细胞培养瓶的使用方法

㈠ 什么时候用细胞培养瓶 什么时候用细胞培养板 怎么选择

一个T25的细胞瓶相当于6个培养板，所以需要大量扩增细胞的时候用细胞瓶啊，以细胞为载体或者对象的实验用培养板比较好，因为用的量比较少节约细胞，而且培养板好做对照实验和梯度实验（每个板子的量或者浓度不一样），比如6孔板，可以拿1个做对照，另外5个孔做不同的实验嘛（比如接不同浓度的病毒），不过培养板相对更容易污染，所以操作要小心

㈡ 细胞培养瓶密封盖和过滤盖的区别

细胞培养瓶有多种规格和多种瓶盖类型可提供,以满足用户的不同需求.由高质量的原生聚苯乙烯(PS)制作,表面经过TC处理,促进细胞的贴壁生长,生产批号可追踪,100%通过完整性检测,无热原,均为无菌包装.
密封盖(Plug seal caps)：Corning经典瓶盖类型.一次成形不带内垫,常用于密闭培养,可保证其密闭性；旋松瓶盖时也可用于开放培养.
聚酯盖(Phenolic style caps)：常用于开放培养(需要旋松瓶盖).只需轻轻旋松瓶盖便可保证瓶内气体与环境中气体的交换.
透气盖(Vent caps)：瓶盖带有0.2μm疏水滤膜,提供无菌气体交换,减少污染的风险.常用于开放培养,推荐用于CO2培养箱培养,尤其适用于需要长期培养的实验.
隔垫盖(Septum caps)：隔垫带有预切割口,可承受多次穿插.可使用吸嘴(或者5ml以下规格的移液管)穿插隔垫进行加液、吸液或者收获细胞,减少污染的机会,维持RoboFlask 培养瓶封闭无菌的环境
直颈(Straight neck)：直颈的设计可减少培养基因晃动而流到瓶里.
斜颈(Canted neck)：易于倾注,移液管或者细胞刮容易进入瓶体.是Corning公司经典的设计.
角度颈(Angled caps)：移液管或者细胞刮易于进入瓶身,并且可减少培养基因晃动而流到瓶盖.
三角形(Triangular and modified triangular)：移液管或细胞刮更易达到瓶角,宽底增加稳定性.
矩形(Rectangular)：斜颈的矩形培养瓶瓶底至瓶颈是一个坡度设计,易于倾注,移液管或者细胞刮容易进入瓶体,大部分斜颈瓶都有一个裙边以增加稳定性.直颈和角度颈的矩形培养瓶整个瓶底都是培养面,节省空间并减少培养基因晃动而流到瓶盖.
RoboFlask 培养瓶(RoboFlask vessels)：微孔板尺寸的培养瓶,兼容自动操作的培养系统,92.6cm2生长面积.

㈢ 传代细胞的培养步骤

1、附着型胞(adherentcell)

（1）吸掉旧培养液。

（2）用D-PBS洗涤细胞一至二次。

（3）加入trypsin-EDTA溶液(1ml/25cm2,2ml/75cm2)，37℃作用数分钟，于倒立显微镜下观察，当细胞将要分离而呈现圆粒状时，吸掉trypsin-EDTA溶液。(若不移去trypsin-EDTA，则在trypsin-EDTA作用后，加入适量含血清之新鲜培养基终止trypsin作用，离心后再吸掉上清液。

（4）轻拍培养瓶使细胞自瓶壁脱落，加入适量之新鲜培养基，以吸管上下吸放数次以打散细胞团块，混和均匀后，依稀释比例转移至新的培养瓶中，以正常培养条件培养。

2、悬浮型细胞(suspensioncell)

（1）吸出细胞培养液，放入离心管中，离心1000rpm5分钟。

（2）吸掉上清液，加入适量之新鲜培养基，混和均匀后，依稀释比例转移至新的培养瓶中，以正常培养条件培养。

3、融合瘤(hybridoma)

有些hybridomacell需培养三天以上才会产生抗体，若是更换培养基，则可能会失去抗体。因此继代培养不需离心后更换培养基，直接添加新鲜培养基稀释细胞浓度即可。若体积太大，可倾斜放置，或分殖至新培养瓶中。

(3)细胞培养瓶的使用方法扩展阅读：

传代方法：

1、悬浮生长细胞传代

多采用离心法传代。1000转/分,20-30秒后去上清。沉淀细胞加新培养液后再混匀传代。亦有直接传代 法，即悬浮细胞沉淀在瓶壁时，将上清培养液去除1/2-1/3，然后用吸管直接吹打形成细胞悬液再传代.

2、半悬浮生长细胞传代（Hela细胞）

此类细胞部分呈现贴壁生长现象，但贴壁不牢，可用直接吹打法使细胞从瓶壁脱落下来，进行传代。

3、贴壁生长细胞传代

采用酶消化法传代。常用的消化液有0.25%的胰蛋白酶液。

㈣ 细胞培养常用器材有哪些

1. 超净工作台

目前绝大部分细胞实验室使用超净工作台实现无菌操作，具有操作简单、安装方便、占用空间小且净化效果很好。安徽人和净化为您介绍两种主要超净工作台-侧流式（垂直式）和外流式（水平层流式）。工作原理一般是将室内空气经粗过滤器初滤，由离心风机压入静压箱，再经高效空气过滤器精滤，由此送出的洁净气流以一定的均匀的断面风速通过无菌区，从而形成无尘无菌的高洁净度工作环境。

（1） 侧流式工作台：空气净化后的气流由左或右侧通过工作台面流向对侧，也有从上向下或从下向上流向对侧，形成气流屏障保持工作区无菌，工作台结构为封闭式；

（2） 外流式工作台：净化后的空气面向操作者流动，因而外方气流不致混入操作，工作台结构为开放式，但进行有害物质实验操作对操作者不利。超净工作台应需要定期请有关部门检查洁净度，符合要求的超净工作台其洁净度应达到100级，用尘埃粒子计数仪检测粒径≤5μm的尘埃粒子数量不应超过3.5个/L；空气流量应控制在0.75-1.0m3/s；细菌菌落数平均<1个，根据无菌状况必要时需要置换过滤器。

2. 显微镜

倒置式显微镜是细胞培养实验室日常工作常规必备设备，主要用于日常了解细胞的生长情况并观察有无污染发生。如资金允许，建议选用配置有照相系统的高品质相差显微镜、解剖显微镜、荧光显微镜、录像系统或缩时电影拍摄装置等，可随时拍摄并记录细胞生长情况。

3. 培养箱

体外培养的细胞和体内细胞一样，需要在恒定的温度下生存，一般最适生长温度为37℃，温差变化不应超过±0.5℃。温度升高2℃时，变不利于细胞生存，温度达到40℃以上细胞将很快死亡。因此，可精确控温的恒温培养箱、CO2培养箱是最佳选择。

（1） 恒温培养箱：应选隔水式或晶体管式自控温培养箱，此类培养箱灵敏度高，温度控制较稳定。一般的恒温培养箱价格较便宜，其缺点是只宜于作密闭式培养。

（2） CO2培养箱：目前多数的细胞培养室已广泛使用。CO2培养箱的优点是能够提供进行细胞培养时所需要的一定量的CO2（常用浓度为5％），易于稳定培养液pH，适用于开放或半开放培养。使用培养瓶时，为使培养瓶内与外界保持通气状态，可将瓶盖略微旋松，为避免细胞被污染，使用这种培养方式时，培养箱内空气必须保持清洁，需定期用紫外线照射或酒精消毒，同时培养箱内应放置盛有无菌蒸馏水的水槽，防止培养液蒸发，保持箱内相对湿度在100%。

（3） 细胞培养耗材：培养细胞的器皿可用培养皿、培养板或培养瓶。

4. 烘箱（干燥箱）

用于细胞培养的一些器械、器皿必须烘干后才能使用，玻璃器皿等须干热消毒。干热消毒时，烘箱内温度一般要达到160℃以上，通常使用鼓风式烘箱。其优点是温度均匀、效果较好，缺点是升温过程较慢。升温时不能先升温后鼓风而应鼓风与升温同时开始，至100℃时，停止鼓风。需注意避免包裹器皿的纸或棉花烧焦，烧焦的碎屑可影响细胞的生长。消毒后不能立即打开箱门，以免骤冷导致玻璃器皿破裂，应等温度自然下降至100℃以下后可开门。

5. 水纯化装置

细胞培养对水的质量要求较高，细胞培养、细胞培养相关液体的配制用水以及清洗细胞培养器皿用水都必须事先经过严格的纯化处理。目前有多种纯化方法相结合，可使普通水纯化为纯水和超纯水的纯水装置使用非常灵活方便，可挂壁式、台式、可配储水箱、也可直接用分液枪、还可根据各类实验用水要求选择配置杀菌功能，有效去除DNA酶、RNA酶、蛋白酶等，更有可有效去除掉热源、内毒素的超滤型纯水装置。

6. 冰箱

细胞培养实验室必备设备，应专用，不得存放易挥发、易燃烧等对细胞有害的物质，且应保持清洁。一般包括普通冰箱、低温冰箱和超低温冰箱。

普通冰箱：储存培养液、生理盐水、Hanks液试剂等培养用的物品，可短期保存组织样本。

-20℃低温冰箱、超低温冰箱：用于储存需要冷冻以保持生物活性以及需长时期存放的制剂，如酶、血清等。

7. 细胞冷冻储存器

储存器常用的液氮容器，根据使用需要分为不同类型和规格。选择液氮容器时需要考虑三个因素：容积大小、取放使用方便、液氮挥发量。液氮容器的大小一般在25-500L，可以储存1ml的冻存管250-15000个左右。液氮温度最低文帝可达-196℃，使用时应注意避免冻伤。由于液氮易挥发，需注意观察剩余液氮量，及时补充，避免液氮不足使细胞受损或死亡。目前有许多智能型细胞冷冻储存器可供选择，可配置有电子控制器的液氮储存器，实现冻存自动化；并可监测液氮水平和样品温度，确保样品温度始终处于设定温度点；可配置报警系统，设置液氮液面、温度、电池、电压、电源等失常情况下报警；同时具备热气体旁路系统，防止高于-130℃的暖空气进入液氮罐，从而更有效地保护样品，防止容器内升温。另外，可选择液氮供应罐通过连接管给储存罐补充液氮，保证样品安全。

8. 离心机

细胞培养时，通常使用离心机制备细胞悬液、调整细胞密度、洗涤和收集细胞。一般常规配置4000rpm台式离心机；若要做细胞沉降，需要使用80-100G离心力，因为离心力过大会损伤细胞。根据不同要求，有大容量、可调温度离心机、高速离心机和低温冷冻离心机等更多功能离心机可选择。

9. 天平

常用的有精密天平和分析天平。分析天平的精确度一般为0.1mg、0.01mg和0.001mg。一般根据取样量量和精度要求选择合适的天平：取样量大于100mg宜选用精确度0.1mg的天平；取样量100-10mg，选用精确度0.01mg的天平；取样量10mg宜选用精确度0.001mg的天平。天平需要定期校准，可选择有自动校准功能的天平，方便维护。天平使用需要注意清洁，避免腐蚀性粉末、液体直接接触称量台。答案来自

㈤ 什么时候用细胞培养瓶什么时候用细胞培养

原代细胞培养专家齐氏生物认为，细胞培养器材常用的有培养瓶（T12.5\25\35\75\150)、培养板（6、12、24、48、96孔板） 。
一般讲细胞的类型分为：贴壁型和悬浮型。这两种细胞均可用培养板，培养瓶来培养。

总结：一般常规原代细胞培养，传代培养可用培养瓶培养，目的为获得大量试验用细胞，而培养板则用于试验，如药敏试验、MTT（96孔培养板），免疫组化（6孔培养板）等等。
希望能帮到您！

㈥ 养细胞时,什么时候用培养瓶,什么时候用培养皿

一般组织块原代培养时用培养瓶，长出的细胞传代后就可以依个人喜好而定了，用培养瓶或培养皿都可以，只要注意无菌操作都是没问题的。不过个人更偏向于用培养皿，操作更方便些。

㈦ T25细胞培养瓶是什么瓶

T25细胞培养瓶指的是细胞生长面积为25cm²的培养瓶。

细胞培养瓶就是用来培养细胞的。根据材质可以分为玻璃的和塑料的，底部形状有正方形、长方形、三角形等，根据瓶子容积有5至500ml供选择。

另外，表面经过特殊改性处理后，可以让细胞更好的进行贴壁培养，这样根据细胞贴壁面积又可以分为25～175cm许多种。

用于提供细胞体外培养环境的培养瓶、培养板和培养皿除了具有良好的透明度和无毒、无菌外，还需经表面改性处理使之能够贴壁、分裂和生长。

(7)细胞培养瓶的使用方法扩展阅读:

按细胞对产品的贴壁要求分为三类：

1、普通型适合细胞和组织的悬浮培养；

2、标准型具有良好的细胞贴壁性能，适用于细胞的贴壁生长；

3、专用型表面含有含氮官能团，能促进某些特殊细胞(如肿瘤细胞)的贴壁、生长和分化。

细胞培养器材：

一、玻璃器材

培养皿、滴流瓶、刻度吸管、离心管、培养瓶、烧杯、量筒、三角烧瓶

二、塑料器材

多孔培养板、培养皿、培养瓶

三、橡皮器材

橡皮制品（最好是硅制品）做各种瓶或试管的塞子、盖子。

四、金属器材

剪刀、镊子、手术刀、解剖刀、血管钳、组织镊、眼科镊及各种型号针头

五、其他物品

纱布、注射器和针头

进入细胞间开始细胞培养时，必须严格按照下列步骤操作：

①确定所有的细胞操作用的溶液和耗材都已经消毒并检测没有问题，不确定的溶液和耗材请勿使用，除非特殊情况，不要借用别人的溶液。

②确定衣服的袖口已经卷起或者白大褂的袖口已经扎紧。

③确定酒精灯内的酒精量，需要的话及时进行补充。

④确定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置。为了方便单手开启瓶盖，实验开始前可以把所有瓶盖旋松。

⑤尽量不要直接倾倒溶液，除非瓶口没有被烧坏。如果倾倒失败，溶液粘在瓶口，请用喷过75%酒精的纸巾仔细清洁瓶口周围（不要接触到瓶口）后在火焰上简单烧灼。

⑥操作时如果不能肯定所用的耗材是洁净的，必须及时更换。

⑦实验完毕及时收拾，保持工作区域清洁整齐，最后用75%酒精清洁台面。

㈧ 细胞培养一般方法有哪些

细胞培养首先分为原代培养和传代培养.
一、原代培养需要从组织中消化、分离、纯化出单细胞,然后继续进行传代、冻存；
二、传代培养首先进行细胞复苏:
1.应遵守慢冻快融的原则.先将水温锅调至37-38度,取出冻存的细胞迅速放入后交细胞面浸至水面以下不断摇动至融化.
2.在无菌台内将完全培养基加入培养瓶内,然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞,置培养瓶内轻轻摇晃,使细胞均匀后置培养箱内培养,24h后换液；也可复苏当时离心（1000rpm 5min左右）后,完全培养基重悬培养,适时换液.
细胞传代:
1.贴壁细胞:
对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基,吸的越干净越好,以免中和后加入的消化液,使强度减弱.PBS清洗2-3次,去除血清和死细胞,50ml培养瓶加入消化液约0.6ml,按此比例进行消化,(根据配制强度经验),晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2分钟,镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后,轻轻振动瓶底使细胞全部脱落,加入2-3ml完全培养基后,轻轻吹打,使细胞基本成单个悬浮,然后收集离心（1000rpm 5min左右）,新鲜培养基重悬沉淀,加入完全培养基后继续培养或实验.
2.悬浮细胞:
一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内,加入完全培养基继续培养,如要高浓度或需更换新培养基,可先离心（1000rpm,5min左右）后加入完全培养基,轻轻吹匀后,分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养.

㈨ biofil 的培养瓶怎么用

贴壁细胞一般加12-15ml培养基(不能再少了)平放就行,悬浮细胞,根据细胞的多少加培养基,最少加5-8ml,最多可以加2/30ml立着放。

㈩ 细胞培养瓶和细胞培养转瓶的区别，各应用于什么情况

转瓶就是培养的时候要旋转的，比如悬浮细胞~
细胞培养瓶就是培养的时候不用旋转的，一般培养贴壁细胞