⑴ 病菌毒性测定方法有哪些
Wolfe等提出了田间直接测定法和室内测定法,后者又可分菌落计数法和孢子计数法
(1)田间直接测定:在田间暴露一组单基因鉴别品种幼苗,经一定时间后取回,保湿,使降落在叶片上的孢子萌发和侵入,在发病后测定每一个品种产生的病斑数,据此计算毒性频率以标准感病品种上的病斑数为计算的基数
(2)室内间接测定:有两种方法,第一种为病斑计数法,将所采集的混合病叶样本用沉降塔接种一套鉴别品种叶段,离体培养,发病后以各品种叶段上的病斑数与感病品种叶段的病斑数比较,计算毒性频率第二种方法为孢子计数法,用沉降塔接种盆栽幼苗或离体叶片,接种叶发病产孢后,洗脱孢子,配制孢子悬液,用血细胞计数板镜检计数孢子数目,换算单位叶面积产孢数,据以计算毒性频率
用上述方法,都可得到单个毒性因子单独出现的频率(实测值),根据这一频率,可计算2个或多个因子组合的频率(理论值)各个鉴别品种上所得孢子,可用来再接种整套鉴别品种,计算各毒性因子频率,用此第二次测得的基因频率,可计算具有2个毒性因子的表型频率(实测值),若再将每个品种产生的孢子,第三次接种整套鉴别品种,用所得结果,就可进一步估计具有3个毒性因子的频率(观测值)
⑵ 内毒素的检测方法和原理
本法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰氏阴性菌产生的细菌内毒素 以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法
细菌内毒素检查包括浊度法和显色基质法 供试品检测时 可使用其中任何一种方法进行试验 当测定结果有争议的时候 除另有规定外 以凝胶法结果为准
本实验操作过程硬防止微生物和内毒素的污染
凝胶法鲎试剂原理 鲎试剂为鲎科动物东方鲎变形细胞溶解物的冷冻干燥品 内含能被微量细菌内毒素激活的凝胶酶原和凝固蛋白源 在适宜的条件下(温度、pH值及无干扰物质)细菌内毒素能激活鲎试剂中的凝固酶原 使鲎试剂产生凝集反应形成凝胶 凝胶法鲎试剂是根据凝集反应所形成凝胶的坚实程度来限量检测细菌内毒素
⑶ 有什么比较便捷的方法可以检测血液细菌内毒素
楼主,目前检测细菌内毒素的方法就是动态浊度法。建议使用“血液细菌内毒素检测试剂盒”,操作简便、快速,仅1小时可出检测报告。
⑷ 细菌内毒素国家药典是怎么检测的
10版国家药典
检测内毒素可以用凝胶法
凝胶法是通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来检测或半定量内毒素的方法。
鲎试剂灵敏度复核试验
在本检查法规定的条件下,使鲎试剂产生凝集的内毒素的最低浓度即为鲎试剂的标示灵敏度,用EU/ml表示。当使用新批号的鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时,应进行鲎试剂灵敏度复核试验。
以上摘自2010版中国药典《细菌内毒素检查法》
⑸ 细菌内毒素检测鲎试剂实验方法有哪些
鲎试剂法就是细菌内毒素检测方法,它包括凝胶法和光度测定法。
凝胶法又分为限度实验和半定量实验。
光度测定法是定量实验,分为浊度法和显色法,其中浊度法又分为动态浊度法和终点浊度法,显色法又分为动态显色法和终点显色法还有重组鲎试剂法
⑹ 细菌内毒素的检测方法和原理是什么
我国药典收载的细菌内毒素检测方法为鲎试验法,包括2种方法,即凝胶法和光度测定法,后者又包括浊度法和显色基质法。当各种检测法得到的检测结果不一致时,以凝胶法的检测结果为准。
鲎试验法有定性和定量之分,其按试验方法还可进一步分为凝胶法、动态浊度法、终点浊度法、动态显色法和终点显色法。
原理:
凝胶法是应用鲎试剂可与内毒素发生凝集反应的原理来定性或半定量检测内毒素的一种鲎试验法,检测时鲎试剂需以除热原水(内毒素检查用水)复溶后使用,通过观察有无凝胶形成作为检测终点。
浊度法是通过检测鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化来检测内毒素含量的鲎试验法,其中动态浊度法检测反应混合物浊度升高至某一预先设定的吸光度时所需的时间或浊度升高的速率。
动态显色法和终点显色法都属显色基质法。显色基质法是通过检测鲎试剂与内毒素反应过程中产生的凝固酶使特定底物游离出生色团的多少来检测内毒素含量的鲎试验法,根据产物色度计算内毒素水平,又被称为比色法。
⑺ 如何检测细菌毒素
细菌毒素分内毒素和外毒素两种。
内毒素可用鲎试剂法灵敏检出。
外毒素可以与其相应的抗体进行特异性反应检出,常用的ELISA,补体试验等
⑻ 细菌内毒素检测步骤,详细的
检测方法: 1、每套器具中,注入80mL水,放置37度保温至少1小时. 这就是A溶液了。2、这种情况下,内毒素要求(限值)就是 0.25EU/mL. 3、买灵敏度是0.25EU/mL的鲎试剂。4、内毒素制备0.5EU/mL浓度,作为阳性对照,药典中的C溶液。5、制备B溶液,这个可能要用近似法来制备,取5EU/mL的内毒素溶液 0.2mL与1.8mL的A溶液混合,漩涡混合至少30秒,就成近似的B溶液了。6、加样反应,取 8 支鲎试剂,全部加0.1mL的细菌内毒素检查用水复溶。然后分别加A、B、C溶液,0.1mL, 还有加细菌内毒素检查用水,0.1mL, 每种溶液平行两管。7、放到37度水浴或干式的恒温仪中反应60分钟,就可以看结果了。8、B、C溶液的反应管必须要阳性,就是轻轻倒转180度过来,鲎试剂安瓿里的反应溶液形成了凝胶体,不滑落。 而D溶液,就是细菌内毒素检查用水那2管,必须要阴性,这样3个满足了,就说明你的试验成功了。最后看A溶液的反应情况,阳性就说明原套器具每套大于20EU。否则就合格,小于20EU了。 当然,1管阳性,1管阴性就要重新复查了,方法看药典。
⑼ 细菌内毒素的检验方式有什么
细菌内毒素检查法是判断供试品中细菌内毒素是否符合规定。 内毒素(Endotoxin)即革兰氏阴性菌细胞壁的脂多糖,其毒性成分为类脂A。菌体死亡崩解后释放出来。细菌内毒素检查包括两种方法,即凝胶法和光度测定法,后者包括浊度法和显色基质法。供试品检测时,可使用其中任何一种方法进行试验。当测定结果有争议时,除另有规定外,以凝胶法结果为准。