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猪圆环荧光pcr检测方法

发布时间:2025-05-21 13:32:21

❶ 猪圆环病毒疾病诊断

猪圆环病毒疾病的诊断需要综合临床表现、病理学分析和实验室检测。首要的诊断手段是病毒的分离与鉴定,这是最可靠的方法。


病理学检查在猪死后极具价值。当发现病猪全身淋巴结肿大,肺部存在退化不全或形成致密病灶时,需警惕圆环病毒感染。显微镜下可见淋巴组织内淋巴细胞减少,单核吞噬细胞和巨细胞浸润,如果发现这些细胞内有嗜碱性或两性染色的包涵体,基本可以确诊。


血清学检测是生前诊断的有效途径,包括间接免疫荧光法(ⅡF),免疫过氧化物单层培养法,ELISA,PCR以及核酸探针杂交和原位杂交试验。例如,ⅡF检测PCV在细胞培养物中的存在,而ELISA则通过竞争性检测血清中的抗体,其检出率高于其他方法。


PCR技术因其快速、简便和特异性,是诊断的重要工具。它能从猪组织、鼻腔分泌物和粪便中扩增PCV的基因序列,通过酶切图谱和碱基序列确认感染。复合PCR(multiplex PCR)进一步简化了检测过程。


ISH方法则用于检测组织中的PCV核酸,虽不能区分PCV1和PCV2,但具有群特异性,能精确定位病毒在器官中的位置,对临诊样本和病理分析有帮助。


临床诊断时需关注以下要点:PMWS主要影响5至16周龄的猪,尤其是断奶前生长良好的猪只。猪群中出现呼吸道症状、腹泻、发育缓慢和体重减轻,抗生素治疗无效,且常见淋巴结肿大、脾脏肿大和肺部变化。其他器官也可能受累。




(1)猪圆环荧光pcr检测方法扩展阅读

猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)在分类学上属圆环病毒科圆环病毒属,为已知的最小的动物病毒之一。病毒粒子直径14-17nm,呈20面体对称结构,无囊膜,含有共价闭合的单股环状负链DNA,基因组大小约为1.76kb。PCV对外界理化因子的抵抗力相当强,即便在PH3的酸性环境及72℃的高温环境中也能存活一段时间,氯仿作用不失活,无血凝活性。现已知PCV有两个血清型,即PCV1和PCV2。PCV1为非致病性的病毒。PCV2为致病性的病毒。猪对PCV2具有较强的易感性,感染猪可自鼻液、粪便等废物中排出病毒,经口腔、呼吸道途径感染不同年龄的猪。

❷ 猪圆环病毒病-猪圆环病毒病症状及其防治

病原
猪圆环病毒(pCV)属圆环病毒科圆环病毒属成员,本病毒是动物病毒中小的一种病毒,其粒子直径为14~25纳米,呈二十面体对称,无囊膜,基因组为单股环状DNA病毒。
猪圆环病毒(pCV)分为2个型,即pCV-1和pCV-2。pCV-1对猪无致病性,但能产生血清抗体,在猪群中较普遍存在,用其接种2日龄与9月龄的猪均不出现任何临床症状;pCV-2对猪有致病性,可引起猪只发
病,在临床上主要表现为断奶后仔猪多系统衰弱综合征(pMWS)和猪皮炎与肾炎综合征(pDNS)。
流行病学
猪圆环病毒pCV-2的天然宿主是猪。各种年龄、不同性别的猪都可感染,还可导致与pCV-2感染相关的几种类型的疾病。如pMWS主要是断奶猪易感。而哺乳猪很少发病。一般发病集中在断奶后2~3周和5~8周的仔猪。断奶应激可能是重要的诱导因素。而pDNS主要发生于生长猪和育肥猪,也可见于哺乳仔猪。pCV-2可经口腔、呼吸道等途径感染,未进行免疫接种猪只与病猪同居感染率可高达100%(Allan等,l999).感染母猪体内的病毒也可经胎盘垂直感染仔猪。感染猪可自鼻液、粪便等排泄物中排出病毒。引起病毒在不同猪个体间进行传播。
临床症状
猪圆环病毒pCV-2导致的疾病类型和临床症状
1断奶仔猪多系统衰竭综合征(pMWS)
主要发生在5~12周龄的仔猪,患猪呈渐进性消瘦或生长迟缓,厌食、精神沉郁、行动迟缓、皮肤苍白、被毛蓬乱、呼吸困难,咳嗽为特征的呼吸障碍。体表浅淋巴结肿大,肿胀的淋巴结有时可被触摸到
,特别是腹股沟浅淋巴结;贫血和可视黏膜黄疸。在同一头猪可能见不到上述所有临床症状,但在发病猪群可见到所有的症状。本病发病缓慢,猪群一次发病可持续12~l8个月.
2猪皮炎与肾病综合征(pDNS)
猪皮炎肾炎综合征(pDNS)是由圆环病毒(pCV2)引起的,主要危害生长猪和育肥猪,主要侵害皮肤和肾,终导致皮肤受损-苍白或有出血点。该病以皮肤损伤和纤维蛋白坏死性肾小球肾炎为主要特征。常
在12~14周龄猪群中零星出现或爆发,猪群发病可持续l2~24个月。常见的临床症状为皮肤发生圆形或不规则形的隆起。呈现周边为红色或紫色中央为黑色的病灶。病灶直径一般为2cm,个别病灶常融
合成条带和斑块。一般早常在后驱、后肢和腹部出现。然后慢慢可扩展到胸肋、耳等部位。发病温和的猪体温正常,行为无有异常,常自动康复。发病严重的猪体温升高。食欲下降。体重减轻。哺乳
仔猪发病时有的还伴有腹泻、贫血和黄疸症状。后可衰竭死亡。
该病死亡率虽低,但发病率高,病程长,尤其是在春夏季节。严重影响猪只的生长发育,易造成猪只生长速度缓慢、饲料报酬降低。而且猪群发病后由于免疫功能受抑制,机体对疫苗的免疫反应降低,
容易并(继)发各种感染,使养猪场损失进一步加大。本病的发生不仅与猪圆环病毒2型有关,还与饲养管理、卫生消毒、应激和继发感染有关。
3猪呼吸病综合征(pRDC)
本病在多数情况下,被视为pMWS的孪生病,系pRRSV或pRV和pCV-2混合感染,致使在免疫抑制状态下,发生多病原混合感染和后续感染出现的综合征。临床症状主要表现为咳嗽和呼吸困难,有时部分猪有
全身潮红的败血症状和因微循环障碍导致的耳尖、尾端及股、前肢液下皮肤瘀血、出血,出现瘀血斑点。
4pCV-2与母猪繁殖障碍
该病近年来在我国也时有发生。发病对象以初产母猪为多,主要表现为流产、死胎、弱仔、滞产、发情期延长、不育等。个别严重的初产母猪死产、流产发病率高达60%左右。
5初生仔猪先天性震颤
本病多发生于初产母猪所产的仔猪,发病率在1%~3%,也有高达l0%左右。一般在生后周发病,震颤为双侧,影响骨骼和肌肉发育,当卧下或睡觉时震颤消失。外界刺激(如声音、温度等)可引发或加
重震颤,有的在整个生长发育期间都不断发生震颤。影响仔猪的正常生长。严重的震颤可因不能吃奶而死亡。
病理变化
病理解剖变化因疾病类型不同而差异较大。
1患断奶仔猪多系统衰竭综合征
(pMWS)的猪死亡后。一般病尸消瘦,皮肤轻度到中度苍白,淋巴结肿大,切面发白,腹股沟、肠系膜、支气管等器官或组织的淋巴结病变尤为突出。肺质地坚实呈橡皮样,表面呈花斑状。灰棕色肺叶
与正常的粉红色肺叶相问。有的病例肝表现呈花斑状,并有不同程度的萎缩,切面肉状、无充血、胆汁浓缩。肾肿大、苍白,肾被膜下呈现可见的白色病灶。盲肠和结肠粘膜充血或淤血。脾脏肿大,质
地呈肉样变化。有报道发现有明显的脾萎缩现象(郎洪武等,2001).
2患猪皮炎与肾病综合征(pDNS)的猪。其特征性病理变化为全身性脉管炎和纤维蛋白坏死性肾小球肾炎。
3患猪呼吸病综合征(pRDC)的猪,剖检病理变化主要表现为大叶性肺炎、坏死性肺炎、胸膜肺炎、心包炎、浆膜炎、胸水和腹水增多等病理变化。
诊断方法
本病的诊断必须将临床症状、病理变化和实验室的病原或抗体检测相结合才能得到可靠的结论。可靠的方法为病毒分离与鉴定。
临床诊断要点
⑴pMWS主要发生在5~16周龄的猪,断奶前生长发育良好。
⑵同窝或不同窝仔猪有呼吸道症状,腹泻、发育迟缓、体重减轻。有时出现皮肤苍白或黄疸。抗生素治疗无效或疗效不佳。
病理学检查
此法在病猪死后极有诊断价值。当发现病死猪全身淋巴结肿大,肺退化不全或形成固化、致密病灶时,应怀疑本病。可见淋巴组织内淋巴细胞减少,单核吞噬细胞类细胞浸润及形成多核巨细胞,若在这
些细胞中发现嗜碱性或两性染色的细胞质内包涵体,则基本可以确诊。
血清学检查
是生前诊断的一种有效手段。诊断本病的方法有:间接免疫荧光法(ⅡF),免疫过氧化物单层培养法,ELISA方法,聚合酶链式反应(pCR)方法,核酸探针杂交及原位杂交试验(ISH)等方法。
ⅡF方法宜检测细胞培养物中的pCV。用组织病料以盖玻片在pK-15细胞培养,丙酮固定,用兔抗pCV高免血清与细胞培养物中的pCV反应,可对pCV进行检测和分型。
ELISA诊断方法可用于检测血清中的病毒抗体。用细胞培养的病毒(pCV2)作为抗原,用pCV2特异性单克隆抗体作为竞争试剂建立竞争ELISA方法,竞争ELISA方法的检出率为99.58%,而间接免疫荧光法的检出率仅为97.14%。该方法可用于pCV2抗体的大规模监测。
pCR方法是一种快速、简便、特异的诊断方法。采用pCV2特异的或群特异的引物从病猪的组织、鼻腔分泌物和粪便进行基因扩增,根据扩增产物的限制酶切图谱和碱基序列,确认pCV感染,还有一种简单的复合pCR(multiplexpCR)法。
ISH方法此法可以检查pCV核酸。但不能区分pCV1和pCV2,具有群特异性,可以定位pCV在组织器官中的部位,可用于检测临诊病料和病理分析。
防制措施
猪圆环病毒pCV-2导致的疾病。目前尚无有效的治疗方法,也缺乏有效的疫苗来预防。由于pCV-2病毒的广泛存在。人们对其传播方式、致病机理、免疫应答机制等方面了解并不详细,临床上很难采取有
效的措施控制和治疗。因此,要坚持预防为主的方针,重点加强饲养管理和卫生防疫措施。以杜绝疫病的发生。建议生产上应该采取综合的防制措施:
1引种监测,不能引进带毒种猪。自繁自养的种猪也要进行抗体监测,必须坚决淘汰带毒种母猪和种公猪。
2完善饲养方式,降低饲养密度、加强通风、实行全进全出的饲养制度,限制寄养和防止不同来源、年龄的猪混养。减少猪群问pCV-2及其他病原交叉传染机会,尽量减少应激因素。6.3做好相关疫病
免疫预防工作,严格实施生物安全措施、控制并发感染。
3提高猪群的营养水平,增强猪群自身的抗病能力。
4治疗时采用综合疗法。从三个原则出发:抗病毒和抗菌结合:治标治本结合:中药与西药结合。主要针对抗病毒、防继发、保健(提高抵抗力)三方面用药。如黄芪多糖,白细胞介素、免疫球蛋白等
再配合敏感的抗菌药物及中草药等其他药物进行综合治疗效果较好。

❸ 猪圆环病毒怎么治疗!

猪圆环病毒病是指由猪圆环病毒Ⅱ型所引起又一种新的猪的传染病,要感染8~13周龄的猪。临床表现症状多种多样,如断奶仔猪多系统衰弱综合征和皮炎肾病综合征、猪呼吸系统复合体病、肠炎、繁殖障碍、新生仔猪的先天性阵颤等,其中,断奶仔猪多系统衰弱综合征、皮炎肾病综合征和繁殖障碍在临床上常见,对养猪业危害较大。本病可经口腔、呼吸道途径感染不同日龄的猪,病猪所接触的物品或病猪的分泌物(血液、尿液、粪便或黏液)可能含有传染性病原体。妊娠母猪感染该病毒后,也可经胎盘垂直传播感染仔猪,并导致繁殖障碍。
发生断奶仔猪多系统衰弱综合征的仔猪,多表现生长发育不良,逐渐消瘦、体重减轻,皮肤与可视黏膜苍白或黄疸,贫血、衰竭无力,呼吸困难、咳嗽、气喘,有的腹泻,腹股沟淋巴结外露明显肿大。随着病情的发展,病猪眼圈发紫,耳朵发青,身体发绀,最后窒息死亡。
发生皮炎肾病综合征的患猪,表现为皮肤出现不规则的红紫斑及丘疹,最先出现在猪体后1/4、四肢和腹部,然后蔓延到胸部、腰背部和耳部。眼观可见圆形或不规则形状的红色到紫色深浅不一的斑点和丘疹,在会阴部和四肢末端结合形成不规则的斑块。随着病程延长,病变区破溃、结痂呈黑色。病情轻者体温不高,生长缓慢,较重者体温升高、厌食和出现瘸腿(仅一只后腿跗关节肿胀)。
【防治措施】
(1)接种猪圆环病毒病疫苗,建议使用基因工程疫苗灭活苗。
(2)完善猪场传统的饲养管理。条件许可的情况下,尽可能采用分段同步生产、两点式或三点式饲养方式。
(3)加强饲养管理,减少仔猪应激,禁止饲喂发霉变质的饲料,做好猪舍通风换气,降低氨气的浓度;保持猪舍干燥,降低猪群的饲养密度。
(4)改进或改善饲料品质。日常饲养中,可在猪只饮水中添加黄芪多糖和电解多维;饲料中添加含强力霉素、氟苯尼考、泰乐菌素和增效剂的预混料,增强猪体抵抗力,防止继发感染。
(5)有效的环境卫生和消毒措施,减少病毒感染机会。
(6)制定并严格执行合理的免疫程序,适时对猪群进行圆环病毒、猪瘟、蓝耳病等疫病的免疫接种,并定期监测猪群抗体水平,及时处理阳性猪。
(7)引种时检疫隔离,对于人工授精的猪场,选择无圆环病毒Ⅱ型污染的精液。
(8)病猪隔离,及时对症治疗或淘汰处理。

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