㈠ 细胞水平及分子水平的生物测定是怎样的
传统的生物测定方法虽然所得数据较为可靠,但是往往所需要的时间较多,且供试药剂的需求量较大,现在新农药的筛选,供试化合物动辄几万个甚至更多,传统的方法根本无法满足数量巨大的筛选要求。基于以上原因,近年来,许多新的生物测定方法层出不穷。
(1)预期作用靶标抑制活性的测定。随着农药作用于昆虫的靶标部位、昆虫体内农药的代谢解毒机制渐渐为人们认知,通过检测供试药物对靶标或代谢物质的作用,可以简化生物筛选测定的步骤与时间,这也是生物合理设计农药的重要思路。
(2)MTT法。MTT(methylthiazoletrazolium)是一种黄色水溶性四噻唑蓝,活细胞中的琥珀酸脱氢酶可使MTT分解产生紫色结晶状颗粒积于细胞内和细胞周围。其量与细胞数呈正比,也与细胞活力呈正比,但是死细胞不具有这个能力。因此,用一定浓度的药剂处理指数生长期的细胞后一段时间,加入MTT,再测出所有混合液体的吸光值,可推出细胞的活力,衡量供试药剂的毒力大小。
一般步骤是首先培养昆虫细胞系,如棉铃虫细胞系、烟草夜蛾细胞系,取对数生长期细胞,置96孔微量滴定板中培养一定时间(使细胞贴壁),然后加入待测化合物,并继续培养24h,结束培养前一定时间,向孔内加入MTT母液,培养结束后弃去上清液,再向孔内加入一定溶剂,待生成物完全溶解后,置酶联检测仪上于570nm处读取吸光度值,通过细胞死亡率高低初步判断化合物有无活性,还可设置系列样品浓度,最终求出LD50/LC50值,以判断活性大小。
MTT法需要专门的无菌操作台及相配套的细胞培养设备,成本较高。但是,此法对药剂所需要的剂量少,能很好的满足现在高通量筛选等筛选技术的要求。
(3)生物传感器。生物传感器是一种以生物的部分活性物质作为敏感部件,结合物理化学分析仪器,对特定种类化学物质或生物活性物质具有选择性和可反应的分析装置。其中关键技术原理是传感器的生物敏感层与复杂样品中特定的目标分析物之间(如酶与底物、抗体与抗原、外源凝集素与糖、核酸与互补片段之间)的识别反应会产生一些物理化学信号(如光热、声音、颜色、电化学)的变化,这些变化通过不同原理的转换器(如光敏管压电装置、光极光敏电阻、离子选择性电极等)转换成第二信号(通常为电信号),经放大后显示或记录。
生物传感器按照识别元件可分为三类:基于分子(酶、抗原或抗体、受体、核酸、脂质体等)的传感器、基于细胞的传感器和基于组织切片的传感器。就敏感元件而言,前者是固定化的生物体成分,后两者是生物体本身。基于分子的生物传感器具有高度选择性和敏感性,只对一靶分子有响应。正因为这种高度选择性,可能会使某些具有相同功能的相关分子检测不到。而将活细胞作为探测单元,可以检测到许多未知的物质。目前生物传感器主要用于环境监测(生化武器、地下水污染等)、药物筛选、新药开发和基础神经学等研究,在农药领域的应用正在起步。
例如测定昆虫电生理反应。其原理是昆虫产生拒食行为与药剂刺激昆虫的味觉感受器如中栓锥感受器有一定的相关性,用供试药液刺激昆虫的中栓锥感受器,同时,将电极连接该感受器,通过电子设备接受并放大感受器发出的脉冲信号,用示波器或记录器记录这些信号,或直接输入电脑通过特定的处理软件对信号进行分析,判断活性的有无或大小。华南农业大学曾就炔类化合物和川楝素对亚洲玉米螟拒食活性与电生理反应做了相关的研究工作。
(4)生物芯片。生物芯片(biochip)技术,采用光导原位合成或微量点样等方法,将大量生物大分子,如核酸片段、多肽分子甚至组织切片、细胞等生物样品有序地固化于支持物(如玻片、硅片、聚丙烯酰胺凝胶、尼龙膜等载体)的表面,组成密集二维分子排列,然后与已标记的待测生物样品中靶分子杂交,通过特定的仪器,如激光共聚焦扫描或电荷耦联摄影像机(CCD)对杂交信号的强度进行快速、并行、高效地检测分析,从而判断样品中靶分子数量。
目前,生物芯片包括基因芯片、蛋白质芯片、组织芯片等。在已知的防治昆虫靶标中,可以将多种害虫的细胞、作用靶标或核酸片断同时制作在同一生物芯片上,以供药物的筛选。芯片技术具有高通量、大规模、平行性等特点,可以进行新药的筛选,也可采用生物芯片技术来寻找潜在药物靶标。用芯片做大规模的筛选研究可以省略大量的动物试验,缩短药物筛选所用时间。
㈡ 微生物计数方法有哪些我想知道详细的操作步骤
微生物的显微直接计数法
一、实验目的
了解血球计数板的构造、计数原理和计数方法,掌握显微镜下直接计数的技能。
二、实验原理
测定微生物细胞数量的方法很多,通常采用的有显微直接计数法和平板计数法。
显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液,如有杂菌或杂质,常不易分辨。菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板,一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽(Petrof Hausser)细菌计数板。两种计数板的原理和部件相同,只是细菌计数板较薄,可以使用油镜观察。而血球计数板较厚,不能使用油镜,计数板下部的细菌不易看清。
血球计数板是一块特制的厚型载玻片,载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间的平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各有一个计数区(图21-1),计数区的刻度有两种:一种是计数区分为16个大方格(大方格用三线隔开),而每个大方格又分成25个小方格;另一种是一个计数区分成25个大方格(大方格之间用双线分开),而每个大方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造,它们都有一个共同特点,即计数区都由400个小方格组成。
计数区边长为1mm,则计数区的面积为l mm2,每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后,计数区的高度为0.1mm,所以每个计数区的体积为0.1mm3,每个小方格的体积为1/4000mm3。
使用血球计数板计数时,先要测定每个小方格中微生物的数量,再换算成每毫升菌液(或每克样品)中微生物细胞的数量。
已知:1mm3体积=10 mm×10 mm×10 mm= 1000mm3
所以:1mm3体积应含有小方格数为1000mm3/1/4000mm3=4×106个小方格,即系数K=4×106 。
因此:每ml菌悬液中含有细胞数= 每个小格中细胞平均数(N)×系数(K)×菌液稀释倍数(d)
三、实验器材
1.活材料:酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)斜面或培养液。
2.器材:显微镜、血球计数板、盖玻片(22mm×22mm)、吸水纸、计数器、滴管、擦镜纸。
四、实验方法
1.视待测菌悬液浓度,加无菌水适当稀释(斜面一般稀释到10-2),以每小格的菌数可数为度。
2.取洁净的血球计数板一块,在计数区上盖上一块盖玻片。
3.将酵母菌悬液摇匀,用滴管吸取少许,从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴(不宜过多),让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区,勿使气泡产生,并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上,不要使计数区两边平台沾上菌悬液,以免加盖盖玻片后,造成计数区深度的升高。然后加盖盖玻片(勿使产生气泡)。4.静置片刻,将血球计数板置载物台上夹稳,先在低倍镜下找到计数区后,再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近,观察时应减弱光照的强度。
5.计数时若计数区是由16个大方格组成,按对角线方位,数左上、左下、右上、右下的4个大方格(即100小格)的菌数。如果是25个大方格组成的计数区,除数上述四个大方格外,还需数中央l个大方格的菌数(即80个小格)。如菌体位于大方格的双线上,计数时则数上线不数下线,数左线不数右线,以减少误差。
6.对于出芽的酵母菌,芽体达到母细胞大小一半时,即可作为两个菌体计算。每个样品重复计数2—3次(每次数值不应相差过大,否则应重新操作),求出每一个小格中细胞平均数(N),按公式计算出每ml(g)菌悬液所含酵母菌细胞数量。
7.测数完毕,取下盖玻片,用水将血球计数板冲洗干净,切勿用硬物洗刷或抹擦,以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机吹干,放入盒内保存。
五、实验作业:
将实验结果填入下表中:
计数次数 每个大方格菌数 稀 释
倍 数 试管斜面中的总菌数 平均值
1 2 3 4 5
第一次
第二次
㈢ 细胞免疫功能检测常用有哪几种方法
细胞免疫(CMⅠ)是由多种细胞相互作用的结果。免疫细胞间相互作用导致多种细胞因子的释放。因此细胞功能测定不仅涉及T细胞的数量和功能与包括各类因子活性测定,因此评价机体的细胞免疫功能不仅程序复杂,且很难标准化。
一、迟发型过敏反应的体外检测方法
皮肤试验和接触性过敏的诱发是检测迟发型过敏反应(DTH)的两种常用方法。皮肤试验中诱发对曾经使病人致敏的抗原的再次应答,而接触性过敏是测试受者对从未接触过的物质发生致敏的能力。
1.皮肤试验 用皮肤试验诊断DTH,常用的抗原有结核菌纯蛋白衍生物(PPD)、腮腺炎病毒、念珠菌素等,在人类试验时在前臂皮内注射少量可溶性抗原,24~48小后,测量红肿硬结的大小,硬结直径大于10mm即被看作为阳性。表明受试者对该病原菌有了一定的细胞免疫能力,若皮试无反应,可用更高浓度的抗原重复试验,若仍无反应即为阴性,需排除皮试技术误差,也可能受试者从未接触过此抗原,也可能由于细胞免疫功能缺损,或由于细胞免疫功能缺损,或由于严重感染(麻疹、慢性播散性结核)造成的无反应性。
2.接触性过敏常应用低分子量化合物如二硝基氯苯(DNCB)诱生接触性过敏。化合物与皮肤蛋白质结合而导至DTH反应。在动物试验时,初次皮肤上涂抹DNCB后间隔7~10天再激发刺激,则皮肤出现即为阳性。此试验人类已不使用。
二、细胞免疫的体外检测方法
体外检测淋巴细胞的数量和功能,最易采集的是血标本,首先需分离或纯化淋巴细胞,一般使用萄聚糖-泛影葡胺配成比重为1.077的淋巴细胞分层液,当将血液重叠于淋巴细胞分层液之上离心时,由于红细胞(1.092)、多形核白细胞(1.090)、淋巴细胞(1.070)的比重不同而相互分开。淋巴细胞和单核细胞在血浆和分层液交界处形成一薄层。仔细分出这一薄层的细胞,其中淋巴细胞占80%,单核细胞占20%,淋巴细胞中T细胞占80%,B细胞占4%~10%,其作为非DT、非B细胞。
1.T细胞计数
(1)E花环法:人类T细胞表面有SRBC受体(CD2)能与SRBC结合形成玫瑰花环样结构,将经分层液分离现的RBM悬液与SRBC在含有血清的平衡盐水中混合,经37℃培养5~10分钟放4℃过夜,取细胞悬计数,外周血淋巴细胞中约70%~80%淋巴细胞结成花环即为T细胞。目前此方法已用来分离T细胞,而不用做T细胞计数。
(2)用单克隆抗体计数T细胞:将人的PBM分成三等份,分别用小鼠抗人CD3、CD4和CD8的单克隆抗体作第一抗体与细胞结合,再用FITC标记的兔抗小鼠IgG抗体作第二抗体进行间接免疫荧光染色,在荧光显微镜下或流式细胞仪检测结果,在PBM中被CD3抗体染上荧光的细胞称为CD3 细胞即总T细胞。正常人在PBM中T细胞占70%~80%。正常人的CD4 细胞和CD8 细胞之和应与CD3 细胞数一致。CD4 细胞与CD8 细胞的比值正常人约为2/1而艾滋病患者则比值小于1.7。
2.T细胞活化试验 T细胞能被非特异的物质称为有丝分裂原所激活而向淋巴母细胞转化。T细胞转化过程可伴随有DNA、RNA、蛋白质的合成增加,最图导致细胞分裂。在光学显微镜下可计数转化后的淋巴细胞数,也可用氚标记的胸腺嘧啶核苷(3HTdR)掺入正在分裂的淋巴细胞,用液闪测定仪检查掺入正在分裂的淋巴细胞,用液测量仪检查掺入的3H-TdR的多少确定淋巴细胞转化率。最近有一种不用同位素,又可用仪器测量的淋巴细胞增殖反应的检查法,称为MTT检测法,MTT是一种甲氮唑盐,它是细胞线粒体脱氢酶的底物,细胞内的酶可将MTT分解产生蓝黑色甲(fromazan)产物。该产物的多少与活性细胞数正相关。结果可用酶标检测仪(595mm)测量汇丰银行密度,做为MTT法的检查指标。此法的结果与3H-TdR掺入法平行,并能反应试验中的活细胞数。
3.细胞毒试验 TC细胞、NK细胞、LAK细胞、TIL细胞对其靶细胞有直接的细胞毒(杀伤)作用。常用的栓测细胞毒效应的方法是51Cr-Na2Cro4盐水溶液与靶细胞胞混合,于37℃培养1小时左右,51Cr即可进入靶细胞,与胞浆蛋白结合,洗去游离的51Cr后,即可得到51Cr标记的靶细胞,将待检细胞毒性的细胞与51Cr标记的靶细胞混合(比例约为50:1或100:1)靶细胞被杀伤越多,释放到上清液中的液游离的51Cr越多,且不能被其他细胞吸收。用γ射线测量仪检测上清液中的cpm值,即可计算出待检细胞杀伤活性的高低。
细胞毒试验检测Tc细胞效应功能是否健全,及经IgG介导的ADCC效应,或NK细胞在抗肿瘤免疫中的作用是有意义的。
4.混合淋巴细胞的反应(MIR) 是体外研究T细胞的较好的方法,双向MLR常被用来筛选骨髓移植的供体。来自不同供体的淋巴细胞分别与病人的淋巴细胞混合培养4~5天,在最后8小时掺入51TdR掺入法测T细胞的反应性。或用细胞毒法观察受刺激的T细胞与活的靶细胞混合(靶细胞来自与刺激细胞相同的个体)如果T细胞受刺激后产生了细胞毒T细胞,可杀死活的细胞,根据靶细胞释放51Cr的多少算出T细胞移动抑制因子)和LIF(白细胞移动抑制因子)来评估细胞免疫功能。近年来应用测定IL-2的免疫酶技术,操作简单,并能定量以取代了MIF和LIF的测定。单个核细胞与分裂原一起培养24小时,然后测定清液中的IL-2活性。在细胞免疫功能缺损时,特别是AIDS病人,IL-2分泌明显降低。而有些疾病,如多发性硬化、类风湿关节炎、移植排斥反应等病人体内血清中IL-2水平升高,表明病人T细胞活性增高。发生移植排斥反应的病人尿中IL-2也可升高。
也可用酶联免疫吸附试验测定各种体液中活化的T细胞脱落的IL-2受体(CD25),一般来说IL-2的水平和IL-2受体水平是平行的,IL-2和IL-2受体的检测可用于对某些疾病的监测,如移杆排斥、自身免疫病以及接受免疫抑制治疗的病人。
对体外培养的细胞进行细胞因子产生能力检测是检查细胞培养上清液中细胞因子的生物活性或抗原性。现已可用核酸杂交技术,即从组织中或细胞中提取RNA,与同位素或酶标记的该种细胞因子的cDNA探针作分子杂交试验,即印迹(dot blotting)或Northern印迹,若查出有某种因子的mRNA存在,即说明该细胞在所处培养条件下有产生某种细胞因子的能力。
㈣ mtt法和cck法是否适用于所有细胞进行细胞活性的检测
是。检测细胞存活和生长的方法。
MTT法又称MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲臜,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。
CCK-8法:是MTT的改善,过程简略,中心不需求吸出孔内的培育基,这么就减小了差错,别的CCK-8反响时间也短,最短1个小时就够了,特别适合做急性效果。还有CCK-8对细胞成长没有影响,测完细胞活性后,去掉含CCK-8的培育基,用新鲜培育基能够持续培育,并且还能够持续做其它目标的检查。MTT就不能。
国产分装的CCK-8试剂盒在质量稳定性上有不足。而原产于国内实验室的CCK-8试剂盒有些具有较好的检测结果,在批次之间的稳定性上较难控制。至于原装进口供应CCK-8试剂盒的进口品牌并不多,就连Abcam、Thermo,Sigma等等几个品牌都不能够提供CCK-8试剂盒,而其它品牌在性价比上远逊于Abbkine产品。
作为Abbkine品牌旗下首款细胞分析旗舰产品,Cell Counting Kit (CCK-8),Abbkine研发工程师为其倾注了大量的投入,不断摸索优化最佳的配方,每一份努力只为让科研工作者更加简单,高效,稳定地获取珍贵的科研数据。
㈤ 检测细胞增殖的方法有哪些
一、MTT比色:
MTT比色是一种目前被广泛采用的检测细胞生长和存活的方法,其原理是外源性MTT(四唑盐)可被活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原成难溶的蓝紫色结晶物并沉淀在细胞中,而死细胞无此功能,DMSO(二甲基亚砜)能溶解细胞中的紫色结晶物,用酶联检测仪在490nm波长处检测其光密度值,可间接反映活细胞数量。在一定范围内,MTT结晶物形成的量与细胞数成正比,此方法已广泛用于检测细胞活力、观察细胞生长等方面,具有灵敏度高、重复性好、操作简便、经济、快速、易自动化、无放射性污染等特点,与细胞计数有良好的相关性。
二、rdU标记法
1.细胞以1.5×105/ml细胞数接种于直径35ml培养皿中(内放置一盖玻片),培养1天,用含0.4% FCS培养液同步化3天,使绝大多数细胞处于G0期。
2.终止细胞培养前,加入BrdU(终浓度为30μg/L),37℃,孵育40min。
3.弃培养液,玻片用PBS洗涤3次。
4.甲醇/醋酸固定10min。
5.经固定的玻片空气干燥,0.3%H2O2-甲醇30min灭活内源性氧化酶。
6.5%正常兔血清封闭。
7.甲酰胺100℃,5min变性核酸。
8.冰浴冷却后PBS洗涤,加1抗即抗小鼠BrdU单抗(工作浓度1:50),阴性对照加PBS或血清。
9.按ABC法进行检测,苏木素或伊红衬染,在显微镜下随机计数10个高倍视野中细胞总数及BrdU阳性细胞数,计算标记指数(LI)。
三、结晶紫法
1.体外细胞培养结束后,去培养液,加入11%的戊二醛固定,置于振荡器上摇20min。
2.固定细胞用去离子水洗涤至戊二醛液洗净。
3.置空气或烘箱37℃彻底干燥。
4.加入0.1%的结晶紫液对细胞染色,振摇30min。
5.用蒸馏水洗涤,至多余的结晶紫液冲洗干净。
6.置空气或37℃烘箱中彻底干燥。
7.加入10%的乙酸对细胞吸收的结晶紫进行提取。
8.1h后在酶标仪上测定光吸收度,波长595nm。
四、酸性磷酸酶法
1.96孔细胞培养板中培养细胞,去培养液。用0.01mol/L PBS洗涤1次(如为悬浮细胞则用离心洗涤)。
2.去洗涤液后加入磷酸酶底物100μl/孔。
3.37℃,孵育1~4h。
4.加入0.1mol/L氢氧化钠10μl/孔。
5.在多孔酶标仪上405nm处测光吸收度,将细胞培养板其中不含细胞,同样处理过的一孔作为空白对照,所测的每孔光吸收度可间接反应每孔中的细胞数。如在同样条件下作一细胞数的系列标准对照,以细胞数为X轴,光吸收度为Y轴,可作直线回归,可推算出每孔中的细胞。
㈥ 细胞活力测定常用的简便方法
又称MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。
缺点:由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水,需被溶解后才能检测。这不仅使工作量增加,也会对实验结果的准确性产生影响,而且溶解甲瓒的有机溶剂对实验者也有损害。
㈦ 细胞活力测定常用的简便方法是
MTT法又称MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。
缺点:由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水,需被溶解后才能检测。这不仅使工作量增加,也会对实验结果的准确性产生影响,而且溶解甲瓒的有机溶剂对实验者也有损害。
细胞活力常用百分比表示,活力的大小对试验结果有很大影响。细胞活力的测定有许多方法,最简便常用的方法是台盼蓝(trypanblue)染色法。台盼蓝又称锥蓝,是一种阴离子型染料,这种染料不能透过活细胞正常完整的细胞膜,故活细胞不着色,但死亡细胞的细胞膜通透性增加,可使染料通过细胞膜进入细胞内,使死细胞着色呈蓝色。
㈧ 常用的细胞因子检测方法有哪些
(1)生物学检测法:又称生物活性检测,是根据细胞因子特定的生物活性而设计的检测法。生物活性检测法又可分为: 1、细胞增殖法; 2、靶细胞杀伤法; 3、细胞因子诱导的产物分析法; 4、细胞病变抑制法。
(2)免疫学检测法:细胞因子均为蛋白或多肽,具有较强的抗原性,可利用抗原抗体特异性反应的特性,用免疫学技术定量检测细胞因子,常用的方法包括ELlSA、RlA及免疫印迹法
(3)分子生物学方法:目前公认的细胞因子的基因均已克隆化,较容易地得到某一细胞因子cDNA探针或根据已知的核苷酸序列人工合成寡聚核苷酸探针。常使用斑点杂交、Northernblot、逆转录PCR,细胞或组织原位杂交等。具有灵敏、快速等优点,甚至从l~10个细胞中就可检出其中的特异mRNA
㈨ 检测体细胞数有哪些方法
目前获得世界各国普遍承认和使用的体细胞计数方法概括起来主要分为显微镜人工计数法和自动计数仪计数法。
1、显微人工计数:体细胞计数的国际标准方法为显微镜镜检法,此法准确,大部分的快速检测方法均用此法作校准,但在制备样品、计数镜检时费时、费力,不适合作为现场快速和大样品量时使用。
2、自动计数仪计数:目前,在乳品生产中牛乳体细胞计数主要是依靠大型的体细胞仪完成的,体细胞自动计数分析研究主要有以下两个方面:
(1)流式细胞分析法.具代表性的产品为美国Bently计数仪,福斯Fossomatic 5000,荷兰Delta体细胞计数仪等。该法检测速度快,适合乳品集中检测,但仪器成本高,不能够保留样本,且需要熟练人工操作,经常性校正监测等。
(2)另一方面是利用数字图像分析系统,典型产品如韩国C-reader ADAM体细胞计数仪,该法数据准确,排除人为因素影响。由于该方法是基于标准镜检法的一种方法,所以其在韩国已经使用该种方法代替标准法对大型自动仪器进行校正。华诚睿光的牛博士Ⅱ和牛博士Ⅲ就是这种检测方法的典型代表。
㈩ 细胞活性检测的方法有多少种
细胞活性测定方法有台盼蓝染色法、克隆(集落)形成法、 3H 放射性同位素掺入法、 MTT 法等。其中 MTT 法以其快速简便,不需要特殊检测仪器、无放射性同位素、适合大批量检测的特点而得到广泛的应用。但 MTT 法形成的 Formazan 为水不溶性的,需要加有机溶剂溶解,由于在去上清操作时会有可能带走小部分的 Formazan ,故有时重复性略差。为了解决这个问题,研究人员又开发了很多种水溶性的四氮唑盐类:如 XTT 、 CCK-8 ( WST-8 )等。