1. 乳酸杆菌的测定方法
乳酸菌是乳酸杆菌的简称.
2. 如何检验酸奶中的乳酸菌要具体的实验步骤和方法及原理
太麻烦的，要有条件，把样品稀释后，例如估计含乳酸菌的量，稀释到每毫升大约30-300个左右，再用特殊的平板培养基，添加了1%碳酸钙的平板培养基，采用倾注法与呈液体状态的40度含碳酸钙的琼脂营养培养基混合，倒制于90毫米在小平皿中，培养后，长出菌落，同时，菌落周围有透明圈的，就是乳酸菌，还可以计数，再剩稀释倍数，还可得含量。
3. 乳饮料中乳酸菌的检验步骤,用的是稀释混合倒平板法, 用梯度法
1、准备无菌水、无菌空白平板、无菌移液管
2、培养乳酸菌培养,灭菌,冷却至50度左右
3、无菌室灭菌30分钟后,在无菌室内,把饮料用无菌水稀释成适当的倍数（如10的负5、6、7次方）
4、分别吸取0.1ml或1ml三个不同稀释度的菌悬液,放于空白平板中,平板中倒入50度左右的培养基15-20ml,平板平放于实验桌上,轻轻摇动,使菌悬液与培养基充分混合
5、平板中培养基凝固后,做好标记
6、倒置于培养箱中,30度培养24-72小时左右
7、观察菌落生长状态,并进行计算
4. 乳酸菌的鉴定方法
1.形态和培养特征观察
采用牛肉膏蛋白胨培养基,将已纯化后的甘油菌种活化后于37℃下培养20～24h ,并进行革兰氏染色及菌体形态和菌落特征的观察。染色方法参照微生物鉴定实验指导
2.生长条件试验
(1)耐盐性试验(NaCl 浓度:0. 85 、1. 20 和1. 71) (mol/ L) ;
(2)耐酸碱试验(p H :4. 3 、5. 7 、6. 8 、8. 4 、8. 6 和8. 7) ;
(3)温度梯度试验(温度: 10℃、30℃、40℃、50℃、55℃、60℃和65℃) 。
分别将参试菌接种于以上处理的液体培养基中培养48 h ,记录生长状况。
3.生理生化试验
⑴过氧化氢酶测定
将实验菌接种于PGY培养基斜面上,37℃培养20h—24h,取一环接种的培养物,涂于干净的载玻片上,然后在其上滴加3%－—15%的过氧化氢,有气泡则为阳性反应,无气泡为阴性反应。
⑵葡萄糖产酸产气实验
在PY基础培养基内加入30g葡萄糖和5%吐温-80,1.6g/100mL的溴甲酚紫1.4mL作指示剂, 在培养基内放置一小倒管,分装试管置37℃培养24h, 经培养后,指示剂变黄表示产酸,倒管内出现气泡,表示产气。
⑶淀粉水解实验
接种新鲜的菌种于含有0.5g可溶性淀粉的PY基础培养基中,取少许培养液于比色盘内,同时取未接种的培养液作对照,分别在其中加入卢哥氏碘液.不显色表示淀粉水解,显蓝黑色或蓝紫色时,表示淀粉未水解或水解不完全。
⑷明胶液化实验
将实验菌接种于明胶基础培养基中,置37℃培养,以一支未接种的试管作为对照。将接种的和未接种的对照管置于冰箱或冷水中,等待对照管凝固后记录实验结果,反复观察对比多次。如对照管凝固时,接种管液化为阳性反应,凝固为阴性反应
⑸甲基红（M.R）试验
接种实验细菌于PYG培养基，于37℃培养2天后，于培养物中加入几滴甲基红酒精溶液，如呈红色，表示阳性。
⑹乙酰甲基甲醇V-P实验
接种新鲜的实验菌种于培养基中, 37℃培养2天后,取培养液1mL在其中
加入1ml 10％的NaOH，混匀，再加入3－4滴2%氯化铁溶液。数小时后，培养基表面的下层出现红色者，为阳性
⑺柠檬酸盐
取幼龄菌种接种于柠檬酸盐斜面培养基上，适温培养3－7天，培养基呈碱性（蓝色）者为阳性反应，不变者则为阴性
⑻酪素水解试验
牛奶平板的制备：取5g脱脂奶粉加入50mL蒸馏水中（或用50mL脱脂牛奶），另称1.5g琼脂溶于50mL蒸馏水中，将两液分开灭菌。待冷至45－50℃时，将两液混匀倒平板，即成牛奶平板。将平板倒置过夜，使表面水分干燥，然后将菌种点接在平板上，每皿可点接3－5株菌。适温培养1、3、5天，记录菌落周围和下面酪素是否已被分解而呈透明。配制该培养基时，切勿将牛奶和琼脂混合灭菌，以防牛奶凝固
⑼厌氧生长测定
将菌种接入营养肉汤平板后,用密封带包好放入CO2培养箱37℃培养2天后,观察生长情况,生长则为阳性
(10)厌氧硝酸盐产气
接种封油：以斜面菌种用接种环接种后，用凡士林油（凡士林和液体石蜡为1:1）封管，封油的高度约1厘米。必须同时接种不含有硝酸钾的肉汁胨培养液作对照。
观察结果：培养2－7d，观察在含有硝酸钾的培养基中有否生长和产生气泡。如有气泡产生，表示反硝化作用产生氮气，为阳性反应。但如不含硝酸钾的对照培养基也可产生气泡，则只能按可疑或阴性处理。
(11)石蕊牛奶的反应
牛奶中主要含有乳糖和酪蛋白，在牛奶中加入石蕊是作为酸碱指示剂和氧化还原指示剂。石蕊在中性时呈淡紫色，酸性时呈粉红色，碱性呈蓝色，还原时则自上而下地褪色变白。观察其产酸、产碱、胨化、酸凝固、凝乳酶凝固、还原情况
(12)糖发酵实验
将需要测定的糖或醇类等碳水化合物加入PY基础培养基中,按表分装含5mL培养基的试管.分别取0.2mL,被鉴定菌株接到灭菌后的碳水化合物培养基中37℃培养24h,振荡培养。检测时取培养液少许置于比色盘内,同时取未加碳水化合物的PY培养液作为对照,滴加试剂比较颜色的变化,记录产酸的强弱.
附一些培养基：
①PY培养基（100mL）：蛋白胨1.0g,酵母提取物1.0g,无机盐溶液4.0mL[盐溶液成分:无水CaCl2 0.2g,MgSO4 20.0g ,K2HPO4 1.0g, ,KH2PO4 1.0g,NaHCO3 10.0g,NaCl 2.0g](将CaCl2和MgSO4一起溶解于300mL蒸馏水中,再加500mL蒸馏水,一边搅拌一边缓慢加入其他盐类.继续搅拌直到全部溶解,加蒸馏水定容至1000mL,混合后贮备于4℃)
②PYG培养基:PY在基础培养液内加入1.0g葡萄糖
③营养明胶 蛋白胨5g、牛肉膏3g、明胶120g、蒸馏水1000mL、pH6.8～7.0；加热溶解、校正至pH7.4～7.6，分装小管，121℃高压灭菌10min，取出后迅速冷却，使其凝固。复查最终pH应为6.8～7.0
④柠檬酸盐斜面培养基：柠檬酸钠 3g NH4H2PO4 1g MgSO4 0.2g
K2HPO4 1g NaCl 5g 琼脂15—20g 水1000mL 加热溶解后，调pH至7，再加入1.6%溴麝香草酚蓝指示剂10mL,培养基呈绿色，分装试管，每管5mL，121灭菌30min
⑤含硝酸钾的营养肉汤 加入2g硝酸钾入营养肉汤
4.16S rDNA 序列分析
这个LZ另外查好了，很多学问。
5.生长曲线
活菌计数方法：采用涂布法,进行菌落计数，每隔一段时间（2-4小时）测
5. 乳酸菌活菌数的测定中需要用到几个培养基和试管
最简单的用MRS培养基培养，要用到90mm的培养皿10多个，试管则要看你的稀释倍数而定，稀释1亿倍的话，要10倍地稀释一次的话，需要用到至少8个试管，也可以用250毫升的三角瓶来稀释，一次稀释100倍，只需要稀释4下就可以，个人认为稀释次数少一些，误差小一些。
可以用培养皿涂布法来培养乳酸菌和计数，也可以用添加碳酸钙的倾注法，培养后菌落周围出现透明圈的方法来检测乳酸菌，后者更为准确，因为只有乳酸菌才可能长透明圈，至少排除了杂菌被计数进去的可能。
6. 如何测定食品中的乳酸菌
菌种的分离 取lmL卤汁以10倍递增稀释方法（一份酸奶，九份无菌水，再取一份第一只管中溶液，加九份无菌水，依次类推），将其稀释至1/10～10的-10次幂（我打不上去），然后从不同浓度稀 释液中分别取lmL倾注在平皿中，再倒入培养基相混合，待培养基凝固后倒置于30~C恒温下 培养48h。挑取长势良好的单个茵落划线分纯，直至纯化(茵落单个大小一致，革兰氏染色镜 检，茵体一致)。结果分离得到3株不同菌株，分别编号为菌株1、菌株2、菌株3。再分别转移 到试管斜面上进行保存。 分离用培养基：牛肉膏5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，蒸馏水1 000 mL，琼脂20g，pH7．0—7．2 ；保存用斜面培养基：酵母膏1％ ，碳酸钙2％ ，葡萄糖1％ ，琼脂2％ ，pH 7．0。 培养条件 将分离出的菌株1、菌株2、菌株3分别接种在上述4种不同的培养基上， 在30。【=恒温条件下培养48h后观察并测定其培养结果。 测定方法 菌落总数采用逐级稀释法来计数；pH值用pHS一2C酸度计测定；乳酸定性 及含量测定依据食品检验技术 1I．2．1乳酸菌的分离与筛选的试验程序 自然发酵酸奶---稀释---培养---挑起单菌落染色、镜检一挑 选革兰氏阳性球菌单菌落一Ⅲ号培养基一挑选溶钙圈大的球菌反复在Ⅲ号培养基上几次纯化筛选一单菌落优 良菌株一试管穿刺低温保存。 1．2 1．2 乳酸菌的鉴定 用光学显微镜、放大镜进行乳酸菌的形态特征鉴定。生理生化特征鉴定：产乳 酸定性试验——乳酸纸层析法0- 、过氧化氢酶(接触酶)反应�6�8、明胶水解反应 、硫化氢反应 、乳酸菌 发酵营养型试验0 、耐盐、酸、温度试验。 1．2．I．3 乳酸菌的保存�6�8 采用定期移植低温保藏法。培养基配方：葡萄糖1％ 、蛋白胨0 2％ 、 l(}l2PQ|0．2％、琼脂20％、pH值7 0，分装试管，121。c灭菌30min。将使用对数生长期后期的细胞进行穿刺 培养，然后密封存于冰箱玲藏室内(5qc左右)，2个月移植1次。 1．2．2 分离乳酸菌的生理特点试验 1 2 2．1 最适生长温度的测定OD值以同温下不接种培养基作对照，定期取出接种培养基在721分光光度 计上，用最大吸收光波长 =6001RIifl测定。 1．2．2．2 生长周期的测定oD值(方法同上)；pH值：PHB一4pH计；可滴定酸(以乳酸计)：吸取ImL菌液 加入9Ⅱ1L蒸馏水，加入1～2滴酚酞，用0．1NNaOH滴定。 1．2 2．3 最适pH值的测试、最适盐浓度的测试。 供试样品及培养基 分离用样品：酸奶、酸奶及西红柿均为市售 分离用培养基：①BCP培养基：酵母膏2 5g，蛋白胨5g，葡萄糖5g，溴甲酚紫0 04g，琼脂15g， 蒸槽水lO00ml，pH7 0；②MRS培养基见文献 。 菌种保藏用培养基：脱脂乳培养基：新鲜牛乳离心去掉上层乳脂，下层奶液分装试管，105℃ 灭菌20mln。 菌利 鉴定用培养基见文献 6。 1 2 方法 1 2 1 乳酸菌的分离纯化 取泡菜汁、酸奶、西红柿表面洗液进行梯度稀释，分别用倾注法、涂布 法和划线法在BCP和MRS培养基平板上进行菌种分离。挑取在BCP平板上有透明目的菌落，在 MRS平扳上有溶钙圈的菌落，反复纯化至纯种，挑菌至脱脂牛奶试管中保存 1．2 2 乳酸菌复筛对初筛菌株进行革兰氏染色，保留革兰氏阳性菌株．并对其所产乳酸能力进 行定性、定量分析，筛选出产酸高的菌株保存，再把产酸高的菌株经萝l、汁发酵 】，进一步选择产 酸高、_l】味纯正的菌株保存鉴定 1 2 3 乳酸定性测定果用纸层析法。溶剂系统为乙醇：浓氨水：水=80：5：15，显色剂为0 04％ 的溴甲酚紫酒精溶液。层析时将乳酸、柠檬酸配成1％ 的标准溶液，两种标准溶液 及乳酸发酵液 均点样3 ．上行层析，显色与标准样比较 1．2 4 乳酸的定量测定采用气相色谱法，利用苄酯化法制备乳酸衍生物，将待测乳酸菌株在产 酸培养基内37"C培养3d，离心。取上清液剃备衍生物，气相色谱分析含量。气相色谱工作条件为： EGS色谱柱，柱温160'C，气化温度180'17．，检测器温度l70"C，载气为N，。 1．2 5 菌种鉴定根据《简明第八版伯杰细菌鉴定手册》 和《一般细菌常用鉴定手册》[6 对复筛 出的菌株的形态、生理生化、碳源利用等方面进行系统鉴定，并提取乳酸菌株DNA，采用熔链温度 .
7. 如何测定乳酸菌的含量
菌种的分离 取lmL卤汁以10倍递增稀释方法（一份酸奶，九份无菌水，再取一份第一只管中溶液，加九份无菌水，依次类推），将其稀释至1/10～10的-10次幂（我打不上去），然后从不同浓度稀
释液中分别取lmL倾注在平皿中，再倒入培养基相混合，待培养基凝固后倒置于30~C恒温下
培养48h。挑取长势良好的单个茵落划线分纯，直至纯化(茵落单个大小一致，革兰氏染色镜
检，茵体一致)。结果分离得到3株不同菌株，分别编号为菌株1、菌株2、菌株3。再分别转移
到试管斜面上进行保存。
分离用培养基：牛肉膏5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，蒸馏水1 000 mL，琼脂20g，pH7．0—7．2
；保存用斜面培养基：酵母膏1％ ，碳酸钙2％ ，葡萄糖1％ ，琼脂2％ ，pH 7．0。
培养条件
将分离出的菌株1、菌株2、菌株3分别接种在上述4种不同的培养基上，
在30。【=恒温条件下培养48h后观察并测定其培养结果。
测定方法 菌落总数采用逐级稀释法来计数；pH值用pHS一2C酸度计测定；乳酸定性
及含量测定依据食品检验技术
1I．2．1乳酸菌的分离与筛选的试验程序 自然发酵酸奶---稀释---培养---挑起单菌落染色、镜检一挑
选革兰氏阳性球菌单菌落一Ⅲ号培养基一挑选溶钙圈大的球菌反复在Ⅲ号培养基上几次纯化筛选一单菌落优
良菌株一试管穿刺低温保存。
1．2 1．2 乳酸菌的鉴定 用光学显微镜、放大镜进行乳酸菌的形态特征鉴定。生理生化特征鉴定：产乳
酸定性试验——乳酸纸层析法0- 、过氧化氢酶(接触酶)反应�6�8、明胶水解反应 、硫化氢反应 、乳酸菌
发酵营养型试验0 、耐盐、酸、温度试验。
1．2．I．3 乳酸菌的保存�6�8 采用定期移植低温保藏法。培养基配方：葡萄糖1％ 、蛋白胨0 2％ 、
l(}l2PQ|0．2％、琼脂20％、pH值7 0，分装试管，121。c灭菌30min。将使用对数生长期后期的细胞进行穿刺
培养，然后密封存于冰箱玲藏室内(5qc左右)，2个月移植1次。
1．2．2 分离乳酸菌的生理特点试验
1 2 2．1 最适生长温度的测定OD值以同温下不接种培养基作对照，定期取出接种培养基在721分光光度
计上，用最大吸收光波长 =6001RIifl测定。
1．2．2．2 生长周期的测定oD值(方法同上)；pH值：PHB一4pH计；可滴定酸(以乳酸计)：吸取ImL菌液
加入9Ⅱ1L蒸馏水，加入1～2滴酚酞，用0．1NNaOH滴定。
1．2 2．3 最适pH值的测试、最适盐浓度的测试。
供试样品及培养基
分离用样品：酸奶、酸奶及西红柿均为市售
分离用培养基：①BCP培养基：酵母膏2 5g，蛋白胨5g，葡萄糖5g，溴甲酚紫0 04g，琼脂15g，
蒸槽水lO00ml，pH7 0；②MRS培养基见文献 。
菌种保藏用培养基：脱脂乳培养基：新鲜牛乳离心去掉上层乳脂，下层奶液分装试管，105℃
灭菌20mln。
菌利 鉴定用培养基见文献 6。
1 2 方法
1 2 1 乳酸菌的分离纯化 取泡菜汁、酸奶、西红柿表面洗液进行梯度稀释，分别用倾注法、涂布
法和划线法在BCP和MRS培养基平板上进行菌种分离。挑取在BCP平板上有透明目的菌落，在
MRS平扳上有溶钙圈的菌落，反复纯化至纯种，挑菌至脱脂牛奶试管中保存
1．2 2 乳酸菌复筛对初筛菌株进行革兰氏染色，保留革兰氏阳性菌株．并对其所产乳酸能力进
行定性、定量分析，筛选出产酸高的菌株保存，再把产酸高的菌株经萝l、汁发酵 】，进一步选择产
酸高、_l】味纯正的菌株保存鉴定
1 2 3 乳酸定性测定果用纸层析法。溶剂系统为乙醇：浓氨水：水=80：5：15，显色剂为0 04％
的溴甲酚紫酒精溶液。层析时将乳酸、柠檬酸配成1％ 的标准溶液，两种标准溶液 及乳酸发酵液
均点样3 ．上行层析，显色与标准样比较
1．2 4 乳酸的定量测定采用气相色谱法，利用苄酯化法制备乳酸衍生物，将待测乳酸菌株在产
酸培养基内37"C培养3d，离心。取上清液剃备衍生物，气相色谱分析含量。气相色谱工作条件为：
EGS色谱柱，柱温160'C，气化温度180'17．，检测器温度l70"C，载气为N，。
1．2 5 菌种鉴定根据《简明第八版伯杰细菌鉴定手册》 和《一般细菌常用鉴定手册》[6 对复筛
出的菌株的形态、生理生化、碳源利用等方面进行系统鉴定，并提取乳酸菌株DNA，采用熔链温度 .
8. 大肠杆菌 乳酸菌如何做实验检测
大肠杆菌的检测：大肠菌群测定的操作细则
大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。
食品中大肠菌群数系以100mL(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。
1 设备和材料
1.1 温箱：36±1℃。 1.2 冰箱:0～4℃。 1.3 恒温水浴 :44.5±0.5℃。 1.4 天平。 1.5 显微镜。1.6 均质器或乳钵。 1.7 平皿:直径为90mm。 1.8 试管。 1.9 吸管。 1.10 广口瓶或三角烧瓶:容量为500mL。 1.11 玻璃珠:直径约5mm。 1.12 载玻片。 1.13 酒精灯。 1.14 试管架。
2 培养基和试剂
2.1 乳糖胆盐发酵管:按GB 4789.28中4.9规定。
2.2 伊红美蓝琼脂平板:按GB 4789.28中4.25规定。
2.3 乳糖发酵管:按GB 4789.28中4.10规定。
2.4 EC 肉汤:按GB 4789.28中4.11规定。
2.5 磷酸盐缓冲稀释液:按GB 4789.28中3.22规定。
2.6 生理盐水。
2.7 革兰氏染色液:按GB 4789.28中2.2规定。
3.1 检样稀释
3.1.1 以无菌操作将检样25mL(或g)放于有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。固体检样最好用均质器,以8 000-10 000 r/min的速度处理1min,做成1:10的均匀稀释液。
3.1.2 用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内,振摇试管混匀,做成1:100的稀释液。
3.1.3 另取1mL灭菌吸管,按上条操作依次做10倍递增稀释液,每递增稀释一次,换用1支1mL灭菌吸管。
3.1.4 根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择三个稀释度,每个稀释度,接种3管。
3.2 乳糖发酵试验
将待检样品接种于乳糖 胆盐发酵管内,接种量在1mL以上者,用双料乳糖胆盐发酵管,1mL及1mL以下者,用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管,置36±1℃ 温箱内,培养24±2h,如所有乳糖胆盐发酵管都不产气,则可报告为大肠菌群阴性,如有产气者,则按下列程序进行。
3.3 分离培养
将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上,置36±1℃ 温箱内,培养18-24h,然后取出,观察菌落形态,并做革兰氏染色和证实试验。
3.4 证实试验
在上述平板上,挑取可疑大肠菌群菌落1-2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,置 36±1℃温箱内培养24±2h,观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌,即可报告为大肠菌群阳性。
3.5 报告
根据证实为大肠菌群阳性的管数,查MPN检索表,报告每100mL(g)大肠菌群的MPN值。
4 粪大肠菌群(faecal coliform)
4.1 用接种环将所有产气的乳糖胆盐发酵管培养物(见3.2条)转种于EC肉汤管内,置44.5±0.2℃水浴箱内(水浴箱内的水面应高于EC肉汤液面),培养24±2h,经培养后,如所有EC肉汤管均不产气,则可报告为阴性;如有产气者,则将所有产气的EC肉汤管分别转种于伊红美蓝琼脂平板上,置 培养18-24h,凡平板上有典型菌落者,则证实为粪大肠菌群阳性。
4.2 结果报告
根据证实为粪大肠菌群的阳性管数,查MPN检索表,报告每100mL(g)粪大肠菌群的MPN值
乳酸菌的检测：
一 概述
乳酸菌是指一群能分解葡萄糖或乳糖产生乳酸，需氧和兼性厌氧，多数无动力，过氧化氢酶阴性，革兰氏阳性的无芽胞杆菌和球菌。这类细菌在自然界分布广泛，可栖居在人和各种动物的口腔、肠道等器官内，在土壤、食品、饲料、水及一些临床标本中都有乳酸菌的存在。乳酸菌在工业、农业和医药等与人类生活密切相关的领域应用价值很高，相当多的乳酸菌对人、畜的健康起着有益的作用，但个别菌种能对人畜致病，乳酸菌主要包括23个属的细菌。
二 样本采集
检样主要为含乳酸菌活菌的饮料和微生态制剂，样本应放入冰箱保存，心快检验。
三 检验方法（中华人民共和国国家标准 乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物学检验GB／T 16347-1996）
乳酸菌菌总数的测定：乳酸菌菌落总数是指标样在一定条件下培养后，所得1ml检样中所含乳酸菌菌落的总数。
（一）检验程序
乳酸菌菌落总数检验程序如下：
（二）培养基和试剂
改良TJA培养基（改良番茄汁琼脂培养基）；改良MC培养基（modified Chalmers培养基）；0.1％亚甲蓝牛乳培养基；6.5％氯化钠肉汤参照；pH9.6葡萄糖肉汤；40％胆汁肉汤；淀粉水解培养基；精氨酸水解培养基；乳酸杆菌糖发酵管；七叶苷培养基；革兰氏染色液；3％过氧化氢溶液；蛋白胨水、靛基质试剂；明胶培养基；硝酸盐培养基、硝酸盐试剂；生理盐水：定量分装于三角瓶和试管内灭菌。
（三）操作步骤
1．以无菌操作将经过充分摇匀的检样25ml（或25g）放入含有225ml灭菌生理盐水的来菌广口瓶内做成1：10的均匀稀释液。
2．用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1m，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液）。
3．另取1ml灭菌吸管，按上述操作顺序，作10倍增稀释液，如此每递增一次，即换用1支1ml灭菌吸管。
4．选择2～3个以上适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。
5．稀释液移入平皿后，应及时将冷至50℃的乳酸菌计数培养基（改良TJA或改良MC）注入平皿约15ml，并转动平皿使混合均匀。同时将乳酸菌计数培养基倾入加有1ml稀释液检样用的灭菌生理盐水的灭菌平皿内作空白对照，以上整个操作自培养物加入培养皿开始至接种结束须在20min内完成。
6．待琼脂凝固后，翻转平板，置36℃±1℃温箱内培养72h±3h取出，观察乳酸菌菌特征，选取菌落数在30～300之间的平板进行计数。计算后，随机挑取5个菌落数进行革兰氏染色，显微镜检查并做过氧氢酶试验。革兰氏阳性，过氧化氢酶阴性，无芽胞的球菌或杆菌可定为乳酸菌。根据证实为乳酸菌菌落计算出皿内的乳酸菌数，然后乘其稀释倍数即得每亳升样品中乳酸菌数。例如，检样10－4的稀释液在改良TJA琼脂平板上，生成的可疑菌落为35个，取5个鉴定，证实的乳酸菌的4个，则1ml检样中乳酸菌数为：
35×4／5×104＝2.8×105
7．乳酸菌在改良TJA和改良MC培养基上菌落生长形态特征。
（四）乳酸菌的鉴定
对上述分离到的乳酸菌需进行菌种鉴定时，则作以下试验。
1．菌种制备 自平板上挑取菌落，接种于改良TJA或改良MC琼脂斜面，于36℃±1℃，24～48h培养，刮取菌苔，分别进行下列试验。
2．乳酸杆菌鉴定试验 极少见还原硝酸盐，不液化明胶，不产生靛基质和硫化氢。
3．常见乳杆菌属内种的碳水化合物反应。
4．产酸乳的链球菌的鉴别试验。
9. 乳酸的检验方法是什么
您好3M微生物快速检测片包括：细菌总数测试片，乳酸菌测试片，大肠菌群测试片，大肠杆菌(同时检测大肠菌群)测试片，金黄色葡萄球菌测试片，霉菌酵母菌测试片，肠杆菌科测试片，环境李斯特测试片，快速大肠菌群测试片，高灵敏度大肠菌群测试片，沙门和李斯特试剂盒，3M快速涂抹棒，电子移液枪，ATP荧光检测仪。3M微生物快速检测片是一种检测微生物的快速检测方法，操作简单，结果准确，只需要三步即可完成，接种，培养，判读。不需要很熟练的化验技巧。Petrifilm能减少测试时间。对于大肠菌群测试时间能从48小时以上减少到24小时，对于大肠菌群，测试时间能从120小时减少到24小时，而金黄色葡萄球菌的测试时间能从96小时以上减少到24小时。操作简单，无须验证实验，结果准确。因此，使用Petrifilm，你将能得到更好的现金流，减少库存和储存的费用，更好的财务控制以及赢得更有利的市场时间。（三）全球化的认证，国际化的使用方法：目前3M微生物测试片已是中国的国家行业标准：细菌总数，SN/T1897-2007大肠菌群SN/T1896-2007，大肠杆菌SN/T1896-2007，金黄色葡萄球菌SN/T1895-2007山东省出入境检验检疫局食品实验室，青岛市出入境检验检疫局食品实验室以及潍坊市商检局，临沂局，济南局等也在应用该产品进行微生物含量的常规检测。作为全球化的一种快速测试方法，3M测试片已得到国际上许多权威机构的认证。如：美国分析化学协会（AOAC），法国标准化协会（AFNOR），北欧国家认证(NordValValidation)，加拿大健康保护协会(HealthProtectionBranch)，新西兰食品安全认可方法(NewZealandFoodSafetyAuthority)，日本食品安全法规标准分析方法()，韩国联邦法典(KoreaCodeofFederalRegulation)澳大利亚VictorianDiaryInstryAuthority。目前已是韩国国家的检测方法，而且通过了日本的检测机构-------农林水产省的认可。另外也是比利时，芬兰，智力等国的国家官方推荐方法。（四）提高准确性，减少安全隐患：在生产车间，传统检测方法使用的试管，培养皿等玻璃器具一旦进入设备或是原料，半成品，带来的风险是不可估量的。3M的产品全部使用塑料聚合物，避免了这一隐患，降低了传统方法可能引入物理性污染的可能性。同时，对在生产车间的表面接触实验，空气监控，3M方法简便准确，有助于长期监控，得到稳定可比对的实验结果。采用Petrifilm测试片，大大提高了实验室的工作效率，这使得员工可以有时间去开展其他较为复杂病原菌实验（如分析沙门氏菌和李斯特氏菌等），在工厂使用传统的方法进行检测的时候，这些工作常常会因为没有足够的时间而被忽略。另外，节省的时间和人力也能用于某些预防工作：环境保护，培训和在工厂实施HACCP。想购买3M测试片找我，[email protected]
10. 乳酸菌的检测方法和培训资料！（越详细越好）
摘要：
〔目的〕探索用细菌学方法检测酵母浸出粉中维生素B族的存在。〔方法〕采用五种乳酸菌接种于含有被测的五种中外产的酵母粉培养基，用细菌学灵敏度、菌落计数和菌落直径测定的方法进行比较。〔结果〕经统计学处理，生长波度、菌落计数和菌落直径试验结果说明五种酵母粉之间有显着性差异，而灵敏度试验则未见显着性差异。〔结论〕酵母浸出粉中维生素B族生长因子的细菌学实验方法估计，可以参考生长浓度、菌落计数和菌落直径等综合性实
指标。
关键词：
乳酸菌；酵母浸出粉；维生素B族生长因子；生长浓度；菌数计数；菌落直径
看到的
不知是不是想要的
还有另个
http://www.cnki.com.cn/Article/CJFD2002-RPGY200201006.htm
乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物学检验
1 主题内容与适用范围
本标准规定了乳酸菌饮料中乳酸菌检验的技术要求。
本标准适用于以鲜乳、乳粉或辅以大豆等为原料，经乳酸菌发酵加工制成的具有相应风味的活性乳酸菌饮料。
2 引用标准
GB 4789.28 食品卫生微生物学检验 染色法、培养基和试剂
3 术语
乳酸菌：一群能分解葡萄糖或乳糖产生乳酸，需氧和兼性厌氧，多数无动力，过氧化氢酶阴性，革兰氏阳性的无芽胞杆菌和球菌。
乳酸菌菌落总数：检样在一定条件下培养后，所得1mL检样中所含乳酸菌菌落的总数。
4 设备和材料
4.1 温箱：36±1℃。
4.2 冰箱：0～4℃。
4.3 恒温水浴：46±1℃。
4.4 电炉：可调式。
4.5 吸管：容量为1，10和25mL。
4.6 广口瓶或三角瓶：容量为500mL。
4.7 平皿：直径为9cm。
4.8 试管：18×180mm。
4.9 显微镜。
5 培养基和试剂
5.1 改良TJA培养基(改良番茄汁琼脂培养基)。
5.2 改良MC培养基(Modified Chalmers培养基)。
5.3 0.1%美兰牛乳培养基。
5.4 6.5%氯化钠肉汤。
5.5 pH9.6葡萄糖肉汤。
5.6 40%胆汁肉汤。
5.7 淀粉水解培养基。
5.8 精氨酸水解培养基。
5.9 乳酸杆菌糖发酵管。
5.10 七叶苷培养基。
5.11 革兰氏染色液：按GB 4789.28规定执行。
5.12 3%过氧化氢溶液：按GB 4789.28规定执行。
5.13 蛋白胨水、靛基质试剂：按GB 4789.28规定执行。
5.14 明胶培养基：按GB 4789.28规定执行。
5.15 硝酸盐培养基、硝酸盐试剂：按GB 4789.28规定执行。
5.16 生理盐水：定量分装于三角瓶和试剂管内灭菌。
6 乳酸菌菌落总数的测定
6.1 检验程序
乳酸菌菌落总数检验程序如下：
（略）
6.2 操作步骤
6.2.1 以无菌操作将经过充分摇匀的检样25mL(或25g)放入含有225mL灭菌生理盐水的灭菌广口瓶内作成1∶10的均匀稀释液。
6.2.2 用1mL灭菌吸管吸取1∶10稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液)。
6.2.3 另取1mL灭菌吸管，按上述操作顺序，作10倍递增稀释液，如此每递增一次，即换用1支1mL灭菌吸管。
6.2.4 选择2～3个以上适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。
6.2.5 稀释液移入平皿后，应及时将冷至50℃的乳酸菌计数培养基(改良TJA或改良MC)注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀。同时将乳酸菌计数培养基倾入加有1mL稀释液检样用的灭菌生理盐水的灭菌平皿内作空白对照，以上整个操作自培养物加入培养皿开始至接种结束须在20min内完成。
6.2.6 待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养72±3h取出，观察乳酸菌菌落特征(见表1)，选取菌落数在30～300之间的平板进行计数。计算后，随机挑取5个菌落数进行革兰氏染色，显微镜检查并做过氧化氢酶试验。革兰氏阳性，过氧化氢酶阴性，无芽胞的球菌或杆菌可定为乳酸菌。根据证实为乳酸菌菌落计算出该皿内的乳酸菌数，然后乘其稀释倍数即得每毫升样品中乳酸菌数。例如，检样10－4的稀释液在改良TJA琼脂平板上，生成的可疑菌落为35个，取5个鉴定，证实为乳酸菌的是4个，则1mL检样中乳酸菌数为：
6.3 乳酸菌在改良TJA和改良MC培养基上菌落生长形态特征见表1。
表1 乳酸菌在不同培养基上菌落特征
（表略）
7 乳酸菌的鉴定
对上述分离到的乳酸菌需进行菌种鉴定时，则作以下试验。
7.1 菌种制备：自平板上挑取菌落，接种于改良TJA或改良MC琼脂斜面，于36±1℃，24～48h培养，刮取菌苔，分别进行下列试验。
7.2 乳酸杆菌鉴定试验：极少见还原硝酸盐，不液化明胶，不产生靛基质和硫化氢。
7.3 常见乳杆菌属内种的碳水化合物反应，见表2。
7.4 产乳酸的链球菌的鉴别试验，见表3。
表2 常见乳杆菌属内种的碳水化合物反应
（表略）
表3 乳酸的链球菌的鉴别表
（表略）
参考资料：http://www.hopebiol.com/asphtml/refere85.htm