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检测固定化效率方法

发布时间:2022-08-01 18:26:30

㈠ 通常用什么来 表示酶固定化效果

固定化酶(immobilized
enzyme)是20世纪60年代发展起来的一种新技术。所谓固定化酶,是指在一定的空间范围内起催化作用,并能反复和连续使用的酶。通常酶催化反应都是在水溶液中进行的,而固定化酶是将水溶性酶用物理或化学方法处理,使之成为不溶于水的,但仍具有酶活性的状态。

㈡ 酸性磷酸酶时固定化效率和回收率大小说明什么问题

固定化效率说明胶珠总酶活占加入总酶活的百分比,回收率说明胶珠在实际实验中表现的活力与理论值之比。

㈢ 怎样固定化乙醛脱氢酶具体步骤是什么

一种乙醇脱氢酶的固定化方法。其原料重量百分比含量为:海藻酸钠0.021%、氯化钙0.012%、柠檬酸钠0.03%、水99.937%。具体步骤如下:将0.021%海藻酸钠用雾化器滴入0.012%氯化钙的溶液中,在37℃的温度下匀速搅拌2分钟。过滤得到微胶囊,用去离子水洗涤3次,然后进入0.03%的柠檬酸钠的溶液中进行搅拌溶芯,保持时间5-10分钟,然后过滤,用去离子水洗涤;然后进行酶的吸附固定,乙醇脱氢酶则固定在合成的微胶囊中。本发明制备固定化酶的性能稳定,固定化率高,制备工艺简单,可用于人体醉酒和酒精中毒的体外检测作用;同时还可用于解酒保健品的体外检测和解酒保健品的效果判断。

㈣ 固定化酶一般采用什么方法

固定化酶(immobilized enzyme),酶本身还是溶于水的,只是是用物理的或化学的方法使酶与水不溶性大分子载体结合或把酶包埋在其中,使得酶在水中溶性凝胶或半透膜的微囊体从而导致流动性降低.酶固定化后一般稳定性增加,易从反应系统中分离,且易于控制,能反复多次使用.便于运输和贮存,有利于自动化生产,但是活性降低,使用范围减小,技术还有发展空间.固定化酶是近十余年发展起来的酶应用技术,在工业生产、化学分析和医药等方面有诱人的应用前景.
具体方法
吸附法
利用各种吸附剂将酶或含酶菌体吸附在其表面上而使酶固定的方法.通常有物理吸附法和离子吸附法.
常用吸附剂有活性炭、氧化铝、硅藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃等.
采用吸附法固定酶,其操作简便、条件温和,不会引起酶变性或失活,且载体廉价易得,可反复使用.
载体结合法
最常用的是共价结合法,即酶蛋白的非必需基团通过共价键和载体形成不可逆的连接.在温和的条件下能偶联的蛋白质基团包括:氨基、羧基、半胱氨酸的巯基、组氨酸的咪唑基、酪氨酸的酚基、丝氨酸和苏氨酸的羟基.参加和载体共价结合的基团,不能是酶表现活力所必需的基团.以中国首先采用的双功能团试剂“对位-β-硫酸酯乙砜基苯胺”偶联载体和酶为例,载体结合的步骤如下页反应式.
此法曾先后用于3′-核糖核酸酶、5′-磷酸二酯酶和葡萄糖淀粉酶等的固定化.此外酶通过物理吸附或离子吸附于载体制备固定化酶也是常用的方法.
交联法
依靠双功能团试剂使酶分子之间发生交联凝集成网状结构,使之不溶于水从而形成固定化酶.常采用的双功能团试剂有戊二醛、顺丁烯二酸酐等.酶蛋白的游离氨基、酚基、咪唑基及巯基均可参与交联反应.
包埋法
酶被裹在凝胶的细格子中或被半透性的聚合物膜包围而成为格子型和微胶囊型两种.包埋法制备固定化酶除包埋水溶性酶外还常包埋细胞,制成固定化细胞,例如可用明胶及戊二醛包埋具有青霉素酰化酶活力的菌体,可连续水解帤基青霉素,工业生产6-氨基青霉烷酸.
酶经过固定化后,比较能耐受温度及pH的变化,最适pH往往稍有移位,对底物专一性没有任何改变,实际使用效率提高几十倍(如5′-磷酸二酯酶的工业应用)甚至几百倍(如青霉素酰化酶的工业应用).

㈤ 这是一道考研题: 简述检测蛋白质的方法,以及如何利用氨基酸的化学性质实现蛋白质的固定化修饰。(8分)

蛋白质的测定
凯氏定氮法(含N量* 6. 25)
双缩脲法、Folin-酚法
紫外光度法(A=280nm)
离心法、电泳法、层析法
至于第二个问题,应该是
甲基化,磷酸化,糖基化
具体的要看具体题目才可以

㈥ 固定化微生物技术

固定化微生物技术是将特选的微生物固定在选证的载体上,使其高度密集并保持生物活性,在适宜条件下能够快速、大量增殖的生物技术。这种技术应用于废水处理,有利于提高生物反应器内微生物(尤其是特殊功能的微生物)的浓度,有利于微生物抵抗不利环境的影响,有利于反应后的固液分离,缩短处理所需的时间。
利用固定化微生物技术提高废水处理效率的工艺方法也被称作“生物增效”,其适用的领域非常广泛,例如:化粪池、隔油槽、排水管、城市污水处理厂以及工业废水…等。一般而言,针对特殊污染源,来自天然环境的微生物消耗很快、效率低下,即使有快速的繁殖能力仍不足以负荷。因此,生物增效的作业过程还是依循自然的方式,向目标添加定制的、具有已知降解能力的微生物制剂(固定化微生物),处理效果则有明显的提升。
现在所研究的生物吸附剂的固定化方法主要有以下几种:
1吸附法
吸附法一般依靠生物体与载体之间的作用,包括范德华力、氢键、静电作用、共价键及离子键,两者间的屯电位,在微生物体和载体的相互作用中起重要作用。常用的吸附载体有活性炭、木屑、多孔玻璃、多孔陶瓷、磁铁矿、硅藻土、硅胶、纤维素、聚氨醋泡沫体、离子交换树脂等。它是一种简单易行、条件温和的固定化方法,但用它固定的生物体不够牢靠,容易脱落。
2交联法
交联法又称无载固定化法,是一种不用载体的工艺,通过化学、物理手段使生物体细胞间彼此附着交联。化学交联法它一般是利用醛类、胺类等具有双功能或多功能基团的交联剂与生物体之间形成共价键相互联结形成不溶性的大分子而加以固定,所使用的交联剂主要有戊二醛、聚乙烯酞胺、表氯醇等等。物理交联法在是指在微生物培养过程中,适当改变细胞悬浮液的培养条件(如离子强度、温度、pH值等),使微生物细胞之间发生直接作用而颗粒化或絮凝来实现固定化,即利用微生物自身的自絮凝能力形成颗粒的一种固定化技术。
3包埋法
在微生物的固定化方法中,以包埋法最为常用。它的原理是将生物体细胞截留在水不溶性的凝胶聚合物孔隙的网络中,通过聚合作用或通过离子网络形成,或通过沉淀作用,或通过改变溶剂、温度、pH值使细胞截留。凝胶聚合物的网络可以阻止细胞的泄露,同时能让基质渗入和产物扩散出来。
包埋材料可以分为两大类:
(l)天然高分子多糖类,如海藻酸盐、琼脂、明胶等I’3l,其中以海藻酸钠和卡拉胶应用最多,它们具有固化方便,对微生物毒性小及固定化密度高等优点,但是它们抗微生物分解性能较差,机械强度低,但是可使用交联剂进行稳定化处理,但活力和传质性能又会下降。
(2)合成高分子化合物,如聚丙烯酞胺、聚乙烯醇(PvA)娜l等。这类交联剂的突出优点是抗微生物分解性能好,机械强度高,化学性能稳定。但是聚合物网络的形成条件比较剧烈,对微生物细胞的损害较大,而且成形的多样性和可控性不好。

㈦ 酶的固定化方法主要有哪些

一、包埋法 定义:将酶、细胞或原生质体包埋在各种多孔载体中,使其固定化的方法。 分类:根据载体的材料和方法的不同分为凝胶包埋法(网格型包埋法)、半透膜包埋法(微囊型包埋法)。 1、凝胶包埋法:应用最广泛的固定化方法。

㈧ 为什么要进行酶的固定化方法有哪些各有何优缺点

因为在有些反应相中,如果酶和产物混合在一起以后不好分离,会影响后续操作,此外,溶解相的酶有时候效率会比较低。
方法:
1、载体结合,将酶和一些高分子材料结合在一起。优点:制作简单,反应效率较高,比较适合大型工业化生产;缺点:适用的酶范围比较小。
2、交联,利用连接分子将酶相互连在一起形成高分子。优点:类似第一条;缺点:会产生酶的浪费,教练反应比较激烈会可能导致酶活性的降低。
3、包埋,将酶包裹在高分子材料所形成的网格中,包埋材料允许反应物通过,但不允许酶通过。优点:方法较统一,适合实验室操作,对酶和反应相限制较少;缺点:持久性差,包埋反应可能会减损酶活性。

㈨ 什么是酶的偶联效率如何测定

偶联后的总活力除以最初加入的总活力

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