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胞质DNA检测方法

发布时间:2022-06-14 08:37:10

‘壹’ DNA检测的方法都有哪些

DNA检测
技术有很多,主要分为定性和定量方法。给你举几个:1,分子杂交技术,(包括southern杂交,northern杂交,基因芯片等)分子杂交分析的基本原理是基于DNA探针检测变性而且固定在硝酸纤维素膜上的宿主细胞DNA。这些探针可以不依赖宿主细胞DNA来制备,例如用随机引物制备探针。探针上标记酶﹑生物素﹑放射性同位素﹑地高辛(Dig)等。由于地高辛标记核酸探针,操作方便、灵敏度高,已标记的探针在4℃贮存可达两年之久,方便随时应用,所以现在常采用地高辛标记核酸探针,用光标记法将光敏Dig标记到探针上,制成光敏-Dig-核酸探针,再与固定在硝酸膜上的靶核酸进行靶DNA分子杂交,使之与抗Dig-碱性磷酸酶结合,最后可用不同的检测方式进行检测,
发光检测
和显色检测均可,灵敏度可达10pg以下2,基于DNA结合蛋白的方法Threshold®
Immunoassay分析系统是基于两种DNA序列非特异性蛋白,单链DNA(ssDNA)结合蛋白(SSB)和抗ssDNA
的单抗。检测的基本过程是当生物素—DNA单链结合蛋白和尿素酶—抗ssDNA
的单抗与变性的宿主细胞DNA结合最终形成复合物,通过亲合素将此复合物连接到生物素—硝酸纤维素膜,在通过洗涤所有非特异性的被洗脱掉,最后放于有
尿素溶液
的读数仪,尿素酶催化尿素分解成NH3和CO2
导致PH值发生变化,读数仪根据PH值的变化换算成DNA的量,从而达到检测残余DNA含量的目的。3,PCR法,其中以实时定量PCR法最为突出荧光定量
PCR是基于PCR扩增时,在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,产物的增加可以通过荧光信号指示,通过实时监控PCR体系中的荧光信号,对样本中初始模板进行定量分析。定量PCR可实时检测产物量,通过加入已知浓度的
标准样品
绘制标准曲线,然后根据待测样品在标准曲线中的位置推算初始模板的浓度,从而达到检测残余DNA含量的目的。此外,对DNA的定量技术也有很多,可以看下这篇文章《核酸定量技术及其在生物检测中的应用》

‘贰’ DNA损伤有什么检测方法

DNA损伤修复-检测方法
大部分DNA损伤修复都依赖于DNA的修复合成,所以对修复合成的测定常用来作为DNA修复的检测方法。常用的有以下几种:
放射自显影法
在细胞培养物中加入氚标记的胸腺嘧啶核苷等放射源,用放射自显影方法计数银颗粒数来测定修复合成过程中参入到DNA分子中的量。
液体闪烁计数法
用液体闪烁计数器测定培养物中的放射源因修复合成而参入到DNA分子中的量。这一方法适用于大批量样本。
超速离心法
一种应用比较广泛的方法,可应用于切除修复、复制后修复及链断裂修复方式的检测。一般是用氚标记溴脱氧尿嘧啶核苷等参入到修复合成的DNA分子中去以改变DNA分子的重量(BrdU的分子量比尿嘧啶核苷大),通过超速离心可以从沉降系数不同的各组分中收集修复合成中参入量不同的DNA片断,然后分别测定其放射性的强度来判断修复合成的多少。
病毒宿主细胞复活法
以SV40病毒、腺病毒、疱疹病毒、噬菌体等感染培养的人体细胞或细菌,然后以紫外线等处理以造成病毒DNA分子的损伤,因为病毒DNA分子损伤的修复是靠宿主细胞的修复酶系统,所以受损伤的病毒能否继续生存繁殖可间接地反映宿主细胞的修复功能。
姐妹染色单体互换(SCE)法
姐妹染色单体互换率的检测也能反映一部分DNA修复功能。人类中的某些先天性DNA修复缺陷疾病如布卢姆氏综合征患者的自发SCE显着增高;另一些如着色性干皮病则诱发SCE增高。这是由于DNA修复功能的缺陷导致染色体稳定性减弱所致。

‘叁’ 检测DNA 有那些方法

甲基绿 或者 二苯胺试剂 DNA探针

‘肆’ 如何检测dna,rna及蛋白质

1.rna在细胞核处由dna转录形成,不是双螺旋,是单链
2.腺嘌呤
尿嘧啶
鸟嘌呤
胞嘧啶
dna中没有尿嘧啶有胸腺嘧啶,rna的组成是核糖核酸,区别是其中的五碳糖是不脱氧的
3.rna有mrna,作用是传递密码子,trna,作用是运载氨基酸,rrna,作用是参与形成核糖体
4.dna在dna解旋酶的作用下开始解旋,然后游离的核糖核苷酸与dna的模板链根据碱基互补配对原则合成mrna,该rna从细胞核中释放,到细胞质中
,与核糖体和trna合成蛋白质
5这个我没有研究过

‘伍’ 用什么方法可检测到细胞有丝分裂各阶段细胞核中DNA和细胞质中蛋白质含量变化

(1)可以利用放射性标记法,检测细胞有丝分裂各阶段细胞核中DNA和细胞质中蛋白质含量变化。
DNA,可以用3H标记的胸腺嘧啶脱氧核苷酸来显示其含量的变化;
蛋白质,可以用35S标记的甲硫氨酸或者半胱氨酸来显示其含量的变化。

(2)可以用流式细胞分选仪来测定细胞有丝分裂各阶段细胞核中DNA和细胞质中蛋白质含量变化。
这种方法,简便、快速、高效。

细胞核中染色体的形成是在细胞分裂期的中期阶段完成的。

细胞分裂过程中核糖体功能比较活跃的时期是分裂间期(主要是分裂间期的G1期,S期和G2期也会合成少量的蛋白质)。

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若还有问题,可以在线交流。因为补充的问题,可能不会及时看到。

‘陆’ 检测DNA和RNA检测方法有什么区别

您好!检测DNA的方法有:1.光密度测定。2.琼脂糖电泳凝胶检测法。3。二苯胺法。
检测RNA的方法有:1.光密度测定。2.苔黒酚法。
主要的嘧啶和嘌呤具有共轭双键,使碱基,核苷,核苷酸和核酸在240-290nm的紫外波段有一段强烈的吸收峰,因此核酸具有紫外吸收特性,在260nm,处是最大的紫外光吸收值,根据朗波-比尔光吸收定律来计算出核酸含量。

‘柒’ DNA质量检测相关方法,及效果

对于基因组DNA质量检测主要包括:基因组DNA片段大小的确定,基因组DNA浓度的测定,基因组DNA纯度的测定三方面。
用到的技术方法有:琼脂糖凝胶电泳(确定片段大小),使用紫外分光光度计测定基因组DNA溶液的OD值(浓度和纯度的测定,OD260/OD280应该在1.8左右,高了表明有RNA污染,低了表明有蛋白质污染)
再看看别人怎么说的。

‘捌’ DNA检测的原理、方法和手段。

要看你是要测DNA的序列还是仅仅检测有没有DNA。如果要检测DNA的存在就用二苯胺试剂在水浴加热的条件下观察到蓝色现象(原理是DNA遇二苯胺试剂在水浴加热的条件呈蓝色),如果要检测DNA的序列就通过DNA分子杂交技术对从生物细胞内提取的DNA分子进行测序(原理是DNA的碱基互补配对原则),如果是检测DNA在细胞中的位置就用甲基绿吡罗红滴一滴在显微镜下观察观察到细胞核呈绿色,细胞核外有部分点为红色(原理是甲基绿好吡罗红对DNA和RNA的亲和力不同,甲基绿对DNA亲和力强吡罗红对RNA的亲和力强)

‘玖’ dna检测复杂吗,有没有简单点的方法

基因突变检测方法:
(1) PCR-SSCP法是在非这性聚丙烯酰胺凝胶上,短的单链DNA和RNA分子依其大街基序列不同而形成不同构象,一个碱基的改变将影响其构象而导致其在凝胶上的移动速度改变。其基本原理为单链DNA在中性条件下会形成二级结构,这种二级结构依赖于其碱基组成,即使一个碱基的不同,也会形成不同的二级结构而出刺同的迁移率。由于该法简单快速,因而被广泛用于未知基因突变的检测。
(2)异源双链分析法(HA) HA法直接在变性凝胶上分离杂交的突变型一野生型DNA双链。由于突变和野生型DNA形成的异源杂合双链DNA在其错配处会形成一突起,在非变性凝胶中电泳时,会产生与相应的同源双DNA不同的迁移率。该法与SSCP相似,所不同的是SSCP分离的是单链DNA,HA法分离的是双链DNA,也只适合于小片段的分析。
(3)突变体富集PCR法(mutant-enriched PCR)本法的基本原理是利用ras基因家族某个密码子部位存在已知的限制性内切酶位点,如K-ras基因第12密码子的BstNI位点,第13密古巴子有BgⅠⅡ位点。用链续二次的巢式PCR来扩增包括K-ras第12、13密码子的DNA片段,在两次扩增反应之间用相应的内切酶消化扩增的DNA片段,野生型因被酶切而不能进入第二次PCR扩增,而突变型则能完整进入第二次PCR扩增并得到产物的富集。

‘拾’ 通过DNA酶处理叶绿体如何发现细胞质DNA的存在

显微镜下观察到叶绿体基质中有细纤维存在,用DNA酶处理后细纤维就消失了,证明细纤维就是叶绿体的DNA。后来用生物化学的方法证明了线粒体也含有DNA。并把这两种DNA统称为细胞质DNA

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