常用于肽链碳端分析的方法有哪些

‘壹’ 蛋白质由n端走向c端是什么意思

蛋白质由n端走向c端是指蛋白质生物合成过程中的氨基酸排列走向。

N端是“氮返正”，是—NH₂，读氨基；

氨基（Amino）是有机化学中的基本碱基，所有含有氨基的有机物都有一定碱的特性，由一个氮原子和两个氢原子组成。

C端是“碳”，是—COOH，读羧基。

羧基（carboxyl）是有机化学中的基本化学基，所有的含有羧基的有机酸物质都可以叫羧酸，由一个碳原子、两个氧原子漏伏悔和一个氢原子组成，化学式-COOH。

多肽合成是一个固相合成顺序一般从N端（氨基端）向 C端（羧基端）合成。过去的多肽合成是在溶液中进行的称为液相合成法。

(1)常用于肽链碳端分析的方法有哪些扩展阅读：

多肽合成技术

1963年，Merrifield首次提出了固相多肽合成方法(SPPS)，由于其合成方便，迅速，成为多肽合成的首选方法，而且带来了多肽有机合成上的一厅顷次革命，并成为了一支独立的学科——固相有机合成，固相合成的发明同时促进了肽合成的自动化。世界上第一台真正意义上的多肽合成仪出现在1980年代初期。

液相合成

基于将单个N-α保护氨基酸反复加到生长的氨基成份上，合成一步步地进行， 通常从合成链的C端氨基酸开始，接着的单个氨基酸的连接通过用DCC，混合炭酐， 或N-carboxy酐方法实现。

Carbodiimide方法包括用DCC做连接剂连接N-和C-保护氨基酸。重要的是，这种连接试剂促接N保护氨基酸自己炭基和C保护氨基酸自由氨基间的缩水，形成肽链。 然而，此方法因其导致消旋的副反应，或在强碱存在时形成5(4H)-oxaylones和N-acylurea而受到影响。

庆幸地是， 这些副反应能最小化，但是还不能完全消除。方法是加入象HoSu或HoBT这样的连接催化剂， 此外，此方法也可用于合成N保护氨基酸的活性酯衍生物。依次产生的活性酯将自发与任何别的C保护氨基酸或肽反应形成新的肽

参考资料来源：网络-多肽合成

‘贰’ 测定多肽链C末端的氨基酸试剂

1、氢硼化锂还原c端为氨基醇，肽链水解后层析分析
2、羧肽酶作用c端
3、肼解法：（肼试剂）肼解后，一条肽链只有一个c端氨基酸游离下来。将游离下来的c端氨基酸与DNFB（二硝基氟苯）反应生成DNP—氨基酸（用以层析分析），剩余肼化肽链部分与苯甲醛反应生成不溶于水的二亚苄衍生物。

‘叁’ 肽链的末端可以用那四种方法测定,而和什么法则是测定C末端氨基酸最常用的方法

常用于N－末端的测定方法：1. DNFP法（桑格反应） 2. PITC法（艾德曼反应） 3. 氨肽酶法（专一性的从氨基末端将肽键切断）
常用于C－末端测定方法： 1. 肼解法 2. 还原法（硼氢化锂） 3. 羧肽酶法（专一性的从羧基末端将肽键切断）
肼解法是测定C末端氨基酸最常用的方法

‘肆’ 常用于蛋白质多肽链N端.C端测定的方法有几种

(1)N-末端测定
A.二硝基氟苯法(FDNB,DNFB)：1945年Sanger提出此方法,是他的重要贡献之一.
DNP-氨基酸用有机溶剂抽提迟扰后码困旦,通过层析位置可鉴定它是何种氨基酸.Sanger用此方法测定了胰岛素的N末端分别为甘氨酸及苯丙氨酸.
B.氰酸盐法：1963年Stank及Smyth介绍了一种测定N末端的新方法,步骤如下：
由于乙内酰脲氨基酸不带电荷,因此可用离子交换层析法将它与游离氨基酸分开,分离所得的乙内酰脲氨基酸再被盐酸水解,重新生成游离的氨基酸,鉴别此氨基酸即可了解N-末端是何种氨基酸.
C.二甲基氨基萘磺酰氯法：1956年Hartley等报告了一种测定N-末端的灵敏方法,采用1-二甲基氨基萘-5-磺酰氯,简称丹磺酰氯.它与游离氨基末端作用,方法类似于Sanger的DNFB法,产物是磺酰胺衍生物.
丹尺桥磺酰链酸具有强烈的黄色荧光.此法优点为灵敏性较高(比FDNB法提高100倍,样品量小于1毫微克分子)及丹磺酰氨基酸稳定性较高(对酸水解稳定性较DNP氨基酸高),可用纸电泳或聚酰胺薄膜层析鉴定.
(2)C-末端分析
A.肼解法：这是测定C-末端最常用的方法.将多肽溶于无水肼中,100℃下进行反应,结果羧基末端氨基酸以游离氨基酸状释放,而其余肽链部分与肼生成氨基酸肼.
这样羧基末端氨基酸可以采用抽提或离子交换层析的方法将其分出而进行分析.如果羧基末端氨基酸侧链是带有酰胺如天冬酰胺和谷氨酰胺,则肼解时不能产生游离的羧基末端氨基酸.此外肼解时注意避免任何少量的水解,以免释出的氨基酸混淆末端分析.
B.羧肽酶水解法：羧肽酶可以专一性地水解羧基末端氨基酸.根据酶解的专一性不同,可区分为羧肽酶A、B和C.应用羧肽酶测定末端时,需要事先进行酶的动力学实验,以便选择合适的酶浓度及反应时间,使释放出的氨基酸主要是C末端氨基酸.

‘伍’ 蛋白质多肽链N端测定的方法及基本原理

1 多肽链的拆分。由多条多肽链组成的蛋白质分子，必须先进行拆分。几条多肽链借助非共价键连接在一起，称为寡聚蛋白质，如，血红蛋白为四聚体，烯醇化酶为二聚体；可用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍处理，即可分开多肽链(亚基).
2 测定蛋白质分子中多肽链的数目。通过测定末端氨基酸残基的摩尔数与蛋白质分子量之间的关系，即可确定多肽链的数目。
3 二硫键的断裂。几条多肽链通过二硫键交联在一起，可在8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍存在下，用过量的-巯基乙醇处理，使二硫键还原为巯基，然后用烷基化试剂保护生成的巯基，以防止它重新被氧化。
二硫键的切割与保护（元素后数字为下标）
a 过甲酸〔performic acid〕 不可逆
－CH2SO3H
b、还原＋氧化 不可逆
[ 巯基乙醇，DTT ] ＋ 碘乙酸等
－S-CH2-COOH
c、亚硫酸分解〔Sulfitolysis〕 可逆
－R1-S-S-R2 ＋ HSO3-
R1-S- + R2-S-SOH3
可以通过加入盐酸胍的方法解离多肽链之间的非共价力；应用过甲酸氧化法或巯基还原法拆分多肽链间的二硫键。
巯基（-SH）的保护4 测定每条多肽链的氨基酸组成，并计算出氨基酸成分的分子比（如右图）
5 分析多肽链的N-末端和C-末端
多肽链端基氨基酸分为两类：N-端氨基酸(amino-terminal)和C-端氨基酸(Carboxyl-terminal) 。在肽链氨基酸顺序分析中，最重要的是N-端氨基酸分析法。N末端分析法（Sanger法；Edman法；DNS-Cl；酶降解法），C末端分析法（肼解法；酶降解法；硼氢化锂法）。
6 多肽链断裂成多个肽段。可采用两种或多种不同的断裂方法将多肽样品断裂成两套或多套肽段或肽碎片，并将其分离开来。
7 测定每个肽段的氨基酸顺序
8 确定肽段在多肽链中的次序。
利用两套或多套肽段的氨基酸顺序彼此间的交错重叠，拼凑出整条多肽链的氨基酸顺序。
9 确定原多肽链中二硫键的位置
一般采用胃蛋白酶处理没有断开二硫键的多肽链，再利用双向电泳技术分离出各个肽段，用过甲酸处理后，将可能含有二硫键的肽段进行组成及顺序分析，然后同其它方法分析的肽段进行比较，确定二硫键的位置。

‘陆’ 对有机化合物的结构鉴定,除了红外光谱外,常用的还有哪些方法

核磁共振

确定分子结构有化学方法与物理方法,
化学方法是利用有机物官能团的特征反应,以确定该化合物所含官能团,还可以利用化学反应进行衍生化,通过确定衍生物的结构进一步推断原分子的结构.化学方法比较麻烦、耗时、消耗样品较多.
物理方法因所需样品量少、速度快、准确,甚至可以确定分子的三维空间结构,而显出较大的优越性,是化学方法所不能比拟的.
质谱分析：
质谱分析法是一种通过测量化学物质分子或分子碎片的质量进行分析的方法,所用的仪器称为质谱仪,所得的谱图称为质谱图.
红外光谱：
在鉴定有机化合物结构的搜册工作中,红外光谱是一种重要的手段,它可以确定有机化合物中存在何种官能团,也可以用来推测物质的纯度.分子中的原子总是处在不断地振动中,包括伸缩振动与弯曲振动,这两种振动的频率正好位于红外区.
核磁共振氢谱：
核磁共振谱学是一门发展极为迅速的科学.因为质量数为奇数的原子核,如1H、13C、15N、19F和31P的核自旋所产生的弱磁场,在强外磁场或漏谈中可以对某个衫碰特定频率的电磁波发生共振吸收,吸收频率和吸收强度可以提供分子结构的重要信息,从而发展成为核磁共振谱学.

‘柒’ 请教：氨基酸序列的测定方法

有两种方法，一是直接测序列法，常用Edman降解法，在弱碱性条件下多肽连N端氨基酸（阿尔发）与PITC反应，标记为苯氨基硫代甲酰蛋白质。肽链中的第一个肽键变弱，在无水酸的存在下发发生降解，第一个氨基酸（AA1）经过分子重排成为PTH-AA1结合层析技术即可确定氨基酸的性质。C端氨基酸残基分析，可用；羧基肽酶，肼解法；二是串联质谱测定多肽链氨基酸测序。

氨基酸（amino acid）：含有氨基和羧基的一类有机化合物的通称。生物功能大分子蛋白质的基本组成单位，是构成动物营养所需蛋白质的基本物质。是含有碱性氨基和酸性羧基的有机化合物。氨基连在α-碳上的为α-氨基酸。组成蛋白质的氨基酸均为α-氨基酸。

‘捌’ 常用于蛋白质多肽链N端.C端测定的方法有几种

N-末端分析1、二硝基氟苯法蔽肆（FDNB法）2、二甲基宏销轿氨基萘磺酰氯法（DNS-Cl法斗旁）3、异硫氰酸笨酯法（Edman法）C-末端分析1、肼解法2、还原法3、羧肽酶法

‘玖’ 常用于蛋白质多肽链N端.C端测定的方法有几种

(1)N-末端测定 A.二硝基氟苯(FDNBDNFB)：1945Sanger提重要贡献DNP-氨基酸用机溶剂抽提通层析位置鉴定何种氨基酸Sanger用测定胰岛素N末端别甘氨酸及苯丙氨酸B.氰酸盐：1963Stank及Smyth介绍种测定N末端新步骤：由于乙内酰脲氨基酸带电荷用离交换层析与游离氨基酸离所乙内酰脲氨基酸再盐酸水解重新游离氨基酸鉴别氨基酸即解N-末端何种氨基酸C.二甲基氨基萘磺酰氯：1956Hartley等报告种测定N-末端灵敏采用1-二甲基氨基萘-5-磺酰氯简称丹磺酰氯与游离氨基末端作用类似于SangerDNFB产物磺酰胺衍物丹磺酰链酸具强烈黄色荧光优点灵敏性较高(比FDNB提高100倍品量于1毫微克)及丹磺酰氨基酸稳定性较高(酸水解稳定性较DNP氨基酸高)用纸电泳或聚酰胺薄膜层析鉴定(2)C-末端析A.肼解：测定C-末端用肽溶于水肼100℃进行反应结羧基末端氨基酸游离氨基酸状释放其余肽链部与肼氨基酸肼羧基末端氨基酸采用抽提或离交换层析其进行析羧基末端氨基酸侧链带酰胺冬酰胺谷氨酰胺则肼解能产游离羧基末端氨基酸外肼解注意避免任何少量水解免释氨基酸混淆末端析B.羧肽酶水解：羧肽酶专性水解羧基末端氨基酸根据酶解专性同区羧肽酶A、BC应用羧肽酶测定末端需要事先进行酶力实验便选择合适酶浓度及反应间使释放氨基酸主要C末端氨基酸

‘拾’ 什么是N端和C端

蛋白质生物合成过程中的氨基酸排列走向。N端是“氮”，是—NH2，读氨基；C端是“碳”，是—COOH，读羧（suo,一声）基。是Dintzis等人用3H-亮氨酸作标记分析敏亩了兔网织红细胞无细胞体系中血红蛋白生物合成的过程来证明的。血红蛋白中含有较多亮氨酸。其氨基酸序列为已知。合成反应在较低温度（15度）中进行，以降低合成速度。在反应开始后的4-60分钟内，每隔一定时间取样分析。将带有标记的蛋白质分离出来，用胰蛋白酶水解肽链，用纸层析法分离水解碎片并测定所含放射性强度。从实验谈祥结果中发现，反应4分钟后，只有竣基端含有3H-亮氨酸。随着反应时间的延长，带有标记的肽段自羧基向N端延伸，到含拿搏60min时，几乎整个肽断都布满了标记物。这个实验说明多肽链的合成是从N端向C端进行的