主要用探针检测mRNA或用抗体检测出表达的蛋白质(转录水平上对特异mRNA的检测和翻译水平上对特异蛋白质的检测)
详见下面:
外源基因转录水平的鉴定
基因表达分为转录及翻译两阶段,转录是以DNA(基因)为模板生成mRNA的过程,翻译是以mRNA为模板生成蛋白质的过程,检测外源基因的表达就是检测特异mRNA及特异蛋白质的生成。所以基因表达检测分为两个水平:即转录水平上对特异mRNA的检测和翻译水平上对特异蛋白质的检测。转录水平上的检测主要方法是Northern杂交,它是以DNA或RNA为探针,检测RNA链。和Southern杂交相同,Northern杂交包括斑点杂交和印迹杂交。
也可用RT-PCR(reverse transcribed PCR)方法检测外源DNA在植物体内的转录表达。其原理是以植物总RNA或mRNA为模板进行反转录,然后再经PCR扩增。如果从细胞总RNA提取物中得到特异的cDNA扩增条带,则表明外源基因实现了转录。此法简单、快速,但对外源基因转录的最后决定,还需与Northern杂交的实验结果结合。
外源基因表达蛋白的检测
表达蛋白的检测方法有三种:①生化反应检测法:主要通过酶反应来检测;②免疫学检测法:通过目的蛋白(抗原)与其抗体的特异性结合进行检测,具体方法有Western杂交、酶联免疫吸附法(ELISA)及免疫沉淀法;③生物学活性的检测。
Western杂交是将聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳分离抗原(Antigen)固定在固体支持物上(如硝酸纤维素膜,NC膜)。不同分子量大小的蛋白质在凝胶中迁移率不同,据此可确定特定的抗原存在与否以及相对丰度,或者蛋白质是否遭到降解等。蛋白质电泳后转到NC膜,放在蛋白质(如牛血清蛋白BSA)或奶粉溶液中,温育,以封闭非特异性位点,然后用含有放射性标记或酶标记的特定抗体杂交,抗原-抗体结合,再通过放射性自显影或显色观察。
参考网上
❷ 镀锌铁丝网的国家标准的检验依据是什么
GB/T15393-94《钢丝镀锌层》,标准修订
主要参照GB/T1.1-2000《标准化工作导则》和ISO 7989-2:2007(E)《钢丝和钢丝制品 — 钢丝的有色金属涂层》
非等效采用ISO7989-2:2007(E)《钢丝和钢丝制品 — 钢丝的有色金属涂层》,与GB/T15393-94相比主要变化如下: ——增加锌合金镀层的技术要求、试验方法及检验规则。本标准的附录A为资料性附录。由中国钢铁工业协会提出。由全国钢标准化技术委员会归口。
(2)铁丝网的特异性检测方法扩展阅读:
固定方法
钢丝网采用塑料膨胀螺栓固定。固定钢丝网时,应从顶层开始沿边角处钉挂钢丝网。钢丝网应横向铺设,也可按分格缝尺寸垂直铺设。钉挂钢丝网时,先将钢丝网的一头(距50毫米处)拆成L角,以便于转弯搭接。用直径不小于1.5毫米的钢丝做成V型卡子,先固定住钢丝网,然后按梅花型打孔或注射安装锚固件。
钢丝网固定后,先用防裂砂浆刮糙2—3毫米,使钢丝网压人其中,固化后再抹3—5毫米,待防裂砂浆达到一定强度后,方可进行面砖粘结层的施工及贴面砖。
❸ 如何用spss分析检查方法的敏感性及特异性差异
使用ROC分析法,做ROC曲线(receiver operating characteristic curve)。
该方法优点:
①简单、直观,通过图示可观察分析方法的临床准确性,并可用肉眼作出判断。
②将灵敏度与特异性以图示方法结合在一起,可准确反映某分析方法特异性和敏感性的关系,是试验准确性的综合代表。
③不固定分类界值,允许中间状态存在,利于使用者结合专业知识,权衡漏诊与误诊的影响,选择一更佳截断点作为诊断参考值。
❹ pcr的特异性检测和敏感性检测要怎么做
pcr灵敏度检测
1.1 样本准备:以4次方国家一级或者二级标准品为基础样本,用阴性血清进行倍比稀释,稀释后的样本浓度分别为1000IU/ml、500IU/ml、250IU/ml、125IU/ml、100IU/ml、50IU/ml、25IU/ml,每份样本使用1000μl进行检测。1.2 用质检合格核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)进行检测,每个浓度每批次试剂盒做5个复管,分析各浓度标本的检出率(即阳性率)。以标本浓度值对数为横坐标,对应的检出率为纵坐标描点,用Origin的Sigmoidal Fit 的方法拟合成曲线,根据软件给出的曲线公式计算出当检出率为95%时所对应的浓度,此浓度即为本试剂盒对HBV标本的分析灵敏度。
pcr特异性检测
2.1 参考样本选择:选择与目的片段相近或者感染方式相似的其他病毒或者细菌高载量样本,同时应满足临床或者其他方法确认目的片段为阴性,做5个副管扩增并且全部为阴性。以乙肝为例:选择高载量HCV、CMV、EBV、HSV2的阳性标本各1个(乙肝表面抗原为阴性),分别检测乙肝表面抗原及乙肝核酸量。每个测5次,全部阴性或者在参考范围以下为特异性良好。
希望能够帮到你,有其他需要可以随时交流!
❺ 荧光定量PCR方法的特异性和准确度怎么计算
特异性主要看检测的目的样品是否是专一的,准确度主要看测量数据之间的偏差
❻ 定性检测方法的灵敏度和特异性是什么意思
灵敏度:正确检出阳性患者的能力,也就是指在诊断疾病的时候对真正的病人不漏诊的机会有多大。灵敏度越高,假阴性越少。
特异性:正确检出阴性患者的能力,也就是指对一个健康人不造成误诊的机会有多大。特异性越高,假阳性越少。
临床灵敏度可用来衡量某种试验检测出有病者的能力,灵敏度是将实际有病的人正确地判定为真阳性的比例。
临床特异度是衡量试验正确地判定无病者的能力,特异度是将实际无病的人正确地判定为真阴性的比例。
(6)铁丝网的特异性检测方法扩展阅读;
灵敏度=真阳性人数/(真阳性人数+假阴性人数)*100%。正确判断病人的率。
特异度=真阴性人数/(真阴性人数+假阳性人数))*100%。正确判断非病人的率。
特异性就是检查发现dsDNA阳性,那他就是SLE患者的概率;敏感性就是检查dsDNA阴性,那他就不是SLE患者的概率。用来评估真阳性和真阴性的。
❼ 免疫学的检测方法
免疫学检测方法可分为体液免疫和细胞免疫。
❽ 医学统计 联合检测 特异性和敏感性怎么计算
1、诊断敏感性:是指将实际患者正确地判断为阳性(真阳性)的百分率。
计算公式为:TP/(TP FN)×100%。TP为真阳性,FN为假阴性。
2、诊断特异性:是指将实际无病者正确地判断为阴性(真阴性)的百分率。
计算公式为:TN/(TN+FP)×100%。TN为真阴性, FP为假阳性。
3、诊断效率:是指能准确区分患者和非患者的能力。
计算公式为:(TP+ TN)/(TP+FP+TN +FN)×100%。
4、阳性预期值:是指特定试验方法测定得到的阳性结果中真阳性的比率。
计算公式为:PPV=TP/(TP+FP)×100%。
5、阴性预期值:是指特定试验方法测定得到的阴性结果中真阴性的比率。
计算公式为:NPV=TN/(TN+FN)×100%。
(8)铁丝网的特异性检测方法扩展阅读:
医学统计方法的选择
一、先确定研究目的,根据研究目的选择方法
不同研究目的采用的统计方法不同,常见的研究目的主要有三类:一是差异性研究,即比较组间均数、率等的差异,可用的方法有t检验、方差分析、χ2检验、非参数检验等。
二是相关性分析,即分析两个或多个变量之间的关系,可用的方法有相关分析。三是影响性分析,即分析某一结局发生的影响因素,可用的方法有线性回归、logistic回归、Cox回归等。
二、明确数据类型,根据数据类型进一步确定方法
不同数据类型采用的统计方法也不同。定量资料可用的方法有t检验、方差分析、非参数检验、线性相关、线性回归等。分类资料可用的方法有χ2检验、对数线性模型、logistic回归等。图1.6简要列出了不同研究目的、不同数据类型常用的统计分析方法。
三、选定统计方法后,需要利用统计软件具体实现统计分析过程
SAS中,不同的统计方法对应不同的命令,只要方法选定,便可通过对应的命令辅之以相应的选项实现统计结果的输出。
四、统计结果的输出并非数据分析的完成
一般统计软件都会输出很多结果,需要从中选择自己需要的部分,并做出统计学结论。但统计学结论不同于专业结论,最终还需要结合实际做出合理专业结论。
❾ 特异性定义 医学检验
特异性(specificity)是指干扰物存在时分析系统可以正确区分或检测被测量的能力。
特异性(specificity)是指在未感染某一病原体的个体中,检测出阴性反应的可能性。
特异性也称灵敏度,是指一般指仪器、设备、试剂或测试方法对微小外加作用显示出的敏感度。
在分析化学中灵敏度一般是指测定方法和检测仪器能检测出物质的最低量或最低浓度。测定方法的灵敏度与实验条件有密切关系,通常用工作曲线的斜率值来表示该方法的灵敏度更符合实际,斜率值越大,方法灵敏度越高。定性鉴定方法的灵敏度是用检出限量m(单位μg)和最低浓度c1(单位g/L)两个相关的量来表示,检出限量和最低浓度越低,鉴定方法越灵敏。在仪器分析中,分析灵敏度直接依赖于检测器的灵敏度与仪器的放大倍数,当提高检测器的灵敏度与仪器的放大倍数,灵敏度提高,噪声也随之增大,而信噪比s/N和分析方法的检出能力不一定会有所改善和提高。如果只给出灵敏度,不给出获得此灵敏度的仪器条件,则各分析方法之间的灵敏度没有可比性。由于灵敏度没有考虑到测量噪声的影响,因此,现在推荐用检出限而不用灵敏度作为表征分析方法最大检出能力
❿ ELISA检测方法的原理及其优缺点是什么
1.
直接法(direct
elisa)
将抗原直接固定在固相载体上,参加酶符号的一级抗体,即可测定抗原总量,此一级抗体的特异性非常重要。
优势:操作手续简略,因无须运用二抗可防止交互反响。
缺陷:实验中的一抗都得用酶符号,但不是每种抗体都适合做符号,费用相对进步。
2.间接法(indirect
elisa)
此测定办法与直接法相似,不一样在于一级抗体没有酶符号,改用酶符号的二级抗体去辨识一级抗体来测定抗原量。
优势:二抗能够加强信号,并且有多种挑选能做不一样的测定剖析。不加酶符号的一级抗体则能保存它最多的免疫反响性。
缺陷:交互反响发作的机率较高。
3.双抗体夹心法(sandwich
elisa)
被检测的抗原包被在两个抗体之间,其间一个抗体将抗原固定于固相载体上,即捕捉抗体。另一个则是检测抗体,此抗体可用酶符号后直接测定抗原的量;或不符号,再透过酶符号的二级抗体来测定抗原的量。这两种抗体有必要当心选择,才可防止交互反响或竞争一样的抗原联系部位。
优势:高活络、高专一性,抗原无须事前纯化。
缺陷:抗原必定得具有两个以上的抗体联系部位。
4.竞争法(competitive
elisa)
样本里的抗原(自在抗原)和纯化并固定在固相载体上的抗原(固定抗原)一同竞争一样的抗体,当样品里的自在抗原越多,就能够联系越多的抗体,而固定抗原就只能联系到较少的抗体,反之亦然。经清洁过程,洗去自在抗原和抗体的复合物,只留下固定抗原和抗体的复合物,拿来与只要固定抗原的对照组成果相比拟,依据呈色区别就可计算出样品里的抗原含量。
优势:可适用比拟不纯的样本,并且数据再现性很高。
缺陷:全体的敏感性和专一性都较差。
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