 事先将恒温水浴的温度调到42℃。
2. 从-70℃ 超低温冰柜中取出一管（100 μl）感受态菌，立即用手指加温融化后插入冰上，冰浴5~10 min。
3. 加入5 μl 连接好的质粒混合液（DNA含量不超过100 ng），轻轻震荡后放置冰上20 min。
4. 轻轻摇匀后插入42℃水浴中1~2 min进行热休克，然后迅速放回冰中，静置3~5 min。
5. 在超净工作台中向上述各管中分别加入500 μl LB培养基（不含抗菌素）轻轻混匀，然后固定到摇床的弹簧架上37℃震荡1 h。
6. 在超净工作台中取上述转化混合液100-300 μl，分别滴到含合适抗菌素的固体LB平板培养皿中，用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀。
7. 如果载体和宿主菌适合蓝白斑筛选的话，滴完菌液后再在平板上滴加40 μl 2% X-gal，8 μl 20% IPTG，用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀。
8. 在涂好的培养皿上做上标记，先放置在37℃恒温培养箱中30~60 min 直到表面的液体都渗透到培养基里后，再倒置过来放入37℃恒温培养箱过夜。
9. 在被细菌污染的桌面上喷洒70%乙醇，擦干桌面，写实验报告。
10. 观察平板上长出的菌落克隆，以菌落之间能互相分开为好。注意白色菌斑。
注意事项
1. 玻璃涂布棒上的酒精熄灭后稍等片刻，待其冷却后再涂。

⑶ 实验笔记丨大肠杆菌转化实验（热击法）

大肠杆菌转化实验（热击法）是一个用于分子生物学研究的核心技术，其主要目的是将重组DNA分子导入大肠杆菌受体细胞，实现复制、增殖和表达，从而获得目的基因。此技术还用于验证大肠杆菌感受态细胞的效果，并在分子生物学的其他研究中发挥重要作用。

实验的原理基于质粒DNA粘附在细菌细胞表面，通过42°C短时间的热击处理，促进DNA吸收。随后，细胞在非选择性培养基中培养一代，待质粒上的抗菌素基因表达，细胞便能够在含抗菌素的培养基中生长。

实验所需的器材和试剂包括旋涡混合器、微量移液取样器、移液器吸头、1.5ml微量离心管、双面微量离心管架、干式恒温气浴或恒温水浴锅、制冰机、恒温摇床、培养皿（已铺好固体LB-Amp）、超净工作台、酒精灯、玻璃涂棒和恒温培养箱。此外，还需要准备质粒DNA、重组DNA、无菌ddH2O、IPTG（M/V）和X-gal（M/V，用N,N-二甲基甲酰胺配制）。

实验准备包括准备无菌ddH2O、灭菌的1.5ml离心管、灭菌的移液器吸头、20%IPTG（M/V）和2%X-gal（M/V，用N,N-二甲基甲酰胺配制）。

实验操作步骤包括：提前将恒温水浴温度调至42°C；从-70°C超低温冰柜中取出感受态菌管，立即融化后冰浴5-10分钟；加入连接好的质粒混合液（DNA含量不超过100ng），轻轻震荡后冰浴20分钟；轻轻摇匀后进行42°C水浴热休克1-2分钟，然后迅速放回冰中静置3-5分钟；向各管中加入500μl不含抗菌素的LB培养基，轻轻混匀后固定至摇床的弹簧架上，37°C震荡1小时；在超净工作台中，将转化混合液100~300μl分别滴入含合适抗菌素的固体LB平板培养皿中，用酒精灯烧过的玻璃涂布棒均匀涂布；若适合蓝白斑筛选，还需在平板上滴加40μl 2%X-gal和8μl 20%IPTG，均匀涂布；在平板上做好标记，放置30-60分钟直至液体渗透到培养基内，再倒置放入37°C恒温培养箱过夜；实验结束后，对被细菌污染的桌面喷洒70%乙醇，擦干后完成实验报告。

实验笔记还包括对其他实验技能的分享，如大肠杆菌感受态细胞制备、免疫细胞的分离、纯化和鉴定、CAR T细胞活化水平检测、Native PAGE步骤详解、病毒感染细胞实验步骤、B淋巴细胞分离技术、贴壁细胞培养和转染、蛋白质表达分离纯化实验、siRNA表达载体构建、Transwell实验、SSR分子标记实验、分子标记技术AFLP、荧光原位杂交实验、流式细胞仪样品制备、Southern和Northern blot实验、重组质粒连接、转化及筛选、2D电泳、ChIP实验、Far western blotting实验、圆二色光谱实验、ELISA实验、病毒滴度及生长曲线测定、蛋白质分子对接在线工具、蛋白质序列分析在线工具、DNA定点突变方法、Western Blotting实验中的常见问题及解决方案、转膜、样品制备、免疫检测、电泳等。

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⑷ 大肠杆菌如何进行涂片染色

革兰氏染色法具体操作步骤：

1. 涂片固定。

2. 草酸铵结晶紫染1分钟。

3. 纯化水冲洗。

4. 加碘液覆盖涂面染1分钟。

5. 水洗，用吸水纸吸去水分。

6. 加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，30秒后水洗，吸去水分。

7. 番红染色液（稀）染10秒钟后，纯化水冲洗。干燥，镜检。