血凝抑制试验用的什么方法

⑴ 血凝和血凝抑制试验具体怎样操作和判定结果

血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验具体操作和结果判定程序如下：
（1）材料准备
a.96孔V型微量反应板，微量移液器（配有滴头）。b.配制阿氏（Alsevers）液、鸡血红细胞悬液。c.pH7.2的0.01摩尔/升磷酸盐缓冲液（PBS）。d.高致病性禽流感病毒血凝素分型抗原和标准分型血清以及阴性血清。
（2）操作方法
①血凝（HA）试验（微量法）
a.在微量反应板的1～12孔均加入0.025毫升PBS，换滴头。
b.吸取0.025毫升抗原加入第1孔，混匀。
c.从第1孔吸取0.025毫升抗原加入第2孔，混匀后吸取0.025毫升加入第3孔，如此进行对倍稀释至第11孔，从第11孔吸取0.025毫升弃之，换滴头。
d.每孔再加入0.025毫升PBS。
e.每孔均加入0.025毫升1%（V/V）鸡红细胞悬液（将鸡红细胞悬液充分摇匀后加入）。
f.振荡混匀，在室温（20～25℃）下静置40分钟后观察结果（如果环境温度太高，可置4℃环境下1小时）。对照孔红细胞将呈明显的纽扣状沉到孔底。
g.结果判定。将板倾斜，观察红细胞有无呈泪滴状流淌。完全血凝（不流淌）的抗原或病毒最高稀释倍数代表一个血凝单位（HAU）。
②血凝抑制（HI）试验（微量法）
a.根据血凝试验结果配制4HAU的病毒抗原。以完全血凝的病毒最高稀释倍数作为终点，终点稀释倍数除以4即为含4HAU的抗原的稀释倍数。例如，如果血凝的终点滴度为1∶256，则4HAU抗原的稀释倍数应是1∶64（256除以4）。
b.在微量反应板的1～11孔加入0.025毫升PBS，第12孔加入0.05毫升PBS。
c.吸取0.025毫升血清加入第1孔内，充分混匀后吸0.025毫升于第2孔，依次对倍稀释至第10孔，从第10孔吸取0.025毫升弃去。
d.1～11孔均加入含4HAU混匀的病毒抗原液0.025毫升，室温（约20℃）静置至少30分钟。
e.每孔加入0.025毫升的鸡红细胞悬液轻轻混匀，静置约40分钟（室温约20℃，若环境温度太高可置4℃条件下1小时），对照红细胞将呈明显的纽扣状沉于孔底。
（3）结果判定
以完全抑制4个HAU抗原的血清最高稀释倍数作为HI滴度。
只有阴性对照孔血清滴度不大于2log2，阳性对照孔血清误差不超过1个滴度，试验结果才有效。HI价小于或等于3log2判定HI试验阴性；HI价等于4log2为阳性。

⑵ 简述常见的抑制血液凝固的方法及基本原理

抗凝----应用化学或物理学的方法，抑制或除去血液中的某些凝血因子以阻止血液凝固的方法。
抗凝剂----能阻止血液凝固的化学试剂。
一、枸橼酸钠
【原理】枸橼酸钠（柠檬酸钠）是枸橼酸钠的三钠盐。它能与血液中的钙离子形成可溶性的螯合物，使Ca2+失去凝血作用，从而阻止血液凝固。
【应用范围】血沉、凝血象、血小板功能检查及血液保养液。
【用量】凝血象: 109mmol/L水溶液,与血液之比为1:9；血沉: 106mmol/L水溶液,与血液之比为1:4。
二、乙二胺四乙酸盐
【原理】乙二胺四乙酸（EDTA）盐可与血液中的钙离子结合形成配位化合物，从而阻止血凝。
【应用范围】一般血液学检查和血液粘度测定。不适于凝血象及血小板功能检查。
【用量】其有效抗凝浓度为1～2mg/ml血液。血细胞分析仪用EDTA-K2作抗凝剂，用量为EDTA-K2•2H2O 1.5～2.2mg/ml血液。
三、肝素
【原理】通过与抗凝血酶Ⅲ结合，增强抗凝血酶的作用，灭活丝氨酸蛋白酶，从而可阻止凝血酶的形成和阻止血小板聚集，阻止血液凝固。
【应用范围】血细胞比容测定、血液粘度测定和多种生化分析。
用量：通常用肝素的钠盐或钾盐粉剂配成1g/L肝素水溶液。取0.5ml置小瓶中，37～50℃烘干后，能抗凝5ml血液。
四、草酸盐
草酸盐也是常用的抗凝剂，优点是溶解度大，作用原理是溶解后解离的草酸根与标本中的Ca2+形成草酸钙沉淀，使Ca2+失去凝血功能，凝血过程被阻断。

⑶ 血凝抑制试验和elisa的区别

• 血凝抑制试验

• 有血凝素(HA)的病毒能凝集人或动物红细胞，称为血凝现象，血凝现象能被相应抗体抑制称为血凝抑制试验，一种测定抗原或抗体的技术。即加入特异性抗体或特异性抗原后，使原有的血凝反应被抑制。

• 正常值

• 试验后的结果呈阴性。

• 临床意义

• 异常结果：相应抗体与病毒结合后，阻止病毒表面HA与红细胞结合，常用于正粘病毒、副粘病毒及黄病毒等的辅助诊断、流行病调查，也可用于鉴定病毒型与亚型。需要检查的人群：新生儿和孕妇者有需要，和带有相关病毒的患者，以做医疗的测定。

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• 酶联免疫吸附剂测定

• 
  

• 酶联免疫吸附测定enzyme linked immunosorbent assay（简写ELISA）指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。酶联免疫吸附测定（ELISA）为免疫学中的经典实验，本词条从定义、基本原理、分类方法、操作要点等方面对其进行了详细介绍。

⑷ 红细胞凝集试验的试验方法

血凝及血凝抑制试验
有些病毒具有凝集某种(些)动物红细胞的能力，称为病毒的血凝，利用这种特性设计的试验称血球凝集(HA)试验，以此来推测被检材料中有无病毒存在，是非特异性的，但病毒的凝集红细胞的能力可被相应的特异性抗体所抑制，即血球凝集抑制(HI)试验，具有特异性。通过HA-HI试验，可用已知血清来鉴定未知病毒，也可用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体和滴定抗体的含量。
目的要求
掌握病毒HA和HI试验的原理和基本操作方法，了解其实用价值。
材料与试剂
1. 96孔“U”形或“V”形微量反应板，50 uL定量移液器，滴头，微型振荡器。
2. 生理盐水，0.5%鸡红细胞悬液，新城疫病毒液（尿囊液或冻干疫苗液），新城疫阳性血清，被检鸡血清。
实验内容及操作方法
（一）血球凝集(HA)试验
1. 在96孔微量反应板上进行，自左至右各孔加50 uL生理盐水。
2. 于左侧第1孔加50 uL病毒液（尿囊液或冻干疫苗液），混合均匀后，吸50 uL至第2孔，依次倍比稀释至第11孔，吸弃50 uL；第12孔为红细胞对照。
3. 自右至左依次向各孔加入0.5%鸡红细胞悬液50 uL，在振荡器上振荡，室温下静置后观察结果（表4-1）。
表4-1 病毒血凝试验的操作方法（单位：uL） 孔 号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 病毒稀释度 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512 1:1024 1:2048 对照 生理盐水 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 病毒液 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 0.5%红细胞 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 弃50 结果观察 ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ +++ + + - - 4. 结果判定：从静置后10 min开始观察结果，待对照孔红细胞已沉淀即可进行结果观察。红细胞全部凝集，沉于孔底，平铺呈网状，即为100% 凝集（++++），不凝集者（-）红细胞沉于孔底呈点状。
以100% 凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价，即为一个凝集单位。从表4-1看出，该新城疫病毒液的血凝价为1:128，则l:128为1个血凝单位，1:64、l:32分别为2、4个血凝单位，或将128/4=32，即1:32稀释的病毒液为4个血凝单位。
(二) 血球凝集抑制(HI)试验
1. 根据HA试验结果，确定病毒的血凝价，配制出4个血凝单位的病毒液。
2. 在96孔微量反应板上进行，用固定病毒稀释血清的方法，自第1孔至第11孔各加50 uL生理盐水。
3. 第1孔加被检鸡血清50 uL，吹吸混合均匀，吸50 uL至第2孔，依此倍比稀释至第10孔，吸弃50 uL，稀释度分别为：1:2、1:4、1:8 …… ；第12孔加新城疫阳性血清50 uL，作为血清对照。
4. 自第1孔至12孔各加50 uL 4个血凝单位的新城疫病毒液，其中第11孔为4单位新城疫病毒液对照，振荡混合均匀，置室温中作用10min 。
5. 自第l孔至12孔各加0.5% 鸡红细胞悬液50 uL，振荡混合均匀，室温下静置后观察结果（表4-2）。
表4-2 病毒血凝抑制试验的操作方法（单位：mL） 孔 号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 血清稀释度 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512 1:1024 病毒
对照 血清
对照 生理盐水 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 被检鸡血清 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 4单位病毒 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 室温中静置 10 min 0.5%红细胞 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 弃去50 结果观察 - - - - - - + ++ +++ ++++ ++++ - 6. 结果判定：待病毒对照孔（第11孔）出现红细胞100%凝集（++++），而血清对照孔（第12孔）为完全不凝集（-）时，即可进行结果观察。
以100%抑制凝集（完全不凝集）的被检血清最大稀释度为该血清的血凝抑制效价，即HI效价。凡被已知新城疫阳性血清抑制血凝者，该病毒为新城疫病毒。
从表4-2看出，该血清的HI效价为1:64，用以2为底的负对数(-log2)表示，即6log2。

⑸ 简述常见的抑制血液凝固的方法及基本原理

抗凝----应用化学或物理学的方法，抑制或除去血液中的某些凝血因子以阻止血液凝固的方法。
抗凝剂----能阻止血液凝固的化学试剂。
一、枸橼酸钠
【原理】枸橼酸钠（柠檬酸钠）是枸橼酸钠的三钠盐。它能与血液中的钙离子形成可溶性的螯合物，使Ca2+失去凝血作用，从而阻止血液凝固。
【应用范围】血沉、凝血象、血小板功能检查及血液保养液。
【用量】凝血象:
109mmol/L水溶液,与血液之比为1:9；血沉:
106mmol/L水溶液,与血液之比为1:4。
二、乙二胺四乙酸盐
【原理】乙二胺四乙酸（EDTA）盐可与血液中的钙离子结合形成配位化合物，从而阻止血凝。
【应用范围】一般血液学检查和血液粘度测定。不适于凝血象及血小板功能检查。
【用量】其有效抗凝浓度为1～2mg/ml血液。血细胞分析仪用EDTA-K2作抗凝剂，用量为EDTA-K2•2H2O
1.5～2.2mg/ml血液。
三、肝素
【原理】通过与抗凝血酶Ⅲ结合，增强抗凝血酶的作用，灭活丝氨酸蛋白酶，从而可阻止凝血酶的形成和阻止血小板聚集，阻止血液凝固。
【应用范围】血细胞比容测定、血液粘度测定和多种生化分析。
用量：通常用肝素的钠盐或钾盐粉剂配成1g/L肝素水溶液。取0.5ml置小瓶中，37～50℃烘干后，能抗凝5ml血液。
四、草酸盐
草酸盐也是常用的抗凝剂，优点是溶解度大，作用原理是溶解后解离的草酸根与标本中的Ca2+形成草酸钙沉淀，使Ca2+失去凝血功能，凝血过程被阻断。

⑹ 临床上常用的血清学检查方法有哪几种

主要有沉淀试验、凝集试验、补体结合试验、中和试验及与标记抗体有关的试验。

（1）凝集试验

包括玻板凝集法、全血平板凝集法、试管凝集法和琼脂扩散法。

①全血平板凝集反应

此法常用于传染性鼻炎、鸡白痢、鸡伤寒、鸡慢性呼吸道病等禽病的检疫和监测。

②琼脂扩散反应

当适当比例的抗原抗体在含有电解质的琼脂网状基质中自由扩散相遇时，形成肉眼可见的白色沉淀线。此法常用于鸡传染性法氏囊病、鸡马立克氏病、禽流感、禽脑脊髓炎、禽腺病毒感染等病的诊断，还常用于抗体监测和血清学流行病学调查。

（2）血凝与血凝抑制试验

试验原理：某些病毒能够与人或动物的红细胞发生凝集，称为血凝反应（HA）。这种凝集反应可被加入的特异性血清所抑制，称为红细胞凝集抑制试验，即血凝抑制反应（HI）。

此方法常用于鸡新城疫、禽流感、鸡产蛋下降综合征等病毒的诊断和血清学监测。

⑺ 血凝实验与血凝抑制实验的原理是什么

血凝实验：当血液流出血管后，由于血浆中可溶性之纤维蛋白元变为不能溶解之纤维蛋白，,将所有的血球都网罗在内,于是流体会凝结成块。
血凝抑制实验：柠檬酸钠等抗凝剂能抑制血液凝结。

⑻ 病毒感染的血清学诊断方法

常用的血清学方法有中和试验、补体结合试验、血凝抑制试验等传统的方法，以及应用免疫学标记技术发展的酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射免疫试验（RIA）及免疫荧光试验（IF）等特异、灵敏的微量血清学方法。
1.中和试验（NT）是指病毒在活体内或细胞培养中，被特异性抗体中和而失去感染性的一种试验。它既可用来检查患病后或人工免疫后机体血清中抗体的增长情况，也可用来鉴定病毒或研究其抗原结构。中和抗体特异性高、持续时间较长，因此流行病学调查也常用此指征。
2.血凝抑制试验许多病毒能凝集鸡、豚鼠、人等的红细胞，称为血凝现象。这种现象能被相应抗体所抑制，称血凝抑制试验。其原理是相应抗体与病毒结合后，阻抑了病毒表面的血凝素与红细胞的结合。
3.酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射免疫试验（RIA）及免疫荧光试验（IF）参见第八节细菌感染的血清学诊断方法的介绍。
4.蛋白印迹试验（Westernblot，WB）用于检测HIV抗体，是HIV感染的确认试验。应用WB也可检测病毒抗原，但一般不常用。
5.检测病毒核酸的分子生物学试验检测患者血清等标本或病毒培养物中病毒基因或核酸片段的技术有多种：①病毒核酸扩增试验即聚合酶链反应（PCR）；②核酸杂交技术，包括点杂交、原位杂交、DNA-DNA印迹杂交（Southernblot）及RNA-DNA印迹杂交（Northernblot）等；③基因芯片技术（genechip）；④病毒基因测序等。目前，分子生物学技术日益广泛地应用于对病毒及其感染的检测和研究中。