荧光检测方法金葡萄球菌的研究

① 求教 大肠杆菌 和 金黄色葡萄球菌 的一般的实验室检测方法

大肠杆菌：
大肠杆菌也是有MPN法的，方法是GB5750.12-2006，见“大肠埃希氏菌多管发酵法”，定性也可以参照。如果你只是要鉴定大肠杆菌，不考虑一定要使用国家标准方法，就用普通的办法，分离单个菌落然后生化鉴定吧。

金黄色葡萄球菌：
这个检测标准很多呀，比如GB4789.10-2010（定性定量都有）、GB/T18204.7-2000（定性）、GB15892-2012（定性）

② 化妆品中金黄色葡萄球菌的测定原理

原理：金黄色葡萄球菌，在甘露醇发酵试剂下被抑制，培养皿上出现透明圈。
有关化妆品中金黄色葡萄球菌样品制备以及考核方案的设计是化妆品致病菌检测能力验证计划的难点和核心内容,本研究从金黄色葡萄球菌,铜绿假单胞菌和其生物性状相似的干扰菌的化妆品样品制作技术和考核方案的设计入手,研究化妆品致病菌检测能力验证的核心技术.方法:以金黄色葡萄球菌,铜绿假单胞菌及其检测干扰菌的样品制作和考核评价为研究目标,从菌液制备,化妆品介质筛选,样品制备,均匀性/稳定性试验,考核方案设计等五方面对化妆品致病菌检测能力验证的关键技术进行了研究.结果:制作的化妆品微生物样品均匀性和稳定性检验结果符合要求,试用鉴定结果符合预期结果.结论:研制出均匀性,稳定性符合能力验证要求的化妆品致病菌检测样品,制定了客观,合理的考核评价方案,为化妆品微生物检测能力验证提供了较有价值的借鉴和参考.

③ 如何快速检测冷冻食品中的金黄色葡萄球菌

不可能快速检测的，所有的微生物检测都需要在特定的环境下繁殖一定时间才能做出正确检测。如果外检的话周期是7天，有的是可以加急到4天的。你说的快速检测指的是培养一定时间之后用荧光法或者指示盒做是可以的 。如果是给企业做的话建议到专业是检测机构做

④ 金黄色葡萄球菌的球菌检验

第一，金黄色葡萄球菌的检验
样品处理：无菌取25g或25mL食品样品，放入225mL灭菌生理盐水中均质，制成10-1稀释液。
增菌培养：将10-1稀释液接入7.5%NaCl肉汤或胰蛋白胨肉汤中，37°C培养24小时。
分离培养：将上述稀释液或培养液分别划线血平板和Baird-Parker平板，置37°C培养24~48小时。金黄色葡萄球菌在血平板上呈金黄或白色菌落，大而凸起，表面光滑，周围有溶血圈。在Baird-Parker平板上菌落为圆形，直径2~3mm，颜色灰或黑色，周围有一浑浊带。
染色观察：从平板上挑取可疑性菌落进行革兰氏染色，金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性，显微镜下呈葡萄状排列无芽胞、荚膜，直径0.5~1μm。
血浆凝固酶试验：吸取0.5mL兔血浆与0.5mL金黄色葡萄球菌试液浸液肉汤24小时培养物充分混匀，置36±1°C培养，每隔半小时观察一次，连续观察6小时，出现凝固，即将小试管倾斜或倒置时，内容物不流动，判为阳性。同时做阴阳性对照。耐热核酸酶试验：将24小时肉汤培养物沸水浴处理15min，用接种环划线刺种于甲苯胺兰-DNA平板，36±1°C培养24小时，在刺种线周围出现淡粉色者为阳性。本试验金黄色葡萄球菌为阳性。
第二，金黄色葡萄球菌肠毒素检测
金黄色葡萄球菌肠毒素的检测主要有动物试验、血清学试验、免疫荧光试验及酶联免疫吸附等方法，在此就不一一赘述。

⑤ 金黄色葡萄球菌

1、采样
采集样品首先采取可疑的食物，其次采取病人的呕吐物，剩余的食品，或采取病人的粪便、血液。以及有关食品加工人员的皮肤感染性化脓创的脓汁等。、
2．国家标准检验方法GB4789．10-84，检验程序如图5-9。
1）增菌和分离培养
将25g检样加于225mL灭菌生理盐水中或吸取液体检样5ml于7．5％氯化钠肉汤50ml进行增菌；同时挑取混悬液接种血平板及Bakd-Rarker氏培养基；取可疑菌落再接种血琼脂平板做纯培养。然后进行革兰氏染色。
2）血浆凝固酶试验
吸取1：4新鲜兔血浆0．5mL于小试管中，再加入培养24小时葡萄球菌肉浸液肉汤培养物0．5mL振荡混匀，37℃温箱或水浴内每半小时观察一次，观察6小时，如呈现凝块即为阳性，同时以已知阳性和阴性葡萄球菌株及肉浸液肉汤作为对照。
血浆凝固试验也可采用玻片法。把兔血浆滴加于载玻片的一端，然后用白金耳挑取菌落与血浆充分混匀、在载玻片另一端以生理盐水代替血浆做阴性对照。混合舌立即观察，若出现凝块即为阳性。
病原性葡萄球菌多数产生血浆凝固酶，非病原性的一般不产生。因此，该法是判定葡萄球菌有无致病性的重要指标。
3．肠毒素的测定
动物试验可用检样稀释液直接作动物试验或按以下方法将分离菌株培养制备肠毒素。
①肠毒素的制备：
肠毒素的制备有固体培养法和液体培养法。
②肠毒素测定：
注射前应先喂给幼猫少量的食物，以便观察反应。取上清液按幼猫体重每100g 1mL的剂量腹腔注射或加大2—3倍量口服。然后仔细观察，一般攻毒后0．5～2小时内幼猫发生呕吐、腹泻、体温上升、畏寒等症状，经4～5小时后逐渐恢复。同时实验时用未接种菌的培养基做同样处理的阴性对照。
4、血清学反应
可用于检测食物、培养物或滤液等标本中的细菌或肠毒素。血清学反应不仅简便快捷，而且能对毒素做出最后定型：
①菌体荧光抗体染色法
涂片：食品样品接种于葡萄糖肉汤培养基，37~C培养24～48小时。用接种环取上述增菌液，涂布于载玻片上。
干燥：每一个培养物涂布3～4个点， 37度培养箱内干燥。
固定：将干燥好的玻片放在克氏固定液中固定3－5分钟，再将固定的玻片标本放入95％酒精中浸泡1分钟，
加抗血清：然后充分干燥，用接种环取1环荧光抗血清轻轻加于菌膜上．
反应：然后37度培养箱内作用30分钟。
冲洗浸泡：取出作用好的玻片用0.01mol/L PH7.4 PBS液冲洗玻片上荧光血清，最后将标本放于95％酒精液中浸泡1分钟左右取出，用荧光显微镜镜检。
有特异性明亮荧光的为阳性或者菌量在一个视野中有数个或十几个细菌以上者为阳性。
②毒素的检出
金黄色葡萄球菌毒素蛇检出有免疫琼脂扩散法、反向间接血凝法，放射免疫测定法、免疫荧光法、酶联免疫吸附测定法、A蛋白血凝试验、核酸探针检测，乳胶凝集试验等。

⑥ 金黄色葡萄球菌的检验过程

1、样品制备：

称取25g样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉汤中，固体样品研磨或置均质器中做成1:10的样品混悬液。若供计数检验，可按十进制递增稀释法将样品匀液再进行适当稀释。

2、增菌与分离培养：

将上述样品匀液于36℃±1℃培养18h～24h。金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长。将上述培养物，分别划线接种到Baird-Parker平板和血平板，血平板36℃±1℃培养18h～24h。Baird-Parker平板36℃±1℃培养24h～48h。

金黄色葡萄球菌在Baird-Parker平板上，菌落直径为2mm～3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈见图[4]。用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。在血平板上，形成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血圈见图[5]。挑取上述菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。

向左转|向右转

⑦ 金黄色葡萄球菌的鉴别要点有哪些

1、形态染色鉴别：

革兰阳性球菌，葡萄串状排列。

2、菌落特征鉴别：

在血平板上菌落中等大小、光滑湿润、菌落呈金黄色、菌落周围有透明溶血环。

3、鉴定试验鉴别：

甘露醇发酵试验阳性，血浆凝固酶试验阳性，触酶阳性球菌，耐热核酸试验酶阳性，新生霉素试验敏感。

(7)荧光检测方法金葡萄球菌的研究扩展阅读：

金黄色葡萄球菌的检验规定：

根据 GB4789.10-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验》第一法定性检验和第二法平板计数法进行实验操作。

其中定性检验的主要步骤有检样处理、增菌、分离、镜检、肠毒素检验等，定量实验主要步骤有：检样处理、接种、培养、计数和确认试验等，常规的计数培养方法时间需要48 h左右。

卫生部于2012年12月21日实施的《速冻面米制品食品安全国家标准》，将金黄色葡萄球菌检测由定性转向定量，规定每批产品抽检5个样品中，至多只能有1个样品每克生制品中检出的金黄色葡萄球菌含量在1000至10000个之间。

⑧ 金黄色葡萄球菌的检测方法

1、培养特性及形态特征①培养特性在37℃条件下，需氧与厌氧培养的血液营养琼脂平板均长出光滑、湿润、隆起，约1mm大小的金黄色菌落，并且有β溶血现象。②镜检结果显微镜下观察该菌为革兰氏阳性球菌，排列成葡萄串状，也有个别2个或3个球菌相连。根据菌落形态、镜检结果怀疑该菌为葡萄球菌。2、菌落计数报告将直接计数法试验中的3个平板中疑似黑色葡萄球菌的金黄色菌落数相加，乘以血浆凝固酶试验阳性数，除以5，在乘以稀释倍数，即为每克样品中金黄色葡萄球菌数量。3、动物感染试验只注生理盐水的小白鼠没有任何变化：接种分离菌的小白鼠在9h内死亡。将死亡的小白鼠剖检采集病料，进行细菌分离和生化试验，得到与原分离菌。
“金球菌”列为“极重要质量项目”
金黄色葡萄球菌因思念、三全、湾仔码头事件而引发标准争议，在2011年12月21日实施的速冻食品新国标中，金黄色葡萄球菌从原来“不得检出”变为“限量检出”，但这一检测标准的改变并不代表可以忽略金黄色葡萄球菌的危害性。
在市质监局征集意见而公示的抽检项目中查询到，对包括速冻水饺、汤圆、包子、花卷、馒头、南瓜饼、八宝饭等在内的速冻米面食品，仍然计划把金黄色葡萄球菌列入A类检验项目，并标注为“极重要质量项目”，同时速冻米面食品的沙门氏菌也是A类检验。
产品检出“金球菌”属严重不合格
市质监局介绍，速冻面米抽检中，金黄色葡萄球菌也是A类检验项目。如果食品检验项目中任一项或一项以上不符合规定的要求，判定为不合格；当产品存在A类项目不合格时，属于严重不合格；仅有B类项目不合格，属于一般不合格。
同时，在婴幼儿奶粉、蛋制品中，三聚氰胺、苏丹红也是同样的A类。为避免一些肉禽食品可能含瘦肉精，此次在肉禽罐头食品中，还有专门针对瘦肉精的检测。
速冻食品“金球菌”可限量检出
中国现行《速冻预包装面米食品卫生标准》（GB19295－2003）规定金黄色葡萄球菌等致病菌不得检出。
而卫生部于2012年12月21日实施的《速冻面米制品食品安全国家标准》，将金黄色葡萄球菌检测由定性转向定量，规定每批产品抽检5个样品中，至多只能有1个样品每克生制品中检出的金黄色葡萄球菌含量在1000至10000个之间。