总糖检测方法

A. 3,5-二硝基水杨酸比色法是如何对总糖进行测定的

可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定。

还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计。

在540nm 波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。

(1)总糖检测方法扩展阅读：

注意事项：

比色仪器分光光度计应定期检定，应选择正确的波长，合适光程的比色皿。色皿应保持干净，受污染的比色皿可用稀硝酸浸洗，用镜头纸擦拭表面，比色皿内液体不能有气泡或悬浮物。通常情况下，比色测定在室温进行。

显色温度与时间。显色反应有一定的温度和时间要求，如高碘酸钾氧化比色法分析MnO，应微沸10～15min使显色完全，并冷却至室温下比色。二安替比林甲烷比色法分析TiO。，由于显色反应较慢，显色时间则需较长时间(40min以上)。

B. 如何分别测定样品中的乳糖，蔗糖和总糖

方法二 乳糖、蔗糖和总糖的测定（莱因-埃农氏法） 9 方法提要 乳糖：样品经除去蛋白质以后，在加热条件下，直接滴定已标定过的费林氏液，样液中的乳糖将费林氏液中的二价铜 还原为氧化亚铜。以次甲基蓝为指示剂，以终点稍过量时，乳糖将蓝色的氧化型次甲基蓝还原为无色的还原型次甲基 蓝。根据样液消耗的体积，计算乳糖含量。 蔗糖：样品除去蛋白质后，其中蔗糖经盐酸水解转化为具有还原能力的葡萄糖和果糖，再按还原糖测定。将水解前后 转化糖的差值乘以相应的系数即为蔗糖含量。 总糖：乳糖和蔗糖之和。 10 试剂 所有试剂，如未注明规格，均指分析纯；所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。 10．1 费林氏液（甲液和乙液） 10．1．1 甲液：取34.639g硫酸铜，溶于水中，加入0.5mL浓硫酸，加水至500mL。 10．1．2 乙液：取173g酒石酸钾钠及50g氢氧化钠溶解于水中，稀释至500mL，静置两天后过滤。 10．2 次甲基蓝溶液：10g/L。 10．3 盐酸溶液：体积比1：1。 10．4 酚酞溶液：0.5g酚酞溶液于75mL体积分数为95%的乙醇中，并加入20mL水，然后再加入约0.1mol/L的氢氧化钠 溶液，直到加入一滴立即变成粉红色，再加入水定容至100mL。 10．5 氢氧化钠溶液：c（NaOH）为300g/L。取300g氢氧化钠，溶于1000mL水中。 10．6 乙酸铅溶液：c（PbAc 2 ）为200g/L。取20g乙酸铅，溶解于100mL水中。 10．7 草酸钾-磷酸氢二钠溶液：取草酸钾3g，磷酸氢二钠7g，溶解于100mL水中。 11 仪器 ：常用理化实验室仪器。 12 操作步骤及结果计算 12．1 费林氏液的标定 12．1．1 用乳糖标定 12．1．1．1 称取预先在92～94℃烘箱中干燥2h，乳糖标样约0.75g（准确至0.2mg），用水溶解并稀释至250mL。将 此乳糖溶液注入一个50mL滴定管中，待滴定。 12．1．1．2 预滴定：取10mL费林氏液（甲、乙液各5mL）于250mL三角烧瓶中。再加入20mL蒸馏水，从滴定管中放出 15mL乳糖溶液于三角瓶中，置于电炉上加热，使其在2min内沸腾，沸腾后关小火焰，保持沸腾状态15s，加入3滴次甲 基蓝溶液（10.2），继续滴入乳糖溶液至蓝色完全褪尽为止，读取所用乳糖 的毫升数。 12．1．1．3 精确滴定：另取10mL费林氏液（甲、乙液各5mL）于250mL三角烧瓶中，再加入20mL蒸馏水，一次加入比 预备滴定量少0.5～1.0mL的乳糖溶液，置于电炉上，使其在2min内沸腾，沸腾后关小火焰，维持沸腾状态2min，加入 3滴次甲基蓝溶液，然后继续滴入乳糖溶液（一滴一滴徐徐滴入），待蓝色完全褪尽即为终点。以此滴定量作为计算 的依据（在同时测定蔗糖时，此即为转化前滴定量）。 12．1．1．4 按式（2）、（3）计算乳糖测定时，费林氏液的乳糖校正值（f 1 ）: V 1 ——滴定时消耗乳糖液量，mL； m 1 ——称取乳糖的质量，g； AL 1 ——由乳糖液滴定毫升数查表1所得的乳糖数，mg。 表1 乳糖及转化糖因数表（10mL费林氏液） 12．1．2 用蔗糖标定 12．1．2．1 称取在105℃烘箱中干燥2h的蔗糖约0.2g（准确到0.2mg），用50mL水溶解并洗入100mL容量瓶中，加水 10mL，再加入10mL盐酸（10.3），置75℃水浴锅中，时时摇动，在2min30s至2min45s之间，使瓶内温度升至67℃。 自达到67℃后继续在水浴中保持5min，于此时间内使其温度升至69.5℃，取出，用冷水冷却，当瓶内温度冷却至35℃ 时，加2滴甲基红指示剂（10.4），用300g/L的氢氧化钠（10.5）中和至呈中性。冷却至20℃，用水稀释至刻度，摇 匀。并在此温度下保温30min后再按12.1.1.2和12.1.1.3操作。得出滴定10mL费林氏液所消耗的转化糖量。 12．1．2．2 按式（4）、（5）计算蔗糖测定时，费林氏液的蔗糖校正值（f 2 ）： V 2 ——滴定时消耗蔗糖液量，mL； m 2 ——称取蔗糖的质量，g； AL 2 ——由蔗糖液滴定毫升数查表1所得的转化糖数，mg。 12．2 乳糖的测定 12．2．1 样品处理 12．2．1．1 称取2.5～3g样品（准确至0.01g），用100mL水分数次溶解并洗入250mL容量瓶中。 12．2．1．2 加4mL乙酸铅（10.6）、4mL草酸钾-磷酸氢二钠溶液，每次加入试剂时都要徐徐加入，并摇动容量瓶， 用水稀释至刻度。静止数分钟，用干燥滤过滤，弃去最初25mL滤液后，所得滤液作滴定用。 12．2．2 滴定 12．2．2．1 预滴定：将此滤液注入一个50mL滴定管中，待测定。取10mL费林氏液（甲、乙液各5mL）于250mL三角烧 瓶中，再加入20mL蒸馏水，置于电炉上加热，使其在2min内沸腾，沸腾后关小火焰，保持沸腾状态15s，加入3滴次甲 基蓝（10.2），然后徐徐滴入乳糖溶液至蓝色完全褪尽为止，读取所用乳糖的毫升数。 12．2．2．2 精确滴定：另取10mL费林氏液（甲、乙各5mL）于250mL三角烧瓶中，再加入20mL蒸馏水，一次加入比预 备0.5～1.0mL的乳糖溶液，置于电炉上，使其在2min内沸腾，沸腾后关小火焰，维持沸腾状态2min，加入3滴次甲基 蓝溶液，然后一滴一滴徐徐滴入乳糖溶液，待蓝色完全褪尽即为终点。以此滴定量作为计算的依据（在同时测定蔗糖 时，此即为转化后滴定量）。 12．2．3 乳糖含量的计算 式中：L——样品中乳糖的质量分数，g/100g； F 1 ——由消耗样液的毫升数查表1所得乳糖数，mg； f 1 ——费林氏液乳糖校正值； V 1 ——滴定消耗滤液量，mL； m——样品的质量，g。 12．3 蔗糖的测定 12．3．1 转化前转化糖量的计算 利用测定乳糖时的滴定时，自表1中查出相对应的转化糖量，按式（7）计算： 式中：F 2 ——由测定乳糖时消耗样液的毫升数查表1所得乳糖数，mg； f 2 ——费林氏液蔗糖校正值； V 1 ——滴定消耗滤液量，mL； m——样品的质量，g。 12．3．2 样液的转化及滴定 取50mL样液于100mL容量瓶中，加水10mL，再加入10mL的盐酸（10.3），置75℃水浴锅中，时时摇动，在2min30s至2min45s 之间，使瓶内温度升至67℃。自达至67℃后继续在水浴中保持5min，于此时间内使其温度升至69.5℃，取出，用冷水 冷却，当瓶内温度冷却至35℃时，加2滴酚酞溶液剂（10.4），用氢氧化钠（10.5）中和至呈中性，冷却至20℃，用 水稀释至刻度，摇匀。并在此温度下保温30min后再按12.2.2滴定，得出滴定10mL费林氏液所消耗的转化液量。 式中：F 3 ——由V2 2 1查得转化糖数，mg； f 2 ——费林氏液蔗糖校正值； m——样品的质量，g； V 1 ——滴定消耗转化液量，mL。 12．3．3 蔗糖含量的计算 式中：L 1 ——转化后转化糖的质量分数，%； L 2 ——转化前转化糖的质量分数，%。 12．3．4 若样品中乳糖与蔗糖之比超过3：1时，则计算乳糖时应在滴定量中加上表2中的校正值数后再查表1和计算。 12．3．5 总糖=蔗糖+乳糖 13 允许差 13．1 重复性 ：由同一分析人员在短时间间隔内测定的两个结果之间的差值，不应超过结果平均值的1.5%。 13．2 重现性 ：由不同实验室的两个分析人员对同一样品测得的两个结果之差，不应超过结果平均值的2.5%。 表2 乳糖滴定量校正值数 方法三 蔗糖的测定——（酶比色法） 同GB/T 16286。

C. 苯酚硫酸法测定总糖和dns法测定还原糖的区别

用苯酚-硫酸法测定糖的原理是使多糖在浓硫酸条件下先水解成单糖并脱水，然后再加入苯酚，苯酚与脱水后的单糖缩合形成有色化合物，在490nm处有最大吸收，在一定范围内其吸光度值和糖的浓度成正比，即可用吸光光度法分析出处理后的溶液中单糖的含量。根据以上原理可知苯酚-硫酸法测定的实际上是总糖。
DNS 法为在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。

D. 总糖含量的测定

根据费林试剂的过程中总糖测定的方法反应溶液碱度、煮沸时间、滴定

速度等对测定结果的影响，根据初步样品溶液滴定消耗体积，调整数量的酸水解样品溶液在分裂之前，有效保证滴定时样品溶液消耗量和校准标准葡萄糖消费基本上是相同的。同时，考虑到破碎后的蛋糕样品均匀性差的问题，增加了样本量，大大提高了测试的准确性和可操作性。

中国实验室国家认可委员会（CNAL）实验室要求的认可标准。

E. 怎样检测果酒的总糖

1．原理

利用费林溶液与还原糖煮沸，生成氧化亚铜沉淀的反应，以次甲基蓝为指示液，以样品或经水解后的样品滴定煮沸的费林溶液，达到终点时，稍微过量的还原糖将蓝色的次甲基蓝还原为无色，以示终点。根据样品消耗量求的总糖或还原糖。改进后在碱性酒石酸铜乙液中加入少量亚铁氰化钾，可反应生成氧化亚铜沉淀与亚铁氰化钾发生络合反应，形成可溶性络合物，消除红色沉淀对滴定终点观察的干扰，使终点变色明显。

2．试样和材料

2.1盐酸溶液(1+1)。

2.2氢氧化钠溶液：200g。

2.3标准葡萄糖溶2.5g/L：精确称取2.5g（称准至0.0001g）在105℃～110℃烘箱内烘干3h，并在干燥箱中冷却的葡萄糖用水溶解并定容至1000ml。

2.4 次甲基蓝指示液10g/L：称取1.0g次甲基蓝溶解于水中，稀释至100ml。

2.5 费林氏溶液

a)配制：按GB/T603-2002配制。同改进后在费林氏碱性酒石酸铜乙液时，每升加入铁氰化钾4g。

b)标定预备试验：吸取费林溶液甲乙液各5.00mL于250mL瓶中，加50mL，摇匀，在电炉上加热至沸腾，在沸腾状态下用制备好葡萄糖标准溶液滴定，当溶液蓝色将消失呈红色时，加2滴次甲基蓝指示液，继续滴定至蓝色消失，呈无色或淡黄色。记录消耗葡萄糖标准溶液体积。

c) 正式试验：吸取费林溶液甲乙液5.00mL于250瓶中，加50mL和比预备试验少1mL葡萄糖标准溶液，加热至沸腾，并保持2min，加2滴次甲基蓝指示液，一定在沸腾状态中1min内用葡萄糖标准溶液滴至终点，记录消耗葡萄糖标准溶液总体积（V）。

d)计算

式中：F—相当于萄萄糖的克数g；m—称取无水葡萄糖质量g；V—消耗萄萄糖标准溶液的总体积ml。

3．样品的制备

3.1 测定总糖用试样：准确吸取一定量的样品（V1）于100ml容量瓶中，含总糖量为0.2 g～0.4g，加5mL酸溶液(1+1),加水至20mL摇匀。于68+1℃水浴锅上水解15min，取出冷却。在酸度计上用200g/L氢氧化钠溶液中和至中性，调温至20℃，加水定容至刻度（V2）。

3.2 测还原糖用试样：准确吸取一定量的样品（V1）于100ml容量瓶中，含还原糖量为0.2 g～0.4g，加水定容刻度。

4．分析步骤

试样代替葡萄糖标准溶液，按2.5b同样操作，记录消耗试样的体积（V3），结果按照公式（4）计算。

测定干葡萄酒样品2.5b操作时，正式滴定需要用葡萄糖标准溶液滴定至终点。结果按照公式(5)计算。

式中X—还原糖的含量g/L；

F—费林氏液甲乙各5mL相当于葡萄糖克数g；

V1—样品的体积mL；

V2—释后或水解定容样品的体积mL；

V3—样品的体积 mL；

G—葡萄糖标准溶液的准确浓度g/ mL；

V—葡萄糖标准溶液的体积mL；

所得结果应表示至一位小数。

5．精密度

在重复性条件下获得的两次测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的2%。

结论讨论：加入亚铁氰化钾目的是使费林溶液与试样中还原糖生成氧化亚铜沉淀与亚铁氰化钾发生络合反应，形成可溶性络合物，消除红色沉淀，使终点变色明显。试验原理未变，终点判定未改变，不影响检测结果。改进后终点易于观察，结果准确可靠。

F. 直接滴定法测总糖的方法和计算公式是怎样的

总糖的测定（直接滴定法）
滴定, 蒸馏水, 葡萄糖, 酒石酸, 试剂
斐林氏试剂

甲液：称取15g硫酸铜（CuSO4·5H2O）及0.05g次甲基兰，用蒸馏水溶解。移入1000mL棕色容量瓶中，用蒸馏水定容。
乙液：称取50g酒石酸钾钠，75g氢氧化钠及4g亚铁氰化钾，用蒸馏水溶解，移入1000mL容量瓶中，用蒸馏水定容。
斐林氏溶液的标定：吸取斐林氏甲液和乙液各5mL于150mL三角瓶中加水10ml，从滴定管中滴加约9.5mL葡萄糖标准溶液控制在2min内加热至沸，趁沸以1滴/2s的速度滴加葡萄糖标准溶液。滴定至蓝色退尽为终点。记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积。同时平行操作三份，取其平均值计算第10mL（甲乙液各5mL）碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量（mg）。
A=W*V/1000
式中：
A——10ml斐林氏甲乙液，相当于葡萄糖克数，g；
W——称取葡萄糖克数，g；
V——滴定时所消耗葡萄糖的毫升数，mL；
1000——葡萄糖的稀释倍数。