检测特定mrna是否存在用什么方法

1. 检测细胞中mRNA水平的方法有哪些

如果检测一个或者少数mRNA的话，可以提取总RNA之后反转录，用荧光定量pcr检测其表达量。如果需要检测大量基因的表达的话，用基因芯片或者转录组测序会比较好

2. mrna检测

先提取RNA,反转录成cDNA,然后根据目的基因设计PCR引物,通过半定量RT-PCR确定目的基因表达.
正因为检测的是mRNA,所以要先反转录成cDNA才能PCR.

3. 检测组织中某基因mrna定量的方法有哪些

所谓基因表达,就是从DNA到mRNA再到蛋白的一个过程,基因表达水平一般是通过该基因转录的mRNA的多少来衡量的.每个基因转录产生的mRNA的量,是受到时空等多种因素调控的,个体在不同的生长发育阶段,或者不同的组织水平,基因转录出mRNA的量都是不一样的.例如,当某种植物长期生长在高盐的环境里,该植物体内与抗盐相关的基因的表达量就会增加,以适应这种高盐环境,是植物能够生存下来,这时植物抗盐相关的基因表达水平就相对高,希望我的回答能够帮你弄清这个问题,

4. 请教：检测mRNA方法

你好，HPVE6、E7mRNA是最新的检测方法。优势主要有：1；HPVE6、E7mRNA其临床敏感性，阴性预测值与HPV——DNA相同，特异性显着较高。2；可减少15——40%的假阳性。3；减少不必要的阴道镜组织学判断。4；为实现宫颈癌的标准筛查更近了一步。希望我的回答对你有帮助。

5. 检测转基因生物是否转录出mRNA，应通过何种分子杂交方法实现

检测目的基因是否导入用的是DNA-DNA分子杂交，检测是否转录用DNA-RNA分子杂交，检测是否翻译用抗原-抗体杂交。
前两者都是通过一条被标记的DNA单链作为基因探针来实现的。这个探针具体的做法就是：用目的基因转录出的mRNA为模板，以被放射性同位素标记的脱氧核苷酸为原料，用逆转录的方法合成一条被标记的DNA，然后把模板的mRNA给水解掉，这样就得到一条被标记的DNA单链，这就是探针。它的特点就是可以和目的基因转录的mRNA互补配对（即能形成杂交带），所以把探针放在受体细胞中如果发现有杂交带产生，就说明目的基因转录了。
另外，这个探针也可以用来做DNA-DNA分子杂交，即检测目的基因是否导入，方法：先取出受体细胞中DNA然后高温变性成单链，把探针放进去，然后降温复性，如果形成杂交带说明，这些DNA中有能和探针互补的DNA片段，即目的基因。因为这个探针本身就是由mRNA逆转录来的，它的碱基序列与目的基因的一条链完全相同，当然就可以和另外一条链刚好互补了。
这样可以吗？

6. 目的mRNA如何检测

先提取RNA，反转录成cDNA，然后根据目的基因设计PCR引物，通过半定量RT-PCR确定目的基因表达。

正因为检测的是mRNA，所以要先反转录成cDNA才能PCR。

7. 检测基因表达的方法

主要用探针检测mRNA或用抗体检测出表达的蛋白质(转录水平上对特异mRNA的检测和翻译水平上对特异蛋白质的检测)

一、外源基因转录水平的鉴定

基因表达分为转录及翻译两阶段，转录是以DNA（基因）为模板生成mRNA的过程，翻译是以mRNA为模板生成蛋白质的过程，检测外源基因的表达就是检测特异mRNA及特异蛋白质的生成。所以基因表达检测分为两个水平。

即转录水平上对特异mRNA的检测和翻译水平上对特异蛋白质的检测。转录水平上的检测主要方法是Northern杂交，它是以DNA或RNA为探针，检测RNA链。和Southern杂交相同，Northern杂交包括斑点杂交和印迹杂交。

也可用RT-PCR（reverse transcribed PCR）方法检测外源DNA在植物体内的转录表达。其原理是以植物总RNA或mRNA为模板进行反转录，然后再经PCR扩增。

如果从细胞总RNA提取物中得到特异的cDNA扩增条带，则表明外源基因实现了转录。此法简单、快速，但对外源基因转录的最后决定，还需与Northern杂交的实验结果结合。

二、外源基因表达蛋白的检测

表达蛋白的检测方法有三种：

1、生化反应检测法：主要通过酶反应来检测；

2、免疫学检测法：通过目的蛋白（抗原）与其抗体的特异性结合进行检测，具体方法有Western杂交、酶联免疫吸附法（ELISA）及免疫沉淀法；

3、生物学活性的检测。

Western杂交是将聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳分离抗原（Antigen）固定在固体支持物上（如硝酸纤维素膜，NC膜）。不同分子量大小的蛋白质在凝胶中迁移率不同，据此可确定特定的抗原存在与否以及相对丰度，或者蛋白质是否遭到降解等。

蛋白质电泳后转到NC膜，放在蛋白质（如牛血清蛋白BSA）或奶粉溶液中，温育，以封闭非特异性位点，然后用含有放射性标记或酶标记的特定抗体杂交，抗原-抗体结合，再通过放射性自显影或显色观察。

(7)检测特定mrna是否存在用什么方法扩展阅读

外显子与内含子表达过程中的相对性 从内含子与外显子的定义来看，两者是不能混淆的，但是真核生物的外显子也并非都“显”（编码氨基酸），除了tRNA基因和rRNA基因的外显子完全“不显”之外，几乎全部的结构基因的首尾两外显子都只有部分核苷酸顺序编码氨基酸，还有完全不编码基酸的外显子，如人类G6PD基因的第一外显子核苷酸顺序。

已发现一个基因的外显子可以是另一基因的内含子，所这亦然。以小鼠的淀粉酶基因为例，来源于肝的与来源于唾液腺的是同一基因。淀粉酶基因包括4个外显子，肝生成的淀粉酶不保留外显子1，而唾液腺中的淀粉酶则保留了外显子1的50bp顺序，但把外显子2与前后两段内含子一起剪切掉，经过这样剪接，外显子2就变成唾液淀粉酶基因中的内含子。

同一基因在不同组织能生成不同的基因产物来源于不同组织的类似蛋白，可以由同一基因编码产生，这种现象首先是由于基因中的增强子等有组织特异性，它能与不同组织中的组织特异因子结合，故在不同组织中同一基因会产生不同的转录物与转录后加工作用。

此外真核生物基因可有一个以一的poly(A)位点，因此能在不同的细胞中产生具有不同3’末端的前mRNA，从而会有不同的剪接方式。由于大多数真核生物基因的转录物是先加poly(A)尾巴，然后再行剪接，因此不同组织、细胞中会有不同的因子干预多聚腺苷酸化作用，最后影响剪接模式。

8. 如何对目的基因进行检测与鉴定

可以从三方面对目的基因进行鉴定：

1、直接测定：按照目的基因组成制作DNA分子探针进行配对。

2、mRNA测定：根据目的基因组得出其转录的mRNA组成，利用探针检测。

3、蛋白测定：可应用PCR相应技术测定目的基因翻译的相关蛋白，也可采用免疫化学法导入蛋白抗体检测蛋白。

(8)检测特定mrna是否存在用什么方法扩展阅读：

对目的基因进行鉴定和检测的多种方法：

基因鉴定技术是一项生物学检测技术，人体细胞有总数约为30亿个碱基对的DNA，每个人的DNA都不完全相同，人与人之间不同的碱基对数目达几百万之多，因此通过分子生物学方法显示的DNA图谱也因人而异，由此可以识别不同的人。

所谓“DNA指纹”，就是把DNA作为像指纹那样的独特特征来识别不同的人。由于DNA是遗传物质，因此通过对DNA鉴定还可以判断两个人之间的亲缘关系。

基因鉴定的原理其实是DNA分子杂交，这种分子杂交是在缓冲液中进行的，由于DNA分子杂交时，两个分子相遇的机会不是很大，所以就需要众多的带有目的基因的DNA与待测的DNA分子。

而PCR技术就是将目的基因进行扩增的一种技术手段，所以在进行基因鉴定时并不是直接进行鉴定的，而是先进行PCR技术将目的基因扩增再进行鉴定。

网络-对目的基因进行检测与鉴定

9. 简述检测mRNA表达的PCR法原理，检测mRNA时有哪些方法避免DNA对结果的影响

聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点；能在一个试管内将所要研究 的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断；可从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的DNA供分析研 究和检测鉴定。过去几天几星期才能做到的事情，用PCR几小时便可完成。PCR技术是生物医学领域中的一项革命性创举和里程碑。
PCR技术简史
PCR的最早设想 核酸研究已有100多年的历史，本世纪60年代末、70年代初人们致力于研究基因的体外分离技术，Korana于1971年最早提出核酸体外扩增的设想：“经过DNA变性，与合适的引物杂交，用DNA聚合酶延伸引物，并不断重复该过程便可克隆tRNA基因”。
PCR的实现 1985年美国PE-Cetus公司人类遗传研究室的Mullis等发明了具有划时代意义的聚合酶链反应。其原理类似于DNA的体内复制，只是在试管中给 DNA的体外合成提供以致一种合适的条件---摸板DNA，寡核苷酸引物，DNA聚合酶，合适的缓冲体系，DNA变性、复性及延伸的温度与时间。
PCR的改进与完善 Mullis最初使用的DNA聚合酶是大肠杆菌DNA聚合酶I的 Klenow片段，其缺点是：①Klenow酶不耐高温，90℃会变性失活，每次循环都要重新加。②引物链延伸反应在37℃下进行，容易发生模板和引物之 间的碱基错配，其PCR产物特异性较差，合成的DNA片段不均一。此种以Klenow酶催化的PCR技术虽较传统的基因扩增具备许多突出的优点，但由于 Klenow酶不耐热，在DNA模板进行热变性时，会导致此酶钝化，每加入一次酶只能完成一个扩增反应周期，给PCR技术操作程序添了不少困难。这使得 PCR技术在一段时间内没能引起生物医学界的足够重视。1988年初，Keohanog改用T4 DNA聚合酶进行PCR，其扩增的DNA片段很均一，真实性也较高，只有所期望的一种DNA片段。但每循环一次，仍需加入新酶。1988年Saiki 等从温泉中分离的一株水生嗜热杆菌(thermus aquaticus) 中提取到一种耐热DNA聚合酶。

10. 用什么方法检测产品是否含有DNA 和rna

DNA和RNA作为遗传物质，本身都有自己的特性，用于检测的方法也有很多，如下：

首先我们要知道：

DNA：为双链结构，由A 、C 、G、T组成，链有外显子和内含子区域，物质性质中A260/A280在1.8左右，在260nm出有最大吸收峰。

tRNA的二级和高级结构

1、抽提试剂盒分别抽提：将产品分成两份，其中一份用来抽提DNA，此样本加入RNA 酶，另一份用来抽提RNA，此样本加入Dnase I，由此抽提出来的核酸进行琼脂糖凝胶电泳或者aligent 4200/2100仪器检测，考虑到DNA和RNA可能会降解，只有样本完好时，才能轻易地辨别出来。

2、qPCR技术：如1中所示，用1中的样本进行qPCR验证，设计引物时DNA样本跨外显子区域，或者是单独设计内含子区，加标准品对照，RNA正常设计即可，由此得出的结果可以根据扩增长度和两个结果进行判定。

以上为两个最基本的方法，操作简单，成本可控，两个结合起来结果准确，当然还有一些其他的方法，并设计对照试验，采用控制变量法进行研究。