水中细菌检测方法

‘壹’ 怎样检测自来水中大肠杆菌数和细菌总菌数

平板计数法：采用常规涂布平板法，37℃24h后计数。培养基为营养琼指和伊红美兰琼脂。
多管发酵法：采用五管法，培养剂为液体EC培养基。
细菌总数：采用AODC法，
具体操作按徐怀恕方法进行。
活菌直接计数：采用Kogure等方法：向水样加入0.002%萘啶酮酸（Sigma
公司）和0.025%酵母膏，在37℃下培养6-24h，加入甲醛（最终浓度为2%）固定，再按AODC法镜检计数。
再可以看看下面这篇文章
水中细菌总数与大肠杆菌检测方法的比较研究

‘贰’ 如何检测水中的细菌

如果水中细菌密度较小，就该应用无菌技术将待测水样通过专门过滤细菌的滤纸，这样细菌就都留在滤纸上了，再将滤纸铺到倒好平板的培养基中培养，长出菌落后数菌落数，数量除以过滤水的体积，就得出单位水样里的细菌数

‘叁’ 细菌总数的检验方法是什么

细菌总数是水质参数之一，指单位体积水中的细菌总量。其检验方法是:在玻璃平皿内,接种一毫升水样或稀释水样于加热液化的营养琼脂培养基中，冷却凝固后在37°C培养24小时，培养基上的菌落数或乘以水样的稀释倍数即为细菌总数。有的国家把培养温度定为35°C或其他温度，也有把培养时间定为48小时的。

‘肆’ 自来水的微生物检测方法是什么样的

自来水的微生物检测方法是：
每周进行水样微生物检测时，先打开水龙头放水2~3分钟——出水口用75%酒精喷洒——防水5分钟以上——用灭菌容器取样（灭菌前加入0.1ml的2%的硫代硫酸钠）。
加入硫酸钠的目的是：中和水中的余氯，中和后利于细菌的生长繁殖，以便观察．

‘伍’ 细菌总数怎么检测

细菌总数检测目前国标规定的方法为平板计数法，其检验方法是：

在玻璃平皿内，接种一毫升水样或稀释水样于加热液化的营养琼脂培养基中，冷却凝固后在37°C培养24小时，培养基上的菌落数或乘以水样的稀释倍数即为细菌总数。

有的国家把培养温度定为35°C或其他温度，也有把培养时间定为48小时的。这种方法精度高，但耗时长，难以满足实际工作需要。

为了简化检测程序、缩短检测时间，国内外学者进行了大量的快速检测方法的研究，提出了阻抗检测法、Simplate TM全平器计数法、微菌落技术、纸片法等检测方法，取得了一定的成果，但检测时间仍在4 h以上。

本研究在分析了已有研究成果的基础上，提出了在滤膜上染色后，直接计数的细菌总数检测方法，具体步骤为：

用集菌仪进行细菌收集→在膜上进行染色→在油镜下计数→按公式计算出菌液浓度。实验结果表明，该方法与传统的平板培养法无显着性差异，检测时间约1 h，是一种快速的细菌总数检测方法。

(5)水中细菌检测方法扩展阅读：

水中通常存在的细菌大致可分为三类：

1、天然水中存在的细菌。普通的是荧光假单孢杆菌、绿脓杆菌，一般认为这类细菌对健康人体是非致病的。

2、土壤细菌。当洪水时期或大雨后地表水中较多。它们在水中生存的时间不长，在水处理过程中容易被去除。腐蚀水管的铁细菌和硫细菌也属此类。

3、肠道细菌。它们生存在温血动物的肠道中，故粪便中大量存在。水体中发现这类细菌，可以认为已受到粪便的污染。致病性肠道细菌有沙门氏杆菌（伤寒和副伤寒菌）、B型炭疽菌、痢疾志贺氏菌和霍乱弧菌等。

‘陆’ 水中细菌总量的测量方法

• 基本原理

  应用平板菌落计数技术测定水中细菌总数。由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。目前一般是采用普通肉膏蛋白胨琼脂培养基。

• 操作步骤

  
  

1．水样的采取

(1)自来水先将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌，再开放水龙头使水流5min后，以灭菌三角烧瓶接取水样，以待分析。
(2)池水、河水或湖水应取距水面l0～15cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查，否则需放入冰箱中保存。

2．细菌总数测定

(1)自来水
①用灭菌吸管吸取lml水样，注入灭菌培养皿中。共做两个平皿。
②分别倾注约15mL己溶化并冷却到45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基，并立即在桌上作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀。
③另取一空的灭菌培养皿，倾注肉膏蛋白胨琼脂培养基15mL作空自对照。
④培养基凝固后，倒置于37℃温箱中，培养24h，进行菌落计数。
⑤两个平板的平均菌落数即为lml水样的细菌总数。
(2)池水、河水或湖水等
①稀释水样取3个灭菌空试管，分别加入9ml灭菌水。取lml水样注入第一管9ml灭菌水内、摇匀，再自第一管取1ml至下一管灭菌水内，如此稀释到第三管，稀释度分别为10-1、10-2与10-3。稀释倍数看水样污浊程度而定，以培养后平板的菌落数在30～300个之间的稀释度最为合适，若三个稀释度的菌数均多到无法计数或少到无法计数，则需继续稀释或减小稀释倍数。
一般中等污秽水样，取10-1、10-2、10-3三个连续稀释度，污秽严重的取10-2、10-3、10-4三个连续稀释度。
②自最后三个稀释度的试管中各取lmL稀释水加入空的灭菌培养皿中，每一稀释度做两个培养皿。
③各倾注15ml已溶化并冷却至45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基，立即放在桌上摇匀。
④凝固后倒置于37℃培养箱中培养24h。

3．菌落计数方法

(1)先计算相同稀释度的平均菌落数。若其中一个平板有较大片状菌苔生长时，则不应采用，而应以无片状菌苔生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌苔的大小不到平板的一半，而其余的一半菌落分布又很均匀时，则可将此一半的菌落数乘2以代表全平板的菌落数，然后再计算该稀释度的平均菌落数。
(2)首先选择平均菌落数在30~300之间的，当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则以该平均菌落数乘其稀释倍数即为该水样的细菌总数。
(3)若有两个稀释度的平均菌落数均在30～300之间，则按两者菌落总数之比值来决定。若其比值小于2，应采取两者的平均数；若大于2，则取其中较小的菌落总数。
(4)若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数。
(5)若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数。
(6)若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，则以最近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数。

‘柒’ 测定水中微生物（包括细菌真菌等）数量的方法

器材及培养

材料和试剂
蒸馏水,自来水,取自儿童公园的湖水,牛肉膏蛋白胨琼脂培养基.
仪器或其他用具
灭菌三角烧瓶,灭菌带玻璃塞瓶,灭菌培养皿,灭菌吸管,灭菌量筒.
研究方法
采用平板菌落记数技术测定水中细菌总数.

水样的采取
自来水
先将自来水水龙头用火焰灼烧3min灭菌,再开放水龙头5min后,以灭菌三角烧瓶接取水样,以待分析.
公园的湖水
应取距水面10~15cm的深层水样,先将灭菌的带玻璃塞瓶,瓶口向下浸入水中,然后翻过来,除去玻璃
塞,水即流入瓶中,盛满后,将瓶塞盖好,再从水中取出,最好立即检查,否则需放入冰箱中保存.
细菌总数的测定

• 自来水
  Step1用灭菌吸管吸取1mL水样,注入灭菌培养皿中.共做两个平皿.
  Step2分别倾注约15mL已溶化并冷却到45e左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基.并立即在桌上做平面
  旋摇,使水样与培养基充分混匀.
  Step3另取一个空的灭菌培养皿,倾注肉膏蛋白胨琼脂培养基15mL,作对照.
  Step4培养基凝固后,倒置与37e温箱中,培养24h,进行菌落记数.

• 公园的湖水
  Step1稀释水样,取三个灭菌空试管,分别加入9mL灭菌水.取1mL水样注入第一管9mL灭菌水
  内,摇匀,再自第一管取1mL到下一管灭菌水内,如此稀释到第三管,稀释度分别为10-1,10-2,10-3.
  Step2自最后三个稀释度的试管中各取1mL稀释水加入空的灭菌培养皿,每一稀释度共做两个培养皿.
  Step3各倾注15mL已溶化并冷却到45e左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基并立即在桌上摇匀.
  Step4凝固后倒置于37e恒温恒湿培养箱中培养24h.

菌落记数方法
1)计算相同稀释度的平均菌落数.若有大片菌苔生长时,弃用;以无片菌苔生长的培养皿记数.若片状菌
苔大小不到培养皿的一半,其余一半分布均匀,将此一半计数@2.
2)选择平均菌落数在30~300之间的平板.只有一个符合此范围时,以该平均菌落数@稀释倍数.有两
个在30~300之间时,按两者菌落总数比值决定,比值小于2,取平均;比值大于2,取较小的菌落数.
3)若所有稀释度的平均菌落数均大于300,则应按稀释度最高的平均菌落数@稀释倍数.
4)若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则按稀释度的平均数@倍数.
5)若所有稀释度的平均菌落数均不在30~300之间,则以最近30或300的平均菌落数@稀释倍数.

微生物的含量能否反应水的营养化程度？

能

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